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1.
目的:观察4-氨基水杨酸(4-ASA)对脂多糖(LPS)诱导的RAW264.7细胞一氧化氮(NO)的生成及诱生型一氧化氮合酶(iNOS)基因和蛋白表达的作用。方法采用LPS诱导RAW264.7细胞建立细胞炎症反应模型,加入不同浓度的4-ASA,采用一步法测定细胞上清中NO释放量;采用实时定量PCR法测定iNOSmRNA的表达;采用Western blot法测定目的蛋白iNOS的表达。结果100μg/mL和1000μg/mL4-ASA能明显抑制LPS诱导的RAW264.7细胞NO的分泌及iNOS基因和蛋白的表达(P<0.05)。结论4-ASA可明显降低LPS 诱导的RAW264.7细胞NO的产生以及iNOS基因和蛋白的表达,从而发挥抗炎作用。 相似文献
2.
目的 探讨乌司他丁对脂多糖(LPS)诱导的RAW 264.7细胞一氧化氮(NO)释放和诱生型一氧化氮合酶(iNOS mRNA)表达的影响。方法 应用LPS激活RAW264.7细胞株,与不同浓度组乌司他丁(100~10000U/ml)共同孵育,Griess试剂法测定NO释放量;实时荧光定量反转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术分析iNOS mRNA的表达。结果 高浓度的乌司他丁(1000~10000U/ml)能抑制LPS诱导的RAW264.7细胞NO的表达(P<0.05),下调iNOS mRNA含量(P<0.05);低浓度乌司他丁(100U/ml)对LPS诱导的RAW 264.7细胞NO、iNOS mRNA表达与LPS单独处理组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论 高浓度乌司他丁抑制LPS诱导的巨噬细胞NO释放和iNOS mRNA表达,这种抑制与浓度相关。 相似文献
3.
黄芪苷对脂多糖诱导巨噬细胞一氧化氮和一氧化氮合酶表达的影响 总被引:1,自引:0,他引:1
[摘要] 目的:研究黄芪苷对小鼠巨噬细胞一氧化氮(NO)生成和诱导型一氧化氮合酶(iNOS)表达的影响。方法:体外培养小鼠巨噬细胞RAW264.7,取生长良好的细胞分别加入LPS(终浓度1μg/ml)和不同浓度黄芪苷(终浓度10,50,100μM)进行干预,并设空白对照组。取培养24h细胞上清,用Griess法检测NO生成量;取培养8h和24h细胞,分别提取细胞总RNA和蛋白,用RT-PCR法和Western Blot法检测iNOS基因和蛋白水平表达情况。结果:与空白对照组相比,LPS明显促进了RAW264.7细胞iNOS表达和NO的生成;加入黄芪苷可抑制 LPS诱导的RAW264.7细胞iNOS mRNA和蛋白表达,减少NO的生成,与LPS组有显著性差别。结论:黄芪苷可明显降低LPS诱导的巨噬细胞iNOS表达和NO生成,这可能是其抗动脉粥样硬化斑块形成的作用机制之一。 相似文献
4.
目的观察钙调蛋白(Calmodulin,CaM)抑制剂对脂多糖/干扰素γ(LPS/IFN-γ)诱导的RAW264.7细胞一氧化氮(NO)的生成及诱生型一氧化氮合酶(iNOS)表达的作用及其可能的作用机制。方法采用LPS/IFN-γ诱导RAW264.7巨噬细胞建立细胞炎症反应模型,钙调蛋白抑制剂(W-7,TFP)预处理细胞后,采用Griess试剂法测定NO释放量;采用Western blot法测定目的蛋白的表达;采用反转录聚合酶链反应法(RT-PCR)分析iNOS mRNA表达的变化。结果 CaM抑制剂可抑制LPS/IFN-γ诱导的RAW264.7细胞NO的释放(P<0.01);可抑制iNOS蛋白和mRNA的表达,早期可抑制IκBα的降解、磷酸化IKK(PIKK)和STAT1的蛋白(PSTAT1)表达。结论 CaM抑制剂可明显降低LPS诱导的RAW264.7细胞NO、iNOS蛋白和mRNA表达;可以通过抑制IκBα降解和磷酸化IKK蛋白表达而发挥抗炎作用。 相似文献
5.
