口腔鳞癌癌细胞和癌相关成纤维细胞的原代培养、鉴定及其生物学特性研究

目的：对口腔鳞状细胞癌细胞（OSCCs）及癌相关成纤维细胞（CAFs）进行培养、纯化和鉴定,初步探讨其生物学特性。方法：取自临床手术的新鲜标本,通过抗污染处理,应用机械分离法和胶原酶Ⅳ消化法获得OSCC及CAFs,0.25%胰蛋白酶消化反复贴壁差数培养法分离、纯化细胞,正常口腔成纤维细胞（NFs）和舌鳞癌细胞系Tca8113作为对照组。通过形态学观察、波形蛋白和角蛋白免疫组化染色对纯化的细胞进行鉴定。应用MTT法绘出OSCCs、CAFs、NFs和Tca8113细胞的生长曲线。结果：获得纯化的OSCCs和CAFs,通过对比研究阐明OS-CC和CAFs的生物学特点;OSCCs中免疫组化染色角蛋白呈阳性、波形蛋白呈阴性,CAFs中角蛋白呈阴性、波形蛋白呈阳性。结论：通过本实验研究成功获得纯化的OSCCs和CAFs,对比研究发现CAFs和NFs在形态结构、生长特点等方面不同。     

牙龈卟啉菌、中间普氏菌的分离、培养和鉴定

目的：采用厌氧培养和鉴定技术，分离牙周炎患者龈下菌斑中的牙龈卟啉菌和中间普氏菌。方法：采集牙周炎患者的龈下菌斑，厌氧培养，分离产黑色素菌。经长波长紫外灯观察，各种生化分析和间接免疫荧光染色，分离和鉴定牙龈卟啉菌，中间普氏菌。结果：在受检的33例牙周炎患者中，24例患者检出了牙龈卟啉菌，总检出率为72．77％，共分离了79株。18例患者检出了中间普氏菌，总检出率为54．54％。共分离了32株。结论：厌氧培养，生化反应鉴定技术的发展，使牙龈卟啉菌和中间普氏菌的分离与培养准确可靠，为今后在分子水平上了解各菌株的致病机理打下了基础。     

慢性根尖周炎患牙根尖生物膜的细菌学研究

目的：对根尖生物膜细菌进行分离、培养和鉴定，了解根尖生物膜细菌的种类、组成和来源。方法：通过根尖外科手术收集25颗慢性根尖周炎患牙的根尖生物膜样本，同时收集其中20颗患牙的根管细菌样本。所有样本均按常规接种、分离、纯化后，根据耐氧实验、细菌和菌落的形态、菌落的颜色、革兰染色和生化实验对细菌进行鉴定。统计分析比较根尖生物膜和根管细菌的检出率、构成比，并对不同临床状态下的根尖生物膜细菌检出进行分析。结果：细菌检出发现92．0％根尖生物膜样本细菌培养阳性，G^＋菌和G^-菌的检出率分别为80．0％和84．0％，专性厌氧菌和兼性厌氧菌的检出率分别为80．0％和44．0％；根管样本细菌检出情况与根尖样本基本一致。结论：根尖生物膜细菌检出率高，大多数样本为多种细菌混合感染；根尖生物膜细菌的种类、检出率、构成比与感染根管细菌基本一致。     

