丙泊酚下调miR-93-5p表达对乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖、侵袭的影响

摘要：目的:探讨丙泊酚对miR-93-5p以及人乳腺癌细胞MDA-MB-231增殖及侵袭的影响。方法:培养对数期MDA-MB-231细胞,进行细胞毒性试验,筛选最佳丙泊酚处理浓度与时间,实验分为空白对照组（0.1%DMSO培养基）、阳性对照组(30μmol·L-1环磷酰胺)、丙泊酚1,2,5 mg·L-1浓度组。CCK8法检测细胞增殖,细胞划痕及Transwell实验检测细胞迁移侵袭情况,免疫印迹法（Western Blot）检测增殖相关蛋白增殖细胞核抗原（PCNA）、侵袭迁移相关蛋白金属机制蛋白酶2（MMP-2）、金属机制蛋白酶2（MMP-9）蛋白表达情况,定量即时聚合酶链锁反应（qRT-PCR）检测细胞miR-93-5p表达情况。结果:与空白对照组相比,阳性对照组与丙泊酚各浓度组MDA-MB-231细胞增殖抑制率、迁移抑制率显著升高,裸鼠肿瘤体积、侵袭细胞数量及PCNA、MMP-2、MMP-9蛋白表达、miR-93-5p表达显著降低（P<0.05）。与阳性对照组相比,1 mg·L-1和2 mg·L-1丙泊酚组MDA-MB-231细胞裸鼠肿瘤体积、侵袭细胞数量及PCNA、MMP-2、MMP-9蛋白表达、miR-93-5p表达依次升高,增殖抑制率、迁移抑制率依次降低（P<0.05）。结论:丙泊酚可能通过下调miR-93-5p表达,抑制乳腺癌细胞MDA-MB-231增殖、侵袭能力发挥抗肿瘤作用。     

三叶苷调控miR-539-5p表达保护缺氧缺糖心肌细胞损伤研究

摘要：目的:探讨三叶苷对缺氧缺糖心肌细胞损伤的保护作用及机制。方法:采用不同浓度的三叶苷作用于缺氧缺糖诱导的心肌细胞H9C2,试剂盒检测丙二醛（MDA）含量、乳酸脱氢酶（LDH）和超氧化物歧化酶（SOD）活性,流式细胞术、蛋白质印记（Western blot）检测细胞凋亡以及B细胞淋巴瘤-2（Bcl-2）和Bcl相关X蛋白（Bax）蛋白表达,实时荧光定量PCR（RTq PCR）检测miR-539-5p表达。转染miR-539-5p模拟物至H9C2细胞,检测过表达miR-539-5p对缺氧缺糖诱导的H9C2细胞损伤的影响。结果:三叶苷作用于缺氧缺糖诱导的H9C2细胞后,细胞中MDA含量、LDH释放量、细胞凋亡率和Bax蛋白表达水平显著降低,SOD活性、Bcl-2蛋白和miR-539-5p表达水平显著升高（P<0.05）。过表达miR-539-5p后,缺氧缺糖诱导的H9C2细胞中MDA含量、LDH释放量、细胞凋亡率和Bax蛋白表达水平显著降低,SOD活性、Bcl-2蛋白表达水平显著升高（P<0.05）。抑制miR-539-5p表达可减弱三叶苷对缺氧缺糖诱导的H9C2细胞MDA含量、LDH释放量、SOD活性、凋亡,以及Bax和Bcl-2蛋白表达的影响。结论:三叶苷可有效降低缺氧缺糖诱导的心肌细胞损伤,其机制与上调miR-539-5p表达有关。     