目的:探讨右美托咪定( DEX)对脂多糖( LPS)诱导的小鼠巨噬细胞RAW264.7凋亡的影响。方法:体外培养小鼠巨噬细胞系 RAW264.7,细胞随机分为正常对照组、LPS刺激组(10 mg/L)、DEX组(0.1、1、10、100μmol/L)和LPS+DEX组(0.1、1、10、100μmol/L);采用四甲基偶氮唑盐( MTT)微量酶反应比色法检测细胞存活率,流式细胞术检测细胞凋亡,蛋白质免疫印迹法( western blot)检测bax、bcl-2蛋白表达。结果:与正常对照组相比,DEX组(浓度为0.1、1、10μ mol/L )对RAW 264.7细胞生存率、凋亡率以及bax、bcl-2的表达影响不明显( P﹥0.05);100μmol/L DEX对RAW264.7细胞生存率、凋亡率明显下降,bax的表达明显增加,bcl-2表达降低(P﹤0.05);与 LPS刺激组相比,LPS+DEX组(0.1,1,10μmol/L)可增加RAW264.7细胞的生存率,降低细胞凋亡率,bax表达降低,bcl-2表达增加( P﹤0.05),LPS+100μmol/L DEX组细胞生存率显著降低,凋亡率显著增加,bax表达明显增加,bcl-2表达显著降低。结论:低浓度DEX(﹤10μmol/L)抑制LPS诱导RAW264.7细胞凋亡,高浓度则表现为增强作用。 相似文献
6.
HUANG Chun-yan ZHAO Yan-qiong LI Mu-jun KUANG Xiao-cong HUANG Ling-ling ZHONG Lin-lin TANG Yan 《广西医学》2012,34(5)
目的 探讨乌司他丁对脂多糖(LPS)诱导的RAW264.7细胞一氧化氮(NO)释放和诱生型一氧化氮合酶(iNOSmRNA)表达的影响.方法 应用LPS激活RAW264.7细胞株,与不同浓度组乌司他丁(100~10 000 U/ml)共同孵育,Griess试剂法测定NO释放量;实时荧光定量反转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术分析iNOSmRNA的表达.结果 高浓度的乌司他丁(1 000~ 10 000 U/ml)能抑制LPS诱导的RAW264.7细胞NO的表达(P<0.05),下调iNOSmRNA含量(P<0.05);低浓度乌司他丁(100 U/ml)对LPS诱导的RAW264.7细胞NO、iNOSmRNA表达与LPS单独处理组比较,差异无统计学意义(P>0.05).结论 高浓度乌司他丁抑制LPS诱导的巨噬细胞NO释放和iNOSmRNA表达,这种抑制与浓度相关. 相似文献
7.
目的 探讨苯并噁唑类衍生物K339 对脂多糖(LPS)诱导的小鼠巨噬细胞RAW264.7 的抗炎效应。方法 通过LPS(100 μg/L)刺激RAW264.7 细胞建立炎性细胞模型;细胞计数试剂盒(CCK-8)检测不同浓度K339 对 RAW264.7 细胞活力的影响;通过一氧化氮(NO)检测试剂盒检测 K339 对 LPS 刺激 RAW264.7 细胞产生NO 的影响;荧光定量PCR 及酶联免疫吸附反应检测诱导型 NO 合酶(iNOS)、白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)mRNA 的表达及在上清中的分泌;蛋白质印迹技术检测p-NFκB 蛋白质表达水平。结果 小分子化合物K339 在最高浓度 30 μmol/L 不影响RAW264.7 细胞活力,但可明显降低LPS诱导产生的 NO ;可抑制 iNOS、IL-6、IL-1β、TNF-α mRNA 的表达及在细胞培养上清中的分泌;可明显下调 LPS诱导的磷酸化 NFκB p65 蛋白表达。结论 小分子化合物 K339 可能通过 Toll 样受体 4(TLR4)/NFκB 通路有... 相似文献
8.