人口腔癌相关成纤维细胞的分离培养及鉴定

目的：分离培养及鉴定口腔癌相关成纤维细胞（ CAFs）,为探究CAFs可能在肿瘤微环境促进口腔癌细胞的侵袭转移中发挥重要作用奠定基础。方法：用组织块培养法和酶消化法分离培养、纯化原代口腔癌相关成纤维细胞CAFs和口腔黏膜正常成纤维细胞（ NFs）;细胞免疫荧光技术及免疫蛋白印迹法对口腔CAFs和NFs进行鉴定。结果：口腔CAFs和NFs分离培养成功,口腔CAFs呈长梭形,达到一定密度时呈多层生长,排列紊乱;NFs呈多胞质突的扁平星状,无重叠生长现象,排列有一定方向性。上皮标志物细胞角蛋白18（ CK18）免疫荧光染色在口腔CAFs和NFs均呈阴性,间质标志物波形蛋白（ Vimentin）染色均呈阳性。α?平滑肌动蛋白（α?SMA）、成纤维细胞特异性蛋白?1（FSP?1）,成纤维细胞激活蛋白（FAP）、血小板衍生生长因子受体α（ PDGFR?α）在CAFs染色呈阳性,而在NFs中染色呈阴性。结蛋白（ Desmin）在CAFs和NFs中染色均呈阳性。蛋白表达水平上,相对于NFs,CAFs中α?SMA、PDGFR?α蛋白表达呈升高趋势,FSP?1呈下降趋势,而FAP、Desmin在 NFs和CAFs中表达无明显差异。结论：CAFs与NFs相比,在形态结构、生长方式、蛋白表达等方面均有明显差异。     

人牙周膜干细胞的分离培养及初步鉴定

目的 体处分离培养人类牙周膜干细胞并对其生物学性状进行初步鉴定.方法 采用有限稀释法进行牙周膜干细胞克隆筛选,获得单细胞克隆来源细胞,检测其克隆形成率,并采用免疫组织化学染色、碱性磷酸酶染色、免疫荧光染色等方法鉴定牙周膜干细胞的组织来源及生物学特性.结果 有限稀释法获得的牙周膜干细胞克隆株呈簇状生长,排列紧密,细胞呈圆形或椭圆形,细胞较小,排列形成紧密的团块状.免疫组化染色显示细胞波形蛋白阳性,角蛋白阴性;碱性磷酸酶染色阳性;早期间充质干细胞的标志物STRO-1荧光染色显示细胞发出明亮的红色荧光,表达阳性.结论 牙周膜中存在具有高增殖能力的干细胞,克隆化分离培养的人牙周膜干细胞具有强克隆形成能力,具有间充质干细胞表型和生物学特性.     

口腔癌相关成纤维细胞的分离培养及初步鉴定

目的　对口腔癌相关成纤维细胞 (CAFs)进行分离、培养、纯化并作初步鉴定。方法①用组织块培养法获得原代口腔CAFs和口腔黏膜正常成纤维细胞 (NFs) ,0 .2 5 %胰蛋白酶消化传代 ,联合采用机械刮除法和酶消化法纯化细胞 ;②通过形态学观察和多种蛋白的免疫组化染色 ,对口腔CAFs进行初步鉴定。结果　①获得第 3代纯化口腔CAFs;②口腔CAFs呈长梭形 ,胞质突减少 ,细胞大小不一致 ,生长密集 ,排列紊乱。电镜下可见肌丝和电子致密斑等超微结构 ;③口腔CAFs的细胞角蛋白免疫组化染色呈阴性 ,波形蛋白、α 平滑肌动蛋白、基质金属蛋白酶 2染色呈阳性。结论CAFs与NFs相比 ,在形态结构、生长方式、蛋白表达等方面差异均有显著性 ,推测口腔肿瘤 宿主界面微环境可能是其重要的影响因素     

成骨细胞分离培养及其生物学特性的探讨

采用改良的酶消化法,从新生兔的颅骨中分离出成骨细胞,进行培养。除了在细胞形态学上对其鉴定外,还根据成骨细胞的生物学特性,首次引用了骨形成蛋白单克隆抗体(BMP-McAb)免疫细胞化学技术。以及碱性磷酸酶染色和含量测定,成骨细胞对甲状旁腺激素(PTH)-cAMP反应等方法,验证了经酶消化分离培养的兔颅骨细胞具有成骨细胞的功能和特性。可供实验使用。     

