附子多糖后处理对缺氧/复氧乳鼠心肌细胞锰超氧化物歧化酶表达的影响

目的:观察附子多糖后处理对缺氧复氧心肌细胞的保护,并以锰超氧化物歧化酶(MnSOD)表达为着眼点,探讨其作用机制。方法:建立乳鼠心肌细胞缺氧/复氧模型,将乳鼠心肌细胞分为正常对照组、缺氧/复氧组、缺氧后适应组、附子多糖(0.1mg/ml、1mg/ml、10mg/ml)后处理组。缺氧/复氧组给予心肌细胞缺氧3h后复氧6h;缺氧后适应组在细胞缺氧3h后,复氧前即给予3个循环的5min,复氧/5min缺氧,随后复氧6h;附子多糖后处理组在缺氧3h后,将心肌细胞换入含附子多糖浓度分别为10mg/ml、1mg/ml、0.1mg/ml的培养液中常规培养6h。流式细胞仪测定心肌细胞线粒体凋亡率和线粒体膜电位,荧光定量PCR测定Bcl-2mRNA和MnSODmRNA的表达量,黄嘌呤氧化酶法检测细胞内MnSOD的活性。结果:与缺氧/复氧组相比较,予10mg/ml浓度的附子多糖后处理可以有效保护线粒体膜电位的稳定,促进Bcl-2mRNA的表达,抑制心肌细胞凋亡的发生。附子多糖可有效促进MnSOD基因表达和增加MnSOD的活性,并呈一定的浓度依赖性。结论:附子多糖后处理对缺氧/复氧后心肌细胞具有保护作用,其机制可能与附子多糖促进锰超氧化物歧化酶的表达合成,保护线粒体,抑制细胞凋亡有关。     

黄精多糖对缺氧复氧诱导H9c2心肌细胞损伤的保护作用

目的:探究黄精多糖(Polygonatum sibiricum polysaccharides,PSP)对H9c2心肌细胞缺氧/复氧(hypoxia-reoxygenation,H/R)损伤的保护作用。方法:体外无菌培养H9c2心肌细胞,制备缺氧/复氧损伤模型。应用A0-EB和Hoechst33324染色法观察心肌细胞凋亡形态学变化,流式细胞仪检测细胞凋亡率,采用MTT法检测心肌细胞存活率,Westen Blot法检测H9c2心肌细胞Caspase-3、Bcl-2及Bax蛋白表达。结果:缺氧/复氧模型组中H9c2细胞存活率明显降低,细胞核浓染致密、固缩,细胞凋亡率明显增加,Caspase-3的表达和Bax/Bcl-2比率显著上调;与模型组比较,黄精多糖1.0、1.5、2.0mg/ml药物组中细胞存活率均明显升高,细胞核淡染,轻微缩小,细胞凋亡率降低,Bax/Bcl-2比率明显下调,Caspase-3表达水平被显著抑制。结论:黄精多糖对H/R诱导的H9c2心肌细胞具有保护作用,其作用可能与抑制心肌细胞凋亡有关。     

附子多糖对SD乳鼠缺氧/复氧心肌细胞的保护作用及其机制研究

目的 以乳鼠心肌细胞缺氧/复氧模型模拟在体心肌缺血再灌注损伤,观察附子多糖后处理对缺氧/复氧后心肌细胞的作用及机制.方法 建立乳鼠心肌细胞缺氧/复氧模型,将乳鼠心肌细胞分为正常对照组、缺氧/复氧组、缺氧后适应组和附子多糖组.缺氧/复氧组给予心肌细胞缺氧3h后复氧6h;缺氧后适应组在细胞缺氧3h后,复氧前即给予3个循环的5 min复氧/5 min缺氧,随后复氧6h;附子多糖组在缺氧3h后,将心肌细胞换入含附子多糖浓度为10 mg·mL-1的培养液中,常规培养6h.MTT法检测细胞活力,流式细胞仪测定细胞内钙离子浓度和心肌细胞凋亡率,检测细胞培养液中乳酸脱氢酶(LDH)和肌酸激酶(CK)的活性.结果 与缺氧/复氧组比较,经附子多糖后处理,可以增加心肌细胞存活率(P＜0.01),减少LDH(P＜0.01)和CK(P＜0.05)的释放,降低细胞内钙离子浓度(P＜0.05),有效抑制心肌细胞的凋亡(P＜0.05).结论 附子多糖对缺氧/复氧后心肌细胞产生保护效应,机制与其抑制钙超载、减轻线粒体的损伤有关.     

