血清冻融前后HBeAg和抗-HBe检测比较

在临床科研工作中，为了减少实验条件对实验结果的影响，而将待测血清分离收集低温冰冻，到一定数量后检测，但忽视血清冻融对结果的影响。为此，我们进行了血清冻融前后HBeAg和抗-HBe检测比较。     

飞行员注射乙肝疫苗后血清HBsAg、抗-HBs追踪观察

2002年我们对注射过乙型肝炎（简称乙肝）疫苗的408名飞行员进行了HBsAg、抗-HBs检测，报告如下： 一、对象与方法 1．对象：2002年2～12月间来院体检的飞行员802人，均为男性，其中408名于1996年3月在原单位检查，符合乙肝疫苗接种筛选条件乙肝表面抗原（hepatitis Bsurface antigens，HBsAg）阴性、乙肝表面抗体（hepatitis B surface antibodies，抗-HBs）阴性、乙肝核心抗体（hepatitis B core antibodies，抗-HBc）阴性，采用0、1、6月接种程序注射基因重组酵母型乙肝疫苗。     

血清HBsAg阴性和HBsAg阳性慢性活动性肝炎患者肝内HBV DNA的研究

用原位杂交法和ABG法对慢性活动性肝炎患者(以下称CAH)血清HBsAg阴性34例和阳性30例对比进行了肝内HBV DNA、HBcAg和HBsAg的检测。上述检出率在34例HBsAg阴性CAH者中分别为23.5％,23.5％和32.4％,30例HBsAg阳性者中分别为63.3％、56.7％和83.3％。结果表明,在我国,血清HBsAg阴性、HBV相关抗体阳性或阴性的CAH中,仍有少部分人肝内存在HBV DNA和HBV抗原表达,并与肝病发病机理有关。血清HBsAg阳性的CAH者中,无论血清HBeAg阳性,或抗HBe阳性、或HBeAg阴性,均有较高比例的肝内HBV DNA和HBV抗原检出。肝内HBcAg与肝内HBV DNA关系密切,可作为反映HBV活跃复制指标;肝内HBsAg则不然。     

人抗HBsAg噬菌体抗体Fab段基因的序列分析及表达

对已建的噬菌体抗体库分离出来的人抗－ＨＢｓ克隆进行了序列分析和表达研究，发现４个克隆中３个克隆的重链和轻链完全相同，ＤＮＡ序列分析表明ＶＨ分别属于ＶＨ１亚群和Ⅱ亚群，其轻链ＶＬ分别属于ＶλⅡ亚群和ＶλⅠ亚群。构建了可溶性Ｆａｂ段表达载体，显示出在细菌中表达的Ｆａｂ段抗体与ＨＢｓＡｇ特异性结合，这说明所筛选出来的噬菌体抗体具有ＨＢdisplay status     

将抗体库所获抗HBs Fab转换为全长人IgG

目的：将大肠杆菌表达的抗乙肝表面抗原（ＨＢｓ）人Ｆａｂ转换为真核表达的全长人ＩｇＧ１。方法：用重叠ＰＣＲ法将人工合成的人Ｖｋ前导序列拼接到抗ＨＢｓ的ＶＨ和Ｖｋ上,构建人ＩｇＧ１真核表达载体,转染真核细胞,通过ＥＬＩＳＡ、ＲＴ－ＰＣＲ、免疫印迹检测抗ＨＢｓ人ＩｇＧ的表达。结果：用轻链和重链同时表达的单一莲体在ＣＨＯ细胞中获得了抗ＨＢｓ人ＩｇＧ的表达。结论：通过噬菌体抗体库所获Ｆａｂ段可通过拼接人Ｖｌ     

斑秃患者血清抗毛囊抗体的检测及意义

斑秃的发病机理不明，多数学者认为和机体免疫功能紊乱有关。本文对32例斑秃患者、引例正常人进行了血清梳毛囊抗体的检测，发现两组人群有显著性差异，现将结果报告如下。对象与方法1．～股资料：斑秃患者32例，其中男性问例，女性13例；最小年龄7岁，最大年龄49岁，平均29．9岁；职业分布包括工人13例、干部12例（包括空勤人员3例）、中学生4例、农民3例、个体户1例；全部患者除一例总有“肾炎”外均无系统性疾病。另选用例血库献血者作为正常对照组，其年龄、性别于健康状况与本组病例相当。2．脱发面积估计：根据患者脱发面积大小分为三…     