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目的建立BALB／c近交系小鼠腭胚突间充质（EPM）细胞体外培养模型并研究其生物学特性。方法芩研究于2012年11月至2013年7月在山西医科大学医学寄生虫研究所进行。采用机械分离及胰蛋白酶消化法，简便、准确、快速地获得高成活率的BALB／c近交系小鼠EPM细胞，采用免疫组化法鉴定细胞，并进行细胞增殖和形态学观察。结果EPM细胞为成纤维细胞样细胞，呈梭型，单层漩涡状排列，排列无序，细胞核大，核分裂像较多。免疫组化染色显示，角蛋白标记为阴性，波形蛋白标记为阳性。EPM细胞呈指数生长，有较强的增殖能力。结论建立的BALB／c近交系小鼠EPM细胞体外培养技术模型可较好地保持EPM细胞的基本生物学特性。     

髓磷脂碱性蛋白在涎腺腺样囊性癌中的表达

目的:利用免疫组化方法研究雪旺氏细胞标记物髓磷脂碱性蛋白(MBP)在腺样囊性癌中的表达,探讨腺样囊性癌中肌上皮细胞向雪旺氏细胞分化与腺样囊性癌嗜神经侵袭之间的关系。方法:对17例腺样囊性癌标本进行MBP免疫组化染色,利用双重免疫荧光染色及激光共聚焦显微镜技术检测MBP和肌上皮标记物MA在腺样囊性癌中的共表达。结果:17例腺样囊性癌中有6例MBP免疫组化染色呈阳性反应,双重免疫荧光染色发现MBP与MA在同一腺样囊性癌细胞的胞浆中表达。结论:腺样囊性癌中的肌上皮细胞发生了雪旺氏分化,推测这种分化与腺样囊性癌嗜神经侵袭密切相关。     

免疫组化双重染色法在毛细淋巴管研究中的应用

目的：评价免疫组化双重染色在毛细淋巴管研究中的作用。方法：利用荆豆凝集素及Ⅳ型胶原单克隆抗体分别标记内层细胞和基底膜，对舌、颊等组织进行免疫组化双重染色。结果：毛细淋巴管由于仅有一层内皮细胞构成而呈单层着色，而毛细管则由于内皮细胞外还有一层完整的基底膜而呈双层着色。结论：免疫组化双重染色法在毛细淋巴管的研究中是一种较为准确、客观的方法。     

Immunohistochemical localization of osteopontin in human pulp stones

The organic matrix component of human pulp stones was investigated by immunohistochemistry. Two pulp stones were extracted from the upper molar teeth of two patients suffering from irreversible pulpitis. Both were formed in the center of the pulp cavity and located apart from the dentin walls. After demineralization, serial sections of the stones were prepared and subjected to immunohistochemical procedures using specific antibodies to type I collagen and noncollagenous proteins (osteopontin, osteonectin, and osteocalcin), which are reported to be involved in calcified matrix formation. Type I collagen was localized evenly in the stones, indicating that it is a major matrix component of pulp stones. Strong immunostaining of osteopontin appeared in the peripheral area of the stones, whereas osteonectin and osteocalcin were not detected. We previously reported that dental pulp cells produced osteopontin in vitro. Osteopontin has been commonly found in other pathological calcification, such as urinary stones, atherosclerotic plaques, and dental calculus. Taken together, the present findings suggest that osteopontin produced by dental pulp cells is possibly associated with calcification of the pulp stone matrix.     

人恒牙牙髓干细胞体外定向诱导分化为成骨细胞的研究

目的:研究人恒牙牙髓组织来源的牙髓干细胞在体外分化为成骨细胞的能力,探讨其作为骨组织工程种子细胞的可行性.方法:从正畸治疗减数拔除的恒前磨牙中分离牙髓组织,应用酶消化法获得牙髓细胞.单抗Stro-1标记、免疫磁珠阳性分选系统分选获得牙髓干细胞,第3代牙髓干细胞用成骨向诱导培养基向成骨细胞诱导分化.用碱性磷酸酶染色和Vo...     