黄芩茎叶总黄酮对缺氧/复氧诱导的心肌细胞凋亡相关基因Bcl-2、Bax表达的影响

目的:探讨黄芩茎叶总黄酮(scutellaria baicalelensis stem leaf total flavonoid SSTF)对培养的乳鼠心肌细胞缺氧/复氧时凋亡相关基因Bcl-2、Bax蛋白表达的影响。方法:原代培养乳鼠心肌细胞,缺氧(hypoxia H)2h后,复氧(reoxygenation R)4h制备缺氧/复氧损伤模型。以免疫组织化学方法检测心肌细胞Bcl-2、Bax蛋白表达变化。心肌细胞损伤程度以心肌细胞存活率表示。结果:缺氧2h再复氧4h,心肌细胞Bcl-2蛋白阳性表达指数(positive expressionindex PEI)显著低于对照组(P<0.01),Bax蛋白PEI显著高于对照组(P<0.01)。细胞存活率明显低于对照组(P<0.05)。SSTF干预组Bcl-2蛋白PEI明显高于缺氧/复氧组(P<0.05),Bax蛋白PEI显著低于缺氧/复氧组(P<0.05),细胞存活率明显高于缺氧/复氧组(P<0.05)。结论:心肌细胞缺氧再复氧时,Bcl-2蛋白表达降低,Bax蛋白表达增强;细胞存活率降低。SSTF可通过上调Bcl-2蛋白表达,抑制Bax蛋白表达,减少细胞凋亡,从而减轻心肌细胞缺氧/复氧损伤。     

马齿苋总黄酮对缺氧/复氧致心肌细胞凋亡的影响

目的观察马齿苋总黄酮(PTF)对缺氧/复氧致H9c2心肌细胞凋亡及凋亡相关基因Caspase-3 mRNA表达的影响。方法利用体外培养的H9c2心肌细胞建立缺氧/复氧模型,采用荧光染色法观察心肌细胞凋亡形态变化,流式细胞术检测心肌细胞凋亡率、RT-PCR检测心肌细胞凋亡基因Caspase-3的表达。结果与A/R组比较,PTF组缺氧/复氧损伤后有部分细胞发生凋亡形态变化,但数量较A/R组明显较少;PTF组均可明显降低细胞凋亡率(P0.05);PTF组可有效减少缺氧/复氧损伤的H9c2心肌细胞内Caspase-3 mRNA的表达。结论 PTF可抑制模拟缺血再灌注损伤心肌细胞凋亡,其作用可能是通过下调Caspase-3表达实现的。     

姜黄素对缺氧/复氧心肌细胞凋亡的影响及其机制的研究

目的研究姜黄素(Cur)对缺氧/复氧干预下心肌细胞凋亡的影响以及其可能的作用机制。方法用体外培养的SD乳大鼠心肌细胞,建立缺氧(4 h)/复氧(1 h)模型,然后用磷脂酰肌醇3-激酶(PI3-K)特异性的抑制剂LY294002进行干预。实验分为对照组、缺氧/复氧组(H/R)、H/R+Cur组和H/R+Cur+LY294002组。用MTT比色法测定细胞活力,Annexin-V与PI双染法及流式细胞仪检测心肌细胞凋亡率,Western blotting检测磷酸化Akt(p-Akt)和总Akt(t-Akt)蛋白水平的表达变化。结果与H/R组和H/R+Cur+LY294002组相比,H/R+Cur组能显著抑制缺氧/复氧损伤所诱导的细胞存活率的下降(P均<0.01),并且可显著降低心肌细胞的凋亡率(P均<0.05);同时H/R+Cur组Akt磷酸化明显增强(P均<0.01)。结论Cur可抑制缺氧/复氧损伤引起的心肌细胞凋亡,其抗细胞凋亡作用可能与Cur激活细胞内信号传递途径PI3-K/Akt有关。     

金属硫蛋白介导附子多糖对缺氧复氧心肌细胞的保护

目的:以金属硫蛋白为着眼点,探讨附子多糖对缺氧复氧后心肌细胞的保护机制.方法:建立乳鼠心肌细胞缺氧/复氧模型,将乳鼠心肌细胞分为正常对照组、缺氧/复氧组、附子多糖组.缺氧/复氧组给予心肌细胞缺氧3h后复氧6h;附子多糖组分别给予10.0,1.0,0.1 g·L-1的附子多糖预处理心肌细胞24 h后再予缺氧3h后复氧6h.ELISA检测金属硫蛋白的含量,流式细胞仪检测细胞的凋亡率,测定心肌细胞内丙二醛( MDA)的含量和细胞培养液中乳酸脱氢酶(LDH)的含量.结果:与缺氧/复氧组相比较,附子多糖可以呈剂量依赖形式地增加金属硫蛋白的合成,减少MDA的生成与LDH的的释放,抑制心肌细胞凋亡,在10.0 g·L-1时作用达到峰值.结论:附子多糖对于缺氧复氧心肌细胞损伤具有保护效应,其机制与附子多糖促进金属硫蛋白的合成,对抗氧化应激损伤,抑制心肌细胞凋亡有关.     

地奥心血康对培养H9c2心肌细胞缺氧/复氧损伤的保护机制

目的:探讨地奥心血康对培养H9c2心肌细胞缺氧/复氧损伤的保护作用机制。方法:建立缺氧/复氧损伤心肌细胞模型,用地奥心血康进行干预。将培养的H9c2心肌细胞随机分为6组,正常对照组(C组);缺氧/复氧模型组(H/R组);缺氧/复氧模型+吡那地尔(pinacidil,Pin)阳性对照组(H/R+Pin组);缺氧/复氧模型+地奥心血康(DAXXK)低剂量、中、高剂量(10mg/L、20 mg/L、40mg/L)干预组(H/R+L、M、H组)。MTT法测定细胞存活率;用罗丹明123(Rh123)荧光探针标记线粒体,在荧光显微镜下采集被Rh123染色的各组心肌细胞荧光图片;收集培养细胞上清液测定乳酸脱氢酶(LDH)、超氧化物歧化酶(SOD)的活性及丙二醛(MDA)的含量。结果:与正常组比较,缺氧/复氧模型组细胞存活率、线粒体膜电位及SOD活性均下降,而LDH活性、MDA含量均升高。地奥心血康用药组可有效提高心肌细胞存活率、升高线粒体膜电位,同时降低受损心肌LDH的释放量,并有效提高SOD的活性,减少MDA的生成量。结论:地奥心血康对缺氧/复氧造成的H9c2心肌细胞损伤具有保护作用,其机制与保护细胞线粒体膜、增强细胞清除氧自由基能力、减少脂质过氧化物的产生有关。     

活络效灵丹拆方对乳鼠心肌细胞缺氧/复氧损伤的保护作用研究

目的探讨活络效灵丹含药血清对乳鼠心肌细胞缺氧/复氧(H/R)损伤的保护作用及其机制。方法取体外培养的乳鼠心肌细胞,建立缺氧/复氧心肌细胞损伤模型。实验分为正常组、模型组(H/R组)、活络效灵丹拆方组和阳性药对照组(单硝酸异山梨酯组)。用MTT比色法检测活络效灵丹对H/R损伤心肌细胞存活率和细胞上清液中LDH漏出量的影响,优选活络效灵丹的最佳配伍组合,并测定各组细胞浆丙二醛(MDA)含量、超氧化物歧化酶(SOD)活性;用RT-PCR法检测心肌细胞Bcl-2 mRNA、Bax mRNA的表达。结果实验优选出活络效灵丹全方、丹参当归配伍、丹参乳香配伍、丹参当归乳香配伍为最佳配伍。与正常组比较,模型组MDA含量升高、SOD活性降低(P<0.01),细胞Bcl-2 mRNA表达降低、Bax mRNA表达增高(P<0.01);与模型组比较,优选的活络效灵丹各配伍组胞浆SOD活性增高、胞浆MDA含量减少(P<0.01),心肌细胞Bax mRNA表达减少、Bcl-2 mRNA表达增高(P<0.01)。结论活络效灵丹对H/R损伤的心肌细胞具有保护作用,其作用机制可能与清除氧自由基、抗脂质过氧化、上调Bcl-2 mRNA和下调Bax mRNA表达等有关。     

红景天苷对乳鼠缺氧/复氧心肌细胞及线粒体损伤的保护作用

目的观察红景天苷对乳鼠缺氧/复氧后心肌细胞及线粒体损伤的保护作用并探讨其机制。方法将乳鼠心肌细胞分为对照组、对照加红景天苷组、缺氧/复氧组、缺氧/复氧加红景天苷组,分别用CCK8试剂盒检测细胞活力,流式细胞仪检测细胞凋亡、线粒体膜电位情况,激光共聚焦显微镜观察细胞线粒体形态,并采用蛋白免疫印迹[Western blot]法分别检测线粒体和胞浆细胞色素C(Cytochrome C)蛋白的表达。结果红景天苷能使缺氧/复氧心肌细胞凋亡减少,增加细胞活力,升高线粒体膜电位,减少线粒体分裂,减少线粒体细胞色素C的释放,实现缺氧/复氧心肌细胞及线粒体损伤的保护作用。结论红景天苷可减轻心肌细胞缺氧/复氧损伤,减少心肌细胞的凋亡,保护心肌细胞线粒体功能。     

维拉帕米对缺氧复氧心肌细胞自噬的影响

目的 观察维拉帕米对缺氧/复氧心肌细胞的自噬相关基因Beclin-1及抗凋亡基因Bcl-2 基因的影响,探讨钙离子拮抗剂维拉帕米对心肌细胞的保护作用机制.方法建立心肌细胞的缺氧/复氧（ H/R）模型,用噻唑蓝染色法（MTT法）检测心肌细胞的存活率,实时荧光定量法（RT-PCR法）测自噬相关基因Beclin-1、LC-3 mRNA的表达量及凋亡相关基因Bcl-2 mRNA的表达量.结果与正常对照组相比,缺氧/复氧组心肌细胞存活率降低,同时Beclin-1及LC-3 mRNA的表达量增加,Bcl-2 mRNA的表达量降低（P＜0.05）.维拉帕米组可抑制Beclin-1 mRNA的表达量,提高Bcl-2 mRNA的表达量（P＜0.05）,明显提高缺氧/复氧心肌细胞的存活率.结论维拉帕米可通过抑制Bcl-2/Beclin-1途径保护缺氧/复氧心肌细胞.     

活络效灵丹对乳鼠缺氧/复氧损伤心肌细胞的保护作用研究

目的 探讨活络效灵丹含药血清对乳鼠心肌细胞缺氧/复氧( hypoxia/reoxygenation,H/R)损伤的保护作用及其机制.方法 取体外培养的乳鼠心肌细胞,建立H/R心肌细胞损伤模型,实验分为4组:正常血清对照组、模型组(H/R组)、活络效灵丹(HXP)血清组和单硝酸异山梨酯(ISMN)血清组,采用MTT比色法检测活络效灵丹对H/R损伤心肌细胞存活率的影响,测定细胞上清液乳酸脱氢酶(LDH)的漏出量以及胞浆丙二醛(MDA)含量和超氧化物歧化酶(SOD)活性,并采用流式细胞仪检测活络效灵丹对H/R损伤心肌细胞凋亡的影响.结果 与正常组比较,模型组细胞存活率明显降低,上清液中LDH漏出量和胞浆MDA含量升高,SOD活性降低,细胞凋亡率显著增加(P＜0.01);与模型组比较,活络效灵丹含药血清可明显提高细胞存活率,增加胞浆SOD活性,减少上清液中LDH漏出量和胞浆MDA含量,并降低细胞的凋亡率(P＜0.01).结论 活络效灵丹对H/R损伤的心肌细胞具有保护作用,其作用可能与其抗脂质过氧化作用有关.     