槲皮黄酮对高糖诱导的心肌H9c2细胞凋亡和氧化应激的抑制作用

摘要：目的:观察槲皮黄酮对高糖刺激心肌H9c2细胞凋亡和活性氧（ROS）水平的影响。方法:体外培养H9c2细胞,并将其分为对照组、高糖组(25 mmol·L-1)、高糖+槲皮黄酮低浓度组(25 mmol·L-1+50μmol·L-1)、高糖+槲皮黄酮中浓度组(25mmol·L-1+100μmol·L-1)和高糖+槲皮黄酮高浓度组(25 mmol·L-1+200μmol·L-1)。CCK8法检测细胞活力,流式细胞术检测细胞凋亡,DCFH-DA检测细胞内ROS水平,Western blot检测细胞中磷脂酰肌醇3-激酶（PI3K）、p-PI3K、Akt（丝氨酸/苏氨酸激酶）和p-Akt蛋白表达;采用PI3K抑制剂LY294002和槲皮黄酮共同处理H9c2细胞后,检测了细胞凋亡率及ROS水平。结果:与对照组相比,高糖诱导的心肌H9c2细胞活力、PI3K和Akt磷酸化蛋白水平显著降低,细胞凋亡率和ROS水平显著增加（P<0.05）;槲皮黄酮可诱导高糖刺激的心肌H9c2细胞活力升高,细胞凋亡率和ROS水平降低,PI3K和Akt磷酸化蛋白水平明显上调（P<0.05）。LY294002能明显降低槲皮黄酮对H9c2细胞凋亡和ROS产生的抑制作用。结论:槲皮黄酮可通过调控PI3K/Akt信号通路改变高糖刺激心肌H9c2细胞活力的降低及凋亡率和氧化应激的增加。     

二氢青蒿素对肺癌H460细胞放疗敏感性及miR-219a-5p、CD164表达的影响

摘要：目的:探讨二氢青蒿素对肺癌H460细胞放疗敏感性及微小RNA-219a-5p（miR-219a-5p）、钙黏蛋白164（CD164）表达的影响。方法:CCK-8法检测不同浓度(0.01,0.1,1,10,100μmol·L-1)二氢青蒿素处理的肺癌H460细胞的增殖抑制率,将肺癌H460细胞设为4组:空白对照组、单纯放疗组、二氢青蒿素组和二氢青蒿素+放疗组,其中空白对照组不进行处理;单纯放疗组采用X射线照射源进行一次性照射,照射剂量为5 Gy,剂量率为1 Gy·min-1;二氢青蒿素组加入23.74μmol·L-1二氢青蒿素的培养基;二氢青蒿素+放疗组加入23.74μmol·L-1二氢青蒿素的培养基并采用照射剂量为5 Gy,剂量率为1 Gy·min-1的X射线照射;CCK-8检测细胞增殖活性,流式细胞术检测细胞凋亡及细胞周期分布情况,实时荧光定量PCR法检测细胞miR-219a-5p、CD164 mRNA表达水平,蛋白免疫印迹法检测细胞CD164蛋白表达水平。结果:随着二氢青蒿素浓度的升高,肺癌H460细胞增殖抑制率逐渐升高（P<0.05）;与空白对照组比较,单纯放疗组、二氢青蒿素组、二氢青蒿素+放疗组肺癌H460细胞吸光度（A）值、细胞增殖率、S期比例、CD164 mRNA和蛋白表达水平降低,凋亡率、G0/G1期比例、G2/M期比例、miR-219a-5p表达水平升高（P<0.05）;与单纯放疗组和二氢青蒿素组比较,二氢青蒿素+放疗组肺癌H460细胞A值、胞增殖率、S期比例、CD164 mRNA和蛋白表达水平降低,凋亡率、G0/G1期比例、G2/M期比例、miR-219a-5p表达水平升高（P<0.05）。结论:二氢青蒿素能够增强肺癌细胞系H460的放疗敏感性,这可能与其通过促进miR-219a-5p的表达来抑制CD164的活性有关。     

芍药醇调控miR-122-5p/GSTM1分子轴对缺血再灌注心肌细胞存活的影响

摘要：目的:探讨芍药醇对缺血再灌注心肌细胞存活的影响,并探讨其机制是否与调控miR-122-5p/谷胱甘肽转移酶M1（GSTM1）分子轴有关。方法:将H9C2细胞分为正常对照（NC）组、缺血/再灌注（I/R）组、I/R+低-中-高芍药醇组、I/R+anti-miRcon组、I/R+anti-miR-122-5p组、I/R+芍药醇+miR-con组、I/R+芍药醇+miR-122-5p组、I/R+芍药醇+miR-122-5p+pc DNA-con组、I/R+芍药醇+miR-122-5p+pc DNA-GSTM1组,采用四甲基偶氮唑蓝（MTT）法检测细胞活力;实时荧光定量PCR（RT-qPCR）和蛋白质印记（Western blot）检测miR-122-5p、GSTM1表达;双荧光素酶报告基因实验和Western blot确定miR-122-5p对GSTM1的靶向作用。结果:I/R处理后,H9C2细胞存活率、GSTM1表达降低,miR-122-5p表达升高（P<0.05）。芍药醇干预后,H9C2细胞存活率、GSTM1表达升高,miR-122-5p表达降低（P<0.05）。抑制miR-122-5p表达后H9C2细胞存活率升高,从而减轻I/R对H9C2细胞的抑制作用（P<0.05）。过表达miR-122-5p可逆转芍药醇对I/R处理下H9C2细胞存活的保护作用（P<0.05）。过表达GSTM1可逆转miR-122-5p对芍药醇干预的I/R处理下H9C2细胞存活的影响（P<0.05）。结论:GSTM1是miR-122-5p的靶基因,miR-122-5p对GSTM1具有负性调控作用。芍药醇可提高I/R条件下心肌细胞存活率,其机制与下调miR-122-5p/GSTM1分子轴有关。     