口腔生态环境中的纳米菌与口腔疾病间的关系

纳米菌较普通细菌小100%,能产生坚硬的矿化外壳,参与结石的形成,与多种疾病有关.随着纳米菌生物学特性地不断揭示,纳米菌已经成为当今研究的一个热点.口腔生态环境中的唾液、牙表面、牙菌斑、牙石和髓石内存在着大量的纳米菌.本文在复习大量文献的基础上,就纳米菌的微生物学特性及其与口腔疾病的关系等作一综述.     

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目的 比较微小RNA（miRNAs）在人牙髓干细胞（dental pulp stem cells, DPSCs）及非DPSCs中的表达差异,探讨其在维持DPSCs干性状态中的作用。方法 本研究于2013年1—10月在福建医科大学附属口腔医院完成。 原代培养人牙髓细胞,利用结合了STRO-1特异性抗体的免疫磁珠分选获得DPSCs,并进行成牙本质样细胞的诱导分化,检测碱性磷酸酶（ALP）、骨钙素（OC）值以及进行von Kossa染色,鉴定其分化能力。采用miRNA基因芯片技术,检测DPSCs和非DPSCs中miRNAs的表达,筛选出差异表达的miRNAs。结果 与非DPSCs相比,DPSCs中表达上调超过2倍的miRNAs有11个,表达下调超过2倍的miRNAs有3个。结论 miRNAs表达谱的变化可能与DPSCs干性状态的维持相关。     

人牙髓干细胞及非牙髓干细胞中微小RNA表达谱比较研究

目的 比较微小RNA（miRNAs）在人牙髓干细胞（dental pulp stem cells, DPSCs）及非DPSCs中的表达差异,探讨其在维持DPSCs干性状态中的作用。方法 本研究于2013年1—10月在福建医科大学附属口腔医院完成。 原代培养人牙髓细胞,利用结合了STRO-1特异性抗体的免疫磁珠分选获得DPSCs,并进行成牙本质样细胞的诱导分化,检测碱性磷酸酶（ALP）、骨钙素（OC）值以及进行von Kossa染色,鉴定其分化能力。采用miRNA基因芯片技术,检测DPSCs和非DPSCs中miRNAs的表达,筛选出差异表达的miRNAs。结果 与非DPSCs相比,DPSCs中表达上调超过2倍的miRNAs有11个,表达下调超过2倍的miRNAs有3个。结论 miRNAs表达谱的变化可能与DPSCs干性状态的维持相关。     

颌面部火器伤后间接损伤的牙髓组织中白介素-1的表达和意义

目的：研究白细胞介素—1(IL—1)在犬颌面部火器伤间接损伤牙髓中的表达情况。方法：采用直径(d)5．80mm制式枪弹致伤犬下颌部的模型，利用免疫组化染色及定量分析方法检测颌面部火器伤后不同时间、下颌不同牙齿的牙髓组织中IL—1的动态变化。结果：IL—1在伤后牙髓组织中有阳性表达，并随时间的改变，呈动态变化过程。伤侧高于对侧：结论：IL—1在颌面部火器伤牙髓间接损伤过程中起重要作用。     

凝血酶受体在人牙髓组织和细胞中表达的免疫组化研究

目的：探讨凝血酶受体在人正常、炎症牙髓组织及体外培养的牙髓成纤维细胞中的表达及其意义。方法：体外培养人牙贿成纤维细胞,收集正常和炎症牙髓组织,采用免疫组织化学方法观察凝血酶受体在牙髓组织和细胞中的表达和分布。结果：体外培养的牙髓成纤维细胞可见受体强阳性表达,正常及炎症牙髓组织中成牙本质细胞层、牙髓细胞、血管内皮细胞均呈广泛的阳性表达,炎症区淋巴细胞、单核细胞、中性粒细胞染色为强阳性。结论：人牙髓组     

The Effect of SIRT6 on the Odontoblastic Potential of Human Dental Pulp Cells

Introduction

The aim of this study was to investigate whether SIRT6 is expressed in human dental pulp as well as the effect of SIRT6 on proliferation and odontoblastic differentiation of human dental pulp cells (HDPCs).