银杏叶提取物对缺氧复氧诱导心肌细胞损伤的影响

目的:通过培养SD大鼠乳鼠心室肌细胞建立缺氧/复氧(H/R)模型,观察银杏叶提取物(EGB)对心肌细胞缺氧/复氧所致心肌细胞损伤的影响,为心脏缺血/再灌注损伤的防治提供理论依据。方法:采用胶原酶消化法原代培养乳鼠心肌细胞。分正常对照组、H/R组、H/R+银杏叶提取物组,用MTT法观察心肌细胞存活率、用Western blotting测定Bcl-2、Bax蛋白的表达。结果:与空白对照组相比,H/R组心肌细胞存活率显著降低,Bcl-2蛋白表达水平下降,Bax表达水平上调;银杏叶提取物预处理后进行H/R较大程度地逆转了上述指标变化,与H/R组相比差异均有显著性(P<0.05)。结论:H/R可以诱导心肌细胞损伤;银杏叶提取物可以通过上调Bcl-2,下调Bax而减轻心肌细胞凋亡,对心肌细胞有保护作用。     

活血解毒方对缺氧/复氧所致心肌细胞凋亡的影响＊

目的 研究活血解毒方对缺氧/复氧（H/R）所致的心肌细胞凋亡的影响。方法 体外培养H9C2心肌细胞并分成正常对照组（Control组）、缺氧复氧组（H/R组）、H/R + 活血解毒中药组、LY294002组和活血解毒中药 + LY294002组，其中正常对照组给予DMEM培养基培养，缺氧复氧组给予缺氧4 h、复氧6 h处理，缺氧复氧 + 活血解毒中药组、LY294002组和活血解毒中药 + LY294002组分别给予活血解毒中药、LY294002、活血解毒中药配合LY294002预处理24 h，然后均给予缺氧4 h、复氧6 h处理。采用CCK8检测各组心肌细胞的存活率，流式细胞术检测各组细胞凋亡水平，电镜观察各组心肌细胞中线粒体、自噬体的变化，Western Blot检测各组细胞凋亡蛋白半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3（Caspase3）、半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶3（Cleaved caspase3）、β-连环蛋白（β-Catenin）、p-p65、B淋巴细胞瘤-2（B-cell lymphoma-2，Bcl-2）蛋白的表达。结果 活血解毒方预处理显著增加H/R诱导的H9C2心肌细胞凋亡，降低凋亡相关蛋白Cleaved caspase3、β-Catenin、p-p65表达，增加Bcl-2表达。结论 活血解毒方可通过抑制细胞凋亡，降低缺氧/复氧所致的心肌细胞损伤，其作用机制可能与PI3K信号通路相关。     

马齿苋总黄酮对缺氧/复氧致心肌细胞损伤的影响及机制研究

目的: 研究马齿苋总黄酮(PTF)对缺氧/复氧致心肌细胞损伤的影响及机制。 方法: 利用体外培养的H9c2心肌细胞建立缺氧/复氧模型。将培养的心肌细胞分为5组:正常对照组、缺氧/复氧损伤模型组、缺氧/复氧损伤加10 mg·L^-1 PTF组、 缺氧/复氧损伤加20 mg·L^-1 PTF组、缺氧/复氧损伤加40 mg·L^-1 PTF组。MTT法检测心肌细胞存活率,荧光分光光度法测定心肌细胞内钙离子浓度,比色法测定心肌细胞培养液中一氧化氮(NO)浓度,流式细胞术检测心肌细胞凋亡率、RT-PCR检测心肌细胞凋亡基因Caspase-3 mRNA的表达。 结果: 与A/R组比较,PTF组(终质量浓度为10,20,40 mg·L^-1)均可明显提高缺氧/复氧损伤的心肌细胞存活率,降低NO浓度、细胞内钙离子浓度、细胞凋亡率[(18.25±2.64,P<0.05),(13.83±1.52,11.21±1.76, P<0.01)],PTF组可有效减少缺氧/复氧损伤心肌细胞内Caspase-3 mRNA的表达。 结论: PTF可通过抑制心肌细胞内钙超载、减轻过量NO的细胞毒性作用、下调Caspase-3表达,从而保护心肌细胞。     

地黄多糖对乳鼠心肌细胞缺氧/复氧损伤后氧化应激和细胞凋亡的影响

目的:研究地黄多糖(polysaccharides from Rehmanniae Radix,PRR)对乳鼠心肌细胞缺氧/复氧损伤后氧化应激和细胞凋亡的影响,并探讨其可能的作用机制。方法:分离并培养乳鼠心肌细胞72 h后随机分为空白组,缺氧/复氧(H/R)模型组,PRR 10,20,40 mg·L~(-1)干预组和舒血宁注射液(SXN,100 mg·L~(-1))干预组,每组设10个复孔。各组细胞经药物干预6 h后,采用噻唑蓝(MTT)检测细胞存活率;检测培养基中天门冬氨酸氨基转移酶(AST),肌酸激酶(CK),乳酸脱氢酶(LDH)活性;测定细胞中超氧化物歧化酶(SOD),过氧化氢酶(CAT)活性和丙二醛(MDA)含量;采用流式细胞仪检测细胞凋亡状况并计算凋亡率,通过实时荧光定量-聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测凋亡相关基因B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2),Bcl-2相关X蛋白(Bax)mRNA表达并计算Bcl-2/Bax表达,通过蛋白质免疫印迹(Western blot)方法检测细胞中凋亡相关蛋白半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)表达并进行半定量分析。结果:与正常组比较,H/R模型组细胞存活率显著降低(P0.01),培养基中AST,CK,LDH活性显著升高(P0.01),细胞中SOD,CAT活性显著降低,MDA含量显著升高(P0.01),细胞凋亡率显著升高(P0.01),细胞中Bcl-2和Bax mRNA表达明显升高(P0.05,P0.01),Bcl-2/Bax表达显著降低(P0.01),Caspase-3蛋白表达显著升高(P0.01);与H/R模型组比较,PRR 20,40 mg·L~(-1)干预组乳鼠心肌细胞存活率明显升高(P0.05,P0.01),培养基中AST,CK,LDH活性明显降低(P0.05,P0.01),细胞中SOD,CAT活性明显升高,且MDA含量明显降低(P0.05,P0.01),细胞凋亡率显著降低(P0.01),细胞中凋亡相关基因Bcl-2 mRNA明显上调而Bax mRNA明显下调,Bcl-2/Bax显著升高(P0.05,P0.01),Caspase-3蛋白表达量明显降低(P0.05,P0.01)。结论:PRR能够通过抑制氧化应激损伤和细胞凋亡而对H/R损伤乳鼠心肌细胞起到一定的保护作用;作用机制可能与其改善抗氧化酶活性,上调抑凋亡基因Bcl-2表达、下调促凋亡基因Bax表达,提高Bcl-2/Bax表达,以及抑制促凋亡蛋白Caspase-3表达有关。     

川芎嗪对缺氧复氧诱导H9C2细胞损伤及凋亡的影响及其机制研究

目的:探讨川芎嗪在缺氧复氧诱导H9C2细胞损伤中的保护作用。方法:体外培养H9C2心肌细胞,构建心肌细胞缺氧复氧损伤及川芎嗪预处理模型。细胞随机分为5组:对照组(NC组)、缺氧复氧损伤组(HR组)、川芎嗪预处理L组(TMP-L组,60μg/mL),M组(TMP-M组,200μg/mL)和H组(TMP-H组,800μg/mL)。心肌细胞损伤程度以心肌细胞活力(OD值)、乳酸脱氢酶(LDH)活性、超氧化物歧化酶(SOD)活性和丙二醛(MDA)含量表示;细胞凋亡程度通过细胞凋亡率测定,并检测bcl-2和bax基因的表达。结果:与NC组比较,HR组细胞活力显著减弱,LDH释放量显著增加,SOD活性降低,MDA含量增多,出现大量心肌细胞凋亡,bcl-2 mRNA表达显著下降,bax mRNA表达显著升高,差异均有统计学意义(P 0.05);与HR组比较,TMP-M组和TMP-H组细胞活力显著增强,LDH释放量显著减少;SOD活性增强,MDA含量下降;TMP-L组、TMP-M组和TMP-H组心肌细胞凋亡率及bcl-2 mRNA表达显著下降,bax mRNA表达显著升高,差异均有统计学意义(P 0.05)。结论:川芎嗪预处理能减轻心肌细胞的缺氧复氧损伤,其作用可能与提高心肌细胞活力、增强SOD活性、降低LDH释放量、减少MDA生成、抑制心肌细胞凋亡有关。     

栀子苷预处理对H9C2心肌细胞缺氧/复氧损伤的影响及机制研究

[目的]探讨栀子苷预处理对H9C2心肌细胞缺氧/复氧损伤的影响及机制。[方法]体外培养H9C2心肌细胞,制备缺氧/复氧损伤模型。实验分为正常对照组,缺氧/复氧模型组,栀子苷预处理组。分光光度法测定细胞培养液中肌酸激酶(CK)、乳酸脱氢酶(LDH)、丙二醛(MDA)含量以及过氧化物歧化酶(SOD)活性,四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测细胞存活率,Annexin V-FITC/PI双染法流式细胞术测定细胞凋亡率。[结果]与模型组比较,栀子苷预处理组能明显减少心肌细胞CK、LDH的漏出量,提高SOD活力,降低MDA含量,同时提高心肌细胞的存活率,减少心肌细胞的凋亡。[结论]栀子苷预处理对H9C2心肌细胞的缺氧/复氧损伤具有保护作用,其机制可能与增强心肌抗氧化能力、清除氧自由基以及抑制心肌细胞凋亡有关。     

荭草花提取物对H9c2心肌细胞缺氧复氧损伤的保护作用

目的:探究荭草花提取物对H9c2心肌细胞缺氧复氧损伤的保护作用。方法:利用氯化钴(CoCl_2)建立缺氧复氧损伤H9c2细胞模型,实验分正常对照组、模型组及荭草花提取物不同浓度组。应用MTS检测细胞存活率;生化试剂盒检测细胞乳酸脱氢酶(LDH)、肌酸激酶(CK)释放量及细胞内丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)水平;Annexin V-FITC/PI双染法流式细胞仪检测细胞凋亡情况;Western blot测定cleaved Caspase-3、Bcl-2、Bax蛋白表达。结果:利用800μmol/L CoCl_2缺氧22 h,复氧2 h可建立缺氧复氧损伤心肌细胞模型。与模型组比较,荭草花提取物能显著升高心肌细胞存活率,降低LDH、CK释放量及细胞内MDA含量,提高细胞内SOD、CAT活性,并呈浓度依赖性抑制CoCl_2诱导的缺氧复氧损伤。荭草花提取物能下调促凋亡蛋白cleaved Caspase-3、Bax的表达,上调凋亡抑制蛋白Bcl-2的表达,减少心肌细胞凋亡。结论:荭草花提取物对心肌细胞缺氧复氧损伤具有一定的保护作用,其机制可能与增强细胞清除自由基能力及抑制细胞凋亡有关。     

麸炒前后茅苍术挥发油对缺氧/复氧损伤心肌细胞的抗氧化与抗凋亡作用

目的:考察茅苍术挥发油对缺氧/复氧(H/R)损伤H9c2心肌细胞的抗氧化与抗凋亡活性,并比较生品和麸炒品的作用差异。方法:以连二亚硫酸钠(Na_2S_2O_4)诱导H9c2缺氧/复氧损伤模型,噻唑蓝(MTT)法检测细胞活力,4′,6-二脒基-2-苯基吲哚(DAPI)染色评估细胞凋亡,酶联免疫吸附测定(Elisa)法检测细胞培养液中超氧化物歧化酶(SOD)、乳酸脱氢酶(LDH)和丙二醛(MDA)的含量;实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-PCR)法检测细胞中半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3 (Caspase-3)、B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)和Bcl-2同源的水溶性相关蛋白(Bax)mRNA的表达;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测细胞中裂解的Caspase-3(cleaved Caspase-3)、BAX、BCL-2的蛋白表达。结果:与正常对照组比较,模型对照组心肌细胞的存活率显著降低,SOD活力、Bcl-2 mRNA、蛋白表达明显降低,LDH、MDA含量、Caspase-3 mRNA、Bax mRNA、cleaved Caspase-3、BAX蛋白表达明显升高(P<0.05)。生品及麸炒茅苍术挥发油1μg/mL～100μg/mL能够提高H9c2心肌细胞的存活率;提高SOD的活力,降低LDH和MDA的含量;上调Bcl-2 mRNA和蛋白的表达,下调Caspase-3、Bax mRNA的表达;下调cleaved Caspase-3、BAX的蛋白表达,与同剂量的生品挥发油比较,麸炒品挥发油具有更好的作用。结论:茅苍术挥发油对H/R损伤心肌细胞具有抗氧化和抗凋亡的作用,麸炒品挥发油的作用优于生品挥发油。