急性心肌梗塞时心肌线粒体钙变化的实验研究

用Ｖｉａｌ方法分离心肌线粒体，按Ｎａｋａｎｉｓｈｉ方法测定线粒体钙，并按张源鑫方法测定Ｃａ２＋－Ｍｇ２＋－ＡＴＰａｓｅ（钙－镁－三磷酸腺苷酶），研究心肌缺血后心肌线粒体钙变化，线粒体膜Ｃａ２＋－Ｍｇ２＋－ＡＴＰａｓｅ活性并相应观察心肌的超徽结构变化。结果表明缺血后心肌线粒体钙明显增高，缺血３０ｍｉｎ和正常组比较Ｐ＜０．０５，６０ｍｉｎ和１８０ｍｉｎ增高更明显。此变化和心肌线粒体超微结构改变相吻合，缺血３０ｍｉｎ时线粒体肿胀，此时尚为可逆性变化。６０、１８０ｍｉｎ后线粒体出现坏死。线粒体Ｃａ２＋－ＡＴＰａｓｅ在缺血后呈进行性下降（Ｐ＜０．０１。说明线粒体Ｃａ２＋－ＡＴＰａｓｅ活性降低是导致线粒体钙超载的原因之一。     

普萘洛尔对去甲肾上腺素性心肌损害心肌细胞膜结合Ca~(2+)影响的研究

目的 :探讨普萘洛尔防治去甲肾上腺素性心肌损害的作用机理。方法 :兔经耳静脉滴注去甲肾上腺素 1ml/ kg,持续 90 min,同时设普萘洛尔预防组和生理盐水对照组。动物用药后 4 8h处死 ,取心室肌观察心肌细胞膜 Ca2 + 结合情况。结果 :去甲肾上腺素组线粒体内大量 Ca2 + 积聚 ,肌膜、肌浆网膜及闰盘上均无 Ca2 + 沉淀物 ,普萘洛尔可明显改善上述现象。结论 :普萘洛尔对去甲肾上腺素性心肌损害的保护作用与防止膜结合 Ca2 +丢失及细胞内 Ca2 +积聚等有关     

缺血再灌注对兔心肌肌浆网Ryanodine受体2功能的影响

目的 评价缺血再灌注（I／R）对心肌肌浆网（SR）钙释放功能的影响。方法 将16只新西兰兔完全随机平分为对照组、缺血再灌注组；采用langendorff离体心脏灌注模型；蔗糖密度梯度离心法制备心肌肌浆网；微孔滤过滤技术测定心肌肌浆网钙转运功能改变；并定量RT－PCR检测相应蛋白质mRNA表达水平改变。结果与对照组相比，缺血再灌组肌浆网摄钙增幅未见减少，而Ryanodine受体2（RYR2）mRNA表达水平改变。结果 与对照组相比，缺血再灌组肌浆网摄钙增幅未见减少，而Ryanodine受体2（RYR2）mRNA表达水平明显减少。结论 缺血再灌注后心肌肌浆网Ryanodine受体2基因表达减少，然后总的释钙量未见减少。     

去甲肾上腺素性心肌损害心肌细胞膜结合Ca~(2+)变化的细胞化学研究

研究利用细胞化学ＰＰＡ法观察去甲肾上腺素性心肌损害心肌细胞膜结合Ｃａ２＋的变化。结果表明,去甲肾上腺素可使心肌细胞膜及闰盘两侧的结合Ｃａ２＋丢失,线粒体内大量Ｃａ２＋沉淀物聚集。可能系胞质内ＰＨ下降,肌膜的酸性磷脂数量发生了变化,丧失了与钙的亲和力所致。     

萘哌地尔Ⅱ号衍生物YMⅡ对血小板聚集的影响及机制研究

目的观察萘哌地尔Ⅱ号衍生物YMⅡ对家兔血小板聚集的影响并对其进行机制研究,为该药的开发研究提供基础资料。方法①以比浊法观察YMⅡ对二磷酸腺苷（ADP）,肾上腺素（Adr）或凝血酶（Thr）发的家兔血小板聚集的影响。②荧光法测定钙荧光指示剂Fura-2／AM负载的家兔血小板胞浆游离钙浓度（【Ca^2＋】i）,观察YMⅡ对ADP、Adr或Thr所致血小板（[Ca^2＋]i）升高的影响。③用^125I放射免疫法观察YMII对ADP、Adr或Thr所致的血小板血栓烷A2（TXA2）的代谢产物血栓烷B2（TXB2）生成含量的影响。结果①YMⅡ高浓度（10^-4mol·L^-1）对ADP（1．5×10^-5mol·L^-1）、Adr（5．5×10^-5mol·L^-1）或Thr（0．6U／mL）诱发的家兔血小板聚集与溶媒组比较均有抑制作用;中浓度（10^-5mol·L^-1）对上述浓度的ADP和Adr诱发的家兔血小板聚集也有抑制作用,但对Thr（0．6U／mL）诱发的血小板聚集抑制作用不明显;低浓度（10^-6mol·L^-1）对ADP、Adr或Thr诱发的血小板聚集均没有抑制作用。②YMⅡ中浓度和高浓度能降低ADP和Adr所致的血小板（[Ca^2＋]i）的升高;低浓度对其无抑制作用;该药对,Thr,只有高浓度才有降低（[Ca^2＋]i）作用。③上述三浓度的YMⅡ呈浓度依赖性地抑制ADP所致TXB2的升高作用;本品中浓度和高浓度对Adr所致的TXB2的升高也有抑制作用,低浓度则无抑制作用;上述高、中、低浓度的YMⅡ对Thr所致的TXB2的升高虽有一定的抑制作用,但不呈量效关系。结论YMⅡ对由ADP、Adr诱发的家兔血小板聚集有不同程度抑制作用,但对由Thr所诱发的血小板聚集却仅呈微弱的抑制,其抗血小板聚集的机制可能与其降低血小板（[Ca^2＋]i）和减少TXA2生成等环节有关。     

卡维地洛与培哚普利联合干预心梗后心衰对心肌肌浆网Ca~(2+)泵活性和Ca~(2+)释放通道密度的影响

目的 探讨β受体阻滞剂卡维地洛与血管紧张素转换酶抑制剂培哚普利联合干预心梗后慢性心衰对心肌肌浆网(SR)Ca~(2+)泵活性和Ca~(2+)释放通道(RyR2)密度的影响及意义.方法 通过结扎大鼠左冠脉建立慢性心衰模型,术后1周开始分别给以卡维地洛(6mg·kg~(-1)·d~(-1))、培哚普利(4mg·kg~(-1)·d~(-1))、特拉唑嗪(2mg·kg~(-1)·d~(-1))、卡维地洛(6mg·kg~(-1)·d~(-1))+培哚普利(4mg·kg~(-1)·d~(-1))联合干预9周,观察血流动力学、左室心肌SR Ca~(2+)泵活性和RyR_2密度的变化.结果 与假手术组相比,心衰组左室舒张末压(LVEDP)显著升高(P<0.01),+dp/dt_(max)、-dp/dt_(max)显著降低(P<0.01),左室心肌SR Ca~(2+)泵活性和RyR_2密度显著降低(P<0.01).卡维地洛、培哚普利单独及联合干预均降低LVEDP(P<0.01),升高+dp/dt_(max)、-dp/dt_(max)(P<0.01),并升高左室心肌SR Ca~(2+)泵活性和RyR_2密度(P<0.01),联合干预变化更明显(P<0.01).特拉唑嗪组对上述指标无明显影响(P>0.05).左室心肌sRCa~(2+)泵活性与+dp/dt_(max)、-dp/dt_(max)显著正相关(r=0.596,r=0.684,P<0.01).结论 β受体阻滞剂卡维地洛和血管紧张素转换酶抑制剂培哚普利长期联合干预心梗后慢性心衰,能够改善血流动力学和心肌SR Ca~(2+)泵活性,增加RyR_2密度,优于任何单一药物干预.

Abstract：

Objective To study the effects of carvedilol combined with perindopril on Ca~(2+) pump activity and the density of Ca~(2+)-release channel ryanodine receptor (RyR2) in the myocardial sarcoplasmic reticulum (SR) in rats with chronic heart failure caused by myocardial infarction. Methods Rat models of chronic heart failure established by left coronary artery ligation were divided into different groups and treated with carvedilol (6 mg·kg~(-1)·d~(-1)), perindopril (4 mg·kg~(-1)·d~(-1)), terazosin (2 mg·kg~(-1) ·d~(-1)), or the combination of carvedilol (6 mg·kg~(-1) ·d~(-1) and perindopril (4 mg·kg~(-1) ·d~(-1) for 9 weeks. Another 12 rats with sham operation served as the sham-operated group. The hemodynamic parameters, activity of SR Ca~(2+) pump, and RyR2 density were determined. Results Compared with shame-operated group, the rats with chronic heart failure showed significantly increased left ventricular end-diastolic pressure (LVEDP) (P<0.01) and decreased +dP/dtmax, -dp/dtmax, activity of SRCa~(2+)pump and density of RyR2 (P<0.01). Both monotherapies with carvedilol and perindopril attenuated the increment ofLVEDP, and significantly increased+dp/dtmax, -dp/dtmax, activity of SR Ca~(2+) pump and density of RyR2 (P<0.01). Combined treatment even further enhanced the therapeutic effects, whereas terazosin produced no obvious effect. The activity of SR Ca~(2+) pump was strongly correlated to +dp/dtmax and -dp/dtmax (r=0.596 and 0.684, respectively, P<0.01). Conclusion Prolonged treatment with p$-blocker carvedilol in combination with ACE inhibitor perindopril may improve the hemodynamic parameters, enhance Ca~(2+) pump activity and increase the density of RyR2 of myocardial SR more effectively than either monotherapy in preventing and treating chronic heart failure following myocardial infarction.     

阿霉素对实验兔心肌细胞内游离钙和肌浆网Ca2+-ATP酶活性的影响

目的：探讨治疗剂量阿霉素（ADR）对心脏血流动力学及心肌肌浆网Ca^2 －ATP酶活性的影响。方法：实验兔每周静脉注射ADR（2mg/kg）1次，共8周，以健康同龄兔静脉注射等量生理盐水为对照组。这药3周后多普勒测定降主动脉血流量，以代表心输出量（CO），左颈总动脉和左心室插管测定血压（BP），平均动脉压（MAP），左心室收缩压（LVSP），左心室舒张末压（LVEDP）。应用荧光分光光度计测定心肌细胞内游离钙（MyoCa^2 ）浓度，无机磷酸根法测定心肌肌浆网（SR）Ca^2 －ATP酶活性。结果：阿霉素组CO、BP、MAP、LVSP均较对照组低，而VEDP则明显增高。阿霉素组使MyoCa^2 浓度显著增高，同时SR Ca^2 -ATP酶活性明显低于对照组。结论：治疗剂量阿霉素可使心脏功能下降，心肌细胞内钙超载及SR Ca^2 －ATP酶活性降低。     

首乌复方对兔红细胞膜Ca^2＋,Mg^2＋—ATPase活性的影响

研究首乌复方对高血脂兔红细胞膜 Ca2 ,Mg2 - ATPase活性的影响。实验结果表明 ,高脂饲料能显著地引起兔血浆中总胆固醇积累 ;也使兔血红细胞膜 Ca2 ,Mg2 - ATPase的基础活性降低近 2 0 % ;而依赖钙调素(Ca M)激活的 Ca2 ,Mg2 - ATPase的活性则是正常兔的 144 %。首乌复方不但能有效地阻止血液中胆固醇的积累 ;而且还能使 Ca2 ,Mg2 - ATPase的基础活性基本恢复正常水平     

人参果皂甙对失血性休克犬心肌保护作用的电镜观察和Ca~(2+)分析

目的 :探讨人参果皂甙对失血性休克犬心肌的保护作用。方法 :采用健康杂种犬 1 6只 ,随机均分为失血性休克组 (HS,放血使血压降至 5.3k Pa,并在这个血压上维持 5h)和失血性休克人参果皂甙治疗组 (HSG,放血前 1 h肌注人参果皂甙生理盐水溶液 ,2 5mg/kg体重 ,其它处理同 HS组 )。观察失血后 5h犬存活率及心肌超微结构和 Ca2 +改变。结果 :与 HS组比较 ,1 HSG组犬存活率明显提高 ,差异显著 (P<0 .0 0 5) ;2 HSG组犬心肌超微结构病变 ,如肌膜、肌原纤维、肌浆网、线粒体、闰盘等细胞器损害明显减轻 ;3HSG组犬心肌肌浆网内 Ca2 +增加 ,线粒体内 Ca2 +减少。结论 :这些结果从不同水平上提示人参果皂甙有抗休克、保护心肌作用     

谷氨酸对培养的皮质神经元Ca~(2 )/CaMPKⅡ活性的影响

目的研究谷氨酸（Ｇｌｕ）对皮质神经元的损伤及对Ｃａ２＋／ＣａＭＰＫⅡ活性的影响。方法５００μｍｏｌ／ＬＧｌｕ作用１０ｍｉｎ，测Ｃａ２＋／ＣａＭＰＫⅡ及乳酸脱氢酶（ＬＤＨ）活性。结果Ｃａ２＋／ＣａＭＰＫⅡ活性和正常对照相比下降４６．３％，１００μｍｏｌ／Ｌ氯胺酮几乎完全保护该酶活性；ＬＤＨ活性在１ｈ时无明显变化，２４ｈ时明显升高。结论（１）Ｇｌｕ对皮质神经元损伤致Ｃａ２＋／ＣａＭＰＫⅡ活性下降早于ＬＤＨ变化；（２）Ｃａ２＋／ＣａＭＰＫⅡ活性下降主要由ＮＭＤＡ受体介导，与非ＮＭＤＡ受体无关。     

丹参酮Ⅱ A 磺酸钠对血管紧张素Ⅱ诱导的大鼠心肌纤维化的影响

目的 观察丹参酮Ⅱ A 磺酸钠（STS）对血管紧张素Ⅱ（Ang Ⅱ）诱导的大鼠心肌纤维化的影响; 并初步探讨STS 抗心肌纤维化的作用与转录因子NF-E2 相关因子2（Nrf2）所调控的抗氧化应激反应的关系。 方法 40 只SD 大鼠随机分为5 组（对照组,模型组,低、中、高剂量STS 组）,采用皮下植入微量渗透泵缓释 Ang Ⅱ复制大鼠心肌纤维化模型,各STS 组给予不同剂量STS 处理。3 周后,采用苏木精伊红和马松染色法 观察心肌纤维化程度;采用qRT-PCR 和Western blot 检测心肌组织中Ⅰ、Ⅲ型胶原,Nrf2 和它的胞质接头 蛋白Keap1,以及Nrf2 所调控的抗氧化酶和Ⅱ相解毒酶mRNA 水平及其蛋白水平;采用比色法检测心肌组 织中丙二醛、谷胱甘肽水平及超氧化物歧化酶活性。结果 STS 呈剂量依赖性地减轻Ang Ⅱ诱导的心肌纤维化, 促使Nrf2 在细胞核内的聚集,提高抗氧化酶及Ⅱ相解毒酶的表达,增强抗氧化应激反应,降低心肌组织脂质过 氧化水平。结论 STS 能够有效减轻Ang Ⅱ诱导的大鼠心肌纤维化,其抗纤维化作用与调控Nrf2 信号通路相关。     

硒对大鼠缺血心肌Ca~(2+)转运功能的影响

目的探讨硒对急性缺血心肌保护作用的机制。方法采用结扎大鼠心肌左冠状动脉复制心肌缺血模型。ＳＤ大鼠１００只，分为正常对照组（Ｃ）、缺血组（ＭＩ）及硒组（ＭＩ＋Ｓｅ）。硒组按每日补硒８０μｇ·ｋｇ－１，连续７ｄ。观察硒对心肌缺血后３０、６０、９０ｍｉｎ肌浆网（ＳＲ）、线粒体（Ｍｉｔ）Ｃａ２＋－ＡＴＰ酶活性动态变化及缺血６０ｍｉｎ肌膜（ＳＬ）Ｎａ＋－Ｋ＋－ＡＴＰ酶活性和线粒体膜磷脂含量变化的影响。结果与正常对照组比较，心肌缺血不同时点，Ｍｉｔ、ＳＲ、Ｃａ２＋－ＡＴＰ酶活性均有不同程度降低，且呈随缺血时间延长进行性下降的趋势；缺血６０ｍｉｎＭｉｔ磷脂含量和ＳＬＮａ＋－Ｋ＋－ＡＴＰ酶活性也明显降低。但无论任何时点，硒组Ｍｉｔ、ＳＲＣａ２＋－ＡＴＰ酶、ＳＬＮａ＋－Ｋ＋－ＡＴＰ酶活性和Ｍｉｔ磷脂含量均显著高于缺血组。结论硒在一定程度上能减轻或延缓缺血对心肌细胞Ｃａ２＋转运功能的损害作用，可能是硒保护急性缺血心肌作用机制之一。     

