乙肝HBsAg和结核杆菌HSP70融合表达载体的构建

目的：构建乙肝HBsAg和结核杆菌HSP70融合表达质粒。方法：用PCR方法从结核杆菌H37Rv基因组中扩增出结核杆菌HSP70基因序列,应用T－A克隆技术,克隆到质粒pGEM-T vector,经DNA测序证实基因碱基无误后,亚克隆到真核表达质粒pcDNA3.1( ),构建成pcDNA3.1-HSP70重组质粒,然后,再用PCR方法,从质粒pEcob6中扩增出HBsAg基因,并克隆到质粒pcDNA3.1-HSP70,将HBsAg基因的C端与HSP70基因N端连接,构建HBsAg和HSP70融合表达质粒pcDNA3。1－SHSP70,结果：经酶切鉴定和DNA测序证实重组质粒构建正确,结论：乙肝HBsAg和结核杆菌HSP70融合表达载体构建成功。     

HSP70在内毒素休克大鼠胰腺的表达及其意义

目的:观察内毒素休克大鼠胰腺的病理改变及HSP70的表达情况.方法:33只健康Wistar大鼠随机分为对照组、内毒素小刑量组(5 mg/kg)及大剂量组(10 mg/kg),于处理后1 h及处死时采血测血糖及血清淀粉酶,处死后取胰腺免疫组化法测定HSP70及INs的表达.结果:内毒素休克大鼠血糖及血清淀粉酶正常(P＞0.05);胰腺组织HSP70表达增强,处理组与对照组比较强阳性表达率明显增高(P＜0.01);小剂量组的强阳性率又较大剂量组显著增强(P＜0.01).3组的Ins表达率无显著差异(P＞0.05).结论:内毒素可诱导胰腺HSP70的表达增强,从而使胰腺产生内毒素耐受.     

膜表达热休克蛋白70真核表达载体的构建及其对肿瘤细胞的转染

目的构建普遍适合性的膜表达热休克蛋白70(HSP70)的真核表达载体,修饰并建立HSP 70表达并结合在细胞膜表面的肿瘤细胞.方法RT-PCR法从人胚肾中获取HSP 70的cDNA,扩增成带酶切位点的目的基因.选择载体pDisplay,将目的基因插入载体多克隆酶位点中.DNA测序证实后,以脂质体转染的方法,将载体转染到黑色素瘤细胞.用G418抗性筛选获得阳性克隆.结果酶切电泳和DNA测序证实载体构建正确;目的基因的上游带信号肽序列,下游带跨膜序列.RT-PCR产物电泳、Westem Blotting、激光共聚焦显微镜和流式细胞术证实大量HSP 70表达并结合在转染的黑色素瘤细胞膜表面.结论成功地构建了膜表达HSP 70的真核表达载体;转染到黑色素瘤细胞后,细胞膜表面表达丰富的HSP70.转染细胞可以进一步制备新型瘤苗.     

人急性白血病淋巴细胞HSP70及 HSP70 mRNA的表达研究

目的：检测急性白血病病人血淋巴细胞热休克蛋白70（HSP70）及其mRNA的表达。方法：ELISA法检测HSP70,RT－PCR法检测HSP70 mRNA。结果：化疗前急性白血病病人淋巴细胞HSP70及mRNA明显低于正常人;而化疗后,急性白血病病人淋巴细胞HSP70及mRNA明显高于正常人（P＜0．01）,结论：HSP70与急性白血病癌细胞关系密切,对癌细胞起保护作用。     

HSP70蛋白在胃癌中的表达

目的 探讨热休克蛋白(heat shock proteins,HSPs)在人胃癌组织中的表达.方法 采用EnVision免疫组化分别检测HSP70在正常胃黏膜、不典型增生、胃癌组织中表达.结果 HSP70在正常胃黏膜、不典型增生、胃癌组织中的阳性率分别为58%、66%、72%,过表达率分别为8%、31%、57%.在胃癌组织和不典型增生胃黏膜中HSP70的表达明显高于正常胃黏膜中的表达(x2=12.16,P＜0.05).结论 HSP70在胃癌和不典型增生病变中呈现过度表达,可应于早期诊断和评估胃癌的发生,进一步研究其分子机制将为胃癌的治疗提供理论依据.     

HSP70-PCs的抗肿瘤作用

热休克蛋白（heat shock protein,HSP）由Ritossa在1962年研究果蝇唾液腺染色体时首先发现,是一类广泛存在于自然界生物体内、具有重要生理功能且高度保守的蛋白质。在正常细胞中有少量表达,约占细胞总蛋白的5％-10％,当细胞处于高温、感染、创伤、缺氧及恶性肿瘤等应激状态下,     

次声作用后大鼠下丘脑HSP70的表达

研究大鼠经次声作用后下丘脑中ＨＳＰ７０的表达。方法ＳＤ大鼠先经８Ｈｚ,１２０ｄＢ次声作用２ｈ,然后分为８组,每组３只。分别于次声作用后０．５,１,２,３,４,５,６和７ｈ后取下丘脑,通过Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔｔｉｎｇ技术检测ＳＨＰ７０的表达。结论ＨＳＰ７０参与了次声应激后机体的反应机制。     

人急性白血病淋巴细胞HSP70及HSP70mRNA的表达研究

目的　检测急性白血病病人血淋巴细胞热休克蛋白 70 (HSP70 )及其mRNA的表达。方法　ELISA法检测HSP70 ,RT -PCR法检测HSP70mRNA。结果　化疗前急性白血病病人淋巴细胞HSP70及mRNA明显低于正常人。化疗后 ,急性白血病病人淋巴细胞HSP70及mRNA明显高于正常人。结论　HSP70与急性白血病癌细胞关系密切 ,对癌细胞起保护作用     

乙型肝炎患者血浆HSP70水平的表达及意义

热休克蛋白(heat shock protein,HSP)是一种应激蛋白,广泛存在于人、动物、微生物和植物细胞内.机体遭受组织损伤、病原微生物感染、炎症细胞因子产生等均可引起HSP70的过量表达,以维持细胞的正常功能[1].     

氯胺酮对内毒素诱导HSP70在肝组织表达的影响

目的　观察氯胺酮对感染性休克大鼠肝热休克蛋白 (HSP70 )表达的影响。方法　 64只大鼠随机分为对照组、内毒素组及氯胺酮组 ,于内毒素处理后 2小时及以内毒素组临终为时点测定肝 HSP70表达及肿瘤坏死因子 - α(TNF- α)血浆水平 ,并观察各组生存时间。结果　内毒素明显提高肝 HSP70的表达及 TNF- α血浆水平(P<0 .0 5 ) ,氯胺酮组 HSP70表达明显上调 ,TNF- α明显减少 ,存活率明显升高 (P<0 .0 5 )。结论　氯胺酮能提高感染性休克大鼠肝 HSP70的表达 ,抑制内毒素刺激的 TNF- α的释放 ,提高大鼠存活率。     

人结核分支杆菌HSP70的原核表达质粒的构建及诱导表达

目的　构建编码人结核分支杆菌 (TB)热休克蛋白 70 (HSP70 )的Dnak基因的重组原核表达质粒 ,并研究其表达动力学。方法　质粒pMT70用限制性内切酶消化、核酸体外扩增 (PCR)及末端修饰后可获得Dnak基因全长 ,与大肠杆菌质粒 pRSET连接重组 ,阳性克隆经酶切分析鉴定后即为质粒 pMT70 3,转入受体菌BL2 1DE3中 ,经诱导剂异丙基硫代 - β -D-半乳糖 (IPTG)诱导 ,由SDS -PAGE、Western -blot鉴定 ,并以薄层扫描分析。结果　重组表达质粒 pMT70 3构建成功 ,可在大肠杆菌中高效表达 ,诱导后 1h即开始表达 ,16h达高峰期。表达量占菌体总蛋白的 6 5 % ,可溶性产物占总表达量的 90 %。结论　pMT70 3质粒不仅构建成功且更有利于对分支杆菌HSP70蛋白的纯化 ,方便对其抗结核、抗肿瘤的研究     

结核分枝杆菌pcHSP65真核表达载体的构建及序列测定

目的 :构建以结核分枝杆菌热休克蛋白 6 5kU基因为基础的核酸疫苗。方法 :采用聚合酶链反应从结核杆菌H37Rv株基因中 ,扩增出HSP6 5的编码基因 ,经限制性核酸内切酶消化后 ,插入真核表达载体pcDNA3.1( )的相应酶切位点 ,并将此重组质粒进行序列测定。结果 :重组质粒的插入基因经序列测定证实为结核分枝杆菌HSP6 5。结论 :以HSP6 5编码基因为基础的真核表达载体构建成功 ,为进一步研究其在结核病防治中的作用奠定了基础     

结核分枝杆菌热休克蛋白65与汉坦病毒G2糖蛋白融合基因真核表达载体的构建与表达

目的 构建以结核分枝杆菌热休克蛋白65（HSP65）和汉坦病毒G2糖蛋白重组融合基因为基础的真核表达载体。为进一步研究其在结核病和出血热防治中的作用奠定基础。方法 采用聚合酶链反应从结核分枝杆菌H37Rv株基因中．扩增出HSP65的编码基因，从T-H8205G2质粒扩增出G2糖蛋白的编码基因．经相应限制性核酸内切酶消化后．插入真核表达载体pcDNA3．1／His，并将此重组质粒通过脂质体介导转染NIH3T3细胞．用SDS-PAGE、免疫组织化学及免疫荧光方法分别测定表达产物的相对分子量及特异性。结果 获得正向插入的pcDNA3.1/ His-HSP65-G2重组表达质粒，表达产物的相对分子量为105kD．与理论预期大小一致．并且可与汉坦病毒H8205株的腹水抗体和HSP65单抗起特异反应。表明构建的pcDNA3．1／His-HSP65-G2能在哺乳动物细胞中表达并具有抗原性。结论 编码HSP65和G2抗原基因的重组基因的真核表达载体构建成功。     

分枝杆菌穿梭表达质粒pJHSP70的构建及鉴定

目的 用结核分枝杆菌热休克蛋白70(heat shock protein70,HSP70)启动子改建分枝杆菌穿梭质粒pJEM11为分枝杆菌穿梭表达质粒pJHSP70,并对其功能进行鉴定.方法 以卡介苗(BCG)基因组DNA为模板,利用聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)扩增HSP70启动子,克隆至pMD18-T载体,经鉴定后,再定向克隆入pJEM11的Apa Ⅰ位点与SnaB Ⅰ位点之间,构建pJHSP70载体,并对载体进行PCR及酶切鉴定,然后再将幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,HP)尿素酶B亚单位(urease B subunit,UreB)基因克隆入pJHSP70载体,评价其在耻垢分枝杆菌(Mycobacteria smegmatis,M. smegmatis)mc2 155中的表达情况.结果 从BCG基因组中扩增出160 bp的基因片段,所构建的穿梭质粒经酶切和PCR鉴定与预期结果一致.测序结果证实插入片段正确,UreB基因在M. smegmatis中成功表达.结论 成功改建穿梭质粒pJEM11为穿梭表达质粒pJHSP70.     