人源抗HBsAg噬菌体抗体的筛选、鉴定及基因序列分析

目的筛选与鉴定人源抗乙肝表面抗原(HBsAg)噬菌体抗体,并对其进行基因序列分析。方法利用噬菌体表面递呈技术,从人的外周淋巴细胞中分离和扩增抗体基因,构建抗体组合文库,经亲和淘洗从该文库中筛选人源抗HBsAg噬菌体抗体,通过ELISA及竞争抑制实验鉴定其活性和特异性,并分析获得的抗HBsAg人源抗体重链和轻链基因序列。结果从第3轮淘洗洗脱下来的噬菌体感染细菌长出的菌落中挑出30个,进行ELISA检测,取A490值最高(1.47±0.08)的一株进行竞争抑制试验,结果A490为0.35±0.10,抑制率为76%,所筛出的噬菌体抗体为HBsAg的特异性抗体,酶切分析显示其包含重链和轻链基因,序列分析表明重链可变区(VH)属人免疫球蛋白VHⅠ亚群,轻链可变区(VL)属于VκⅠ和VκⅢ亚群。结论从所构建的抗体库中,筛选出能特异结合HBsAg的抗HBsAg噬菌体抗体,说明通过噬菌体抗体库筛选人源抗HBsAg噬菌体抗体在技术上是可行的,这为抗HBsAg基因工程抗体的应用以及设计针对乙型肝炎的新型靶向治疗策略奠定了基础。     

乙肝病毒前S1抗原与乙肝病毒血清标志物联合检测的临床意义

目的探讨乙肝病毒前S1抗原（PreS1-Ag）与乙肝病毒血清标志物（HBV-M）联合检测在临床应用中的意义。方法用酶联免疫吸附试验（ELISA）测定328例乙型肝炎患者血清中PreS1-Ag和乙型肝炎病毒表面抗原（HBsAg）、乙型肝炎病毒表面抗体（HBsAb）、乙型肝炎病毒e抗原（HBeAg）、乙型肝炎病毒e抗体（HBeAb）、乙型肝炎病毒核心抗体（HBcAb）5项HBV血清标志物。结果 PreS1-Ag在HBsAg（＋）、HBeAg（＋）、HBcAb（＋）组和HBsAg（＋）、HBeAg（＋）组的阳性率显著升高,分别为87.3%和80.0%;在HBsAg（＋）、HBeAb（＋）、HBcAb（＋）组和HBsAg（＋）、HBcAb（＋）组及HBsAg（＋）组的PreS1-Ag阳性率分别为47.5%、63.9%和25.0%;PreS1-Ag在HBeAg（＋）组的阳性率为86.2%,明显高于在HBeAg（-）组的52.1%（χ2=21.33,P〈0.01）;328例乙型肝炎患者中,PreS1-Ag阳性率为61.9%,HBeAg阳性率为28.7%（χ2=73.098,P〈0.01）。结论 PreS1-Ag能较好地反映HBV的复制情况,且对HBV感染的早期诊断和判断治疗效果具有重要的临床意义。     

乙肝病毒前S1抗原、乙肝病毒血清标志物和HBV—DNA联合检测的临床应用

目的探讨乙肝病毒前S1抗原（PreS1）、乙肝病毒标志物（HBVM）与乙肝病毒DNA（HBV—DNA）检测三者之间的关系，判断乙肝病毒在体内的复制情况。方法对550例乙型肝炎患者血清，用ELISA方法检测PreS1、两对半标志物，用荧光定量PCR方法定量检测HBV—DNA并分析3者之间的关系。结果HBsAg（＋）、HBeAg（＋）、HBcAb（＋）的模式中，PreS1与HBV-DNA检出率分别为5213％与88．4％，HBsAg（＋）、HbeAb（＋）、HBcAb（＋）的模式中PreS1和HBV—DNA检出率分别为31．1％和47．5％，HBsAg（＋）、HBcAb（＋）的模式中PreS1和HBV-DNA检出率分别为47.3％和63．4％。结论PreS1能较好的反映HBV病毒感染及复制情况，可作为一种新的HBV血清标志物和监测指标，三者联合检测互相补充，更有助于临床疾病的诊治。     

