白细胞介素-1β和黄芪对气道上皮细胞胰岛素样生长因子-1表达的影响

目的通过检测经白细胞介素-1β(IL-1β)和黄芪共同干预后兔气道上皮细胞胰岛素样生长因子-1(IGF-1)蛋白的表达水平,探讨IL-1β对气道上皮细胞IGF-1表达的影响,以及黄芪在哮喘气道重塑中的防治作用。方法将体外培养的气道上皮细胞随机分为实验组和对照组,实验分3步进行:①实验组用1ng/ml的IL-1β作用于体外培养的兔气道上皮细胞,分别在不同时间点(4、8、16、24、48h)收集培养上清液及贴有细胞的盖玻片;②实验组随机分为IL-1β0.05、0.1、1、10ng/ml组,分别用不同浓度的IL-1β作用于体外培养的兔气道上皮细胞,在16h时收集培养上清液及细胞爬片。以上对照组加入等量培养液;③实验组随机分为黄芪50、200、500mg/ml组,分别用不同浓度的黄芪加入终浓度为10ng/ml的IL-1β干预的气道上皮细胞中,对照组只加入终浓度为10ng/ml的IL-1β,于16h后收集培养上清液及贴有细胞的盖玻片。用免疫细胞化学染色法和双抗体夹心酶联免疫吸附试验(ELISA)法测定IGF-1蛋白的表达。从而分析不同浓度,不同时间IL-1β和不同浓度黄芪对体外培养的气道上皮细胞分泌IGF-1的影响。结果①经IL-1β1ng/ml处理后气道上皮细胞及培养上清液IGF-1的表达水平分别为16h(0.577±0.036,0.141±0.017)、24h(0.537±0.041,0.114±0.032)、48h(0.527±0.067,0.107±0.027)均高于对照组(0.259±0.012,0.054±0.014;0.260±0.012,0.053±0.005;0.267±0.014,0.056±0.009),差异有统计学意义(P值均<0.05),而这三组之间比较差异无统计学意义,加入IL-1β1ng/ml后,气道上皮细胞IGF-1表达增加,至16h达高峰,之后基本呈平台趋势。②IL-1β0.1ng组(0.328±0.012,0.084±0.021)、1ng组(0.471±0.018,0.113±0.019)、10ng组(0.569±0.031,0.145±0.021)气道上皮细胞及培养上清液中IGF-1的表达水平均高于对照组(0.260±0.019,0.051±0.012)及0.05ng组(0.283±0.027,0.053±0.031),差异有统计学意义(P分别<0.05)。IL-1β10ng组气道上皮细胞及培养上清液中IGF-1的表达水平明显高于其它各组(P分别<0.05),而IL-1β0.05ng组与对照组差异无统计学意义。③与对照组(0.56±0.03,0.14±0.16)比较,黄芪50mg组(0.454±0.050,0.104±0.013)、黄芪200mg组(0.391±0.080,0.085±0.014)、黄芪500mg组(0.296±0.074,0.073±0.014)气道上皮细胞及其在培养上清液中的表达水平均降低,差异有统计学意义(P值均<0.05),黄芪500mg组与对照组及黄芪50mg组比较,差异有统计学意义(P均<0.05),而与黄芪200mg组比较差异无统计学意义。结论IL-1β可促进气道上皮细胞IGF-1的蛋白表达,黄芪对上述过程有抑制作用。     

胰岛素样生长因子-Ⅰ与原发性高血压

目的探讨胰岛素样生长因子-Ⅰ(IGF-Ⅰ)与原发性高血压及高血压左心室肥厚(LVH)的关系,为高血压的诊断和治疗提供新思路。方法对26名正常人及74例原发性高血压患者均行超声心动图检查,并用放射免疫法测定血清IGF-Ⅰ水平。74例原发性高血压患者降压治疗3个月后测定血压与血清IGF-Ⅰ水平。结果①原发性高血压患者血清IGF-Ⅰ水平(298±61)ng/ml明显高于正常对照组(178±51)ng/ml,P<0.05。②原发性高血压组血压1～3级间血清IGF-Ⅰ水平比较差异有统计学意义[分别为(238±54)ng/ml,(295±79)ng/ml,(376±62)ng/ml,P<0.05]。③原发性高血压伴LVH者血清IGF-Ⅰ水平[(369±64)ng/ml]高于无LVH者[(255±69)ng/ml],IGF-Ⅰ水平与左室重量指数(LVMI)中度正相关(r=0.52)。④原发性高血压组经药物治疗3个月后血压达标者其血清IGF-Ⅰ水平[(241±59)ng/ml]显著低于血压未达标者[(299±49)ng/ml],P<0.05。结论IGF-Ⅰ可能参与了原发性高血压的病理生理过程及LVH形成。     

