肿瘤体外药敏试验三磷酸腺苷生物发光法（ATP-TCA）检测技术在化疗中的应用（简报）

肿瘤体外药敏试验三磷酸腺苷生物发光法(ATP-TCA)，是近年发展起来的针对恶性实体肿瘤有较高可评估率的新方法。ATP-TCA法的检测原理：由于ATP是活细胞最基本的能量来源，其水平与活细胞数呈正相关线性关系。用荧光素-荧光素酶试验定量测定细胞内源性ATP的含量，荧光酶在有氧条件下，可以和底物结合后催化ATP转变成ADP，并且释放出荧光(波长562mm)。通过测定内源性ATP的含量所产生的荧光强度，直接反映出细胞的数量。     

三磷酸腺苷-肿瘤体外药敏试验对宫颈癌临床化学治疗的指导作用

目的：研究三磷酸腺苷-肿瘤体外药敏试验（ATP-tumor chemosensitivity assay,ATP-TCA）对宫颈癌患者化学治疗（化疗）方案选择的指导性作用。方法：选择2007年7月至2009年10月宫颈癌住院患者72例,将其随机分为药敏组（35例）和对照组（37）例。采用ATP-TCA法检测药敏组宫颈癌组织对6种联合化疗方案的敏感性。药敏组患者根据药敏结果选择化疗方案,对照组根据临床经验制定化疗方案。随访3年,比较药敏组与对照组1年复发率和3年生存率。结果：3s例药敏组中有32例成功进行了ATP-TCA检测;体外有效例数分别为紫杉醇＋卡铂20例、紫杉醇＋奥沙利铂18例、博莱霉素＋异环磷酰胺＋顺铂17例、博莱霉素＋长春新碱＋顺铂18例、氟尿嘧啶＋顺铂17例、吉西他滨＋顺铂21例。1年复发例数药敏组与对照组比较差异无统计学意义（P〉0．05）;3年生存情况药敏组好于对照组（P〈0．05）。结论：ATP-TCA法可以为宫颈癌患者筛选出敏感、有效、个体化的化疗方案,值得临床推广。     

三磷酸腺苷法肿瘤药敏检测与胃癌个体化化疗的临床研究

目的采用三磷酸腺苷生物荧光法（ATP-TCA）对胃癌组织标本进行肿瘤药敏检测，为胃癌的个体化化疗选择提供依据。方法42例胃癌新鲜标本行肿瘤细胞分离，原代培养后用ATP-TCA技术对5种6组化疗药物进行检测。结果所有标本均顺利完成检测，可评估率为100％。不同胃癌患者对同一种化疗药物的敏感度显著不同，差异有高度统计学意义（P〈0．01）；不同胃癌患者对不同药物的敏感程度也不同，差异亦有高度统计学意义（P〈0．01）。结论ATP-TCA可为胃癌的临床个体化化疗提供重要的指导作用。。     

5-Fu抗结肠癌作用与细胞凋亡及P-gp蛋白表达的关系

目的探讨5-氟尿嘧啶(5-Fu)抗结肠癌作用中,细胞凋亡与P-gp(P-glycoprotein)蛋白表达的关系.方法应用琼脂培养MTT法,测定人结肠癌对抗代谢药的药物敏感性,同时观察5-Fu对结肠癌病人手术前化疗疗效;用S-P免疫组化和图像定量分析技术,测定34例人结肠癌组织中P-gp蛋白表达量;采用末端标记法(TUNEL),检测结肠癌细胞的凋亡指数.结果 (1)P-gp蛋白表达量与5-Fu抗药指数呈正相关(r=0.675,P<0.05).(2)凋亡率与5-Fu抗药指数呈负相关(r=-0.53,P<0.05).(3)以5-Fu抗药指数1.0为界,>1为耐药组,<1为敏感组,两组间P-gp蛋白表达量、凋亡指数差异均有显著性(P<0.05).结论 5-Fu通过诱导细胞凋亡产生抗结肠癌作用,而P-gp蛋白高表达阻碍5-Fu诱导的凋亡.     

