抗rSjCTPI单克隆抗体检测血吸虫循环抗原的研究

为探讨抗重组血吸虫磷酸丙糖异构酶（rSjCTPI）的单克隆抗体检测血吸虫循环酶抗原在血吸虫病免疫诊断和疗效考核中的价值。制备日本血吸虫rSjCTPI表达蛋白,以此重组蛋白免疫小鼠,筛选出高效价的抗rSjCTPI单抗,建立以纯化的抗血吸虫可溶性虫卵抗原（SEA）的多克隆抗体（IgG）为捕捉系统,以酶标的抗rSjCTPI单抗为检测系统的酶联免疫吸附试验（P-M-ELISA）法检测血吸虫病人等血清。并对该法的敏感性、特异性、交叉反应以及疗效考核与常规的SEA-ELISA比较。结果获得了一株抗rSjCTPI的单克隆抗体,其抗体同型为IgG1。P-M-ELISA检测急性、慢性血吸虫病人、健康人以及华枝睾吸虫病人、肺吸虫病人血清的阳性率分别为100%、91.7%、0、0和0。而SEA-ELTSA为100%、98.3%、6.69%、10%和20%。P-M-ELISA法对30例同批血吸虫病人治疗前的阳性率和治愈后4个月的阴转率分别为100%和30%;而SEA-ELTSA分别为100%和10%。结果表明,应用抗rSjCTPI单抗检测血吸虫病人循环抗原的P-M-ELISA法具有较高的敏感性和特异性,并有一定的疗效考核价值。     

卵黄抗体IgY检测血吸虫病人循环抗原的初步研究

目的 探讨抗可溶性虫卵抗原（SEA）卵黄抗体（IgY）检测血吸虫循环抗原的应用价值。方法以纯化的鸡IgY作为捕捉抗体,以酶标抗SEA单克隆抗体NP28-5B为检测抗体的双抗体夹心酶联免疫吸附试验法（S-ELISA）检测急、慢性血吸虫病人和健康人血清,并与常规检测抗体的酶联免疫吸附试验法（SEA-ELISA）作比较。结果S-ELISA测得SEA浓度（y）与吸光度（A450）值（x）呈明显的正相关（y=459．22x-108．14,r=0．9481）。急性血吸虫病人循环抗原的阳性率为100．00％（9／9）,慢性血吸虫病人循环抗原的阳性率为84．44％（38／45）,健康人的特异性为96．00％（48／50）。两种方法对血吸虫病的检出率差异无统计学意义（P〉0．05）。结论S-ELISA具有较好的敏感性和特异性,可用于血吸虫病免疫诊断。     

重组GST—HD融合蛋白用于血吸虫病诊断和疗效考核的研究

目的 探讨重组GST-HD融合蛋白用于血吸虫病免疫诊断的价值。方法 用IPTG诱导表达日本血吸虫中国大陆株23kDa分子（SjC23)的大亲水片段的融合蛋白（GST-HD），再经Glu-tathione Sepharose4B凝胶进行亲和纯化，建立应用纯化的GST-HD融合蛋白检测抗SjC23抗体的ELISA血吸虫开门见山诊断方法（GST-HDELISA），用该方法和常规的SEA-ELISA平行检测血吸虫病人，肝吸虫病人及健康人血清，同时检测32份同一病人治疗前、治疗后半年的配对血清，比较两种方法诊断血吸虫病的效能和疗效考核价值。结果 GST-HDELISA和SEA-ELISA检测90份病人血清的阳性率分别为95.55%和93.33%，检测29份肝吸虫病人血清，交叉反应率分别为0和3.44%，检测40份健康人血清假阳性率分别为0和2.5%。融合蛋白中的GST分子对实验结果没有影响，检测32份治疗前、治疗后配对病人血清，治疗后6个月GST-HD抗体的阴转率达75.0%，而SEA抗体的阴转率仅为12.5%。结论 重组表达的GST-HD融合蛋白分子是一种新的血吸虫病基因工程免疫诊断抗原，具有较高的免疫诊断和病效考核价值。     

日本血吸虫4类循环抗原和抗体的检测对感染兔疗效考核价值研究

目的观察感染家兔在治疗前后血清中循环抗原和循环抗体的动态变化情况。方法采用日本血吸虫4株单克隆抗体3D8,5C7,SM21－3及SM38m（靶抗原分别为肠相关多糖蛋白抗原、肠相关蛋白抗原、虫卵抗原和成虫表膜抗原）作为捕获抗体,用斑点酶联免疫吸附试验（Dot－ELISA）检测4类循环抗原,与常规ELISA检测IgG抗体比较。结果感染日本血吸虫家兔在经硝唑咪治疗后1～2个月,循环抗原基本转阴,而IgG抗体一直维持较高水平。结论循环抗原具有较好的疗效考核价值,IgG抗体不具有疗效考核作用。     

日本血吸虫可溶性尾蚴抗原早期诊断价值的研究

目的　确定日本血吸虫可溶性尾蚴抗原作为血吸虫病早期诊断检测用抗原的应用价值。方法　从感染日本血吸虫的钉螺收集尾蚴 ,制备可溶性尾蚴抗原 (SCA) ,建立应用 SCA为抗原检测家兔血清抗体的 ELISA法 ,并以此法检测 2 8只低度感染日本血吸虫家兔的感染前和感染后不同时期的血清 ,并与常规 SEA-ELISA法比较。结果　用 SCA检测时 ,感染后 15 d有 2 /2 8只家兔血清开始出现抗 SCA抗体阳性 ,2 0 d已有 2 0只阳性 ,阳性率为 71.4% ,3 0 d 2 8只全部阳性 ,阳性率为10 0 % ,而抗 SEA抗体在感染后 2 0 d开始出现 ,3 4d有 2 1只阳性 ,阳性率为 75 .0 % ,3 7d阳性率为10 0 %。平均出现抗体的时间 SCA-ELISA和 SEA-ELISA分别为 (2 1.2 5± 4.0 7) d和 (3 1.5 0±5 .12 ) d,前者比后者早 10 d。结论　用日本血吸虫可溶性尾蚴抗原检测血吸虫病具有早期诊断的价值     

抗rSjCTPI单克隆抗体检测血吸虫循环抗原的研究

为探讨抗重组血吸虫磷酸丙糖异构酶（ｒＳｊＣＴＰＩ）的单克隆抗体检测血吸虫循环酶抗原在血吸虫病免疫诊断和疗效考核中的价值。制备日本血吸虫ｒＳｊＣＴＰＩ表达蛋白,以此重组蛋白免疫小鼠,筛选出高效价的抗ｒＳｊＣＴＰＩ单抗,建立以纯化的抗血吸虫可溶性虫卵抗原（ＳＥＡ）的多克隆抗体（ＩｇＧ）为捕捉系统,以酶标的抗ｒＳｊＣＴＰＩ单抗为检测系统的酶联免疫吸附试验（Ｐ－Ｍ－ＥＬＩＳＡ）法检测血吸虫病人等血清。并对该法的敏感性、特异性、交叉反应以及疗效考核与常规的ＳＥＡ－ＥＬＩＳＡ比较。结果获得了一株抗ｒＳｊＣＴＰＩ的单克隆抗体,其抗体同型为ＩｇＧ１。Ｐ－Ｍ－ＥＬＩＳＡ检浊急性、慢性血吸虫病人、健康人以及华枝睾吸虫病人、肺吸虫病人血清的阳性率分别为１００％、９１．７％、０、０和０。而ＳＥＡ－ＥＬＴＳＡ为１００％、９８．３％、６．     

过碘酸钠氧化可溶性虫卵抗原ELISA诊断血吸虫病的研究

目的改进可溶性虫卵抗原-酶联免疫吸附试验(SEA-ELISA),进一步提高其诊断血吸虫病的敏感性、特异性及疗效考核价值。方法应用过碘酸钠(sodiumPerodate,SP)处理SEA,氧化其糖基化表位,建立SP-SEA-ELISA,检测血吸虫病患者血清中的特异性抗体,并与常规SEA-ELISA进行比较。结果分别用两种方法检测患者血清,其中慢性血吸虫病64例、华支睾吸虫病34例、卫氏并殖吸虫病33例、囊尾蚴病36例,检测健康人血清119例。SP-SEA-ELISA特异性为99.2％,高于SEA-ELISA,敏感性为98.4％,与SEA-ELISA比较无明显降低。用SP-SEA-ELISA及SEA-ELISA检测治疗后12个月的慢性血吸虫病患者血清,阴性率为89.0％,明显优于SEA-ELISA(42.1％)。结论过碘酸钠处理SEA,可提高免疫诊断特异性,降低交叉反应,有一定的疗效考核价值。     

单克隆抗体74D_(11)、SJA_(111)检测慢性日本血吸虫病循环抗原的研究

本研究用双抗夹心ＥＬＩＳＡ法检测慢性日本血吸虫病人血清循环抗原，观察血吸虫感染家兔血清循环抗原的动态变化。该方法采用兔抗ＡＷＡ－ＩｇＧ作包被抗体，抗日本血吸虫成虫和虫卵单抗ＳＪＡ１１１和７４Ｄ１１组合作Ⅱ抗，１７２例经粪孵毛蚴确诊的血吸虫病人中，１３６例循环抗原阳性（７９．１％），其中轻度（毛蚴数＜５只／２０克粪）、中度（６－２０）、重度（大于２０）感染者循环抗原阳性率分别为７３．４％、８７．７％、９２．８％，检测６５例健康献血员，２０例肺吸虫病人，１２例华支睾吸虫病人，１０倒包虫病人，交叉反应率依次为１．５％、５％、０％、０％，４２例经吡喹酮治疗后的血吸虫病人用该方法复查，治后３月和６月随访粪孵毛蚴阴转者中，循环抗原阴转率分别为７８．０％和９２．１％，考核疗效明显优于检测循环抗体。用单抗ＳＪＡ１１１检测感染家兔循环抗原动态变化，循环抗原于感染后３—４周可检出，７周达高峰，以后逐渐消退，而循环抗体（ＩｇＧ）推迟１周出现，８－９周达高峰。实验结果表明，血吸虫病血清ＣＡｇ阳性率与感染度有关，可在早期检出，检测方法具有较高敏感性和特异性，可用于早期诊断和疗效考核。     

日本血吸虫重组信号蛋白14-3-3(rSj14-3-3)及其单克隆抗体用于诊断的价值

目的探讨纯化的日本血吸虫重组信号蛋白14-3-3(rSj14-3-3)及其相应单克隆抗体对日本血吸虫病的诊断价值。方法利用纯化的rSj14-3-3抗原和可溶性虫卵抗原(SEA)间接ELISA方法检测急、慢性日本血吸虫病患者血清中特异性抗体;以纯化的抗rSj14-3-3单克隆抗体包板,以兔抗rSj14-3-3多抗和酶标羊抗兔多抗为检测系统的酶标夹心法检测患者血清中的循环抗原。结果用rSj14-3-3检测急、慢性血吸虫病患者血清中特异性抗体的阳性率分别为100%和933%,用抗rSj14-3-3单克隆抗体检测循环抗原的阳性率分别为100%和956%,两者联合检测的总阳性率分别为100%和978%;经治疗后2、4、6、12个月,抗体转阴率分别为387%、548%、75%、90%,血清循环抗原转阴率分别为177%、419%、55%、85%,两者联合检测的总转阴率分别为452%、63%、85%、90%;对正常人血清的检测未见假阳性反应,与华支睾吸虫病和钩虫病患者血清出现轻微的交叉反应;用SEA检测抗体的阳性率分别为978%和956%,与正常人及华支睾吸虫病和钩虫病患者血清均有不同程度的交叉反应,治疗后2、4、6、12个月阴转率分别为32%、65%、125%、15%。结论rSj14-3-3检测急慢性血吸虫病患者血清中的特异性抗体和利用抗rSj14-3-3单克隆抗体检测循环抗原具有高度的特异性和敏感性,抗原和单抗可规模化     

日本血吸虫虫卵组分抗原疗效考核价值的研究

本研究首次建立了应用日本血吸虫虫卵组分抗原(107—121kDa)的酶联免疫吸附试验(FA-ELISA)检测血吸虫病人体内短程抗体的方法。结果表明该方法具有较高的敏感性(30例血吸病人的阳性率为93.33％)和较好的特异性(60例健康人无假阳性)。应用该方法对同批血吸虫病人治疗前及治疗后8个月,1年、1.5年进行检测,并与常规SEA-ELISA比较,显示该法有较好的疗效价值,并明显优于常规法。     