大黄衍生物B对白介素-6诱导宫颈癌Hela生物学行为的影响

目的探讨大黄衍生物B通过AMPK/mTOR通路对白介素-6(IL-6)诱导的子宫癌细胞凋亡、迁移及侵袭的影响。方法将宫颈癌Hela细胞分为对照组、IL-6组、高剂量组、中剂量组和低剂量组。IL-6组添加25 ng/ml IL-6,低剂量组添加25 ng/ml IL-6+40μmol/L大黄衍生物B,中剂量组添加25 ng/ml IL-6+80μmol/L大黄衍生物B,高剂量组添加25 ng/ml IL-6+120μmol/L大黄衍生物B。MTT试剂检测宫颈癌细胞增殖,流式细胞仪检测宫颈癌细胞凋亡,细胞划痕测定宫颈癌细胞迁移能力,Transwell小室测定宫颈癌细胞侵袭能力,RT-PCR检测各组细胞中AMPK、mTOR、TSC1和TSC2 mRNA表达,Western blot检测各组细胞AMPK、mTOR、p-AMPK、p-mTOR、TSC1和TSC2表达。结果各剂量组宫颈癌细胞增殖抑制率和凋亡率明显低于IL-6组(P0.01)。各剂量组宫颈癌细胞细胞划痕愈合率和穿膜细胞数明显低于IL-6组(P0.01)。各剂量组宫颈癌细胞AMPK、TSC1和TSC2 mRNA表达明显高于IL-6组(P0.01),mTOR mRNA表达明显低于IL-6组(P0.01)。各剂量组宫颈癌细胞AMPK、p-AMPK、TSC1和TSC2蛋白表达明显高于IL-6组(P0.01),mTOR和p-mTOR蛋白表达明显低于IL-6组(P0.01)。结论大黄衍生物B通过上调AMPK和下调mTOR通路能够明显抑制白介素-6诱导宫颈癌Hela增殖、迁移及侵袭。     

姜黄素预处理对大鼠肢体缺血再灌注肺损伤时血红素加氧酶-1的影响

目的:探讨姜黄素预处理对大鼠肢体缺血再灌注肺损伤时血红素加氧酶-1(HO-1)的影响。方法:建立大鼠肢体缺血2h再灌注3h肺损伤模型。60只大鼠随机等分为5组:假手术组(Sham)、姜黄素组(Cur)、缺血再灌注组(I/R)、姜黄素+缺血再灌注组(Cur-I/R)和锌原卟啉IX(ZnPP)+姜黄素+缺血再灌注组(ZnPP-Cur-I/R)。ZnPP-Cur-I/R组于缺血前24h经腹腔注射ZnPP 20mg/kg,Cur组、Cur-I/R组和ZnPP-Cur-I/R组分别于缺血前2h经腹腔注射姜黄素200mg/kg,其余各组给予等容量生理盐水。除Sham组和Cur组外,其余各组行肢体缺血再灌注。观察肺组织病理学变化,测定肺组织损伤评分、湿/干重比(W/D)、中性粒细胞(PMN)数目和HO-1mRNA及其蛋白表达的情况。结果:与Sham组比较,I/R组肺组织损伤较重,肺损伤评分、W/D及PMN计数升高,HO-1mRNA及其蛋白表达上调(P<0.01);与I/R组比较,Cur-I/R组肺组织损伤减轻,肺损伤评分、W/D及PMN计数降低,HO-1mRNA及其蛋白表达上调(P<0.01);与Cur-I/R组比较,ZnPP-Cur-I/R组肺组织损伤加重,肺损伤评分、W/D及PMN计数升高,HO-1mRNA及其蛋白表达下调(P<0.01)。结论:姜黄素预处理可通过上调肺组织HO-1的表达减轻大鼠肢体缺血再灌注肺损伤。     

