PTEN基因诱导人脑胶质瘤SHG-44细胞凋亡及bcl-2蛋白表达下调

目的　探讨PTEN基因对人脑胶质瘤SHG 44细胞凋亡及凋亡相关基因bcl 2表达的影响 ,阐明PTEN基因抑制肿瘤细胞增殖的机理。方法　PTEN基因体外转染SHG 44细胞 ,筛选阳性细胞克隆 ,以原位杂交、免疫组化方法检测PTEN基因的表达情况采用透射电镜、流式细胞仪和核DNA琼脂糖凝胶电泳检测细胞的凋亡情况以免疫荧光法检测bcl 2基因的表达。结果　PTEN基因转染的SHG 44细胞有PTEN基因和蛋白的表达。透射电镜下可见转染PTEN基因后细胞核染色质浓缩边集、胞浆浓缩、核碎裂及凋亡小体形成等典型的凋亡表现 ;流式细胞仪示细胞周期从G1 期到S期发生抑制 ,并且在G1 期峰前出现一明显的凋亡峰 (1 2 .9% ) ;细胞核DNA琼脂糖凝胶电泳呈现凋亡细胞特有的梯状条带 ;bcl 2的表达也显著下调。转染空载体和未转染的SHG 44细胞无明显的凋亡表现。结论　PTEN基因可诱导SHG 44细胞凋亡 ,并下调bcl 2蛋白的表达 ,这可能是PTEN基因抑制肿瘤细胞增殖的分子机制之一     

PTEN在人脑胶质瘤细胞中的表达及其对细胞增殖的影响

背景与目的:PTEN基因的缺失及突变与多种肿瘤有关,而脑胶质瘤是与PTEN基因变异关系最为密切的恶性肿瘤之一.本研究旨在观察PTEN基因对人脑胶质瘤细胞生物学特性的影响,为PTEN用于胶质瘤基因治疗提供科学的实验依据.方法:(1)应用RT-PCR方法扩增人脑胶质瘤细胞U251、SHG-44中PTEN基因,序列测定分析.(2)采用阳离子聚合物转染试剂,将携带野生型PTEN基因的重组真核表达载体质粒转染至胶质瘤细胞,G418筛选出稳定转染的细胞并扩增培养.通过细胞形态学、细胞生长曲线观察PTEN基因表达对细胞形态和增殖的影响,应用Western blot、免疫细胞化学法检测相关蛋白的表达.结果:(1)胶质瘤细胞U251和SHG-44的PTEN mRNA分别存在着突变型、缺失型两种表达方式.(2)稳定转染的U251和SHG-44细胞株的生长曲线显示细胞增殖明显受抑制,第7天细胞计数分别为未转染对照组细胞数的39.1%、27.8%;Westem blot显示稳定转染细胞株有外源性PTEN蛋白的表达;细胞免疫化学法显示胶质纤维酸性蛋白(glial fibrillary acidic protein,GFAP)表达量增加,从而表现出对细胞形态影响的差异,稳定转染的U251细胞出现向星形细胞分化的特征,SHG-44细胞形态转染前后无明显改变.结论:恢复野生型PTEN基因表达对胶质瘤细胞存在差异性的诱导分化作用.     

PTEN蛋白表达与子宫内膜癌的相关性研究

目的:探讨子宫内膜癌中抑癌基因PTEN的表达,及其与子宫内膜癌临床病理特征及预后的关系.方法:采用免疫组化检测16例正常子宫内膜、32例子宫内膜癌组织中PTEN蛋白的表达,分析其与临床病理的相关性.结果:抑癌基因PTEN在子宫内膜癌组中蛋白阳性表达显著低于正常子宫内膜组(P<0.01).PTEN阳性表达的缺失与组织学分级与肌层浸润深度有关(P<0.05).结论:PTEN基因突变及蛋白表达缺失与子宫内膜癌的发生有关,与子宫内膜癌的分化程度、肌层浸润深度有相关性.     