人脑星形细胞系肿瘤中HSP70的表达水平及其意义

目的 :检测热休克蛋白 70 (HSP70 )在人脑星形细胞瘤中的表达水平 ,探讨其在胶质瘤诊断中的意义。方法 :采用免疫组织化学方法对 4 1例星形细胞瘤标本及 13例脑组织进行染色 ,比较肿瘤与正常脑组织HSP70表达水平的差异。结果 :星形细胞瘤标本的HSP70水平明显升高 ,与正常脑组织比较有明显差异 (P <0 .0 1) ,而且随着肿瘤恶性程度的增高 ,HSP70的表达水平也相应增加 (P <0 .0 1)。结论 :HSP70可以作为反映肿瘤增殖情况的参考依据 ,为临床准确判定肿瘤恶性程度及预后提供了新的指标     

HSP70与肿瘤免疫治疗

热激蛋白70（HSP70）家族是一类重要的应激蛋白，在肿瘤免疫中发挥免疫佐剂的功能，可协同抗原呈递细胞（APC）、αβT细胞、γδT细胞和NK细胞的作用。通过分子载体的作用将抗原肽呈递APC表面，激活CD8^＋T细胞，达到杀伤肿瘤细胞的目的。HSF70对开发肿瘤疫苗也有重要的意义。本文简要综述HSF70分子及其在肿瘤免疫治疗中的新进展。     

HSP27和HSP70在老年性白内障和透明晶状体中的表达

目的观察热休克蛋白HSP27和HSP70在老年性白内障和透明晶状体中的表达情况。方法WesternBlot法测定HSP27和HSP70在老年性白内障和透明晶状体中的表达情况。结果老年性白内障的晶状体和透明晶状体中均有HSP27和HSP70的表达。经t检验,老年性白内障晶状体中HSP27(1.08±0.33)的表达与正常对照组(0.61±0.13)相比,差异存在统计学意义(P<0.05),老年性白内障晶状体中HSP70(1.41±0.48)的表达与正常对照组(0.67±0.12)相比,差异亦存在统计学意义(P<0.05)。结论老年性白内障晶状体中HSP27和HSP70的表达高于透明晶状体。     

结核分枝杆菌优势蛋白PPE37重组载体的构建及原核表达

目的构建结核分枝杆菌ppe37基因的重组原核表达质粒,并将其转化到E.coli BL21中诱导表达。方法以结核分枝杆菌国际标准株H37Rv基因组DNA为模板,PCR法扩增ppe37基因,将其克隆至pEasyE2克隆载体中,构建pEasyE2-ppe37重组质粒。经双酶切后将ppe37基因片段亚克隆到pET30a载体中,构建重组原核表达质粒pET30a-ppe37,并转化到大肠杆菌BL21中,经IPTG诱导表达。利用SDS-PAGE及WesternBlot对表达产物进行鉴定。结果 PCR法扩增出约1600bp的条带。重组质粒pEasyE2-ppe37经PCR及双酶切鉴定构建正确,测序结果与GenBank中登录的PPE37蛋白基因序列一致。重组原核表达质粒pET30a-ppe37经PCR及双酶切鉴定构建正确。SDS-PAGE鉴定表达的组氨酸标签重组蛋白相对分子质量约为50KDa,Western blot验证重组蛋白可与抗组氨酸单抗发生特异性反应。结论成功构建结核分枝杆菌ppe37基因重组原核表达质粒pET30a-ppe37,并成功诱导表达,为PPE37蛋白作为结核病特异性诊断抗原的开发奠定了基础。     

Expression of HSP70 in Peripheral Lymphocytes of the Patients with Allergic Rhinitis

Allergicrhinitis (AR)isanallergicinflammationcausedbythenasalstimulationofallergens Alongwiththedevelopmentofindustrializationandthesharpchangesinmodernlifestylesandhumanenvi ronment,ARmorbidityisincreasingworldwide ,ac countingfor 5 %to 5 0 %ofthepopulation Atrialofchildasthmaandallergicdiseasesdemonstratedthatthemorbidityofteenager’sseasonalARwasupto5 0 %inthedevelopingcountries InEurope ,Ameri caandAustralia ,theincidenceofARalsowashigh Ithasbeenasevereharmtohealth ,living ,studyandwo…