虫草素通过调控miR-524-5p表达抑制口腔鳞癌HSC3细胞的增殖、迁移及侵袭

摘要：目的:探讨虫草素通过调控微小RNA-524-5p（miR-524-5p）表达对口腔鳞癌细胞增殖、迁移、侵袭的影响。方法:体外培养口腔鳞癌细胞HSC3,分别使用不同浓度(10,20,40μmol·L-1)的虫草素处理;采用甲基噻唑基四唑（MTT）检测细胞增殖; Transwell小室实验检测细胞迁移及侵袭;实时荧光定量聚合酶链反应（qRT-PCR）检测miR-524-5p的表达水平;蛋白免疫印迹法（Western blot）检测细胞周期蛋白1（Cyclin D1）、p21、基质金属蛋白酶-2（MMP-2）、基质金属蛋白酶-9（MMP-9）、上皮型钙黏蛋白（E-cadherin）的表达量;分别将miR-524-5p mimics或anti-miR-524-5p转染至HSC3细胞后,采用上述方法检测细胞增殖、迁移及侵袭。结果:与对照组比较,虫草素各浓度组细胞增殖抑制率显著升高（P<0.05）,迁移细胞数及侵袭细胞数显著减少（P<0.05）,Cyclin D1、MMP-2、MMP-9蛋白水平显著降低（P<0.05）,p21、E-cadherin蛋白水平及miR-524-5p的表达水平显著升高（P<0.05）,且虫草素浓度组间的上述指标比较差异均有统计学意义（P<0.05）; miR-524-5p过表达可抑制HSC3细胞增殖、迁移及侵袭,而抑制miR-524-5p表达可减弱虫草素对HSC3细胞增殖、迁移及侵袭的作用。结论:虫草素可能通过上调miR-524-5p的表达从而抑制口腔鳞癌细胞增殖、迁移及侵袭。     

miR-139-5p低表达重组慢病毒的构建及其在H9c2细胞的表达验证

目的构建miR-139-5p低表达慢病毒载体,检测其在H9c2细胞的表达效果。方法根据大鼠miR-139-5p序列,设计合成其靶点序列,并合成寡核苷酸双链,克隆入慢病毒载体p GC-LV,与p Helper 1.0和p Helper 2.0共转染293T细胞,包装病毒。收取病毒上清液,纯化后感染H9c2细胞。荧光倒置显微镜下观察感染效率,实时定量PCR检测慢病毒感染后H9c2细胞中miR-139-5p的相对表达量。结果成功构建miR-139-5p低表达慢病毒载体,病毒感染H9c2细胞的效率超过95%,miR-139-5p表达明显减少。结论成功构建了miR-139-5p低表达慢病毒载体,包装的病毒可在H9c2细胞中实现抑制miR-139-5p表达的效果。     

柚皮苷通过上调miR-628-5p抑制宫颈癌ME-180细胞增殖和周期进展

目的 探讨柚皮苷影响宫颈癌ME-180细胞增殖和周期的机制。方法 将宫颈癌ME-180细胞分成宫颈癌ME-180细胞分成对照组（正常培养）、实验组(64μmol·L^-1的柚皮苷处理)、实验组+Anti-miR-NC组(64μmol·L^-1的柚皮苷+转染inhibitor control处理)、实验组+Anti-miR-628-5p组(64μmol·L^-1的柚皮苷+转染miR-628-5p inhibitor处理)。转染前将对数期的ME-180细胞浓度调整为每毫升5×10⁴个,接种于无菌细胞培养板,细胞融合度至75%～85%时,用0.5%胰蛋白酶消化,用Lipofectamine^?2000转染试剂将inhibitor control、miR-628-5p inhibitor转染进细胞。用实时定量反转录聚合酶链反应方法检测miR-628-5p表达;用噻唑蓝法测定各组细胞增殖活力;用碘化丙啶单染法检测周期;用Annexin V-FITC/PI双染法检测细胞凋亡;用蛋白质印迹法检测蛋白...     