姜黄素通过上调 miR-124减轻脂多糖诱导的大鼠急性肺损伤

目的探究姜黄素( Cur)对脂多糖( LPS)诱导的大鼠急性肺损伤( ALI)的保护作用及可能机制。方法体外培养大鼠肺泡巨噬细胞 NR8383,采用双荧光素酶报告基因实验验证微小 RNA-124(miR-124)与肿瘤坏死因子受体相关因子 6(TRAF6)的靶向关系。 SD大鼠采用随机数字表法分为对照组( NC组)、 LPS组、 LPS+Cur组、 LPS+Cur+inhibitor-NC组、 LPS+Cur+inhibitor组,每组 10只。 LPS组腹腔注射 LPS 10 mg/kg制备 ALI大鼠模型, LPS+Cur组在 ALI模型制备 30 min后尾静脉注射 Cur 200 mg/ kg,LPS+Cur+inhibitor-NC组、 LPS+Cur+inhibitor组大鼠尾静脉分别注射 miR-124 inhibitor-NC、miR-124 inhibitor 50 mg/kg 1周后腹腔注射 LPS 10 mg/kg,30 min后尾静脉注射 Cur 200 mg/kg,NC组注射等量生理盐水 30 min后尾静脉注射等量生理盐水。干预 24 h后, HE染色观察肺组织病理变化,酶联免疫吸附试验( ELISA)检测血清肿瘤坏死因子 -α(TNF-α)、白细胞介素 -6(IL-6)水平,分别采用实时荧光定量 PCR(RT-qPCR)、蛋白质印迹法( WB)检测肺组织 miR-124、TRAF6 mRNA及蛋白表达。结果双荧光素酶报告基因实验结果显示, miR-124可直接靶向 TRAF6 3 '' UTR区负调控其表达。动物实验结果表明, NC组大鼠肺组织结构清晰,肺泡结构完整,无明显异常改变; LPS组、 LPS+Cur+inhibitor组大鼠肺组织结构破坏严重,肺间质增厚,大量炎性细胞浸润,弥漫性充血、渗出,肺泡萎缩; LPS+Cur组、 LPS+Cur+inhibitor-NC组大鼠肺组织损伤减轻。与 NC组比较, LPS组大鼠血清 TNF-α、IL-6、肺组织 TRAF6 mRNA及蛋白表达水平显著增加, miR-124表达水平显著降低( P<0.05);与 LPS组比较, LPS+Cur组大鼠血清 TNF-α、IL-6、、肺组织 TRAF6 mRNA及蛋白表达水平显著降低, miR-124表达水平显著增加( P<0.05);与 LPS+ Cur+ inhibitor-NC组比较, LPS+ Cur+inhibitor组大鼠血清 TNF-α、IL-6、肺组织 TRAF6 mRNA及蛋白表达水平显著增加, miR-124表达水平显著降低( P<0.05)。结论 Cur可通过上调 miR-124靶向抑制 TRAF6减轻 LPS诱导的大鼠 ALI及炎症反应,发挥治疗作用。     

姜黄素对MPP~+诱导PC12细胞凋亡的影响

目的观察姜黄素对MPP+诱导的PC12细胞凋亡的影响。方法采用透射电镜,hoechst染色和流式细胞仪(FCM)观察PC12细胞凋亡,间接免疫荧光流式细胞术检测PC12细胞bcl2的表达。结果PC12细胞自然凋亡率为(15±01)%,05mmol·L-1、1mmol·L-1和2mmol·L-1MPP+作用24h后,PC12细胞凋亡率分别为(441±38)%、(549±21)%和(822±26)%;20μmol·L-1和40μmol·L-1姜黄素对PC12细胞作用24h后无明显凋亡诱导作用,但可分别使05mmol·L-1MPP+处理组细胞凋亡率由(441±38)%下降到(341±38)%和(179±15)%(P<001);PC12细胞经20μmol·L-1姜黄素处理24h后,其bcl2表达率由正常对照的(3643±790)%增加到(7673±860)%(P<001)。结论姜黄素可以抑制MPP+诱导的PC12细胞凋亡,其作用机制之一可能与促进bcl2的表达有关。     

