5-氟脲嘧啶预防重症急性胰腺炎早期肾损伤的免疫机制研究

目的探讨5-氟脲嘧啶(5-Fu)和奥曲肽(Oct)防治重症急性胰腺炎(SAP)肾损伤的免疫机制。方法逆行胰胆管注射牛黄胆酸建立大鼠SAP模型,随机分成生理盐水组(n=17),成模后静滴生理盐水;5-Fu组(n=20),5-Fu2mg/h持续静滴12h;奥曲肽组(n=18),Oct首剂2μg/100g,继以0.2μg/(100g·h)持续静滴12h,另设假手术组(n=10)。ELISA法检测4组大鼠成模后6h和12h血清TNF-α等系列细胞因子表达变化,TUNEL法检测大鼠肾组织凋亡率,RT-PCR法测定肾组织TNF-αmRNA表达。体外培养大鼠正常肾NRK细胞,用上述4组SAP大鼠血清分别置换培养液中小牛血清,流式细胞术检测处理后细胞凋亡率。结果5-Fu组和奥曲肽组血清TNF-α、IL-1和TXB2较生理盐水组均明显降低(P均<0.05),奥曲肽组PGE2水平明显升高(P<0.05)。5-Fu组和奥曲肽组肾组织凋亡率分别为(5.8±3.1)%和(4.6±3.1)%,显著低于生理盐水组(12.3±5.6)%(P<0.05),且两组TNF-αmRNA表达明显下降。生理盐水组、奥曲肽组、5-Fu组和假手术组大鼠血清处理后NRK细胞凋亡指数分别为(38.67±11.4)%、(20.4±18.4)%、(10.5±11.0)%和(1.7±2.2)%。生理盐水组与奥曲肽和5-Fu组差异有统计学意义(P<0.05)。结论5-Fu可通过降低血清炎性介质和细胞因子,减少肾细胞凋亡防治SAP急性肾损伤。     

TNF-α介导重症急性胰腺炎肾上腺细胞的凋亡

目的观察肿瘤坏死因子-α(TNF-α)在重症急性胰腺炎(SAP)肾上腺细胞凋亡中的作用。方法采用随机数字表法将40只雄性Wistar大鼠随机分为假手术组(SO组)和SAP组,SAP组又再分为3、6、12及24 h4个亚组,每组8只大鼠。采用5%牛黄胆酸钠(0.1 m L/100 g)逆行胆胰管注射法建立SAP大鼠模型,测定各组大鼠血清淀粉酶及脂肪酶水平,观察胰腺和肾上腺组织的病理学改变,并进行评分;用TUNEL法检测肾上腺细胞凋亡情况,并比较各组大鼠的凋亡指数;采用Western blot法检测肾上腺组织中TNF-α及Caspase-3蛋白的表达。结果造模术后各时间点SAP组大鼠血清淀粉酶和脂肪酶水平以及胰腺组织和肾上腺组织的病理学评分均较SO组显著升高(P0.05);随病程延长,SAP组大鼠肾上腺细胞凋亡指数也进行性升高,并均高于SO组(P0.05);SAP组大鼠肾上腺组织中TNF-α和Caspase-3蛋白的相对表达量也逐渐增高,24 h时略有下降,但均高于SO组(P0.05)。结论 TNF-α可能参与了SAP时的肾上腺损伤,可能通过激活Caspase-3在SAP肾上腺细胞凋亡中发挥重要作用。     

大黄素对大鼠重症胰腺炎TNFα、IL-6及胰腺腺泡细胞凋亡的影响

目的 :探讨大黄素治疗重症急性胰腺炎 (SAP)的作用机理。 方法 :用胰胆管内逆行注射去氧胆酸钠法制作大鼠SAP模型 ,随机分为对照组、SAP组、大黄素治疗组 ,动态测定术后 0h、6h、12h各组血清TNFα及IL - 6浓度 ,并取胰组织作病理学检查 ,同时应用TUNEL技术分析大鼠胰腺腺泡细胞凋亡的变化。 结果 :发现大黄素给药后 6h及 12h时血清TNFα、IL - 6水平明显降低 ,腹水量减少 ,胰组织病变程度改善 ;术后 6hSAP组胰腺腺泡细胞凋亡指数为 (3 92± 0 94 ) ,大黄素治疗组为(2 6 5 0± 6 72 ) ,两组比较 ,P <0 0 5。 结论 :大黄素可明显抑制大鼠胰酶及TNFα、IL - 6的释放 ,并且诱导已受损的不可恢复的腺泡细胞凋亡 ,从而改善大鼠重症胰腺炎的病情发展。     