吉马酮通过调控miR-297表达对H2O2诱导的小鼠海马神经元细胞凋亡和氧化应激的影响

摘要：目的:探讨吉马酮对H2O2诱导的小鼠海马神经元细胞凋亡和氧化应激的影响及分子机制。方法:分离培养小鼠海马神经元,将其分为对照组、H2O2组、H2O2+吉马酮低、中、高(50,100,200μmol·L-1)浓度组、H2O2+miR-NC组、H2O2+miR-297组、H2O2+吉马酮(200μmol·L-1)+anti-miR-NC组、H2O2+吉马酮(200μmol·L-1)+anti-miR-297组。流式细胞术检测细胞凋亡;蛋白质印迹（Western blot）法检测B细胞淋巴瘤/白血病-2（Bcl-2）、Bcl-2相关X（Bax）蛋白表达;丙二醛（MDA）和超氧化物歧化酶（SOD）试剂盒分别检测MDA含量和SOD活性;实时荧光定量PCR（RT-qPCR）检测miR-297表达水平。结果:吉马酮低、中、高浓度处理后,H2O2诱导的小鼠海马神经元中细胞凋亡率、Bax表达水平和MDA含量降低,Bcl-2表达水平、SOD活性和miR-297表达水平升高,且呈浓度依赖性（P<0.05）。miR-297过表达可降低H2O2诱导的海马神经元细胞凋亡率和MDA含量,提高SOD活性（P<0.05）。抑制miR-297表达逆转了吉马酮对H2O2诱导的海马神经元细胞凋亡和氧化应激的作用。结论:吉马酮可能通过上调miR-297表达抑制H2O2诱导的小鼠海马神经元细胞凋亡和氧化应激。     

氧化苦参碱通过胰腺星状细胞中miRNA-211-5p调节TLR4/NF-κB通路调控炎性反应

目的 探讨氧化苦参碱（OM）是否通过胰腺星状细胞株（LTC-14）中miR-211-5p调节TLR4/NF-κB通路调控炎性反应。方法 用生物预测、文献分析筛选出目的miR;脂多糖（LPS）刺激LTC-14细胞制备炎症模型,通过实时荧光定量PCR（qRT-PCR）法检测miR的变化以及OM对其的调节作用;通过转染mimics和inhibitor来过表达和低表达目的miR后,以Western Blotting法、实时荧光定量PCR（qRT-PCR）法检测LTC-14细胞中TLR4/NF-κB信号通路相关分子（TLR4、MyD88、NF-κB）的表达情况,ELISA法检测细胞上清中炎性因子TNF-α的表达情况。结果 经生物信息学预测筛选出的目的miR为miR-211-5p;与对照组比较,LPS刺激LTC-14细胞后miR-211-5p表达明显下降（P<0.001）;与模型组比较,经OM干预后miR-211-5p表达显著上升（P<0.001）。过表达miR-211-5p后,TLR4、MyD88、NF-κB的mRNA和蛋白水平,以及炎性因子TNF-α表达显著下降（P<0.05、0.01、0.001）;低表达miR-211-5p后,TLR4、MyD88、NF-κB的mRNA和蛋白水平,以及炎性因子TNF-α表达上升（P<0.05、0.01、0.001）。结论 PSCs中的miR-211-5p通过调节TLR4/NF-κB信号通路调节炎症反应,OM可以调节炎症模型中miR-211-5p的表达,OM调节炎症反应的作用机制可能是通过miR-211-5p调节TLR4/NF-κB信号通路实现的。     