急性支气管哮喘病人外周血程序性死亡因子 -1及其配体的表达

目的探讨急性支气管哮喘病人外周血程序性死亡因子 -1(PD-1)及其配体 PD-L1的表达水平及意义。方法选择 2017年 2月至 2019年 3月无锡市第五人民医院收治的 101例急性支气管哮喘病人作为病例组,同期体检正常 40例健康者为对照组;病例组病人分为轻中度组 46例、重度组 34例、危重组 21例。采用流式细胞术法检测外周血 CD4+T淋巴细胞中 PD-1表达( CD4+PD-1)、 CD8+T淋巴细胞中 PD-1表达( CD8+PD-1)CD19+B淋巴细胞中 PD-L1(CD19+PD-L1)表达,采用单因素方差分析其与疾病严重程度的关系;采用化学发光分析仪检测呼出,气一氧化氮( FeNO)水平,酶联免疫吸附法( ELISA)检测外周血白细胞介素 4(IL-4)、白细胞介素 17(IL-17)水平。结果病例组外周血 CD4+PD-1、CD19+PD-L1表达水平及 PD-1/PD-L1值均高于对照组高［ 17.98±4.16比 5.43±1.52、3.13±0.75比 1.08±0.27、5.75±1.62比 5.03±1.11］(P<0.05);病例组 FeNO及外周血 IL-17水平高于对照组［( 29.74±6.08)μg/L比( 16.38±4.12)μg/L、(38.66±8.27)ng/L比( 24.73±5.21)ng/L］,外周血 IL-4水平低于对照组［(9.14±2.47)ng/L比( 12.86±3.65)ng/L］(P<0.05);病例组不同严重程度外周血 CD4+PD-1、CD19+PD-L1表达水平及 PD-1/PD-L1值由高至低为危重组、重度组、轻中度组(P<0.05);病例组外周血 CD4+PD-1、CD19+PD-L1与 FeNO呈正相关关系(r=0.61、0.55, P<0.05)与 IL-17呈正相关关系( r=0.51、0.50,P<0.05)与 IL-4呈负相关关系(r=.0.43、.0.38,P<0.05)。结论急性支气管哮喘病人外周血,PD-1/PD-L1(CD4+PD-1/CD19+PD-L1)表达异,常,病情越严重,其表达水平可能越高。     

血管紧张素Ⅱ调控基质金属蛋白酶 9的表达在蛛网膜下腔出血发病中的机制研究

目的 探讨血管紧张素 Ⅱ(AngⅡ)调控基质金属蛋白酶 9(MMP?9)的表达在蛛网膜下腔出血( SAH)发病中的机制。方法人脑微血管内皮细胞( HBMEC)株分为 AngⅡ组、 AngⅡ+SB203580组和对照组。其中 AngⅡ组以 100 μg/L浓度 AngⅡ处理 90 min、2h、4h、6h、12 h后取细胞上清液进行相关指标检测; AngⅡ+SB203580组以 5 μΜ的 SB203580处理 20 min后以 100 μg/L浓度 AngⅡ处理 90 min、2h、4h、6h、12 h后取细胞上清液进行相关指标检测;对照组加入 RPMI?1640培养液培养 90 min、2h、4h、6h、12 h后取细胞上清液进行相关指标检测。以酶联免疫吸附法( ELISA)检测各组细胞上清液 MMP?9水平,以实时荧光定量 PCR和蛋白质印迹法检测各组细胞 p38丝裂原活化蛋白激酶( p38 MAPK)的 mRNA和蛋白表达水平。结果并与对照组比较, AngⅡ组细胞上清液 MMP?9［处理 12 h:(4.21±1.36)μg/L比( 5.81±1.72)μg/L,P＜0.01］水平升高, AngⅡ+ SB203580组细胞上清液 MMP?9［处理 12 h:(4.21±1.36)μg/L比( 3.64±1.45)μg/L,P＜0.01］水平降低( P＜0.05)。与 AngⅡ组比较, AngⅡ+SB203580组细胞上清液 MMP?9水平降低( P＜0.001)。与对照组比较, AngⅡ组细胞 p38 MAPK的 mRNA［处理 12 h:(0.422±0.057)比( 0.538±0.071),P＜0.05)］和蛋白表达水平［( 0.452±0.105)比( 0.635±0.133)P＜0.001］升高, AngⅡ+ SB203580组细胞 p38 MAPK的 mRNA［处理 12 h:(0.422±0.057)比( 0.375±0.066),P＜0.05］和蛋白表达,水平［(0.452±0.105)比(0.276±0.081)P＜0.001］降低( P＜0.05)。与 AngⅡ组比较, AngⅡ+SB203580组细胞 p38 MAPK的 mRNA和蛋白表达水平降低( P＜0.001)。结论,AngⅡ可能通过激活 p38 MAPK信号通路上调 MMP?9表达从而促进 SAH发生发展。     