地塞米松治疗急性坏死性胰腺炎的实验研究

目的探讨地塞米松治疗急性坏死性胰腺炎(ANP)的机理.方法经胰胆管逆行注射牛磺胆酸钠法诱导SD大鼠ANP,治疗组(n=24)模型诱导30 min后注射地塞米松0.2 mg/100 g鼠重,对照组(n=24)注射等量生理盐水,两组分别于4 h和12 h各处死8只鼠测血清肿瘤坏死因子α(TNFα)、淀粉酶,并行胰腺坏死程度评分、检测胰腺腺胞细胞凋亡,余下8只鼠作生存期观察.结果治疗组4 h、12 h TNFα分别为(17.8±2.7) pg/ml和(8.5±1.6) pg/ml,胰腺腺胞细胞凋亡指数分别为(36.94±4.12)%和(32.79±3.31)%,生存时间为(33.4±21.5) h; 对照组上述各项指标依次为(53.6±18.7) pg/ml和(37.2±11.1) pg/ml (P<0.01)、(4.37±1.24)%和(5.12±2.11)%(P<0.01)及(14.6±5.7) h (P<0.01),两组胰腺坏死程度评分差异有显著性意义(P<0.01).结论地塞米松能通过抑制TNFα调控细胞凋亡,细胞凋亡对胰腺具有保护作用.     

重症急性胰腺炎大鼠肝脏毛细血管渗漏的发生机理

目的探讨重症急性胰腺炎(SAP)大鼠肝脏毛细血管渗漏的发生机理。方法 40只SD大鼠采用完全随机法随机分为假手术(sham operation,SO)组和SAP组,SAP按不同的取材时间又分为3、6、12及24 h 4个亚组,每组8只。以胰胆管逆行注射5%牛磺胆酸钠建立SAP模型,观察各组肝脏组织病理改变,检测血清肿瘤坏死因子(TNF)-α水平,干湿重法检测肝脏组织含水率,免疫组织化学方法检测肝脏组织中occludin蛋白表达水平,RT-PCR法检测肝脏组织中occludin mRNA表达水平。结果 SO组肝脏组织病理无明显改变;SAP组肝脏组织表现为典型SAP病理改变,包括血管扩张明显、组织疏松水肿、炎性细胞浸润。SAP组各时相TNF-α水平、肝脏组织含水率逐渐升高,在观察时间范围内,24 h时均达最高,TNF-α水平、肝脏组织含水率在SAP组不同时相比较差异均有统计学意义(P<0.05),且SAP组不同时相均明显高于SO组(P<0.05)。SAP组3 h时occludin蛋白和mRNA水平均开始降低,6 h时达最低值,12 h和24 h时较6 h时明显升高(P<0.05),但仍均低于SO组(P<0.05)。结论 SAP大鼠肝脏发生严重的毛细血管渗漏,可能与SAP时TNF-α表达上调,导致紧密连接蛋白occludin及其mRNA表达下调有关。     