PTEN基因增强卵巢癌A2780细胞对紫杉醇敏感性的研究

背景与目的:近来的研究表明PTEN基因(phosphatase and tensin homology deleted on chromosome ten,第10号染色体上磷酸酶和张力蛋白同源缺失的基因)失活在肿瘤化疗耐药发挥了重要作用。本文研究外源性PTEN基因稳定转染人卵巢癌A2780细胞后对紫杉醇敏感性的影响。方法:将野生型PTEN基因真核表达质粒在脂质体介导下转染人卵巢癌A2780细胞,同时以转染空载体和未转染细胞作为对照(3组细胞分别命名为WT-PTEN/A2780,GFP/A2780和A2780),分别应用RT-PCR和蛋白印迹技术检测各组细胞PTEN mRNA转录和蛋白表达的变化;四甲基偶氮唑蓝实验观察转染PTEN基因对肿瘤细胞生长的抑制作用和A2780细胞对紫杉醇药物敏感性的影响,流式细胞仪(FACS)分析细胞凋亡情况。结果:与对照组相比,转染野生型PTEN基因能明显增加A2780细胞PTENmRNA转录和蛋白的表达,差异有显著性(P<0.05);MTT法显示,WT-PTEN/A2780细胞生长明显慢于GFP/A2780和A2780细胞;紫杉醇对WT-PTEN/A2780,GFP/A2780和A2780的IC50值分别为(7.6±0.40)nmol/l、(22.5±0.9)nmol/l和(22.7±0.8)nmol/l,WT-PTEN/A2780细胞对紫杉醇药物敏感性显著增加(P<0.05);FACS分析显示,紫杉醇作用24h后,WT-PTEN/A2780,GFP/A2780和A2780的凋亡率分别为(34.6±1.6)%、(13.5±0.9)%和(12.7±1.0)%,差异有显著性(P<0.05)。结论:转染野生型PTEN重组质粒能有效提高A2780细胞内PTEN的表达,诱导A2780细胞凋亡,显著增加A2780细胞对紫杉醇杀伤的敏感性。     

抑癌基因PTEN对肝癌细胞增殖的抑制及作用机制

目的探讨抑癌基因PTEN对肝癌细胞增殖和细胞周期的调控作用。方法构建野生型PTEN基因和突变型PTEN基因的真核表达载体pEGFP—WT—PTEN和pEGFP—PTEN;G129R。采用脂质体介导的基因转染法,分别将上述载体转染不表达PTEN蛋白的人肝细胞肝癌细胞系HHCC,经G418筛选,获得稳定表达PTEN蛋白的细胞克隆。以流式细胞仪测定细胞周期,以Western blot法分析稳定表达PTEN蛋白的肝癌细胞内源性的磷酸化AKT表达水平,同时与未进行基因转染和转染空载体pEGFP-C1的HHCC细胞进行对照。结果稳定表达野生型PTEN蛋白的肝癌细胞,细胞生长受到明显抑制,与转染空载体的HHCC细胞比较,G1期细胞比例显著增高,G2期和S期细胞比例显著降低,且差异有统计学意义（P〈0．05）;而转染突变型PTEN基因的HHCC细胞,与转染空载体的HHCC细胞比较,差异无统计学意义（P〉0.05）。与转染空载体的HHCC细胞比较,稳定表达野生型PTEN蛋白的HHCC细胞,其内源性磷酸化AKT水平明显减低;而转染突变型PTEN基因的HHCC细胞,其AKT水平无明显变化。结论野生型PTEN基因对肝癌细胞周期具有调控作用,而突变型PTEN基因丧失对肝癌细胞周期的调控作用;野生型PTEN基因可能通过降低AKT的活化而实现对肝癌细胞周期的调控。     

腺病毒介导PTEN基因对胶质瘤增殖与侵袭力的影响

脑胶质瘤为神经外科的常见病、多发病 ,约占颅内肿瘤的 45 % ,其主要治疗手段包括手术切除、化学治疗与放射治疗 ,其生存时间短、预后差 ,平均生存时间不足 1年 ,这与其具有高增殖性及高侵袭性有关。本实验应用腺病毒作为载体介导抑癌基因PTEN体外转染人脑胶质瘤细胞U87,检测其细胞增殖力与体外侵袭力的改变 ,进而探讨PTEN作为胶质瘤基因治疗靶点的可能性。分别用的Ad PTEN(实验病毒 )、Ad LacZ(对照病毒 )感染人胶质瘤细胞U87(病毒滴度为 5× 1 0 8pfu/ml,MOI为 5 0 ) ,同时用无病毒感染的U87作空白对照 ,首先用RT PCR检测PTE…     

外源型P14ARF基因对人脑胶质瘤细胞生长的影响

目的：研究Ｐ１４ＡＲＦ基因对人脑胶质瘤细胞株（Ｕ－２５１）生长的影响。方法：用脂质体介导携带Ｐ１４ＡＰＦ的真核表达载体转染Ｕ－２５１细胞,观察其对该细胞株的生长、增殖周期等生物学行为的影响。结果：导入Ｐ１４ＡＰＦ胶质瘤细胞Ｕ－２５１的生长有明显的抑制作用。     