干扰素联合拉米夫定对肝癌根治术后血管内皮生长因子的协同抑制作用

目的观察干扰素联合拉米夫定对肝癌根治切除术后患者血清中血管内皮生长因子C(VEGF-C)表达水平的协同抑制作用。方法收集62例肝癌根治性切除术后患者,随机分为干扰素组及干扰素联合拉米夫定组,分时段观察VEGF-C表达水平。结果于治疗6个月、1年及2年测定VEGF-C表达水平,联合治疗组分别为(122.62±45.96)ng.L-1、(88.3±24.58)ng.L-1及(80.32±27.6)ng.L-1,较干扰素组差异有统计学意义(P<0.05)。结论干扰素联合拉米夫定可有效抑制肝癌根治术后血清VEGF-C的表达,降低肿瘤复发率。     

胰岛素样生长因子-1对血管平滑肌细胞增殖的影响

目的探讨胰岛素样生长因子-1(IGF-1)对血管平滑肌细胞(VSMC)增殖的影响。方法用脂多糖(LPS)诱导巨噬细胞RAW264.7极化为M1型巨噬细胞,制备炎症模型即条件培养基(CM),未加LPS诱导组为对照组即非条件培养基(nCM)。体外培养VSMC分为5组,分别予nCM、CM、CM+IGF-1 60 ng/ml、CM+IGF-190 ng/ml、CM+IGF-1 120 ng/ml干预,用噻唑蓝(MTT)法检测各组吸光度(A)值,以A值反应各组VSMC的数量。结果巨噬细胞RAW264.7在LPS 0 ng/ml、10 ng/ml、100 ng/ml、1μg/ml、10μg/ml浓度刺激下各组上清液中IL-6的浓度分别是(6.75±0.12)pg/ml、(7.82±1.53)pg/ml、(44.09±1.58)pg/ml、(155.71±23.93)pg/ml、(436.59±3.15)pg/ml,差异有统计学意义(P<0.01);VSMC在5组不同干预下各组A值分别是(0.53±0.07)、(0.26±0.06)、(0.30±0.10)、(0.62±0.09)、(0.55±0.05),差异有统计学意义(P<0.01)。结论 M1型巨噬细胞可抑制VSMC增殖,但IGF-1可拮抗M1型巨噬细胞对VSMC增殖的抑制作用,本实验中IGF-1促进VSMC增殖的最适浓度为90 ng/ml。     

Quantification of curcumin,demethoxycurcumin, and bisdemethoxycurcumin in rodent brain by UHPLC/ESI‐Q‐TOF‐MS/MS after intra‐nasal administration of curcuminoids loaded PNIPAM nanoparticles

An ultra high performance liquid chromatography‐electrospray ionization‐synapt mass spectrometric method (UHPLC/ESI‐QTOF‐MS/MS) for the analysis of curcumin (Cur), demethoxycurcumin (DMC), bisdemethoxycurcumin (BDMC) in Wistar rat brain homogenate was developed and validated. The chromatographic separation was achieved on a Waters ACQUITY UPLC? BEH C18 (2.1mm × 100 mm; 1.7μm) column using isocratic mobile phase, consisting of acetonitrile: 10mM ammonium formate: formic acid (90:10:0.05v/v/v), at a flow rate of 0.2 ml min^‐1. The transitions occurred at m/z 367.0694/217.0598, 337.0717/173.0910, 307.0760/187.0844 for Cur, DMC, BDMC and m/z 307.0344/229.0677 for the IS (Nimesulide) respectively. The recovery of the analytes from Wistar rat brain homogenate was optimized using liquid‐liquid extraction technique (LLE) in (ethyl acetate: chloform) mixture. The total run time was 3.0 min and the elution of Cur, DMC, BDMC occurred at 1.6, 1.75, 1.70 min, and for the IS 1.87 min, respectively. The linear dynamic range was established over the concentration range of 1.00 ng mL^‐1 to 1000.0 ng mL^‐1(r²; 0.9909 ± 0.0011, 0.9911 ± 0.003, and 0.9919 ± 0.0013) for Cur, DMC, and BDMC, respectively. The intra and inter‐assay accuracy in terms of % CV for Cur, DMC, and BDMC was in the range 0.47–2.20, 0.47–1.65, and0.44–2.70, respectively. The lower limit of detection (LOD) and quantitation (LOQ) for Cur, DMC, and BDMC were 0.46, 0.05, 0.16 ng mL^‐1 and 0.153, 0.015, 0.052 ng mL^‐1, respectively. Analytes were stable and the method proved to be accurate (recovery, >85%), specific and was applied to evaluate the Cur, DMC, BDMC loaded PNIPAM NPs as vehicles for nose to brain drug delivery. Copyright © 2013 John Wiley & Sons, Ltd.     