TNF-α抑制剂对重症急性胰腺炎大鼠肾损伤的影响

目的：探讨肿瘤坏死因子α（TNF-α）抑制剂对重症急性胰腺炎（SAP）大鼠肾损伤的影响。方法：60只SD大鼠随机分成假手术组,SAP组,TNF-α抑制剂治疗组,每组20只。各组建模48 h后处死动物并收集标本,测血清淀粉酶,TNF-α,尿素氮和肌酐;应用TUNEL法检测肾细胞凋亡,计算凋亡指数（AI）;并用免疫组化法检测肾脏组织NF-κB的表达,RT-PCR检测ET-1 mRNA的表达。结果：假手术组的各项指标均低于SAP组和治疗组（P＜0.05）。SAP组TNF-α,血清淀粉酶,尿素氮,肌酐和NF-κB IOD水平分别为（185.36±10.95）ng/L,（7 257.30±361.20）U/L,（17.28±0.87）mmol/L,（78.83±3.02）μmol/L和316.25±20.90,治疗组以上指标分别为（124.32±15.11）ng/L,（6182.60±291.63）U/L,（13.66±0.88）mmol/L,（68.68±3.38）μmol/L和241.90±19.04,两组间比较差异有统计学意义（P＜0.05）。SAP组AI为3.33±0.49,明显低于治疗组的7.04±0.41（P＜0.05）。SAP组中ET-1 mRNA水平明显高于治疗组和假手术组（P＜0.05）。结论：TNF-α抑制剂可促进大鼠肾脏细胞凋亡,减轻炎症反应对肾的损伤,改善肾脏功能。     

白细胞介素10对重症急性胰腺炎大鼠肾功能的保护作用

目的探讨白细胞介素10(IL-10)对重症急性胰腺炎(SAP)大鼠肾功能障碍的保护作用。方法将SD大鼠54只随机分为3组,假手术组(SO)、SAP组、SAP加IL-10治疗组(SAP IL- 10),以5%牛磺脱氧胆酸钠逆行胰胆管注射建立SAP模型,观察各组术后12、24 h血清淀粉酶,肿瘤坏死因子α(TNF-a)、1L-6、尿素氮(BUN)、肌酐(Cr)水平,以及腹水量、胰腺和肾脏的病理改变,逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)分析肾脏细胞间黏附分子1(ICAM一1)mRNA表达水平。结果SAP组制模后血清TNF-α、IL-6水平明显上升,肾脏ICAM-1 mRNA表达上调(P<0.01),BUN、Cr在12、24 h持续升高。与SAP组比较,SAP IL-10组血清TNF-α、IL-6、BUN、Cr水平明显下降,ICAM-1 mRNA表达下调(P<0.01),肾脏病理改变得到改善。结论IL-10可抑制TNF-α、IL-6血清水平,下调肾脏ICAM-1基因表达,改善SAP肾功能障碍。     

辛伐他汀对大鼠肾缺血再灌注损伤中Wnt/JNK影响的研究

目的:探讨辛伐他汀(simvastatin SIM)对大鼠肾缺血再灌注损伤中Wnt/JNK的影响。方法:雄性wistar大鼠36只随机分为:假手术组、手术组、SIM干预组,每组12只,再将每组按取材时间不同分为6 h、48 h两个时相组。手术方法:假手术组开腹分离双侧肾动脉,但不夹闭,后关闭腹腔;手术组游离双侧肾动脉,动脉夹夹闭45 min后恢复灌注建立肾IRI模型;SIM干预组术前1周给大鼠灌胃SIM 20 mg.kg-1.d-1,其余处理同手术组。肾IRI后6 h、48 h,检测血清Scr值,肾组织行病理学观察及免疫组织化学法测定Wnt4、JNK1及其信号通路下游炎症因子TNFα的表达,并采用real time PCR法测定肾组织Wnt4 mRNA、JNK1 mRNA的表达。结果:肾组织病理学观察:假手术组肾组织形态结构基本正常;手术组肾小管上皮细胞有不同程度的肿胀、坏死和脱落、排列紊乱,管腔扩张,肾间质水肿、炎细胞浸润明显,以IRI后6 h为著;SIM干预组肾组织损伤程度较手术组明显减轻。Scr值测定:手术组Scr值较假手术组明显升高(P<0.01);SIM干预组Scr值较手术组有所下降(P<0.01);以IRI后6 h,Scr值较高(P<0.01)。免疫组化检测:假手术组肾小管上皮细胞Wnt4、JNK1、TNFα表达较弱;手术组IRI后肾小管上皮细胞胞浆内Wnt4、JNK1、TNFα表达均比假手术组增强(P<0.01),以6 h时为著(P<0.01)。SIM干预组Wnt4、JNK1、TNFα表达水平较手术组减弱(P<0.05)。real time PCR检测:假手术组肾小管上皮细胞Wnt4 mRNA、JNK1 mRNA表达较弱;手术组肾小管上皮细胞Wnt4 mRNA、JNK1 mRNA表达均较假手术组增强(P<0.01),以6 h为著(P<0.01);SIM干预组Wnt4 mRNA、JNK1 mRNA表达比手术组均有所下降(P<0.01)。相关性分析:JNK1与Wnt4、TNFα均成正相关(rs=0.94,rs=0.95);Wnt4 mRNA、JNK1 mRNA成正相关(rs=0.75);且均与Scr成正相关(rs分别为rs=0.93,rs=0.96,rs=0.94,rs=0.70,rs=0.35)。结论:辛伐他汀预处理可能通过抑制Wnt/JNK信号通路的表达,从而减轻肾IRI程度。     

