NaOH消蚀法制备脱细胞真皮基质修补腹壁疝*

背景：与其他疝修补材料相比,脱细胞真皮基质具有易血管化、抗感染、从而可用替代传统补片用于感染腹壁缺损重建等特点。 目的：观察NaOH消蚀法制备的脱细胞真皮基质作为修补材料应用于腹疝的应用价值。 方法：以全厚猪皮制成脱细胞真皮基质,45只SD雄性大鼠制备腹壁疝模型,随机数字表法分为腹壁疝组：直接缝合皮肤,Marlex网组和脱细胞真皮基质组：分别应用大小为3.5 cm×4.0 cm的Marlex网和脱细胞真皮基质缝合皮肤;观察修复后1周时有无腹壁疝发生,脱细胞真皮基质组修复后1,2,3,5,10周分别取材,其中每周各组取4只用于苏木精-伊红染色,光镜观察。修复后第5周Marlex网组和脱细胞真皮基质组各取6只用于抗张力试验。 结果与结论：术后1周脱细胞真皮基质组与Marlex网组腹壁疝发生率均显著低于腹壁疝组(P < 0.001)。脱细胞真皮基质的胶原纤维无明显变化,即有少量成纤维细胞植入,术后2周可见新生血管,术后5周脱细胞真皮基质内部血管密度基本稳定。将单独脱细胞真皮基质片与Marlex网行抗张力试验,Marlex网的抗张力显著高于脱细胞真皮基质(P < 0.001)。但植入体内5周后,脱细胞真皮基质筋膜组织的抗张力高于Marlex-筋膜组织(P < 0.05)。提示复合消蚀制备的脱细胞真皮基质可以作为良好的疝修补材料。     

异种脱细胞真皮替代睑板材料重建眼睑的可行性*☆

摘要背景：眼睑后层重建是眼睑重建的重点和难点,其中睑板替代物更是研究的焦点。异种脱细胞真皮作为一种新型的组织工程材料,在国内外烧伤整形领域,正得到广泛的研究和应用。目的：观察异种(猪)脱细胞真皮植入兔眼睑后的组织相容性极其组织病理学变化。方法：剥取健康小白猪全层皮肤20 cm×20 cm,制备异种(猪)脱细胞真皮基质。同时制备兔睑板全层缺损模型并植入脱细胞真皮基质,观察大体情况,并分别于第1,2,3周取移植交界处眼睑组织光镜下观察组织学的改变。结果与结论：大体观察未见明显排斥反应及眼睑的变形;光镜下1周时可见局部炎症细胞浸润,2周时炎症细胞减少,3周时正常纤维组织长入,逐渐分割代替植入的胶原纤维,炎症反应消失。提示异种脱细胞真皮免疫原性低,并可引导新生胶原的生长,是一种良好的睑板替代物。关键词：异种脱细胞真皮;眼睑重建;组织工程;材料;相容性doi:10.3969/j.issn.1673-8225.2011.03.004     

脱细胞真皮基质修补腹股沟疝

背景：当前应用聚丙烯补片行腹股沟疝无张力修补已成为腹股沟疝修补的标准手段,但这些材料可能对患者生殖功能产生影响。 目的：总结应用脱细胞真皮基质修补腹股沟疝的经验。 方法：回顾性分析19例应用异体脱细胞真皮基质修补腹股沟疝患者的临床资料,男15例,女4例,年龄5~38岁。术后观察切口愈合情况,并定期随访。 结果与结论：19例患者伤口均Ⅰ期愈合,无切口感染、皮下积液等并发症。18例患者获得随访,随访3~30个月,无局部疼痛、牵拉等不适感,无复发病例。提示脱细胞真皮基质材料为未成年人、尚未婚育及有生育要求的男性腹股沟疝患者的治疗提供一种新的选择。     

