心肌功能损害的机制研究:Toll样受体4在脂多糖诱导小鼠心肌IL-1β基因表达中的作用

目的:探讨脂多糖诱导心肌炎症因子白细胞介素1β(interlukine1β,IL-1β)的表达过程中,Toll样受体4所起的作用,寻找心肌损害的防治方法。方法:以Toll样受体4基因突变型小鼠C3H/HeJ(n=36)及野生型小鼠BALB/C(n=36)为实验对象,给以腹腔内注射脂多糖(1mg/kg)或生理盐水。注射生理盐水的小鼠作为对照。用反转录-聚合酶链反应方法,对注射脂多糖前后两组小鼠心肌Toll样受体4和IL-1βmRNA表达进行半定量检测。结果:C3H/HeJ小鼠存在Tlr4突变。两种小鼠心肌均检测到Toll样受体4表达。脂多糖刺激后,野生型小鼠心肌IL-1βmRNA表达迅速显著增加,而突变型小鼠心肌未检测到IL-1β的表达。结论:TLR4在心肌表达,并且介导了脂多糖刺激下小鼠心肌局部IL-1β的基因表达。     

Toll样受体4在抗β2GPⅠ-β2GPⅠ复合物诱导小鼠腹腔巨噬细胞表达炎症因子中的作用

目的观察抗β2GPⅠ-β2GPