原发性高血压患者外周血中性粒细胞NADPH氧化酶活性的检测意义

目的检测原法性高血压患者(EH)患者外周血中性粒细胞中NADPH氧化酶活性变化,并统计它们与患者病情特征之间的关系。方法101例EH患者按照年龄、病情分期、以及有无心脑血管并发症进行分组,同时选择56例来我院体检的健康人做对照,对EH患者进行外周血PMN分离,分离后所得细胞进行NADPH氧化酶活性的检测。结果EH患者外周血中性粒细胞中NADPH氧化酶活性明显高于对照组,且随年龄的增大、病理分期的加重、及并发心脑血管并发症等因素的变化而逐渐加强。结论EH患者外周血中性粒细胞中NADPH氧化酶活性与临床病理特征有很好相关性,是预测患者临床特征和预后的较好指标。     

血管紧张素Ⅱ对自发性高血压大鼠外周血单个核细胞NADPH氧化酶2表达的影响

目的:探讨血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)对自发性高血压大鼠(SHR)外周血单个核细胞NADPH氧化酶2(NOX2)表达的影响.方法:分离SHR外周血单个核细胞并进行培养,将细胞随机分为4组(n=6):空白对照组、Ang Ⅱ(10-8 mol/L)组、Ang Ⅱ(10-7 mol/L)组和Ang Ⅱ(10-6 mol/L)组.RT-PCR检测NOX2 mRNA的表达,Western blot检测NOX2蛋白的表达.结果:与空白对照组相比,Ang Ⅱ(10-8、10-7mol/L)组NOX2 mRNA的表达差异无显著性(P>0.05),而NOX2蛋白的表达升高(P<0.01),Ang Ⅱ(10-6mol/L)组NOX2mRNA及蛋白的表达均明显升高(P<0.01).结论:Ang Ⅱ可以促进高血压外周血单个核细胞NOX2的激活.     

随意跑轮运动对糖尿病大鼠心肌NADPH氧化酶及心脏重塑的影响

目的 观察随意跑轮运动对糖尿病大鼠心肌烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸（NADPH）氧化酶调节亚基p47phox及p67phox表达的影响,初步探讨运动训练抑制糖尿病心脏氧化应激及心脏重塑的可能机制。 方法 采用随机数字表法将40只SD大鼠分为正常对照组、模型组及运动组,后2组采用链脲佐菌素进行糖尿病造模。于造模成功1周后正常对照组及模型组大鼠均置于鼠笼内安静饲养,运动组大鼠给予8周（5 d/周）随意跑轮运动。于末次训练结束48 h后取静脉血测定血糖含量,利用超声心动图检测心脏结构及功能,采用Masson染色进行心肌组织病理学观察并检测心肌纤维化指数,将心肌组织匀浆后测定丙二醛（MDA）及活性氧（ROS）含量,采用Western blot技术检测心脏NADPH氧化酶p47phox及p67phox亚基蛋白表达量。 结果 与正常对照组比较,模型组血糖含量升高（P<0.05）,左心室收缩末期直径（LVESD）和左心室舒张末期直径（LVEDD）增加（P<0.05）,左心室射血分数（LVEF）下降（P<0.05）,心肌纤维化指数增加（P<0.05）,MDA及ROS含量升高（P<0.05）,p47phox及p67phox亚基蛋白表达量上调（P<0.05）;与模型组比较,运动组血糖含量降低（P<0.05）,LVESD及LVEDD下降（P<0.05）,LVEF升高（P<0.05）,心肌纤维化指数降低（P<0.05）,MDA及ROS含量下降（P<0.05）,p47phox及p67phox亚基蛋白表达量下调（P<0.05）。 结论 随意跑轮运动能通过抑制NADPH氧化酶调节亚基p47phox及p67phox表达,减轻糖尿病大鼠心脏氧化应激反应,进而抑制心脏重塑并增强心功能。     

姜黄素对大鼠肝纤维化的保护作用及其对肝脏NADPH氧化酶4表达的影响

目的：探讨姜黄素对四氯化碳（carbon tetrachloride,CCl4）诱导的大鼠肝纤维化的影响及姜黄素能否抑制肝脏NADPH 氧化酶4（NADPH oxidase 4,NOX4）的表达.方法：腹腔注射CCl4（每周2次,共6周）诱导SD大鼠肝纤维化模型.将SD大鼠随机分成4组：正常对照组（n=10）、单纯给药组（n=10）、模型对照组（n=15）和姜黄素预防组（n=1 5）,姜黄素给药剂量为200 mg/kg体质量.检测血清中ALT、AST及活性氧自由基（reactive oxygen species,ROS）的水平;肝损伤和肝纤维化评估采用肝组织HE染色与天狼星红染色;分别用实时荧光定量PCR、Western blotting和免疫组织化学方法检测肝组织NOX4的表达.结果：姜黄素能减轻CCl4诱导后大鼠的肝损伤与肝纤维化,抑制血清ROS的产生.与模型对照组相比,姜黄素预防组的肝纤维化大鼠肝脏中NOX4 mRNA与蛋白表达水平显著降低.结论：姜黄素能减轻CCl4诱导大鼠发生的肝损伤与肝纤维化,其效应可能与抑制肝脏NOX4过表达有关.     

抑制NADPH氧化酶对心血管疾病保护作用研究进展

氧化应激在心血管疾病进展中发挥重要作用。随着对氧化应激中NADPH氧化酶及其诱导的活性氧的深入研究,发现特定空间特异性抑制不同NADPH氧化酶亚型可起明显改善作用。NADPH氧化酶靶向抑制剂可能成为心血管疾病的一种新的治疗方案。本文就抑制NADPH氧化酶对心血管疾病保护作用的研究进展作一综述。     

糖尿病NADPH氧化酶相关的氧化应激与房颤

正心房颤动(房颤)是我们目前临床工作中一种非常常见的心律失常,人群的发病率相对较高,约为1%-2%~([1])。房颤状态下心房组织的氧化应激增强,促进心房组织发生结构性重构和电学重构,继而对房颤的产生和持续起着一定作用~([2])。糖尿病是房颤发生的独立性危险因素之一,荟萃分析显示,糖尿病患者并发房颤的几率升高约34%~([3])。然而,糖尿病引起房颤发生的具体机制至今仍然不是十分清楚,糖尿病时机体会产生大量的活性氧(ROS),ROS参与了许多病理生理过程~([4]),可能是两者之间的关键     

NADPH氧化酶NOX家族与疾病的关系

还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(nicotinamide adenine dinucleotide phosphate,NADPH)氧化酶的非吞噬细胞氧化酶(non-phagocytic cell oxidase,NOX)家族是许多非吞噬细胞中活性氧(reactive oxygen species,ROS)的主要来源。正常状态下,通过该途径产生的ROS作为信号分子参与了细胞分化、增殖、凋亡等的调节,但在环境胁迫下,NOX蛋白家族在感受细胞外信息刺激时,能够迅速活化产生过量的ROS,引起的氧化压力会诱导机体多种疾病的发生、发展。本文主要从NADPH氧化酶NOX家族蛋白的结构、活化、功能及与疾病发生、发展的关系等方面进行简述。     

加味茵陈五苓散对高尿酸血症大鼠黄嘌呤氧化酶活性的调节作用

目的观测加味茵陈五苓散对高尿酸血症大鼠血尿酸、黄嘌呤氧化酶水平的影响,探讨其治疗高尿酸血症的机理。方法以腺嘌呤合盐酸乙胺丁醇灌胃法造成大鼠高尿酸血症模型,分别以加味茵陈五苓散大、中、小剂量,西药别嘌醇进行治疗,检测实验后第7、14和21天血清中尿酸、黄嘌呤氧化酶含量。结果加味茵陈五苓散大、中剂量均能降低高尿酸血症大鼠血清中尿酸水平(P0.05),加味茵陈五苓散中剂量能降低高尿酸血症大鼠血清中黄嘌呤氧化酶水平(P0.05)。结论加味茵陈五苓散具有防治高尿酸血症的作用。     