基于miR-138-5p/E2F3信号通路探讨柠檬苦素对人非小细胞肺癌H1299细胞生物学行为的影响

摘要：目的:基于微小RNA-138-5p（miR-138-5p）/E2F转录因子3（E2F3）信号通路探讨柠檬苦素对人非小细胞肺癌H1299细胞生物学行为的影响。方法:设H1299细胞组、氟尿嘧啶组(25μg·ml-1)、柠檬苦素低、高剂量组(40,80μg·ml-1),以上各组每孔设6个平行样,培养72 h。培养结束后,四甲基偶氮唑蓝（MTT）法测定细胞活力,结晶紫染色测定单克隆形成数目,Transwell小室测定细胞侵袭迁移水平,流式细胞仪测定细胞凋亡率,实时荧光定量PCR（qRT-PCR）及蛋白免疫印迹（Westernblot）法测定细胞miR-138-5p、E2F3 mRNA及蛋白水平。结果:与H1299细胞组比较,氟尿嘧啶组、柠檬苦素低、高剂量组光密度（OD）值、细胞存活率、克隆形成数目、穿膜数目、E2F3 mRNA和蛋白表达水平显著降低,凋亡率、miR-138-5p表达水平显著升高（P<0.05）。与氟尿嘧啶组比较,柠檬苦素低剂量组OD值、细胞存活率、克隆形成数目、穿膜数目、E2F3 mRNA和蛋白表达水平显著升高,凋亡率、miR-138-5p表达水平显著降低（P<0.05）;柠檬苦素高剂量组OD值、细胞存活率、克隆形成数目、穿膜数目、E2F3 mRNA和蛋白表达显著降低,凋亡率、miR-138-5p表达水平显著升高（P<0.05）。柠檬苦素高、低剂量组间各指标差异有统计学意义（P<0.05）。结论:柠檬苦素能抑制人非小细胞肺癌H1299细胞增殖、侵袭迁移,促进非小细胞肺癌H1299细胞凋亡;其机制可能与柠檬苦素通过促进H1299细胞miR-138-5p表达,抑制E2F3 mRNA和蛋白表达,进而抑制miR-138-5p/E2F3通路的激活有关。     

芒柄花黄素通过circ0020123/miR-145对胰腺癌细胞增殖迁移侵袭的影响

摘要：目的:探讨芒柄花黄素对胰腺癌细胞的影响及分子机制。方法:将胰腺癌细胞SW1990分为对照组、芒柄花黄素低、中、高剂量组(10,30,100μmol·L-1)、si-circ0020123组、si-NC组、芒柄花黄素(100μmol·L-1)+pcDNA-circ0020123组、芒柄花黄素(100μmol·L-1)+pcDNA组;蛋白质印迹（Western blot）法检测蛋白表达;四甲基偶氮唑盐比色法（MTT）检测细胞增殖抑制率;克隆形成实验检测集落形成数;划痕实验检测细胞划痕愈合率;Transwell检测侵袭细胞数;实时荧光定量PCR（RT-qPCR）检测circ0020123和miR-145的表达水平;双荧光素酶报告实验检测circ0020123和miR-145的靶向关系。结果:不同剂量芒柄花黄素处理后,胰腺癌SW1990细胞的增殖抑制率、E-钙黏蛋白（E-cadherin）及miR-145表达水平升高,集落形成数和侵袭细胞数减少,细胞划痕愈合率、N-钙黏蛋白（N-cadherin）及circ0020123表达水平降低（P<0.05）。干扰circ0020123表达后,细胞增殖抑制率、E-cadherin及miR-145表达水平升高,集落形成数和侵袭细胞数减少,细胞划痕愈合率、N-cadherin及circ0020123表达水平降低（P<0.05）。circ0020123过表达可减弱芒柄花黄素对SW1990增殖迁移侵袭的抑制作用。circ0020123靶向调控miR-145。结论:芒柄花黄素通过调控circ0020123/miR-145抑制胰腺癌细胞的增殖与转移。     

胞外信号调节激酶1/2通路在阿霉素引起的心肌细胞损伤中的作用

目的探讨胞外信号调节激酶1/2(ERK 1/2)通路在阿霉素(doxorubicin,DOX)引起的心肌细胞损伤中的作用。方法应用DOX处理H9c2心肌细胞建立细胞损伤的体外模型,在DOX处理前应用ERK 1/2抑制剂PD98059抑制ERK 1/2的活化;检测细胞存活率、ERK 1/2的活化、胞内活性氧(ROS)水平、线粒体膜电位(MMP)以及胱硫醚γ-裂解酶(CSE,为内源性硫化氢的合成酶)的表达。结果 5μmol·L-1DOX处理H9c2心肌细胞1～6 h,呈时间依赖性地促进ERK1/2的活化;5μmol·L-1DOX对心肌细胞具有明显的损伤作用,表现为细胞存活率下降、ROS水平升高、MMP丢失及CSE表达降低;在DOX处理H9c2心肌细胞前30min,应用ERK1/2抑制剂10μmol·L-1PD-98059预处理能明显拮抗DOX对心肌细胞的损伤作用,使ROS水平降低,细胞存活率MMP和CSE表达水平均升高。结论 ERK1/2通路参与DOX对H9c2心肌细胞的损伤作用。     