小鼠脾内注射日本血吸虫病患者尿液循环抗原制备单克隆抗体

目的： 探讨用一种快速免疫方法制备抗人尿液日本血吸虫循环抗原的单克隆抗体。方法： 将日本血吸虫病患者尿液用１５％ 三氯醋酸提取循环抗原后采用脾内直接注射法免疫 Ｂ Ａ Ｌ Ｂ／ｃ小鼠制备单克隆抗体。结果： 建立了 ２ 株分泌抗人尿日本血吸虫循环抗原的单克隆细胞株２ Ｅ６ 及２ Ｂ１１,两者免疫球蛋白鉴定均属 Ｉｇ Ｍ 类, Ｅ Ｌ Ｉ Ｓ Ａ测得单抗对尿液循环抗原（ Ｉ Ｈ Ｕ Ｃ Ａｇ）,效价分别为２．５６×１０５ 和６．４×１０４ 。琼脂双扩散试验显示２ 株单抗与正常人尿三氯醋酸提取物均不能形成沉淀线,而２ Ｅ６ 与日本血吸虫病患者尿液循环抗原能产生沉淀线。分别用２ Ｂ１１ 和２ Ｅ６ 腹水为捕捉抗体, Ｈ Ｒ Ｐ Ｈ１１ 为酶标抗体检测 １２ 例急性血吸虫病患者尿液,依次为６ 例和３ 例阳性,８ 例正常人尿液均为阴性。结论： 用血吸虫病患者尿液提取的循环抗原经脾脏注射免疫 Ｂ Ａ Ｌ Ｂ／ｃ 小鼠制备单克隆抗体用于检测日本血吸虫病患者尿液中循环抗原是可行的。     

血吸虫循环抗原检测的现场试验Ⅱ

制备血吸虫病单克隆抗体诊断试剂盒,将其用于Dot—ELISA,分别检测江苏、安徽流行区急性血吸虫病患者及四川、江西、安徽流行区慢性血吸虫病患者血清中循环抗原。结果不同流行区Dot—ELISA反应的平均“+”值、阳性率和抗原滴度的几何均数不同,循环抗原水平可以反映流行区的疫情。另将Dot—ELISA、ELISA检测四川慢性血吸虫病人治前及治后半年、1年的血清循环抗原及抗体,结果循环抗原在病人治疗后很快下降,治后1年77.8％(35/45)病人的循环抗原转为阴性。循环抗体在病人治疗后也逐渐下降,但速度甚为缓慢。治疗后1年,仅21.7％(10/46)病人转为阴性。上述结果表明,循环抗原能更直接、更真实地反映防治效果。     

Dot－ELISA检测抗原与IHA、COPT检测抗体诊断血吸虫病的比较

本文比较了斑点酶联免疫吸附试验（Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ）检测循环抗原，间接血凝试验（ＩＨＡ）、环卵沉淀试验（ＣＯＰＴ）检测抗体诊断血吸虫病的效果。１２例急性血吸虫病患者血清３种方法检测均为阳性；２７７例慢性血吸虫病患者血清３种方法检测阳性率分别为７９．４２％、６４．６２％和６３．１８％。１４例华支睾吸虫病患者血清和８９例健康人血清Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ检测均为阴性。１０例急性血吸虫病患者，在离开流行区经吡喹酮治疗后３７周时粪检全部转阴，检测血清循环抗原４例转阴，其余６例滴度大幅度下降；ＩＨＡ检测３例转阴，其余７例几何平均倒数滴度（ＧＭＲＴ）由４７．５７降至９．３５；ＣＯＰＴ检测平均环沉率由２１．５％降至４．１２％。结果表明Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ检测血吸虫循环抗原具有较好的敏感性和特异性。这３种方法在血吸虫病诊断及疗效考核中均有一定价值。     