NADPH氧化酶、中性粒细胞与白血病的关系

中性粒细胞是机体重要的免疫细胞。还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(nicotinamide adenine dinucleotide phosphate,NADPH)氧化酶是产生内源性活性氧(reactive oxygen species,ROS)的主要分子,在中性粒细胞发挥免疫功能及其分化成熟方面具有重要的调控作用。研究证实NADPH氧化酶活性异常是导致白血病细胞中ROS水平增高的关键因素,并且与白血病发生、发展及耐药密切相关。NADPH氧化酶的活化受到多种因素调控,弄清这些调控机制有助于研究和寻找更为有效的白血病防治方法。     

NADPH氧化酶抑制剂对高糖刺激大鼠近端肾小管上皮细胞中内质网应激的作用机制探讨

目的探讨在有或无还原型烟酰胺腺嘌呤核苷酸磷酸(NADPH)氧化酶抑制剂存在的条件下,高糖刺激大鼠近端肾小管上皮细胞中内质网应激蛋白GRP78及凋亡蛋白caspase-12表达的变化,从细胞和分子水平探讨糖尿病肾病中氧化应激和内质网应激的相互作用机制。方法大鼠近端肾小管上皮细胞(NRK52E)培养,使用高糖(30mmol/L)DMEM培养基刺激NRK52E细胞24 h,荧光显微镜检测细胞内活性氧ROX的产生量,Western-blot检测细胞内内质网应激蛋白GRP78及凋亡蛋白Caspase12的表达;并且使用NADPH氧化酶抑制剂DPI(10μM)预处理细胞,并观察其对细胞内ROX产生及GRP78和Caspase12蛋白的表达影响。结果高糖刺激24 h可明显增加细胞内ROS的产生,为正常对照组的2.5倍(P<0.05)。NADPH氧化酶抑制剂DPI(10μΜ)预处理后,高糖诱导的细胞内ROS产生明显受到抑制,较高糖刺激刺激组降低了43.69%(P<0.05)。高糖刺激NRK52E细胞24 h后可,细胞内内质网应激蛋白GRP78蛋白表达显著上调,为正常对照组的5倍(P<0.05)。与正常对照组相比,高糖刺激组NRK52E细胞凋亡相关蛋白caspase12的表达也显著增加(P<0.05)。NADPH氧化酶抑制剂DPI(10μΜ)预处理后并高糖刺激NRK52E细胞24 h,与高糖刺激组相比,DPI处理组NRK52E细胞内质网应激蛋白GRP78表达显著下调(P<0.05),凋亡相关蛋白caspase12的表达显著下调(P<0.05)。结论高糖刺激大鼠近端肾小管上皮细胞后,细胞内发生氧化应激与内质网应激反应,并且氧化应激可能作为上游信号诱导细胞内内质网应激反应的发生,并最终导致细胞凋亡的发生。     

糖尿病大鼠心肌病的NADPH氧化酶介导内质网应激机制研究及DPI的改善作用

目的本研究探讨糖尿病心肌病的NADPH氧化酶介导内质网应激机制研究及二甲苯基碘(DPI)的改善作用。方法 SD大鼠随机分为三组:对照组、糖尿病组和DPI治疗组(n=8)。腹腔注射链脲佐菌素(65 mg/kg)复制糖尿病心肌病模型,Western Blotting分析大鼠左心室NADPH氧化酶亚基及内质网应激蛋白的表达变化。结果糖尿病组大鼠左心室±dp/dtmax明显增高,p22phox、p47phox及PERK、CHOP表达明显增强,而DPI干预组上述表达异常得到显著的恢复。结论 NADPH氧化酶介导的内质网应激是糖尿病心肌病发病的重要机制,DPI具有显著改善糖尿病心肌病的作用。     