白细胞介素-1β和黄芪对气管上皮细胞转化生长因子-β_1表达的影响

目的检测经白细胞介素(IL)-1β、IL-1β和黄芪共同干预后兔气道上皮细胞转化生长因子-β1(TGF-β1)蛋白的表达水平,探讨IL-1β对气管上皮细胞TGF-β1表达的影响以及黄芪在哮喘气管重塑中的防治作用。方法体外培养兔气管上皮细胞,①实验组加入终浓度为1ng/ml的IL-1β,于不同时间点收集培养上清液及贴有细胞的盖玻片;②实验组分别加入不同浓度的IL-1β;③各组均加入终浓度为10ng/ml的IL-1β,同时实验组分别加入不同浓度的黄芪和地塞米松。②与③均于24h后收集培养上清液及贴有细胞的盖玻片。采用免疫细胞化学染色和双抗体夹心酶联免疫吸附试验(ELISA)测定TGF-β1蛋白的表达。结果①经IL-1β1ng/ml处理后TGF-β1的表达在24h点[上皮细胞吸光度值(0.613±0.022),上清液含量(701±32)pg/ml]明显高于其余各时间点(P分别<0.05和0.01)。②与对照组[(0.138±0.009),(216±28)pg/ml]比较,IL-1β 0.1ng组[(0.156±0.003),(267±12)pg/ml]、1ng组[(0.614±0.020),(710±32)pg/ml]、10ng组[(0.917±0.050),(940±34)pg/ml]TGF-β1表达均增高,差异有统计学意义(P分别<0.05和0.01);经直线相关分析培养上清液中TGF-β1的含量与所加IL-1β的浓度呈正相关(r=0.906,P<0.01)。③与IL-1β组[(0.904±0.047),(935±32)pg/ml]比较,黄芪50mg组[(0.397±0.020),(398±52)pg/ml]、黄芪200mg组[(0.144±0.005),(258±45)pg/ml]、黄芪500mg组[(0.401±0.005),(414±22)pg/ml]和地塞米松组[(0.155±0.003),(247±44)pg/ml]TGF-β1表达水平均降低,差异有统计学意义(P分别<0.05和0.01)。结论IL-1β可促进气管上皮细胞TGF-β1的蛋白表达,黄芪对这一过程有抑制作用,早期应用黄芪可能延缓气管重塑的形成与发展。     

危重型胰腺炎全身炎症采用谷氨酰胺联合早期肠内营养治疗的临床效果

目的 探讨采用谷氨酰胺联合早期肠内营养治疗危重型胰腺炎对患者炎症反应的影响.方法 在2014年6月至2016年4月期间本院收治的危重型胰腺炎患者中选取82例,按照治疗方案的不同将其分为观察组和对照组,其中对照组患者仅接受肠外营养,观察组患者则采用早期肠内营养联合谷氨酰胺进行治疗,对两组患者炎症反应、氨基酸代谢情况进行观察分析.结果 观察组患者在治疗后MCP-1[(25.3±3.4) ng/ml]、HMGB-1[(6.7±0.9) ng/ml]水平均明显低于对照组[(41.2±6.3) ng/ml、(10.5±1.7)ng/ml],差异有统计学意义(P＜0.05);观察组患者在治疗结束后,其血清苏氨酸[(11.2±1.5) μmol/L]、苯丙氨酸[(4.3±0.6)μmol/L]、缬氨酸[(4.9±0.7) μmol/L]及赖氨酸[(6.6±0.8)μmol/L]水平均明显高于对照组[(7.6±0.9)μmol/L、(2.3±0.4)μmol/L、(3.5±0.4)μmol/L、(2.7±0.3)μmol/L],差异有统计学意义(P＜0.05).结论 采用早期肠内营养联合谷氨酰胺治疗危重型胰腺炎,可有效促进患者蛋白质合成的改善,有助于缓解机体负氮平衡,并有利于促进患者全身炎症反应的缓解,建议在临床推广应用.     