异体异种脱细胞真皮与自体刃厚皮复合移植的比较

背景：尽管真皮基质的生物模板作用可减少瘢痕形成, 改善创面愈合质量已得到共识,但不同种属脱细胞真皮基质作为真皮添充物的成活机制和重建过程等生物学性能是否有差异仍需进一步探讨。 目的：对比分析异体及异种脱细胞真皮基质与自体刃厚皮复合移植的近期效果。 设计、时间及地点：随机分组,自身对照观察实验,于2008-01/06在海南省人民医院医学动物实验中心完成。 材料：J-1 型人脱细胞异体真皮基质由北京桀亚莱福生物技术有限公司提供。小型香猪1只以低含量胰蛋白酶消化加反复冻融法制备制备猪脱细胞真皮基质。 方法：选取近交系小型香猪15 只,在每头猪脊背两侧制作6 cm×6 cm全层皮肤缺损创面各3处,共6处,按移植物的不同将创面随机分为3组：猪脱细胞真皮基质与猪刃厚自体皮复合移植组与人脱细胞真皮基质与猪刃厚皮复合移植组在脱细胞真皮基质植入后,在其表面重叠覆盖自体刃厚皮,对照组单纯行猪薄皮片移植。 主要观察指标：移植后9 d、21 d及3个月各组移植物成活情况、创面收缩率和组织学变化。 结果：移植后第9,21天各组移植皮片大部分均成活良好,局部无红肿,3个月时两复合移植组皮肤外观相似,均光滑、柔软、丰满、有弹性,与周围正常组织结合部平坦, 对照组创面收缩凹陷明显,皮片薄弱,韧性也较复合移植组差,3组移植物成活率差异无显著性意义(P > 0.05),自体刃厚皮移植创面收缩率高于其他两组(P < 0.05)。移植后8 d,2个复合移植组脱细胞真皮基质引导形成丰富的毛细血管结构, 复合皮表皮层形成且分化良好;移植后21 d,已有完整的皮肤结构, 真皮层内可见胶原纤维排列规整,表皮-真皮连接区“钉突”结构明显,移植后3个月结构更加接近正常真皮,对照组组织致密,胶原排列紊乱,与瘢痕组织结构相似。 结论：与自体皮复合移植时, 异体及异种脱细胞真皮基质具有相近的生物学性能,且效果优于单纯刃厚自体皮移植。     

异种脱细胞真皮基质组织补片修复口腔黏膜组织缺损71例

摘要 背景：近年来,同种异体脱细胞真皮基质组织补片已在口腔组织缺损修复中广泛应用,但有关异种脱细胞真皮基质组织补片修复口腔黏膜缺损的研究较少。 目的：评价异种脱细胞真皮基质在口腔黏膜组织缺损修复中的效果及生物安全性。 方法：选择口腔良、恶性肿瘤手术切除后遗留的黏膜及部分软组织缺损患者71例,男37例,女34例,年龄45(20~70)岁;其中良性肿瘤42例,恶性肿瘤29例。采用异种脱细胞真皮基质组织补片修复口腔软组织浅层缺损。观察生物膜成活情况,颜色、质地,比较组织补片修复无硬组织支撑部位(颊、舌、口底)和有硬组织支撑部位(牙龈、硬腭)的收缩率。 结果与结论：71例补片完全成活,未发生坏死、感染等并发症。植入后2周补片成活面积为(98.20±5.20)%,植入后3个月,补片颜色已与周围黏膜相近,大部分患者诉有不同程度的紧张感;植入后6个月补片植入区成功完成了细胞的爬行代替和血管化,生长稳定,无进一步收缩,弹性良好,患者感觉趋于正常。生物膜收缩发生在植入后2周~1个月,植入后3个月后基本稳定,术区组织形态与正常组织相比无明显差异。无硬组织支撑部位(颊、舌、口底)的收缩率较硬组织支撑部位(牙龈、硬腭)收缩率大。说明应用异种脱细胞真皮基质组织补片修复口腔黏膜具有组织相容性好、来源广泛、操作简单等优点,能够起到早期覆盖创面,促进创面愈合,减轻瘢痕生成的作用,可作为口腔黏膜缺损修复的理想材料。 关键词：口腔黏膜组织缺损;异种脱细胞真皮基质;组织移植;补片;牙周与口腔组织再生修复材料     