蛋白激酶C对内毒素诱导的诱导型一氧化氮合酶基因表达的调控作用 总被引:5,自引:0,他引:5
目的探讨内毒素(LPS)诱导单核/巨噬细胞诱导型一氧化氮合酶(iNOS)基因表达的分子机制.方法用LPS刺激诱导RAW264.7细胞,观察其对蛋白激酶C(PKC)的激活,用Griess还原法测定PKC抑制剂对LPS诱导的一氧化氮(NO)生成作用,并用逆转录PCR(RT-PCR)研究其对iNOS基因表达的影响;构建iNOS荧光素酶报告基因载体,用基因转染及报告基因检测等方法研究LPS刺激RAW264.7细胞对iNOS启动子活性的诱导作用及PKC对其影响.结果 LPS刺激RAW264.7细胞引起PKC磷酸化激活和膜移位(P<0.01);LPS刺激诱导RAW264.7细胞12 h后即可明显诱导NO生成(30.1 μmol/L±5.4 μmol/L, P<0.01)和iNOS基因表达;PKC抑制剂H-7可抑制NO的生成(P<0.01)和iNOS基因表达;LPS刺激诱导iNOS启动子的转录活性(25.3±4.6相对荧光素酶活性单位, P<0.01),用H-7和钙离子通道阻滞剂异博定(Verapamil)均可抑制其转录活性(P<0.01).结论 LPS刺激RAW264.7细胞,通过引起细胞内钙增加和PKC激活诱导iNOS基因表达,使NO生成增加,这是内毒素休克时NO增加的一个重要的信号机制. 相似文献
9.
目的 研究中药防风中5-O-甲基维斯阿米醇苷对脂多糖(LPS)诱导的小鼠RAW264.7细胞炎症的保护作用及其作用机制。方法 建立LPS诱导小鼠RAW264.7细胞体外炎症模型,采用MTT比色法测定不同浓度(160、80、40、20、10μmol/L)5-O-甲基维斯阿米醇苷对小鼠RAW264.7细胞活性的影响;实验分空白组,LPS组,阳性对照组(吲哚美辛,10μmol/L),5-O-甲基维斯阿米醇苷低(20μmol/L)、中(40μmol/L)、高(80μmol/L)剂量组,空白组、LPS组加入空白培养基,其余给药组加入相应药物,2h后加入LPS(10μg/mL),采用格里斯试剂法检测小鼠RAW264.7细胞上清液的一氧化氮(NO)的分泌,酶联免疫吸附试验法检测小鼠RAW264.7细胞中的前列腺素E2(PGE2)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)含量,RT-qPCR检测小鼠RAW264.7细胞核因子-κB(NF-κB)p65、白细胞介素1β(IL-1β)、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)、环氧合酶2(COX-2)的mRNA表达,Western b... 相似文献
10.
研究COX/5-LOX双重抑制剂ZLJ-6对脂多糖(LPS)诱导下RAW 264.7细胞炎症模型的抗炎作用。采用LPS (1μg/mL)刺激生长良好的RAW 264.7巨噬细胞建立细胞炎症模型,在不同浓度的ZLJ-6( 3,10,30 μmol/L)作用下,用Griess法检测细胞培养液中NO的含量,用ELISA法检测TNF-α、IL-6含量,并用Western blotting检测各组细胞中环加氧酶-2(COX-2)和诱导型一氧化氮激酶(iNOS) 的表达。ZLJ-6能剂量依赖性地抑制LPS诱导的RAW264.7细胞NO的释放以及TNF-α、IL-6等炎症因子的生成,同时抑制COX-2和iNOS的表达。结果表明,ZLJ-6具有抑制LPS诱导的RAW 264.7细胞炎症反应的作用,其抗炎机制可能通过抑制COX-2、iNOS的表达以及炎症介质NO以及TNF-α、IL-6的产生。 相似文献
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目的探讨硫化氢(H2S)对海洛因依赖大鼠一氧化氮(NO)/一氧化氮合酶(NOS)体系的影响。方法实验大鼠随机分成3组:正常对照组、海洛因依赖组(herion组)、海洛因依赖+NaHS组(heroin+NaHS组)。采用比色法测定大鼠血浆及海马组织NO含量,Real time PCR测定海马组织nNOS mRNA表达量。结果血浆及海马NO含量比较,herion组与heroin+NaHS组均高于对照组(〈0.05),heroin+NaHS组低于herion组(〈0.05);海马组织nNOS mRNA表达量比较,herion组高于对照组(〈0.05),heroin+NaHS组与对照组无显著差异(〉0.05),heroin+NaHS组低于herion组(〈0.05)。结论海洛因依赖可导致大鼠体内NO水平升高,H2S供体NaHS可抑制NO的产生,下调nNOS mRNA表达。 相似文献
12.