人PTEN基因表达载体的构建及其在U251细胞中的表达

背景与目的:克隆人野生型和突变型PTEN的cDNA并构建其表达载体,探讨该表达质粒在人星形胶质瘤细胞U251中的表达情况.材料与方法:分别从新鲜胎盘组织和结肠癌组织中提取总RNA,采用RT-PCR的方法扩增人野生型和突变型PTEN基因全长cDNA,分别克隆入pMD 18-T载体上,经PCR、酶切鉴定均为阳性的克隆,进行核苷酸序列分析.再分别将两段基因定向克隆入pcDNA3.1( )载体中构建表达载体,转染入U251细胞.结果:成功克隆了人野生型及突变型PTEN cDNA并成功构建其表达载体,发现突变型PTEN蛋白对细胞生长无明显抑制作用,而野生型PTEN蛋白对细胞生长有明显抑制作用.结论:PTEN可能能抑制肿瘤细胞生长,为后进一步开展PTEN对肿瘤相关功能的研究奠定基础.     

乳腺癌细胞转染野生型PTEN质粒后转移能力的变化

 目的 研究抑癌基因PTEN对乳腺癌细胞转移的影响。方法 脂质体介导法将外源野生型抑癌基因PTEN转染入该基因缺陷的ZR-75-1乳腺癌细胞中，用嘌呤霉素筛选阳性克隆,Western- blot法检测PTEN蛋白表达；重组人工基底膜上检测黏附与侵袭能力。结果 转染后ZR-75-1乳腺癌细胞PTEN蛋白有明显表达；转染后ZR-75-1乳腺癌细胞侵袭抑制率与黏附抑制率分别达70.4 %和60.0 %。结论 PTEN基因对乳腺癌细胞转移具有一定的抑制作用；PTEN基因的缺失与否在一定程度上可以评价乳腺癌患者发生转移的危险程度。     

PTEN及其与前列腺癌关系的研究进展

抑癌基因PTEN是迄今为止人们发现的唯一具有双重特异性磷酸酶活性的基因,即脂质磷酸酶活性和蛋白磷酸酶活性。该基因的变异与人类多种肿瘤的发生发展及预后有关。本文就PTEN的研究进展及其与前列腺癌的关系进行了综述。1PTEN基因的概述1.1PTEN的发现1997年,Li等[1]采用代表性差     

PTEN基因蛋白在恶性黑素瘤中的表达及意义

目的探讨PTEN基因蛋白在恶性黑素瘤中的表达及其意义.方法采用免疫组化EnVision检测PTEN基因蛋白在51例恶性黑素瘤以及30例皮内痣组织中的表达情况.结果恶性黑素瘤组织中PTEN表达强度低,总体阳性率52.9%(27/51),其中Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ各期阳性率分别为59.4%(17/32)、38.5%(5/13)、33.3%(2/6);而皮内痣中PTEN均呈强阳性,表达阳性率为100%(30/30),二者差异具有显著性(P＜0.01).结论恶性黑素瘤的发生可能与PTEN基因蛋白的低表达有关,PTEN基因蛋白表达缺失或低下者更易发生远处转移,标记PTEN可作为判断黑素瘤预后的一项指标.     

子宫内膜癌组织中PTEN基因突变及蛋白表达的检测

背景与目的:肿瘤抑制基因———第10染色体同源丢失性磷酸酶-张力蛋白基因(phosphataseandtensinhomologdeletedonchromosometen,PTEN)被称为子宫内膜的看家基因。但有关PTEN基因在子宫内膜癌发生发展中的确切作用尚不清楚。本研究旨在检测子宫内膜癌组织中PTEN基因的突变及蛋白表达情况。方法:应用聚合酶链反应-单链构象多态性分析(polymerasechainreaction-singlestranconformationpolymorphism,PCR-SSCP)和DNA序列分析法,检测52例子宫内膜癌组织和10例正常子宫内膜组织中PTEN基因第5和第8外显子的突变;免疫组织化学法检测PTEN蛋白的表达,并结合临床病理特征进行分析。结果:子宫内膜癌组织的PTEN基因突变率和蛋白缺失率分别为25%和60%,高于正常子宫内膜组织(0%),差异有显著性(P<0.05)。病理学分级为G1、G2及肌层浸润深度<1/2的组织的PTEN基因突变率高于病理学分级为G3及肌层浸润深度≥1/2者,而病理学分级为G1、G2组织的PTEN蛋白表达缺失率低于病理学分级为G3者,差异有显著性(P<0.05)。PTEN基因突变率和蛋白表达缺失率在子宫内膜样腺癌和其它组织类型之间比较,差异有显著性(P<0.05),而在不同手术分期之间差异无显著性(P>0.05)。结论:PTEN基因突变和蛋白阳性表达常发生在病理学分级较低的子宫内膜癌病例     