冻存温度、冻融次数和冻存时间对血清生化指标稳定性的影响

目的 分析在生物样本库中,冻存温度、冻存时间及反复冻融效应对血清常规生化指标的影响,以探讨血清常规生化指标在生物样本库中的稳定性。方法 以2014年7月江苏省泰兴市人民医院160例健康体检者为研究对象,取空腹静脉血制备混合血清。24 h内检测新鲜混合血清的12项常规生化指标作为基准值。将混合血清样本随机分组：A组贮存于-20 ℃,B组、C组、D组、E组均贮存于-80 ℃,其中C组、D组、E组分别于冻存开始的1、5、10 d内,每天进行一次冻融处理。在第1,3,5,7,9个月时进行重复检测。运用配对t检验比较各时点检测值与基准值的差异,运用线性混合效应模型分析冻存温度、冻融循环次数、冻存时间效应对各指标含量稳定性的影响。结果 9个月的冻存中,12项生化指标的含量均不稳定。导致含量不稳定的因素有冻存温度、反复冻融次数、冻存时间,冻存温度、冻融次数与冻存时间分别产生的交互效应。结论 血清样本不宜在生物样本库中冻存,应选择新鲜样本进行血清常规生化指标的检测,否则会降低检测结果的准确性。     

轻链替换文库对抗HBs基因工程Fab抗体亲和力的影响

目的测定轻链替换文库对基因工程Fab抗体的亲和力的影响。方法将PCR扩增的人抗体轻链基因插入已克隆有人源抗乙肝表面抗原(HBsAg)抗体重链Fd基因的噬菌粒中,构建成轻链替换文库,经亲和淘洗,从该文库中筛选与重链Fd基因相匹配的轻链基因。结果链替换的噬菌体抗体(phab)的ELISA光吸收值(A)从0·43±0·09提高到最高为1·24±0·10。序列分析ELISA光吸收值(A)最高的5株phab的轻链基因,3株κ链的碱基序列基本一致,属VκIII亚群,2株λ链的基因序列相同,属VλⅠ亚群。结论所筛选出来的phab具有抗HBsAg的特异性。     

新兵血清HBsAg检测效果与影响因素分析

目前,新兵乙肝表面抗原(HBsAg)检测多采用酶联免疫吸附试验(ELISA)。ELISA是一种敏感性高、特异性强、重复性好的诊断方法,适宜批量检测。由于新兵体检标本量大,试验涉及环节多,各种影响因素易被放大而影响检测结果。因此,加强试验全程质量管理,优化试验条件,才能更好体现ELISA方法学的优点。笔者对几年来新兵HBsAg检测数据及相关影响因素进行调查分析,现报告如下。1对象和方法1.1对象2001～2004年新兵体检静脉血标本,共13003例,从离心血清外观初步分为合格标本与不合格标本(溶血标本)。1.2主要试剂和仪器采用上海荣盛试剂公司提供…     

鸡抗HBs抗体的制备及在人HBsAg检测中的应用

对所制备的抗鸡蛋黄IgY单克隆抗体1G11和3A6进行鉴定,标记后建立了检测鸡蛋黄IgY的间接ELISA方法.用乙型肝炎疫苗免疫25周龄蛋鸡,血清及蛋黄中第8d出现特异性抗体,在第60d效价达1×10~(-5).利用鸡抗HBs抗体,建立了检测血清HBsAg的夹心ELISA方法.检测HBsAg的最低浓度达0.5ng/ml.且特异性较目前商业化试剂盒高     