姜黄素对大鼠重症急性胰腺炎防治作用及其机制

目的:探讨姜黄素对重症急性胰腺炎(SAP)的防治作用及其机制。方法:将54只SD大鼠随机均分为:假手术组,SAP模型组(SAP组),姜黄素预处理+SAP组(姜黄素预处理组)。用5%牛磺胆酸钠胰胆管逆行注射法制作SAP模型,分别于术后3,6,12 h测各组腹水量和以下各项观察指标:血清淀粉酶(AMY),IL-6,TNF-α水水平;胰腺的病理学损伤和评分和胰腺组织NF-κB p65和Toll样受体4(TLR4)的表达。结果:与假手术组比较,SAP组和姜黄素预处理组的腹水量、血清AMY,IL-6,TNF-α水平在各时间点均明显升高(均P<0.01),但姜黄素预处理组的以上各项指标的升高程度均不如SAP组明显,特别是在6 h和12 h时间点,两者间差异均有统计学意义(均P<0.05);除假手术组外,SAP组和姜黄素预处理组均呈典型SAP病理改变,但姜黄素预处理组各时间点的病理改变均较SAP组为轻,且姜黄素预处理组Schmidt评分在6 h和12 h时间点明显低于SAP组(均P<0.05);SAP组和姜黄素预处理组各时间点胰腺组织NF-κB p65和TLR4蛋白表达均较假手术组明显增加,但姜黄素预处理组两者的表达低于SAP组。结论:姜黄素对SAP有防治作用,其作用机制可能是其抑制NF-κB及TLR4信号通路的激活,缓解胰腺炎症,从而减轻SAP的病理损伤。     

甘草甜素治疗重症急性胰腺炎的实验研究

目的:探讨甘草甜素对大鼠重症急性胰腺炎(SAP)疗效。方法:将大鼠随机均分为假手术组,SAP组,SAP+甘草甜素治疗组(治疗组),以5%牛磺胆酸钠胰胆管逆行注射制作大鼠SAP模型。比较各组术后的生存时间,术后不同时间点血淀粉酶及血清TNF-α,IL-1β,IL-6的水平及胰腺组织病理学评分。结果:假手术组大鼠在观察时间内无死亡,SAP组和治疗组大鼠术后的平均生存时间分别为(28.50±17.82)h和(41.50±17.59)h,两者差异有统计学意义(P<0.05);与假手术组比较,SAP组和治疗组各时间点血清TNF-α,IL-1β,IL-6水平均明显升高(均P<0.05),但治疗组上述指标升高程度均明显低于SAP组(均P<0.05);除假手术组外,SAP组和治疗组胰腺组织均呈现出不同程度的SAP病理改变,但治疗组病理改变明显较轻,各时间点组织学评分也明显低于SAP组(均P<0.05)。结论:甘草甜素治疗大鼠重症急性胰腺炎有一定的疗效。