脱细胞真皮基质补片治疗小儿肛瘘

背景：采用异体脱细胞真皮基质材料填塞治疗成人低位肛瘘具有较好的临床效果。 目的：探讨脱细胞异体真皮基质补片修补小儿肛瘘的可行性以及方法。 方法：将138例肛瘘患儿随机分为2组,用可吸收线将脱细胞异体真皮基质生物补片固定在直肠黏膜下,A组双层缝合封闭内口,B组不游离、缝合内口。 结果与结论：随访观察6个月,所有病例肛周无红肿,外观无异常,外口硬结消失,内口愈合良好,无肛门狭窄及肛门外形改变。两组在修复后均有部分患儿出现瘘口出流便,但未经特殊处理,症状均自行消失,痊愈。A组术后瘘口漏便患儿人数较B组多(P < 0.01),出现时间较B组早(P < 0.05),但总体愈合时间无差异。说明手术中仅固定补片于内口,而不游离、缝合内口即可达到满意疗效。     

纳米银猪脱细胞真皮敷料的细胞毒性评估

背景：传统的猪皮敷料具有保护创面的作用,但不具有主动抗感染功能。 目的：评估自制纳米银猪脱细胞真皮敷料的体外细胞毒性,评价其作为新型敷料的可行性。 方法：用四甲基偶氮唑盐比色法检测自制纳米银猪脱细胞真皮敷料100%和50%的浸提液对小鼠成纤维细胞(L-929细胞)相对增殖率的影响,并评价其细胞毒性。倒置显微镜观察各组细胞形态变化,培养2,4,7d后用酶联免疫检测仪测定溶液吸光度值来评估细胞毒性。 结果与结论：L-929细胞在自制纳米银猪脱细胞真皮敷料的浸提液中增殖良好,其细胞毒性实验显示细胞毒级为1级,实验组与阴性对照组之间的吸光度值差异均无显著性意义( P >0.05)。说明自制纳米银猪脱细胞敷料无细胞毒性,作为新敷料具有可行性。 关键词：猪脱细胞真皮基质;敷料;纳米银;细胞毒性;MTT doi:10.3969/j.issn.1673-8225.2010.25.012     

异种（牛）脱细胞真皮基质修复咽喉肿瘤切除术后黏膜缺损的效果评估

目的：咽喉肿瘤切除后黏膜缺损的修复直接影响呼吸、发音、吞咽功能的恢复。文章评估了应用异种（牛）脱细胞基质修复膜修复咽、喉术后黏膜缺损的效果。 方法：选择2006-08/2007-11青岛大学医学院附属烟台毓璜顶医院耳鼻咽喉头颈外科收治的咽喉肿瘤患者27例，口咽部扁桃体癌5例，下咽癌6例，喉癌16例，其中声门区癌15例，声门上区癌1例，肿瘤病理均为鳞状细胞癌。实验经医院伦理委员会批准，所有患者对实验及治疗方案均知情同意。实验采用烟台正海生物技术有限公司提供的异种（牛）脱细胞真皮基质修复膜，批号SS070603，规格（2×2.5）cm或（4×3）cm的白色、半透明、蜂窝状片块组织，基底膜面较粗糙，另一面较光滑。扁桃体癌患者将修复膜缝于创面后，采用碘仿纱条打包固定7 d。喉癌患者如缺损组织小可以将修复膜直接铺于创面缝合，如缺损较大则先应用带状肌或带状肌筋膜修补喉部缺损，然后将修复膜铺于喉内创面与黏膜切缘对位缝合，采用喉扩张模局部压迫10～12 d。下咽癌及颈段食管癌患者亦应用带状肌修补下咽部后壁或侧壁缺损，然后将修复膜与局部黏膜切缘直接对位缝合。术后对患者进行随访观察，以3，6个月，1年为观察时间；主要观察脱细胞真皮基质修复膜修复的愈合，呼吸功能、发音功能、吞咽功能的恢复情况。 结果：27例患者中出院时经电子喉镜检查26例黏膜缺损修复一期愈合，1例下咽癌患者术后出现咽漏，经局部换药对症处理后愈合。4例扁桃体癌、4例下咽癌、6例喉癌患者在术后3～6个月应用电子喉镜复查，修复的局部已经恢复为肉眼可见的黏膜组织，吞咽、呼吸均恢复正常（1例声门上喉癌的患者在术后15 d进食时有呛咳，经过锻炼进食恢复正常）。喉癌患者发音功能恢复，但是发音的清晰度欠佳；5例扁桃体癌中随访6个月以上4例无复发，1例术后放疗于2个月时局部复发及颈部转移，拒绝再次手术，现带瘤生存；随访1年以上者2例。6例下咽癌随访6个月以上者4例，其中1例患者术后出现咽瘘，经局部换药及对症处理后咽瘘愈合，放疗后3个月因口内大出血死亡。16例喉癌患者随访6个月者6例，随访1年以上者1例。27例患者均未发现排斥、过敏等反应。 结论：异种脱细胞真皮基质修复膜为修复头颈肿瘤术后黏膜缺损提供了一种新的方法，手术操作简便，效果良好，为功能恢复提供了保证。     