罗格列酮对血管平滑肌细胞血管紧张肽Ⅱ受体2表达的影响

目的:观察罗格列酮对血管紧张肽Ⅱ(AngⅡ)诱导大鼠血管平滑肌细胞(VSMCs)血管紧张肽Ⅱ受体2(AT_2R)mRNA和蛋白表达的影响及其机制。方法:1μmol·L~(-1) AngⅡ孵育体外培养大鼠VSMCs 6h,然后随机分成7组,另设空白对照组。其中3组分别加入终浓度为20、30、50μmol·L~(-1)罗格列酮干预12h;另3组加入30μmol·L~(-1)的罗格列酮分别再干预6、12、24h;余1组为AngⅡ模型组。采用RT- PCR和免疫组织化学方法检测VSMCs AT_2R mRNA及蛋白的表达水平。结果:空白对照组AT_2R mRNA和蛋白表达量为[(57±s5)％,1.094±0.012],AngⅡ可下调AT_2R mRNA及蛋白的表达[(41±4)％,0.91±0.05](P<0.01,P<0.05);与AngⅡ组相比,罗格列酮20、30、50μmol·L~(-1)干预12h或30μmol·L~(-1)罗格列酮再干预6、12、24h均能使AT_2R mRNA和蛋白的表达明显上调[(63±6)％,1.18±0.04;(94±10)％, 1.35±0.03;(110±12)％,1.58±0.03;(40±4)％,1.23±0.03;(57±6)％,1.372±0.023;(90±10)％,1.64±0.03](P<0.05,P<0.01)。结论:基础状态下,体外培养的大鼠VSMCs AT_2R少量表达, AngⅡ下调AT_2R mRNA及蛋白的表达;一定浓度范围内,罗格列酮可剂量、时间依赖性地上调AngⅡ诱导的大鼠VSMCs AT_2R mRNA和蛋白的表达。     

Curcumin regulated shift from Th1 to Th2 in trinitrobenzene sulphonic acid-induced chronic colitis

AIM: To investigate the therapeutic effects of curcumin (Cur) on trinitrobenzene sulphonic acid (TNBS)-induced colitis and the effects of Cur on the balance of Th1/Th2 cytokines. METHODS: Colitis was induced by TNBS and treated with Cur (30 mg/kg/d, ip), dexamethasone (Dex, 2 mg/kg/d), or Cur plus dexamethasone (Cur+Dex, 30 mg/kg/d Cur ip+2 mg/kg/d Dex,ip). mRNA in colon mucosa were detected by real-time quantitative polymerase chain reaction. Intracellular cytokines were detected by flow cytometry and concentrations of cytokines in sera were detected by enzyme-linked immunosorbent analysis. RESULTS: Both Cur and Dex improved body weight loss, ameliorated histological images and decreased macroscopic score and myeloperoxidase activity. Cur decreased the expression of Th1 cytokines (IL-12, IFN-gamma, TNF-alpha, IL-1) and increased the expression of Th2 cytokines (IL-4 and IL-10) in colon mucosa. Cur also increased the proportion of IFN-gamma/IL-4 in splenocytes and circulation. Dex and Cur+Dex decreased the expression of Th1 cytokines but could not increase the expression of Th2 cytokines and the proportion of IFN-gamma/IL-4. CONCLUSION: Cur exerted therapeutic effects on colitis by regulating the shift from Th1 to Th2.     