藁本内酯通过调控miR-133b-5p表达对脂多糖所致心肌损伤的保护作用

目的： 探讨藁本内酯（LIG）对脂多糖（LPS）所致心肌损伤的影响及分子机制。方法： 用质量浓度为10 mg·L^-1的LPS处理心肌细胞,记为LPS组,正常培养的细胞为对照（Con）组;用浓度分别为10,20,40 μmol·L^-1的藁本内酯处理心肌细胞后再用10 mg·L^-1的LPS处理,作为藁本内酯低、中、高浓度组;将miR-NC、miR-133b-5p转染至心肌细胞中再用10 mg·L^-1的LPS处理,记为LPS+miR-NC组、LPS+miR-133b-5p组;将anti-miR-NC、anti-miR-133b-5p转染至心肌细胞中再用40 μmol·L^-1的藁本内酯、10 mg·L^-1的LPS处理,记为LPS+LIG+anti-miR-NC组、LPS+LIG+anti-miR-133b-5p组。酶联免疫吸附法（ELISA）法检测肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白细胞介素-6（IL-6）水平;流式细胞术检测细胞凋亡;蛋白质印迹（Western blot）法检测B细胞淋巴瘤/白血病-2（Bcl-2）、Bcl-2相关X蛋白（Bax）蛋白表达;实时荧光定量PCR （RT-qPCR）检测miR-133b-5p表达水平。结果： 藁本内酯低、中、高浓度处理后,LPS诱导的心肌细胞中TNF-α、IL-6水平显著降低,细胞凋亡率显著降低,Bcl-2表达水平显著升高,Bax表达水平显著降低,miR-133b-5p表达水平显著升高,且呈浓度依赖性（P<0.05）。miR-133b-5p过表达可抑制LPS诱导的心肌细胞中TNF-α、IL-6水平和细胞凋亡。抑制miR-133b-5p表达逆转了藁本内酯对LPS所致的心肌细胞损伤的保护作用。结论： 藁本内酯通过上调miR-133b-5p表达可抑制LPS诱导的心肌细胞凋亡和炎症反应,对LPS诱导的心肌损伤具有保护作用。     

5-氟尿嘧啶半乳糖神经酰胺脂质体的抗耐药作用及部分机制研究

目的研究5氟尿嘧啶半乳糖神经酰胺脂质体(5FuGCL)体外对耐5FuHepG2细胞株的抑制作用并对其抗耐药机制进行探讨。方法在建立耐5Fu的HepG2细胞株模型的基础上,采用MTT法检测5FuGCL对其的抑制作用。另外,通过高效液相法(HPLC)检测细胞内液的药物含量、免疫组化法检测胸苷酸合酶(TS)的表达、化学法检测NO含量等研究其抗耐药作用机制。结果5FuGCL(75,150,300,600,1200μmol·L-1)对耐5Fu的HepG2细胞株有明显的抑制作用,IC50为158.6μmol·L-1,远小于游离5Fu(400.9μmol·L-1);5FuGCL(300μmol·L-1)对耐5Fu的HepG2细胞的抑制作用随时间的延长而增强,其中(24～48h)的抑制作用明显强于相同浓度的游离5Fu。5FuGCL(300μmol·L-1)与相同浓度的游离5Fu比较,能明显增加药物进入HepG2细胞内液的程度;5FuGCL(75,300,1200μmol·L-1)既可明显降低TS的表达,又可显著增加NO的含量,且5FuGCL(300,1200μmol·L-1)与相同浓度的游离5Fu相比,其作用明显增强。结论5FuGCL有明显的抗5Fu耐药作用,这可能是通过增加细胞内液5Fu的含量,抑制TS的表达和增加NO含量实现的。     