改建脱细胞真皮基质作为软骨细胞移植载体修复兔软骨缺损○

背景：脱细胞真皮(Acellular Dermal Matrix, ADM)具有良好的柔韧性、易于修剪,制成微粉状皮内或皮下注射后,可见到成纤维细胞的移入及胶原的沉积,目前己被广泛应用于整形修复临床实践。 目的：验证脱细胞真皮经改建后作为软骨细胞移植载体的可行性。 设计、时间及地点：对比观察,于2003-08/ 2007-02在北京大学医学部和北京积水潭医院完成。 材料：新生小牛的真皮层由北京元亨圣马生物研究所提供;体质量250 g的SD健康成年大白鼠24只,雌雄不限。3月龄的新西兰大白兔36只。 方法：①取新生小牛背部真皮组织,进行脱细胞处理,分别用戊二醛和水溶性交联剂进行交联;再用生长因子对其进行纤维表面修饰。②取SD大白鼠,于大鼠脊柱两侧各设计3个长方形皮瓣,分别植入两组交联后的脱细胞真皮基质。术后2,6,12周取出植入物。③取新西兰大白兔,分为实验组和对照组,从其左侧关节面取原代软骨,分离软骨细胞并接种于复合后的ADM上进行培养。将实验组兔右侧后肢造成软骨缺损,植入含有自体软骨细胞的ADM,再将生物胶滴加于载体表面;对照组兔右侧后肢造成软骨缺损后分层缝合伤口。分别于第4,12,24周取材,对照组每次取2只,实验组每次取5只。 主要观察指标：①交联效果的比较。②兔软骨缺损修复结果。 结果：①经戊二醛交联后的ADM植入大鼠皮下后有强烈的炎症反应,并有组织出血坏死;而经水溶性交联剂交联的ADM的组织相容性较好。②在植入接种有自体软骨细胞的ADM24周后大白兔股关节的软骨缺损修复完好,附和的细胞能够存活且有增殖,ADM本身基本降解。 结论：经脱细胞及纤维改建和交联及生长因子修饰的ADM孔隙均匀,组织相容性好,适于细胞黏附及长期生长。ADM胶原支架在兔体内可基本降解,未见排异反应,移植24周后见骨缺损修复。     