血吸虫病患者血清中循环25kD表膜抗原的检测

采用细胞杂交瘤技术获得一株血吸虫成虫抗原的单克隆抗体SM 38-3。其靶抗原为成虫表膜,免疫球蛋白型为1gG 2a,能识别血吸虫分子量为25k D的表膜蛋白抗原表位。该单克隆抗体纯化后标记过氧化物酶,用于Dot-ELISA测定慢性血吸虫病人血清115份,阳性反应103份,阳性率为89.6％;测定急性病人血清89份,阳性反应85份,阳性率为95.5％;测定141份正常人血清,阳性反应2份,假阳性率为1.4％。与血吸虫肠相关抗原的检测比较,结果阳性率与抗原滴度均无明显差别。     

双抗体夹心ELISA检测循环抗原在血吸虫病控制流行地区应用的研究

对血吸虫病已控制流行地区1099名10岁以上的人群,应用抗血吸虫成虫抗原多克隆抗体(PcAb)为捕捉抗体,抗血吸虫虫卵抗原单克隆抗体(McAb)MG_2-HRP为覆盖抗体的双抗体夹心ELISA,检测血吸虫循环抗原(CAg),并以ELISA检测抗体(CAb)作平行对照.结果CAg和CAb的阳性检出率分别为4.55%和4.64%,两者的差异无显著意义(P>0.05).在50例CAg阳性者中,无血吸虫病治疗史者31例,而51例CAb阳性者中,无血吸虫病治疗史者仅6例.CAg和CAb联合检测能提高检出率.     

基于A1E3及B1C4单克隆抗体检测日本血吸虫循环抗原ELISA法的建立及现场初步应用

目的 目的 建立基于A1E3及B1C4单克隆抗体检测日本血吸虫循环抗原的夹心酶联免疫吸附试验 （ELISA）, 并对其 应用情况进行初步评价。 方法 方法 采用十二烷基磺酸钠?聚丙烯酰胺凝胶电泳 （SDS?PAGE） 和免疫印迹试验 （Western blot? ting） 对A1E3及B1C4单克隆抗体进行特性分析, 用ELISA 法测定B1C4、 A1E3单克隆抗体效价。采用棋盘格滴定法确定双 单抗夹心ELISA法检测循环抗原的最佳工作浓度。在最佳条件下, 分别检测20份急性血吸虫病病人血清、 46份慢性血吸 虫病病人血清及20份正常人血清, 评价其检测敏感性和特异性。用建立的双单抗夹心ELISA法和市售检测血吸虫循环抗 原的ELISA试剂盒检测湖北省江陵县IHA阳性血吸虫病病人血清72份, 以评估双单抗夹心ELISA法的检测效能。 结果 结果 经SDS?PAGE和Western blotting分析, 纯化后的A1E3及B1C4在相对分子质量 （Mr ） 88 000和52 000处各有一条清晰重链, 在Mr 20 000处有一条相同的轻链, 且A1E3及B1C4可与可溶性虫卵抗原 （SEA） 及急性血吸虫病病人血清发生特异性反 应。B1C4单抗效价可达1∶105 , A1E3单抗效价可达1∶30 000。用B1C4、 A1E3双单抗夹心ELISA法检测急、 慢性血吸虫病 病人血清阳性率分别为100%和86.9%, 检测20份正常人血清特异性为100%。双单抗夹心ELISA法及市售ELISA试剂盒 检测日本血吸虫循环抗原阳性率分别为45.8%及43.1%。 结论 结论 成功建立了基于A1E3及B1C4双单抗夹心ELISA法, 该 法检测日本血吸虫循环抗原具有较高的敏感性及特异性。     

Detection of a circulating antigen in human schistosomiasis japonica using a monoclonal antibody

A double antibody enzyme-linked immunosorbent assay (sandwich ELISA) was used for the detection of a circulating antigen from human schistosomiasis japonica infections. This assay involves the use of polyclonal rabbit Schistosoma japonicum soluble egg antigen (SEA) antiserum to bind circulating antigen and a monoclonal antibody (MabH4) to identify and quantify this antigen. Sera from 108 S. japonicum-infected patients (acute and chronic) were tested. Sera from 93 of 95 patients with chronic infection were positive for this antigen; sera from 12 of 13 patients with acute infections were also positive. Antigen was not detectable in control human sera. Sera from 35 chronic schistosomiasis patients were collected 6-12 months after praziquantel treatment. Circulating antigen was not detectable in the sera of 33 of these patients and was dramatically reduced in 2. This ELISA system may prove valuable in differentiating past and current infections.