环氧化酶-2抑制剂对糖尿病大鼠肾脏活性作用的研究

目的观察糖尿病大鼠肾脏的环氧化酶-2(cyclooxygenase-2,COX-2)的表达,并探讨COX-2抑制剂罗非昔布(rofe-coxib)对早期糖尿病肾病的活性作用。方法实验大鼠随机分为正常对照组(C组)、糖尿病组(D组)及糖尿病rofecoxib治疗组(DL组)。各组分别于模型建立后第1、3、6周留取24h尿液,第3、6周末留取血液和肾组织,放免法测定尿6-酮前列腺素F1a(6-Ket-PGF1a)、尿血栓素B2(TXB2)、24h尿白蛋白及血清、尿液的胰岛素样生长因子-I(IGF-I);用考马斯亮蓝法测定24h尿总蛋白:ELISA法测定血清、尿液转化生长因子-β1(TGF-β1);免疫组织化学染色法观察肾脏COX-2的表达。结果D组肾脏肥大指数、COX-2表达、尿白蛋白(uAlb)、24h总蛋白(uPro)、TGF-β1、IGF-I均较C组明显升高(P<0.01);DL组上述指标低于D组(24h总蛋白和肥大指数P<0.05,其余P<0.01)。D组尿6-Ket-PGF1a在3、6周末较C组降低(P<0.01),尿TXB2在6周末较C组升高(P<0.01);DL组两项指标均较糖尿病组降低(前者P<0.01,后者P<0.05)。结论糖尿病大鼠肾脏的COX-2表达增加,rofecoxib可以通过抑制COX-2,影响前列腺素代谢,降低尿蛋白,从而减轻早期糖尿病肾脏损害。     

NADPH氧化酶与阻塞性睡眠呼吸暂停综合征的研究进展

阻塞性睡眠呼吸暂停低通气综合征（OSAHS）,是以睡眠时间断出现的上气道部分或完全阻塞,造成反复的呼吸暂停、破坏正常睡眠结构同时伴有打鼾、白天嗜睡等症状为特征的一组综合征。     

博来霉素性肺纤维化大鼠NADPH氧化酶介导的细胞外基质重构机制研究

目的探讨博来霉素性肺纤维化大鼠NADPH氧化酶介导的细胞外基质重构机制。方法 40只SD大鼠随机分为4组:对照组、模型组、乙酰香草素低剂量和高剂量组。一次性气管注入博来霉素复制大鼠肺纤维化模型,乙酰香草低剂量组灌胃乙酰香草素1μmol/L,高剂量组灌胃乙酰香草素10μmol/L治疗,对照组大鼠给予等剂量的生理盐水。分析各组大鼠肺组织羟脯氨酸及丙二醛(MDA)及超氧化物歧化酶(SOD)含量,Western Blotting法分析各组大鼠肺组织NADPH氧化酶亚基及细胞外基质重构相关酶系的表达。结果模型组大鼠肺组织羟脯氨酸及MDA水平明显增高,SOD水平明显降低;模型组大鼠肺组织NADPH氧化酶亚基p22phox及p47phox表达明显增强,且MMP2/9及TIMP1/2的表达也明显增强。低剂量和高剂量的乙酰香草素均可以明显改善上述指标的异常(P0.05,P0.01),且具有剂量依从性效果。结论乙酰香草素通过抑制NADPH氧化酶的过度激活及细胞外基质重构改善博来霉素性肺纤维化损伤。     