亚硒酸钠对依米丁所致心肌损害的影响

本文报道依米丁中毒性心肌损害实验模型的复制方法,并观察亚硒酸钢对此种损害的保护作用。实验结果表明,依米丁组大鼠(盐酸依米丁15mg/kg一次腹腔注射)出现中毒性心肌损害症状,并有心电图改变,血清磷酸肌酸激酶(SCPK)明显增高以及心肌组织病理学改变等。硒+依米丁组大鼠(每日腹腔注射亚硒酸钠200μg/kg,连续五天,第六天再给依米丁)上述指标均比依米丁组动物减轻或降低,说明亚硒酸钠对依米丁诱发的心肌损害有一定的保护作用。     

生姜对缺血性脑损伤时过氧化氢酶、Ca~(2+)—ATPase活性及乳酸含量的影响

为了解生姜对缺血性脑损伤时过氧化氢酶、Ca~(2+)—ATPase活性及乳酸含量的影响,本实验采用Pussinell′s四血管结扎法和Lamson＇s失血性休克法制造家兔脑急性完全性缺血再灌注模型。观察生姜对大脑皮层过氧化氢酶、Ca~(2+)—ATPase和乳酸含量改变.结果表明:生姜能有效地保护过氧化氢酶和Ca~(2+)—ATPase的活性,能明显降低乳酸的含量,亦可使过氧化氢酶和Ca~(2+)—ATPase与乳酸比值呈显著性升高。提示生姜能保护缺血再灌注大脑。     

大鼠心肌顿抑模型中血管紧张素Ⅱ受体表达的实验研究

目的：探讨大鼠心肌顿抑（Ms）之后血管紧张素Ⅱ1型受体（ATR1）和2型受体（ATR2）在缺血再灌注之后表达的变化。方法：将48只大鼠随机分为6组,每组8只：A组（对照组）、B组（MS后1h）、C组（MS后4h）、D组（MS后8h）、E组（MS后24h）、F组（MS后72h）。经过HE染色后观察大鼠的心肌组织结构,免疫组化SP法观察心肌ATR1、ATR2细胞的定位以及表达的变化。结果：大鼠心肌顿抑模型心肌组织结构HE染色检查无明显变化,免疫组化检查发现心肌顿抑后ATR1和ATR2都呈现动态变化,顿抑后1h两者都升高,其中ATR2达到峰值,在顿抑后4hATR1达到峰值,而后两者都呈现缓慢下降的趋势,到顿抑后72h,均达到最低值,但是此时ATR2高于ATR1,仍然维持较高的水平,ATR2表达增高可能发挥对心肌的保护作用。结论：ATR1在心肌顿抑后4h后达到峰值,ATR2在1h后达到峰值,心肌顿抑后可能通过局部的RAS系统激活,细胞内钙离子超负荷,ATR1表达上升后可能损伤心肌功能;ATR2表达上升则可能发挥对心肌的保护功能,早期阻断ATR1,提高ATR2可能对于心肌顿抑后心功能的恢复有帮助。     