Methods

Immunohistochemical and immunocytochemical assays were used to detect the expression of SIRT6 in human dental pulp tissue and HDPCs. To determine the effect of SIRT6 on odontoblast differentiation, HDPCs with loss (HDPCs SIRT6 knockdown) and gain (HDPCs SIRT6 overexpression) of SIRT6 function were developed, and their proliferation ability was examined. Odontogenic differentiation of HDPCs was determined by alkaline phosphatase (ALP) activity, ALP-positive cell staining, alizarin red staining, and von Kossa staining. Mineralization-related genes, including ALP, dentin sialophosphoprotein (DSPP), and dentin matrix acidic phosphoprotein 1, were determined by real-time quantitative polymerase chain reaction. Western blot analysis was performed to detect the expression of DSPP protein.

Results

SIRT6 was found in the dental pulp tissue and HDPCs. SIRT6 knockdown decreased ALP activity in HDPCs; calcium nodule formation ability; and the expression of mineralization-related genes such as ALP, DSPP, and DMP1, whereas these were increased with the overexpression of SIRT6.

Conclusions

SIRT6 is expressed in human dental pulp and participates in the odontoblast differentiation of HDPCs.     

A radiographic assessment of the prevalence of pulp stones in a group of Turkish dental patients

Aim  To determine the prevalence of pulp stones in a group of patients using radiographs, and to assess any associations with age, gender, systemic diseases, tooth type, jaw, caries, restorations, impacted third molars and dental anomalies including dens invaginatus, taurodontism, dens evaginatus and microdontia.
Methodology  A total of 519 patients were selected randomly amongst patients referred to Oral Diagnosis and Radiology Department, Faculty of Dentistry, Ankara University. After clinical inspection, full-mouth periapical radiographs were obtained. An oral radiologist examined the radiographs to identify pulp stones. Frequency distribution of teeth with pulp stones was calculated and statistical analysis was performed with chi-square test.
Results  Of the patients, 313 (60%) were female and 206 (40%) were male. Sixty (12%) had one or more teeth that contained pulp stones. Amongst the 13 474 teeth examined radiographically, 627 (5%) had pulp stones. There was no significant association between pulp stone occurrence and gender or systemic diseases. As age increased, the prevalence of pulp stones increased ( P  < 0.01). Molars had statistically more pulp stones than premolars and incisors ( P  < 0.001). Frequencies in both maxillary and mandibular jaw were similar. There was no association between pulp stones and impacted third molars, caries, restorations or dental anomalies.
Conclusions  The prevalence of pulp stones increased with age and was significantly higher in molar teeth than premolars and incisors. There was no significant association between pulp stones and gender, systemic diseases, impacted third molars, condition of the crown and dental anomalies.     

髓石形成原因初探

目的：观察无龋及深龋患牙牙髓组织学表现及髓石检出情况，初步探讨髓石形成的相关因素。方法：收集健康无龋牙、深龋患牙及患者的一般情况，分析对比患者年龄差异；牙髓组织HE染色，显微镜下观察比较无龋牙与深龋患牙的髓腔组织学形态及髓石检出情况。结果：两组患者年龄无统计学差异，无龋牙牙髓组织细胞成分较多，纤维组织成分较少，无明显炎症细胞，髓石检出率为0；深龋患牙牙髓组织呈老龄化状态：细胞成分少，纤维血管组织显著增多，髓腔内可见炎症反应，髓石检出率为20％。结论：髓石的发生可能与牙髓的老龄化状态、炎症等因素密切相关。