TRAIL抑制胃癌多药耐药基因MDR1/P-gp的表达

目的观察肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)对胃癌耐药细胞株SGC-7901/VCR多药耐药基因MDR1及其编码P-gp蛋白表达的影响,探讨以TRAIL为靶点逆转胃癌多药耐药的机制。方法 SGC-7901/VCR细胞株经不同浓度的TRAIL处理48 h后,RT-PCR检测各组胃癌细胞株中多药耐药MDR1 mRNA的表达情况,同时用ELISA法检测各组胃癌细胞株中P-gp表达的含量。结果不同浓度TRAIL(50、100、200、400μg/L)作用于细胞后,胃癌耐药细胞株SGC-7901/VCR的MDR1/P-gp表达受不同程度抑制,与对照组相比差异均具有统计学意义(P<0.05)。400μg/L与200μg/L组相比其MDR1/P-gp抑制程度并不明显,其余各组间差异均有统计学意义(P<0.05)。结论 TRAIL可抑制SGC-7901/VCR MDR1/P-gp的表达,且呈量效关系。TRAIL可能通过降低耐药基因MDR1的表达逆转胃癌的多药耐药。     

GST-π、P-gp在胃癌组织中的表达及与胃癌细胞生物学行为的关系

胃癌是消化系统最常见的恶性肿瘤,发病率居恶性肿瘤的第4位[1].了解胃癌生物学行为对判断预后、指导治疗具有重要意义.我们回顾性分析105例胃癌患者癌组织中谷胱甘肽S转移酶-π(GST-π)和P糖蛋白(P-gp)的表达状况,并探讨两者与胃癌细胞生物学行为的关系,现报告如下.     

尿毒清颗粒对CYP450与P-gp体外影响的初步研究

[目的] 初步考察尿毒清颗粒(NDQ)对重组人细胞色素P450(CYP450)和P糖蛋白(P-gp)的体外影响.[方法] 1)使用 Promega P450-GloTM Screening System,通过荧光发光原理来检测NDQ组、抑制剂组对重组CYP450的IC₅₀(半数抑制浓度)值,比较NDQ组与抑制剂组IC₅₀来评价NDQ对重组人CYP1A2、CYP2D6、CYP3A4、CYP2C19,CYP2C9的抑制作用.2)使用BD ATPase Assay Kit,通过发光法检测NDQ组、空白对照组P-gp三磷酸腺苷(ATP)酶活性,比较NDQ组、空白对照组ATP酶活性来评价NDQ是否为重组人P-gp 的底物或抑制剂.[结果] 1)NDQ组与抑制剂组IC₅₀值(g/L)如下,CYP1A2: 17.47、3.37×10^-6;CYP3A4:33、4.181 3×10^-5; CYP2C9:10.39、1.056×10^-3; CYP2D6:13.98 、2.245 9×10^-6;CYP2C19:9.251、1.442×10^-3.2)NDQ组的P-gp ATP酶的活性为16.39 nmol/(mg·min),空白对照组的ATP酶活性为4.72 nmol/(mg·min).[结论] 1)NDQ组IC₅₀大于对应抑制剂组IC₅₀, NDQ对重组人CYP1A2、CYP2D6、CYP3A4、CYP2C19、CYP2C9基本没有抑制作用.2)NDQ组ATP酶活性高于空白组并差异有统计学意义,NDQ可能为重组人P-gp的抑制剂或底物.     

实体瘤多药耐药性与P-gp和p53表达的关系

目的探讨４种常见实体瘤多药耐药性与Ｐ－糖蛋白（Ｐ－ｇｐ）及ｐ５３表达的关系。②方法采用ＭＴＴ比色法检测胃癌、大肠癌、乳癌、肺癌对１４种化疗药的耐药性；用免疫组化方法检测同一标本Ｐ－ｇｐ，ｐ５３的表达。③结果１０９例标本中多药耐药者５１例，疏水性药物耐药者５９例。各肿瘤Ｐ－ｇｐ阳性表达者共４０例，ｐ５３阳性表达者共６３例。乳癌疏水性耐药组Ｐ－ｇｐ表达率为５７．１％，对照组表达率为９．０％；大肠癌多药物耐药组ｐ５３表达率为１００％，敏感组表达率为５０％．④结论Ｐ－ｇｐ阳性表达可反映乳癌的疏水性耐药，ｐ５３阳性表达是大肠癌多药耐药的标志之一。     

ATP生物荧光肿瘤体外药敏检测技术在治疗非小细胞肺癌胸水中的临床应用

目的：研究三磷酸腺苷-生物荧光肿瘤体外药敏检测技术(ATP-TCA)在非小细胞肺癌(NSCLC)化疗中的应用,为临床治疗方案的选择提供依据。方法：选择52例伴有胸水的NSCLC患者,根据患者及家属治疗意愿分为经验治疗组和药敏治疗组。经验治疗组20例患者根据经验给予(紫杉醇联合卡铂,PTX+CBP)标准方案全身化疗;药敏治疗组32例患者对胸水标本分别进行顺铂(DDP) 、诺维本(NVB) 、紫杉醇(PTX) 、卡铂(CBP) 、健择(GEM)、PTX+CBP、NVB+CBP、GEM + DDP体外药敏检测,根据体外药敏检测结果选用化疗方案,比较2组患者治疗有效率。结果:体外药敏试验,单一用药中NVB和PTX对 NSCLC的体外敏感率最高,均为28.1 % ;GEM的体外敏感率次之,为25%;CBP的体外敏感率为21.9%;DDP的体外敏感率最低,为17.6%。联合用药方案显示较好的治疗效果,其中GEM + DDP 的体外敏感率最高,达55.9%;PTX+CBP的体外敏感率次之,达50%; NVB+CBP的体外敏感率最低,为40.6%。药敏治疗组患者有效率为65.6%,经验治疗组有效率为40.0%,两组有效率比较差异有统计学意义（P＜0.05）。结论：不同化疗药物对NSCLC的体外敏感率不同;根据药敏试验结果选择化疗方案可取得更
好的临床治疗效果。     

胃癌细胞POT1 mRNA表达、端粒酶活性与胃癌发生的关系

目的研究人胃癌细胞POT1 mRNA表达、端粒酶活性与胃癌发生的关系。方法采用实时定量荧光PCR分析不同胃黏膜细胞POT1 mRNA的表达,采用TRAP-ELISA半定量分析不同细胞端粒酶活性。结果与癌旁正常黏膜相比,晚期胃癌癌组织POT1 mRNA增高,中重度不典型增生胃黏膜与其正常胃黏膜比较其POT1 mRNA表达也明显增高,肠上皮化生胃黏膜及其正常胃黏膜POT1 mRNA表达无明显差异。晚期胃癌及中重度不典型增生胃黏膜上皮中端粒酶活性明显高于肠上皮化生组织和正常胃黏膜上皮,但是胃癌和中重度不典型增生及肠上皮化生组织和正常胃黏膜间端粒酶活性无明显变化。结论尽管胃癌细胞和中重度不典型增生端粒酶活性高于正常和肠上皮化生胃黏膜细胞,但是POT1 mRNA的表达与之无关。     

肺癌MDR1基因表达与临床病理特征的关系

目的 探讨ＭＤＲ１基因表达与肺癌病理特征的关系。方法 应用逆转录－多聚酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）技术对原发性肺癌,癌旁组织及淋巴结中ＭＤＲ１基因的表达进行检测分析。结果 肺癌组织及癌旁组织中ＭＤＲ１阳性率分别为５４％和１０％,两者比较差异显著（Ｐ〈０．００１）;转移淋巴结组织ＭＤＲ１阳性率为５３％,而非转移淋巴结组织未见ＭＤＲ１阳性表达;各病理类型中不同分化程度肿瘤的ＭＤＲ１阳性分布不同,高分化腺癌     

MDR1/P-gp与大肠癌多药耐药及中医药研究概况

肿瘤多药耐药是指肿瘤细胞对分子结构不同、作用机制各异的抗肿瘤药物产生交叉耐药,多药耐药是肿瘤化疗失败的重要原因.大肠癌多药耐药涉及P-糖蛋白(P-gp)、多药耐药相关蛋白(MRP)、肺耐药蛋白(LRP)表达增加,谷胱甘肽转移酶(GST)活性增强,DNA拓扑异构酶(Topo Ⅱ)含量减少或性质改变等,其中,对P-gp介导的多药耐药研究最多,通过药物逆转肿瘤多药耐药是提高化疗效果的重要手段,但目前许多药物存在着比较严重的不良反应,临床应用受到一定的限制.中药相对来说,毒性和不良反应较小.近年来,陆续有用中医中药逆转肿瘤多药耐药的报道,现将其研究进展综述如下.     

胃癌患者血浆游离BRCA1 mRNA表达水平与临床病理特征及生存时间的关系

目的:探讨胃癌患者外周血浆中乳腺癌易感基因1(breast cancer susceptibility gene1,BRCA1)mRNA表达水平与患者临床病理特征及生存时间的关系及意义?方法:采用荧光定量PCR方法检测胃癌患者外周血浆中BRCA1 mRNA的表达水平,并分析其表达水平与胃癌患者的临床病理特征以及预后之间的关系?结果:胃癌患者血浆BRCA1 mRNA表达水平与患者的性别?年龄?是否手术?手术切除方式?TNM分期?肿瘤部位?Lauren分型?浆膜?神经?脉管是否浸润无显著性相关,但与肿瘤大小有显著相关性(P = 0.033)?生存分析提示胃癌患者血浆BRCA1 mRNA的表达与患者总生存时间显著相关(P = 0.034)?结论:胃癌患者血浆BRCA1 mRNA表达水平在一定程度上能反映肿瘤的负荷,且能作为预后评估的分子标志?     

难治性癫痫患者血清和脑脊液多药耐药基因-1表达的研究

目的 探讨难治性癫痫的发病机制,为寻找难治性癫痫新的治疗方法提供理论依据.方法 采用ELISA方法及荧光定量聚合酶链反应技术检测临床确诊为难治性癫痫的15例患者血清、脑脊液p-糖蛋白( P-glycoprotein,P-gp)及多药耐药基因-1(multidrug resistancel,MDR1)-mRNA,并与用药物控制良好的15例癫痫患者和15例正常人比较.结果 难治性癫痫组血清、脑脊液P-gp和MDR1-mRNA明显高于癫痫治疗有效组和正常对照组.结论 MDR1过度表达可能是癫痫耐药的重要因素,并可作为癫痫耐药的一个客观指标.     

慢性粒细胞白血病细胞株伊马替尼耐药与MDR1基因表达相关性探讨

目的 探讨慢性粒细胞白血病细胞株伊马替尼耐药与MDR1基因表达相关性.方法 采用Real-time PCR检测MDR1 mRNA表达,Western-blot检测P-gp蛋白表达,MTS法检测细胞药物敏感性.结果 耐伊马替尼细胞株K562/G01MDR1的mRNA表达明显上调,P-gp表达明显上调,维拉帕米能部分逆转K562/G01细胞株对伊马替尼的耐药.结论 MDR1基因参与伊马替尼耐药机制,P-gp抑制剂能改善伊马替尼临床疗效.     

谷胱甘肽转硫酶P1基因多态性及其与胃癌遗传易感性的关系

目的 为了分析中国西南地区人群谷胱甘肽转硫酶P1基因(GSTP1)的多态性分布,同时探讨GSTP1基因多态性与胃癌发病风险的关系.方法 采用PCR-RFLP及基因测序法检测160例胃癌患者及130例正常人外周血GSTP1基因的Ile105Val多态性,进行胃癌风险分析.结果 中国西南地区人群GSTP1基因Val等位基因的分布频率为18%,其中胃癌患者人群GSTP1基因Val等位基因分布频率为30%,正常人群Val等位基因分布频率为5%.结论 GSTP1基因Val等位基因的分布存在人群及地区差异,携带GSTP1基因Val等位基因的个体胃癌发病风险增高.     

P-gp与CIAPIN1、突变型p53在乳腺癌中的表达及意义

目的 探讨P-gp与CIAPIN1、突变型p53在乳腺癌中的表达及相关性.方法 应用SP免疫组化法检测41例石蜡包埋的乳腺癌组织及癌旁正常乳腺导管组织中P-gp及CIAPIN1、突变型p53的表达.结果 乳腺癌组织中,P-gp、突变型p53阳性表达率分别为51.2％ (21/41)、41.5％(17/41),明显高于癌旁正常乳腺导管组织中表达率7.3％(3/41)、0％ (0/41);而癌旁正常乳腺导管组织中CIAPIN1的阳性表达率为80.1％ (33/41),明显高于乳腺癌组织中表达率34.1％(14/41).乳腺癌中P-gp过表达与CIAPIN1及突变型p53的过表达呈正相关(均P＜0.05).3种蛋白表达均与年龄、组织病理类型及ER、PR无关.结论 CIAPIN1及突变型p53过表达可能引起乳腺癌多药耐药基因编码产物P-gp表达增高.3种蛋白可能与乳腺癌的发生有关,而与乳腺癌的发展、转移无关.     