脱细胞真皮基质黏膜补片填充治疗单侧声带麻痹

背景：脱细胞真皮基质黏膜补片作为一种新型的组织填充修复材料,具有良好的生物和结构相容性。 目的：观察脱细胞真皮基质黏膜组织补片作为填充材料应用于声带内移的近远期疗效。 方法：选择2009-01/2010-01解放军第三军医大学大坪医院野战外科研究所耳鼻咽喉-头颈外科收治的单侧声带麻痹患者20例,局麻下患侧甲状软骨板开窗,观察脱细胞真皮基质黏膜补片患侧声带下填充对改善声嘶等症状的疗效,术后1 d、3,6,12个月各随访1次,通过纤维喉镜观察发音时声门闭合情况,嗓音分析评估音质,包括标准化噪声能量和最长声时。 结果与结论：经患者主观评价及治疗前后各阶段嗓音声学参数分析(标准化噪声能量,最长声时),证实手术近远期疗效满意,无特殊手术风险及不良反应。提示脱细胞真皮基质黏膜补片具有良好的组织相容性和易操作性,可作为声带麻痹手术治疗中声带内移的新型填充材料,临床应用疗效满意。     

脱细胞异体真皮组织补片在智齿拔除中的应用

背景：使用J-1型脱细胞异体真皮组织补片覆盖拔牙创口的报告较少。 目的：探讨异体脱细胞组织补片置入拔牙窝对预防拔牙后并发症的影响。 方法：将400例阻生智齿拔除患者随机分为2组,实验组智齿拔除后拔牙窝内放置医用组织补片;对照组智齿拔除后不放置医用组织补片。分别观察拔牙后组织补片脱落率、肿胀发生率、拔牙窝内血凝块存留和食物残渣残留情况、牙龈是否红肿、对拔牙后出血的影响以及干槽症的发生率。 结果与结论：拔牙后出血的百分比,血凝块留存率,拔牙窝内食物残渣残留百分比,干槽症发生率实验组均明显低于对照组。放置组织补片对术后肿胀和牙龈红肿无明显影响。所有放置在拔牙窝内的组织补片与拔牙创周围组织附着紧密,未见脱落。     

异种(猪)无细胞真皮基质的制备及体外生物相容性*

背景：人同种无细胞真皮基质作为一种永久性真皮支架,已成功应用于烧伤创面修复及美容医学等领域,但由于来源有限,限制了其应用。 目的：研制异种(猪)无细胞真皮基质,并对其体外生物相容性进行评价。 设计、时间及地点：体外细胞学对比观察实验,于2007-08/2008-06在中国辐射防护研究院生物材料与制药技术研究所实验室完成。 材料：实验猪由中国辐射防护研究院实验动物中心提供;人成纤维细胞来自武警山西总队医院健康儿童包皮环切术切除的包皮组织。 方法：无菌条件下获取健康小白猪猪皮,用高渗盐溶液-去污剂、胰酶消化及超声清洗的方法,制备猪无细胞真皮基质。体外培养人成纤维细胞,用猪无细胞真皮基质浸提液法及人成纤维细胞和猪无细胞真皮基质直接贴附法,评价猪无细胞真皮基质体外生物相容性。 主要观察指标：①猪无细胞真皮基质的组织学形态。②猪无细胞真皮基质的体外生物相容性。 结果：制备的猪无细胞真皮基质,完全去除了表皮和真皮中的细胞成分,保留了胶原基质。猪无细胞真皮基质浸提液对人成纤维细胞增殖无明显影响。人成纤维细胞可以在猪无细胞真皮基质上贴附、增殖。 结论：此种方法制备的无细胞真皮基质完全去除了表皮和真皮中的细胞成分,有较好的体外生物相容性。 关键词：猪无细胞真皮基质;人成纤维细胞;生物相容性     

组织工程同种异体脱细胞真皮复合自体刃厚皮微粒皮移植

为观察组织工程同种异体脱细胞真皮复合自体刃厚皮、微粒皮移植的临床应用效果，选择2005-04/2008-06海南省农垦三亚医院烧伤整形科严重烧伤和瘢痕患者8例12个创面，采用脱细胞真皮复合自体刃厚皮片、脱细胞真皮复合自体微粒皮移植修复创面。12创面中，10个创面复合皮完全成活，1个创面出现散在点状坏死,经换药8 d愈合。1例植皮部分成活，经补充游离植皮后创面愈合。随访6~12个月，复合移植皮肤质地柔软，弹性良好，无瘢痕增生，类似全厚皮片。提示采用脱细胞真皮复合自体刃厚皮、微粒皮移植修复严重烧伤创面，疗效满意，没有排斥反应，是理想的治疗方法。     