目的 观察口服降糖药米格列奈对高糖环境下内皮细胞一氧化氮(NO)合成及氧化应激反应的影响.方法 成功培养及传代人主动脉内皮细胞(HAECs),分为对照组(葡萄糖浓度为5.5 mmol/L)、高糖组(葡萄糖浓度为30 mmol/L)、米格列奈组(30 mmol/L葡萄糖+10 μmol/L米格列奈).ELISA法测NO、上清液中内皮型一氧化氮合酶(eNOS)及诱导型一氧化氮合酶(iNOS)的含量;比色法分别检测6、12、24、48、72 h上清中超氧化物岐化酶(SOD)的活力及丙二醛(MDA)的含量.结果 ①米格列奈组24 h NO含量为(232.7 1±8.78)μmol/L,较高糖组低(P<0.05),随后逐渐升高,48 h和72 h含量[(263.48±6.32)、(270.91±6.03)μmol/L]较高糖组明显增高,差异有统计学意义(P<0.05).②干预24、48、72 h测米格列奈组eNOS的含量[(51.96±2.65)、(59.28±3.63)、(60.41±4.48) μmol/L]均较高糖组增高,差异有统计学意义(P<0.05);同步测iNOS含量[(53.28±3.45)、(62.09±3.71)、(59.90±3.60) μmol/L]与高糖组相比明显降低,差异有统计学意义(P<0.05).③干预6、12、24、48、72 h测米格列奈组SOD活力[(3.99±0.46)、(5.70±0.14)、(4.98±0.37)、(3.18±0.25)、(3.35 ±0.51) U/mL]较高糖组高,差异有统计学意义(P<0.05);测MDA含量[(0.500±0.014)、(0.633±0.018)、(0.623 ±0.051)、(0.510±0.030)、(0.513±0.015) nmol/mL]较高糖组明显降低,差异有统计学意义(P<0.05).结论 米格列奈能减少高糖环境中动脉内皮细胞iNOS的生成,增强eNOS的活性和表达,促进内皮细胞NO的产生,同时能减轻高糖引起的氧化应激损伤. 相似文献
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脂多糖诱导小鼠腹腔巨噬细胞TNF—αmRNA、iNOSmRNA的表达 总被引:2,自引:0,他引:2
目的观察脂多糖对小鼠腹腔巨噬细胞肿瘤坏死因子-α以及诱导型一氧化氮合酶表达水平的影响。方法按常规方法获取小鼠腹腔巨噬细胞,随机分成两组:空白对照组及LPS组(分别含LPSO.01,0.1,1.0,10rag/L)。采用荧光定量PCR方法测定肿瘤坏死因子-α及诱导型一氧化氮合酶的基因表达情况。结果经0.01μg/mL LPS刺激后细胞TNF-αmRNA、iNOSmRNA表达水平均明显升高,与空白对照组比较有显著性差异(P〈0.01),并且在一定范围内呈剂量一效应关系。结论LPS可诱导小鼠巨噬细胞TNF-α mRNA、iNOS mRNA的表达。 相似文献
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目的 探讨高糖培养的肾小球系膜细胞中一氧化氮(NO)合成的变化,以及上述变化对细胞外基质的影响.方法 体外培养大鼠肾小球系膜细胞,按干预方法分为正常组(NG组,5.56 mmol·L-1 DMEM),高糖组(HG组,25 mmol·L-1 DMEM)、一氧化氮供体组(SNP组,5.56 mmol·L-1 DMEM+100 μmol·L-1 SNP)、NO清除剂组(C-PTIO 组,25 mmol·L-1 DMEM+200 μmol·L-1 C-PTIO),以Griess比色法测定培养上清中NO水平;用ELISA法测定培养上清中Ⅳ型胶原、层黏蛋白含量.结果 高糖培养条件下上清中NO增多(P〈0.05),Ⅳ型胶原、层黏蛋白含量增加(P〈0.01),应用C-PTIO可显著降低上清中NO的含量,Ⅳ型胶原、层黏蛋白的含量也降低.结论 高糖可诱导大鼠肾小球系膜细胞产生NO,异常增多的NO又可导致系膜细胞中Ⅳ型胶原、层黏蛋白的积聚. 相似文献