姜黄素对缺血/再灌注大鼠海马神经细胞凋亡及NR2A、NR2B表达的影响

目的观察不同剂量姜黄素对大鼠全脑缺血/再灌注后海马神经细胞凋亡及N-甲基-D-天门冬氨酸受体亚单位NR2A、NR2B表达的影响。方法采用SD大鼠四血管阻断模型,动物随机分为5组:假手术组(SH组)、缺血/再灌注组(I/R组)、姜黄素30、100、300mg·kg-1组(Cur30、100、300组),每组根据再灌注不同时间点(2h、6h、1d、3d、7d)又分5个亚组。HE染色观察海马神经细胞形态;TUNEL法检测海马CA1区神经细胞凋亡;免疫组化检测NR2A、NR2B蛋白在海马CA1区及CA3/DG区的表达。结果I/R组凋亡细胞多于SH组及Cur100组,Cur300组凋亡细胞多于Cur100组。姜黄素处理各组及SH组各时间点CA1区、CA3/DG区NR2A的表达均高于I/R组(P<0.05)。SH组及Cur100组CA1、CA3/DG区各时间点NR2B表达低于I/R组(P<0.05)。结论姜黄素减少缺血性神经细胞凋亡的发生可能与增加NR2A、降低NR2B蛋白表达有关;100mg·kg-1姜黄素抗凋亡作用最佳。     

The influence of ezetimibe on classical and alternative activation pathways of monocytes/macrophages isolated from patients with hypercholesterolemia

Macrophages are crucial for the development of atherosclerotic plaques. Classically activated macrophages contribute to plaque growth and destabilization, while alternatively activated macrophages increase plaque stability. Here, we assessed the influence of ezetimibe on the activation of monocyte-derived macrophages isolated from patients with hypercholesterolemia (total cholesterol 263.4?±?12.5 mg/dl, low-density lipoprotein cholesterol 179.7?±?11.3 mg/dl, triglycerides 123.9?±?11.4 mg/dl). Cells were stimulated with 1 μg/ml lipopolysaccharide (LPS) or 1 μg/ml LPS plus 22 ng/ml ezetimibe. Control cells were left unstimulated. The expression of classical activation markers (interleukin-1β (IL-1β), nitric oxide (NO), and inducible nitric oxide synthase (iNOS)) and alternative activation markers (mannose receptor (MR) and arginase-1 (Arg1)) was determined after 48 h. The employed analytical methods included enzyme-linked immunosorbent assay, Griess reaction, real-time polymerase chain reaction, and Western blotting. LPS increased the secretion of IL-1β and NO and the expression of iNOS mRNA, iNOS protein, and Arg1 protein. It did not affect the expression of MR or Arg1 mRNA. In comparison to LPS stimulation, co-stimulation with ezetimibe decreased the secretion of IL-1β and the expression of iNOS mRNA and protein, while it increased MR mRNA and protein expression. Co-stimulation with ezetimibe did not change the secretion of NO or the expression of Arg1. The results suggest that ezetimibe in inflammatory in vitro conditions contributes to the suppression of classical and promotion of the alternative macrophage activation.     

Wnt通路对胰岛素样生长因子-1抑制小鼠毛细胞凋亡的作用

目的探讨胰岛素样生长因子-1(IGF-1)抑制小鼠毛细胞凋亡作用的调控机制。方法体外培养新生小鼠耳蜗基底膜。在分别含有正常对照培养液(A组)、0.5 mmol/L庆大霉素(GM)(B组)、0.5 mmol/L GM+1 ng/mL IGF(C组)、0.5 mmol/L GM+1 ng/mL IGF+5μg/mL wif(D组)、0.5 mmol/L GM+1 ng/mL IGF+10μg/mLwif(E组)、0.5 mmol/L GM+1 ng/mL IGF+15μg/mL wif(F组)的成分中培养24 h后收集细胞及固定。应用TUNEL法观察各组耳蜗毛细胞的凋亡情况。应用Western blot及Real-time PCR法观察Caspase-3的表达情况。结果 B组耳蜗毛细胞经刺激后,细胞凋亡数量及Caspase-3 mRNA和蛋白表达较A组明显上升(P<0.01),C组耳蜗毛细胞经IGF刺激后,细胞凋亡数量及Caspase-3mRNA和蛋白表达较B组明显下降(P<0.01),应用Wnt阻断剂(wif)后D、E及F组细胞凋亡数量及Caspase-3 mRNA和蛋白表达较C组升高,其中F组升高显著(P<0.01)。结论 IGF可能通过激活Wnt通路抑制毛细胞凋亡。