Decreased expression of DICER1 in gastric cancer

Background  The role of epigenetics in gene expression regulation and development significantly enhances our understanding of carcinogenesis. All the tumor related genes may be the target of epigenetical or genetic regulation. We selected some epigenetically regulated genes for cDNA array analysis and observed variability in the expression of the DICER1 gene in distinct stages of gastric cancer. The aim of this study was to assess the correlation between the expression of DICER1, an epigenetically regulated gene, and gastric cancer.
Methods  To detect the expression of 506 tumor-associated genes, including DICER1, in the matched cancerous mucosa, pre-malignant lesion (adjacent mucosa), non-cancerous gastric mucosa and distant lymphocyte metastatic lesion in 3 cases of gastric cancers using cDNA array. DICER1 mRNA expression and DICER1 protein expression were further analyzed by Real-time PCR and Western blot in 32 cases of progressive gastric cancer. DICER1 protein expression was also detected in 33 early and 30 progressive gastric cancers by the immunohistochemistry (IHC) method.
Results  In 3 cases of gastric cancer cDNA array showed dramatically decreased expression of DICER1 in pre-malignant lesion, cancerous mucosa and distant lymphocyte metastatic lesions compared with matched noncancerous gastric mucosa, pre-malignant lesion and cancerous mucosa. Real-time PCR results showed that the expression level of DICER1 mRNA in gastric cancer was significantly down-regulated compared to normal gastric tissue (P<0.05). The IHC assay also showed that the expression of DICER1 was significantly decreased in progressive gastric cancer. Among the 63 cases of gastric cancers, 13/33 early (39.4%) and 19/30 (63.3%) progressive cancers showed negative expression of DICER1 (50.8%). The difference in expression of DICER1 between early and progressive gastric cancers was significant (P<0.01). The result of Western blotting showed that DICER1 protein was down-regulated significantly in advanced gastric cancer (P<0.05).
Conclusions  DICER1 expression is decreased during the progression of gastric cancer, especially in progressive gastric cancers, which indicating DICER1 may play an important role in the development of cancer and the epigenetical regulation involved.

     

黏膜地址素细胞黏附分子-1的表达与胃癌的关系

目的 探讨黏膜地址素细胞黏附分子-1(MadCAM-1)的表达与胃癌发生的关系.方法 采用免疫组织化学SP法检测50例行胃癌根治术所收集的癌组织、癌旁组织和正常胃黏膜组织中MadCAM-1的表达情况.结果 MadCAM-1表达率在正常胃黏膜、癌旁组织和癌组织中分别为78%(39/50)、64%(32/50)和40%(20/50).癌组织中的阳性表达率明显低于正常组织(P<0.01)和癌旁组织(P<0.01);而正常组织与癌旁组织之间差异无统计学意义(P>0.05);MadCAM-1阳性表达率低年龄组(<45岁)表达低于高年龄组(>45岁,P<0.05);MadCAM-1的阳性表达率与Borrmarn分型、肿瘤部位、肿瘤大小及癌细胞的浸润深度和分化程度无关(P>0.05).结论 MadCAM-1参与肿瘤局部免疫过程,与胃癌发生有关.     

胃癌组织Rac1表达与临床病理特征的相关性

【目的】研究胃癌组织中Rac1蛋白表达与临床病理特征和生存期并讨论其临床意义。【方法】运用免疫组化和组织芯片技术联合检测胃癌组织95例,对应淋巴结30例（其中有转移灶20例）,无癌癌旁≥6cm组织27例进行Rac1蛋白的表达。另取30例胃正常组织作对照。【结果】正常胃粘膜Rac1蛋白表达阳性率（13.3%）明显低于胃癌组织（72.0%）和癌旁组织（55.6%,P〈0.01）。Rac1蛋白表达与淋巴结转移、分化程度、浸润深度及Lauren分型密切相关（P〈0.05）。胃癌原发灶Rac1蛋白表达阳性率（85.0%）高于相应淋巴结转移灶（60.0%,P〈0.05）。COX多因素回归分析表明,Rac1蛋白表达阳性患者生存时间明显缩短（P〈0.05）,是生存期预测因子。【结论】胃癌组织Rac1蛋白与胃癌临床病理特征和生存期密切相关。