miR-502增强肺癌对替莫唑胺化疗敏感性的机制研究

摘要：目的:探讨miR-502对替莫唑胺化疗敏感性的影响及其作用机制。方法:用200μmol·L-1的替莫唑胺处理细胞A549作为替莫唑胺组,不作任何处理的细胞作为对照（Con）组;将miR-NC、miR-502、anti-miR-NC、anti-miR-502质粒分别转染至A549细胞中,分别记为miR-NC组、miR-502组、anti-miR-NC组、anti-miR-502组; miR-502转染至A549细胞后再用200μmol·L-1的替莫唑胺处理作为替莫唑胺+miR-502组;将miR-502质粒分别与pcDNA 3.1、pcDNA 3.1-ERCC1共转染至A549细胞中再用200μmol·L-1的替莫唑胺处理,分别记为替莫唑胺+miR-502+pcDNA 3.1组、替莫唑胺+miR-502+pcDNA3.1-ERCC1组;转染均采用脂质体法。实时荧光定量PCR（RT-qPCR）检测miR-502表达水平;蛋白质印迹（Western Blot）法检测p21、细胞周期素D1（Cyclin D1）、B细胞淋巴瘤/白血病-2（Bcl-2）、Bcl-2相关X蛋白（Bax）、切除修复交叉互补基因1（ERCC1）表达;四甲基偶氮唑盐比色法（MTT）检测细胞活性;流式细胞术检测细胞凋亡;双荧光素酶报告实验检测miR-502和ERCC1的靶向关系。结果:与人胚肺成纤维细胞MRC5相比,肺癌细胞A549中miR-502表达水平显著降低。过表达miR-502、替莫唑胺处理以及替莫唑胺处理同时过表达miR-502,肺癌细胞A549中p21、Bax表达水平均显著升高,Cyclin D1、Bcl-2表达水平均显著降低,细胞活性均显著降低,细胞凋亡率均显著升高（P<0.05）。结论:过表达miR-502和替莫唑胺均可抑制细胞A549增殖,促进细胞凋亡,过表达miR-502可增强替莫唑胺对细胞A549增殖抑制和凋亡促进作用,其机制可能与ERCC1有关,将可为提高肺癌化疗效果提供新途径。     

羽扇豆醇调控miR-100-5p对非小细胞肺癌NCI-H1299细胞生物学行为的影响

目的 探讨羽扇豆醇调控miR-100-5p对非小细胞肺癌（NSCLC）NCI-H1299细胞增殖、迁移和侵袭的影响。方法 将体外培养的NCI-H1299细胞分为正常对照（NC）组（未处理）、低剂量组（12.5μmol/L羽扇豆醇）、中剂量组（25μmol/L羽扇豆醇）、高剂量组（50μmol/L羽扇豆醇）、miR-NC组（转染miR-NC）、miR-100-5p组（转染miR-100-5p）、anti-miR-NC+高剂量组（转染anti-miR-NC后用50μmol/L羽扇豆醇处理）、anti-miR-100-5p+高剂量组（转染anti-miR-100-5p后用50μmol/L羽扇豆醇处理）。CCK-8和克隆形成实验检测NCI-H1299细胞增殖;Transwell法检测NCI-H1299细胞迁移和侵袭。荧光定量PCR(q PCR)检测miR-100-5p表达;Western blot检测细胞周期蛋白D1(CyclinD1)、基质金属蛋白酶（MMP）2和MMP9蛋白的表达。结果 与NC组比较,低、中、高剂量组NCI-H1299细胞活力、细胞克隆数、迁移数、侵袭数、CyclinD1、...     

茶多酚通过miR-33a-5p/RUNX2介导人牙槽骨成骨细胞增殖和凋亡

摘要：目的:探讨茶多酚对人牙槽骨成骨细胞增殖和凋亡的影响及分子机制。方法:分离培养人牙槽骨成骨细胞,用含0.000 1～100μg·ml-1茶多酚的DMEM培养基培养人牙槽骨成骨细胞,记为不同浓度茶多酚处理组,用不含茶多酚的正常培养基培养的细胞作为对照组;将pcDNA3.1-NC、pcDNA3.1-RUNX2、anti-NC、anti-miR-33a-5p、mimics-NC、miR-33a-5p分别转染至人牙槽骨成骨细胞中,记为pcDNA3.1-NC组、pcDNA3.1-RUNX2组、anti-NC组、anti-miR-33a-5p组、mimics-NC组、miR-33a-5p组。细胞计数试剂盒8（CCK-8）检测细胞活力;流式细胞术检测细胞凋亡;蛋白质印迹（Western blot）法检测细胞增殖核抗原Ki67（Ki-67）、增殖细胞核抗原（PCNA）、B细胞淋巴瘤/白血病-2 （Bcl-2）、Bcl-2相关X蛋白（Bax）、runt相关转录因子2（RUNX2）蛋白表达;实时荧光定量PCR（RT-qPCR）检测miR-33a-5p和RUNX2 m RNA表达;荧光素酶报告实验检测miR-33a-5p对RUNX2的靶向调控。结果:各浓度茶多酚处理的人牙槽骨成骨细胞的细胞活力显著升高,凋亡率显著降低（P<0.05）,其中茶多酚浓度为1μg·ml-1处细胞活力和凋亡率达到极值;1μg·ml-1茶多酚处理的成骨细胞中Ki-67、PCNA、Bcl-2水平及RUNX2 m RNA和蛋白表达水平显著升高,Bax和miR-33a-5p水平显著降低（P<0.05）。过表达RUNX2或抑制miR-33a-5p表达,细胞活力及Ki-67、PCNA、Bcl-2水平显著升高,细胞凋亡率和Bax水平显著降低（P<0.05）。miR-33a-5p靶向负调控RUNX2。结论:茶多酚可能通过miR-33a-5p/RUNX2轴促进人牙槽骨成骨细胞增殖,抑制细胞凋亡。     