输尿管无细胞基质移植物的制备和评价

背景：与小肠黏膜下层等材料相比，脱细胞血管具有天然管状结构，与输尿管形态结构相近，替代输尿管时仅需端端吻合即可，手术操作简单，血管外壁光滑，获取及制备方法简便等优点。 目的：拟应用同种颈动脉血管无细胞基质体外构建输尿管。 设计、时间及地点：观察性实验，于2006-09/2008-06在上海交通大学医学院附属新华医院动物实验中心完成。 材料：长风杂交白猪由上海松联实验动物公司提供。上海交通大学医学院实验动物中心提供的健康成年大鼠8只，用于血管无细胞基质的动物毒性实验。 方法：剥去猪颈动脉血管外膜，PBS冲洗若干遍，然后将血管置于pH 7.1 的PBS中4 ℃下振荡清洗，0.5%十二烷基硫酸钠振荡24 h，后使用双蒸水4 ℃下反复振荡洗涤1周，每日换双蒸水2次。对于解剖过程中肌肉残留相对稍多的血管，在双蒸水洗涤前以混合消化液37 ℃下振荡消化约2 h，再行双蒸水洗涤。制备的无细胞基质置于青、链霉素溶液中，4 ℃保存，完成脱细胞支架制备。 主要观察指标：光镜及电镜观察脱细胞后管壁无细胞基质片的主要成分。将同种异体来源内皮祖细胞培养增殖后植入血管无细胞基质，观察细胞生长情况，并进行血管无细胞基质动物毒性实验。拉力实验了解血管无细胞基质材料的收缩性能。 结果：颈动脉血管无细胞基质中已无细胞成分，无细胞基质主要由胶原成分组成。扫描电镜未见该材料表面存在细胞及细胞碎片，同时发现该无细胞基质存在孔隙样结构。体外同种异体来源的内皮祖细胞培养增殖后植入血管无细胞基质，细胞黏附于无细胞基质。血管无细胞基质按毒性分级属于无毒级。拉力实验说明该无细胞基质具有一定的韧性和牵张性。 结论：采用胰酶和十二烷基硫酸钠制备的颈动脉血管无细胞基质材料无细胞残留，具有一定的韧性和牵张性，种植于其中的种子细胞具备一定的生长能力。     

脱细胞血管基质制备及体内外生物相容性

背景：利用脱细胞血管基质作为血管支架具有以下优点：脱细胞血管基质保留了自然血管的复杂三维结构;脱细胞基质表面的生长因子和结构域有利于细胞的黏附和浸润。 目的：制备脱细胞血管基质并对其体内外生物相容性进行评价。 方法：采用胰蛋白酶、Triton X-100逐步处理猪颈动脉制备脱细胞血管基质。采用皮下植入实验、急性毒性实验和体外细胞毒性实验等评价其生物相容性。 结果与结论：脱细胞基质材料具有良好的化学稳定性,未释放对红细胞产生破坏溶解作用的有害元素,未引起急性溶血反应,对细胞的生长无毒性影响。脱细胞基质材料在动物体内植入后早期有较多炎性细胞浸润,到实验观察的后期无明显炎性细胞浸润,脱细胞基质内可见成纤维细胞。另外,脱细胞基质材料对周边组织未产生毒性作用,伤口Ⅰ期愈合。同时组织学切片显示：支架材料与周边组织相容性好,未产生排斥反应。说明脱细胞基质材料在动物体内具有很好的生物相容性。 关键词：血管支架;生物相容性;生物材料;脱细胞血管基质;相容性 doi:10.3969/j.issn.1673-8225.2010.16.010