电针对帕金森病模型大鼠黑质抗氧化酶的影响

目的:已有研究表明,氧化应激过度及自由基损伤是帕金森病发生机制中的关键环节,观察电针对帕金森病大鼠黑质抗氧化酶的影响及其作用机制。方法:实验于2003-11在湖北中医学院针灸实验室完成。选用40只Wistar大白鼠,将6-羟基多巴胺注入中脑右侧黑质造成单侧黑质损毁的帕金森病大鼠模型,采用电针对模型大鼠进行治疗,检测各组大鼠治疗前后旋转行为及黑质相关指标。结果:电针组大鼠旋转行为治疗前后分别为(10.44±1.01)r/min和(8.22±1.30)r/min,电针对其有一定改善作用(t=3.305,P<0.05);黑质谷胱甘肽过氧化物酶、超氧化物歧化酶、谷胱甘肽在电针组为(13.22±1.56)U/mL,(304.76±48.00)NU/mL,(16.12±1.74)mg/mg蛋白,模型组为(9.64±2.47)U/mL,(223.20±55.42)NU/mL,(11.67±3.80)mg/mg蛋白,电针对其均不同程度升高(q=6.718,6.301,7.443,P<0.05)。结论:电针能部分改善帕金森病大鼠旋转行为,其机制可能在于减轻自由基的损伤。     

电针对帕金森病模型大鼠黑质抗氧化酶的影响

目的：已有研究表明，氧化应激过度及自由基损伤是帕金森病发生机制中的关键环节，观察电针对帕金森病大鼠黑质抗氧化酶的影响及其作用机制。方法：实验于2003—11在湖北中医学院针灸实验室完成。选用40只Wistar大白鼠．将6-羟基多巴胺注入中脑右侧黑质造成单侧黑质损毁的帕金森病大鼠模型，采用电针对模型大鼠进行治疗，检测各组大鼠治疗前后旋转行为及黑质相关指标。结果：电针组大鼠旋转行为治疗前后分别为(10．44&;#177;1．01)r／min和。(8．22&;#177;1．30)r／min，电针对其有一定改善作用(t=3．305，P&;lt;0．05)；黑质谷胱甘肽过氧化物酶、超氧化物歧化酶、谷胱甘肽在电针组为(13．22&;#177;1．56)U／mL．(304．76&;#177;48．00)NU／mL．(16．12&;#177;1．74)mg／mg蛋白，模型组为(9．64&;#177;2．47)U／mL，(223．20&;#177;55．42)NU／mL，(11．67&;#177;3．80)mg／mg蛋白，电针对其均不同程度升高(q=6．718，6．301，7．443，P&;lt;0．05)。结论：电针能部分改善帕金森病大鼠旋转行为，其机制可能在于减轻自由基的损伤。     

缺氧诱导因子-1α和NADPH氧化酶在大鼠深静脉血栓形成中的作用

目的 探讨大鼠深静脉血栓(DVT)模型股静脉内皮组织中缺氧诱导因子-1α (HIF-1α)和NADPH氧化酶(NOX4)的表达变化及其在血栓形成中的作用.方法 将60只SD大鼠随机分为对照组(10只)和模型组(50只),对模型组采用股静脉钳夹联合双下肢石膏制动构建大鼠DVT模型.不同时间点(造模后2.5 h和25 h)解剖股静脉、观察血栓发生率,进而将模型组分为血栓形成前组(造模后2.5 h)、血栓形成组(造模后25 h)、血栓不形成组(造模后25 h).分离股静脉内皮组织,提取总RNA;采用Genechip Rat Genome 230 2.0基因芯片筛查差异表达的基因;采用实时荧光定量聚合酶链式反应(real-time PCR) 验证这些基因的表达变化.结果 基因芯片分析及real-time PCR结果均发现,大鼠股静脉内皮组织中HIF-1α和NOX4的表达水平,血栓形成组最高,血栓形成前组次之,均明显高于对照组和血栓不形成组(P<0.05).Pathway分析提示,缺氧条件下,HIF-1α可通过上调靶基因NOX4的表达,诱导活性氧(ROS)的产生,继而活化静脉内皮细胞,促进血栓形成.结论 大鼠股静脉内皮组织中HIF-1α和NOX4表达上调,可能在创伤性DVT形成中发挥重要作用.     