三碘甲腺原氨酸对心肌细胞肌浆网钙-ATP酶活性的影响及对心肌功能的调控

目的　研究不同甲状腺功能状态下,缺血再灌注（Ｉ／Ｒ）过程中心肌细胞肌浆网钙－ＡＴＰ酶（ＳＲ·Ｃａ２＋－ＡＴＰａｓｅ,　　　　ＳＥＲＣＡ）活性的变化及三碘甲腺原氨酸（Ｔ３）对其变化的影响,同时探讨心肌功能的调控。方法将实验大鼠分为甲状腺　　　　功能正常（Ａ组）和甲状腺功能减退（甲减,Ｂ组）两组,每组又分别随机分成对照组、缺血组、单纯灌注液组、Ｔ３灌注液　　　　组;建立高体心工作模型;测定各组心肌细胞ＳＥＲＣＡ活性。结果甲减状态下大鼠心肌细胞ＳＥＲＣＡ活性下降４３．２％　　　　（Ｐ＜０．０１）。缺血３０ｍｉｎ时,Ａ、Ｂ两组的ＳＥＲＣＡ活性均显著降低,并随着复灌进一步下降。但在复灌２０ｍｉｎ时,Ｔ３　灌注　　　　液组的酶活性较单纯灌组显著提高,Ａ组分别为（１１．２０±１．０７）和（７．３３±０．５６）μｍｏｌ·ｍｇ－１·ｈ－１（Ｐ＜０．０１）　;Ｂ组分别为　　　　（６．８９±０．５２）和（５．２３±０．７１）μｍｏｌ．ｍｇ－１·ｈ－１（Ｐ＜０．０５）,甚至高于缺血组。结论甲减状态及Ｉ／Ｒ过程中,心肌细胞ＳＥＲＣＡ活　　　　性受到严重损害,可导致胞浆中Ｃａ２＋超负荷。Ｔ３可显著提高ＳＥＲＣＡ活性,降低胞浆中Ｃａ２＋     

抗GPⅡb／Ⅲa和抗CD9单克隆抗体对人血小板Ca对流的影响

采用Ca~(2 )敏感光蛋白Aequorin法测定结合位点在GPⅡb/Ⅲa的单克隆抗体(Mc-Ab)Apt_4及在CD9抗原的McAb XW-1和SJ-9A_4对人血小板胞浆Ca~(2 )的影响,发现Ap-t_4和XW-1可引起载有Aequorin的血小板Ca~(2 )内流,SJ-9A_4可引起载有Aequorin的血小板Ca~(2 )内流和释放。钙通道阻滞剂异搏定可完全抑制Apt_4引起的血小板Ca~(2 )内流和聚集,部分抑制XW-1和SJ-9A_4引起的血小板胞浆Ca~(2 )浓度([Ca~(2 )]i)升高和聚集。ADP抑制剂CP/CPK和钙调蛋宜抑制剂EBB部分抑制3种McAb的作用,环氧酶抑制剂ASA只有轻度抑制作用。实验结果提示3种McAb引起的血小板[Ca~(2 )]i升高和活化的途径不同。     

Ang Ⅱ对左心室心肌跨室壁复极不均一性的影响

目的 观察AngⅡ灌流对家兔左心室心肌跨室壁复极不均一性及Cx43蛋白分布异质性的影响,探讨AngⅡ在恶性室性心律失常(MVA)发生中的作用.方法 将20只家兔随机分成正常对照组和AngⅡ灌流组,正常对照组离体心脏给予单纯改良台氏液灌流,AngⅡ灌流组则给予含1μmol AngⅡ的台氏液灌流,分别检测两组家兔的室颤阈值(VFT)及心外膜下、中层心肌和心内膜下心肌细胞的单相动作电位复极90％时程(APD90)、跨室壁复极离散度(TDR)以及三层心肌Cx43蛋白表达的差异.结果 ①正常对照组和AngⅡ灌流组的VFT分别为(13.40±2.950)V和(8.30±1.77)V,两组对比差异有统计学意义(P＜0.001).②与正常对照组比较,AngⅡ灌流组三层心肌的APD90均明显延长(P＜0.05).AngⅡ灌流组和正常对照组的△APD9分别为(34.70±9.68)ms和(23.70±5.68)ms,TDR分别为(49.30±13.52)ms和(36.10±12.44)ms,AngⅡ灌流组均明显大于正常对照组(P＜0.05),说明AngⅡ灌流组中层心肌APD90的延长较心外膜下和心内膜下心肌更为明显.③与正常对照组比较,AngⅡ灌流组三层心肌的Cx43蛋白表达均有明显下降(P＜0.05),但以中层心肌的下降最为显著.结论 AngⅡ灌流改变了正常家兔左心室心肌的跨室壁Cx43表达异质性,使左心室心肌跨室壁复极不均一性增大,VFT下降,更加容易诱发MVA.