建立人脑胶质瘤恶性进展相关基因表达谱

目的：建立人脑胶质瘤恶性进展相关基因表达谱。方法：用微阵列技术对同一胶质瘤患者初发(WHOⅡ级)、复发(WHOⅢ级)和再发(WHOⅣ级)的3次手术标本中基因差异表达情况进行检测,并以第3次手术时切取的正常脑组织作为对照。结果：全组共获取16363个数据。3份肿瘤标本中,表达差异≥3倍的基因共197条。将含正常脑组织在内的4份标本进行两两比较,表达差异≥3倍的基因共489条(上调193,下调296)。再将已知功能的109条基因按出现频率排列,由高到低依次为发育、代谢、分化、信号传导、DNA结合转录、细胞受体、免疫、DNA合成修复重组、离子通道运输、蛋白翻译合成、细胞骨架运动、应激、原癌和抑癌、细胞凋亡、细胞周期相关基因。结论：从处于恶性进展不同阶段的人脑胶质瘤手术标本中发现了197条表达差异≥3倍的基因,同时经生物信息学分析,发现17条候选新基因,它们在胶质瘤发生与发展的分子机制中起重要作用。     

Ad-PTEN体外对SGC-7901胃癌细胞生长的抑制作用

目的：探讨腺病毒介导的PTEN基因表达体外对SGC-7901胃癌细胞生长抑制作用及其分子机制。方法：将携有PTEN基因的复制缺陷型腺病毒载体（Ad-PTEN）感染SGC-7901胃癌细胞,用RT-PCR法检测Ad-PTEN在细胞中的表达,光学显微镜及荧光显微镜下观察Ad-PTEN感染细胞前后形态的变化,MTT法检测Ad-PTEN对SGC-7901胃癌细胞生长的抑制作用,用流式细胞术（FCM）检测SGC-7901胃癌细胞凋亡率。RT-PCR分析Bax、Bcl-2、p53、Survivin细胞凋亡相关基因的表达。结果：Ad-PTEN基因组感染SGC-7901胃癌细胞后,RT-PCR结果显示PTEN目的基因能在SGC-7901胃癌细胞中转录,其表达可明显抑制该胃癌细胞的生长,并诱导细胞凋亡。其凋亡机制可能与Bax/Bcl-2比值、p53基因表达上调、Survivin下调有关。结论：重组腺病毒Ad-PTEN具有抑制SGC-7901胃癌细胞生长和诱导细胞凋亡的作用。     

肿瘤抑癌基因PTEN在胃癌中的研究进展

 Pten是迄今发现的第一个具有双特异性磷酸酶活性（脂质磷酸酶、蛋白磷酸酶）的抑癌基因,它主要通过调整细胞周期及信号转导途径来发挥作用。PTEN蛋白在胃癌发生发展不同阶段表达呈进行性下调或缺失,提示PTEN基因的异常改变参与胃粘膜细胞的恶性转化过程,PTEN蛋白表达水平可作为评价胃癌病理生物学行为的客观指标之一。     

p16基因的不同转染方法对脑胶质瘤细胞的不同作用

目的：探讨Ｐ１６基因在脑胶质瘤发生发展过程中的作用。方法：分别采用脂质体、磷酸钙＋ＤＭＳＯ休克转染的方法,观察外源野生型Ｐ１６基因短暂转染与长期稳定转染对人胶质瘤细胞系Ｕ２５１、ＳＷＯ的作用,并筛选阳性克隆。同时以空载体质粒ＰＣＤＮＡ３为对象。免疫组化、Ｎｏｒｔｈｅｒｎ杂交检测Ｐ１６基因表达,对转染后细胞生长、细胞周期及细胞凋亡的变化进行分析。结果：Ｐ１６基因短暂转染有明显的凋亡诱导作用;而Ｐ１６     

抑癌基因PTEN与口腔肿瘤

PTEN基因是第一个具有双特异性磷酸酶活性的抑癌基因，具有调控细胞的生长发育和细胞凋亡的作用，并能影响肿瘤细胞的浸润、转移过程。该基因与口腔癌发生、发展及预后有相关性，从而为口腔癌基因治疗提供一种新途径。