黄连素对实验性2型糖尿病大鼠黄嘌呤氧化酶的影响

目的观察黄连素对实验性2型糖尿病大鼠血清、肾脏中黄嘌呤氧化酶(XOD)活性的影响及肾脏组织学改变。方法采用小剂量链脲佐菌素加高糖高脂饲料喂养的方法建立Wistar大鼠2型糖尿病模型,成模后给予黄连素0.1g.kg-1.d-1灌胃治疗8周,检测大鼠空腹血糖(FPG)的变化,血清和肾脏中黄嘌呤氧化酶(XOD)活性的变化,观察肾脏组织学改变。结果与糖尿病组相比,黄连素治疗组血清和肾组织黄嘌呤氧化酶(XOD)活性明显降低(P<0.01)。黄连素组大鼠肾脏组织仅见内皮细胞数目稍有增加,较糖尿病组大鼠有所改善。结论黄连素可降低大鼠体内黄嘌呤氧化酶活性、延缓DM肾脏的发生和发展。     

高浓度低密度脂蛋白对血管内皮细胞NADPH氧化酶4 mRNA水平、活性氧产生及细胞凋亡的影响

目的:低密度脂蛋白进入血管内皮细胞后可刺激细胞产生活性氧,在内皮细胞的生长与损伤过程中起关键作用.实验拟进一步观察高浓度低密度脂蛋白对人脐静脉内皮细胞活性氧、NADPH氧化酶4 mRNA 水平和凋亡的影响.方法:实验于2004-12/2006-02在卫生部老年医学重点实验室完成.①实验材料:脐带来自卫生部北京医院产科,产妇或家属签署知情同意书;低密度脂蛋白由卫生部北京医院老年医学研究所生化室经过超速离心提取.②实验过程及分组:分离人脐静脉内皮细胞.先以不同浓度的低密度脂蛋白处理人脐静脉内皮细胞 24 h以选取最佳的浓度,观察NADPH氧化酶4表达,分为:不加低密度脂蛋白的对照组;0.8 g/L 低密度脂蛋白组;1.6 g /L 低密度脂蛋白组;2.4 g/L低密度脂蛋白组.再以1.6 g/L 低密度脂蛋白浓度处理人脐静脉内皮细胞不同的时间以选取最佳的处理时间观察NADPH氧化酶4表达,分为:不加低密度脂蛋白的对照组,12 h处理组,24 h处理组,48 h处理组.以最佳浓度和最佳时间处理人脐静脉内皮细胞,并观察其NADPH氧化酶4表达、活性氧生成和凋亡.③实验评估:反转录-聚合酶链反应检测人脐静脉内皮细胞中NADPH氧化酶的表达;流式细胞仪检测胞内活性氧生成量和细胞凋亡率,Hoechst 33342染色分析细胞凋亡.结果:①1.6 g/L低密度脂蛋白处理24 h后人脐静脉内皮细胞内活性氧生成量高于对照组(P＜0.05).②1.6 g/L低密度脂蛋白处理24 h组细胞凋亡也比对照组明显增加(P＜.05).③用反转录-聚合酶链反应检测不同浓度(0.8,1.6,2.4 g/L)低密度脂蛋白处理人脐静脉内皮细胞 24 h和以1.6 g/L低密度脂蛋白处理人脐静脉内皮细胞不同时间(12,24和48 h)时NADPH氧化酶4 mRNA水平变化,结果显示与不加低密度脂蛋白的对照组相比,各组NADPH氧化酶4 mRNA表达均增强.结论:低密度脂蛋白上调人脐静脉内皮细胞内NADPH氧化酶4 mRNA表达,并促进细胞内活性氧生成和细胞凋亡.