免疫PCR方法检测乳癌患者血清抗P53蛋白抗体

p5 3基因是人类肿瘤中突变频率最高的抑癌基因 ,几乎发生在所有肿瘤 ,与肿瘤产生、生长调控和细胞凋亡等关系密切 ,检测p5 3基因 /蛋白对诊断肿瘤、评价患者预后和提高患者术后生存期限具有重要价值。p5 3突变基因编码突变型P5 3蛋白并在细胞内积聚 ,与细胞内的热休克蛋白HSP70结合 ,导致异常的P5 3蛋白过度表达 ,释放入血而诱发机体自身免疫应答 ,产生抗P5 3蛋白抗体。最近的研究发现 ,抗P5 3蛋白抗体可以反映早期p5 3基因突变和P5 3蛋白表达 ,可用于肿瘤的诊断、肿瘤转移和复发检测及p5 3表达动态观察 ,已引起了国内外研究者的关注[1…     

不孕症妇女抗卵巢抗体与血清激素关系的探讨

抗卵巢抗体（AOAb）多见产卵巢早衰（POF）、早绝经（PM）、接受体外人工授精（IVF）和不孕症患者[1－3]。为此我们分别对AOAb阳性、AOAb阴性的不孕症妇女血清卵泡刺激素（FSH）、黄体生成素（LH）、雌二醇（E2）、孕酮（P）和泌乳素（PRL）水平进行了比较，以探讨AOAb与血清激素的关系。1对象和方法1．1对象我院门诊的原发不孕症妇女26例，年龄25～39岁，婚后性生活正常，＞2年未孕，月经周期28～30d。基础体温（BBT）测定以观相（黄体期上升0．3～OS”C，＞12d者）、单相或黄体功能不全（高温相＜9d，平均温差wto．3”C，…     

非竞争性ELISA法测定人源抗HBsAg Fab功能性亲和常数

目的　测定完全人源化基因工程抗体HBsAgFab的亲和常数。方法　采用非竞争性ELISA固相法 ,经确定最佳抗原包板浓度、最佳抗原包板时间及最佳抗原与抗体结合反应时间后 ,得到了HBsAg与抗体片段抗HBsAgFab及完整抗体抗HBsAgIgG的抗原抗体结合反应曲线 ,计算出抗HBsAgFab及抗HBsAgIgG的亲和常数。结果　人源基因工程抗体抗HBsAgFab的功能性亲和常数在 10 7～10 8M 1水平 ,比完整抗HBsAgIgG仅仅小约 1个数量级 (10 8～ 10 9M 1)。结论　该基因工程抗体与抗原结合能力较强 ,为今后开发应用Fab进行生物导向治疗提供了理论基础。     

血清抗脑抗体定量方法的建立与应用

抗脑抗体(antibrainantibody,ABAb)是针对脑组织抗原的自身抗体,见于精神分裂症、癫等。目前抗脑抗体的测定多采用人脑、兔脑组织匀浆粗提抗原进行间接血凝、补体结合试验和间接酶联免疫吸附测定(ELISA)等方法[1～3]。我们从胎牛脑组织中,用pH7.8的Tris缓冲液(含10ml/LTritonX-100及10g/L脱氧胆酸钠,简称TDOC缓冲液)提取,亲和层析技术纯化脑组织抗原(B-Ag),并制备兔抗B-Ag抗血清,建立了定量检测ABAb的ELISA,结果满意。1　对象和方法1.1　对象　经临床确诊精神分裂症住院患者197例(均符合精神分裂症CCMD-2-R诊断标准),男145…     

血清CA19-9在检测HBV相关性肝病中的价值

目的:探讨血清CA19 -9在在慢性乙肝病毒相关性肝病患者临床应用中的价值.方法:CA19 -9、a-FP采用IRMA法测定;a-FP采用IRMA法测定;HBV DNA定量:采用FQ - PCR法.结果:原发性肝癌组检测结果,与肝硬化组、HBV- DNA阳性组、HBV-DNA阴性组比较差异有显著意义.肝硬化组检测结果,与HBV -DNA阳性组、阴性组比较差异均有显著意义.HBV-DNA阳性组检测结果,与HBV-DNA阴性组比较差异无显著意义.结论:检测CA19 -9在慢性乙肝病毒相关性肝病,特别是对乙肝病毒相关性原发性肝癌、肝硬化患者临床应用中的价值.