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目的:观察巴马汀对脂多糖(LPS)诱导的RAW264.7小鼠巨噬细胞一氧化氮(NO)的分泌及诱导型一氧化氮合酶(iNOS)表达的作用。方法:采用LPS诱导RAW264.7巨噬细胞建立细胞炎症反应模型,加入不同浓度的巴马汀,采用Griess法测定NO的分泌量;采用Westernblot法检测iNOS蛋白的表达。结果:巴马汀能明显抑制LPS诱导的RAW264.7巨噬细胞NO的分泌,以及iNOS蛋白的表达,并呈现出浓度依赖性。结论:巴马汀可通过抑制LPS诱导的RAW264.7巨噬细胞NO的分泌及iNOS的表达,从而发挥抗炎作用。 相似文献
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[目的]探讨汉黄芩素对脂多糖(LPS)诱导的BV2细胞激活时所分泌的一氧化氮的产生以及诱导型一氧化氮合酶(iNOS)表达的影响.[方法]用10,100,500,1 000μg/L的LPS刺激小胶质细胞株BV2,并向LPS(100μg/L)中加入10,20,30μmol/L的汉黄芩素后再培养24h,采用Greiss法测定细胞外液所分泌的一氧化氮含量;应用Western-Blot及RT-PCR法分别检测iNOS蛋白和mRNA的表达.[结果]LPS高度激活BV2细胞,并且能使一氧化氮分泌增加,汉黄芩素呈剂量依赖性抑制一氧化氮的含量,同时抑制iNOS蛋白和mRNA的表达.[结论]汉黄芩素可有效抑制LPS激活的BV2细胞iNOS蛋白和mRNA的表达及一氧化氮的产生. 相似文献
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目的探讨重症急性胰腺炎(SAP)时胰腺组织一氧化氮(NO)和诱导型一氧化氮合酶(iNOS)表达的变化。方法 36只健康雄性Sprague-Dawley大鼠随机分为2组。SAP组(n=18)以逆行胰胆管内加压注射5%牛磺胆酸钠的方法建立SAP模型;对照组(n=18)以同法注射等剂量生理盐水。造模后6、12、24 h每组随机处死大鼠6只,检测血淀粉酶、胰腺组织病理组织学改变、胰腺组织NO水平及iNOS活性以及腺腺组织iNOS mRNA表达的变化。结果与对照组相比,SAP组在6 h时间点上,胰腺组织中NO水平、iNOS活性明显升高(P〈0.01),免疫组化和RT-PCR结果也显示iNOS蛋白及iNOS mRNA表达增高(P〈0.01);随时间延长,在12 h和24 h各指标到达高峰,24 h仍维持在较高水平(P〈0.01)。结论在SAP时,随着时间的延长,iNOS表达增高,从而产生高浓度的NO,加重胰腺组织的损伤。 相似文献
18.
目的利用KC1滴注大鼠大脑皮质制作皮层扩布性抑制模型,研究其血清一氧化氮(NO)含量的变化。方法健康雄性Wistar大鼠随机分为3组:空白对照组、假手术组和皮层扩布性抑制模型组,取颈静脉血,采用硝酸还原酶法测量血清NO含量,组间进行方差分析,P〈0.05表明统计学有意义。结果正常对照组NO含量为(58.75±5.96)μmol/L,假手术组,两者比较P〉0.05,没有统计学意义。CSD模型组,高于正常对照组和假手术组(P〈0.05)。结论皮层扩布性抑制可以诱导血清NO含量的增加,对于研究偏头痛的发病机制和治疗提供了重要参考。 相似文献
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目的探讨银杏叶提取物(GBE)对重症急性胰腺炎(SAP)大鼠模型一氧化氮(NO)及诱导型一氧化氮合成酶(iNOS)表达的影响。方法 72只SD大鼠随机分为3组:假手术组(SO)、SAP组、GBE干预组。采用5%牛磺胆酸钠胰胆管注射方法建立SAP动物模型。GBE治疗组于建模后5 min将GBE溶液通过股静脉给药。SO组和SAP组注入同样量的生理盐水。检测3组6、12、24 h血清淀粉酶、胰腺组织病理评分、血清及胰腺组织NO水平、实时荧光定量PCR检测胰腺组织iNOS mRNA表达情况。结果 GBE组胰腺组织病理评分6、12 h均显著低于SAP组,但在24 h胰腺组织病理评分与SAP组无显著差异;GBE组在6 h时血清及胰腺组织NO水平、12 h时胰腺NO水平较SAP组低,但随着时间延长,两组无显著差异;6 h时GBE组iNOS mRNA表达较SAP组低(P<0.05);12、24 h时SAP组与GBE组iNOS mRNA表达无统计学意义。结论 GBE在SAP早期可能通过抑制iNOS mRNA表达而降低NO水平,对胰腺组织起保护作用;但随着病程进展,这种作用不明显。 相似文献