右美托咪定调控miR-219a-5p/CACUL1通路抑制子宫内膜癌细胞增殖、迁移和侵袭的机制研究

摘要：目的:探讨右美托咪定对子宫内膜癌细胞的增殖、迁移和侵袭的影响和机制。方法:采用不同浓度(5,10,20,40μmol·L-1)的右美托咪定处理子宫内膜癌细胞Ishikawa,细胞计数试剂盒（CCK-8）检测细胞存活率,Transwell法检测细胞迁移和侵袭能力,并确定用药浓度。实时定量PCR（RT-qPCR）和蛋白质印迹法（Western blot）检测右美托咪定对Ishikawa细胞miR-219a-5p和细胞周期素依赖激酶2相关性Culin结构域1（CACUL1）表达的影响。采用上述方法检测抑制miR-219a-5p表达或过表达CACUL1对右美托咪定处理的Ishikawa细胞增殖、迁移和侵袭的影响。双荧光素酶报告基因实验和Western blot验证miR-219a-5p和CACUL1的靶向调控关系。结果:右美托咪定可抑制Ishikawa细胞增殖活力和迁移侵袭能力（P<0.05）,且呈剂量依赖性。右美托咪定处理可促进miR-219a-5p表达,抑制CACUL1表达（P<0.05）。抑制miR-219a-5p表达或过表达CACUL1可逆转右美托咪定对Ishikawa细胞的增殖、迁移和侵袭的影响（P<0.05）。CACUL1是miR-219a-5p的靶基因,miR-219a-5p负性调控CACUL1表达。结论:右美托咪定通过调节miR-219a-5p/CACUL1轴抑制子宫内膜癌细胞的增殖、迁移和侵袭。     

冬凌草乙素联合放疗对肺癌A549细胞凋亡的协同作用及miR-16-5p/WEE1信号轴的影响

摘要：目的:探讨冬凌草乙素联合放疗对肺癌A549细胞凋亡的协同作用及微小RNA-16-5p（miR-16-5p）/丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶1（WEE1）信号轴的影响。方法:设A549细胞组、放疗组(6 Gy·min-1的固定剂量率发射,照射孵育24 h)、冬凌草乙素组(20 mg·L-1)、放疗+冬凌草乙素组(冬凌草乙素浓度为20 mg·L-1,并以6 Gy·min-1的固定剂量率发射,照射孵育24 h);培养结束后,CCK-8法测定细胞增殖水平,Transwell腔室系统测定细胞侵袭水平,流式细胞仪测定细胞凋亡水平,实时荧光逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）及蛋白免疫印迹法测定细胞miR-16-5p、WEE1 mRNA和蛋白水平。结果:与A549细胞组比较,放疗组、冬凌草乙素组、放疗+冬凌草乙素组光密度（OD）值、存活率、穿膜数、WEE1 mRNA和蛋白表达显著降低（P<0.05）,凋亡率、miR-16-5p表达显著升高（P<0.05）;与放疗组、冬凌草乙素组比较,放疗+冬凌草乙素组OD值、存活率、穿膜数、WEE1 mRNA和蛋白表达显著降低（P<0.05）,凋亡率、miR-16-5p表达显著升高（P<0.05）。结论:冬凌草乙素联合放疗对肺癌A549细胞凋亡具有协同作用,其机制可能与冬凌草乙素促进miR-16-5p的表达进而抑制WEE1表达有关。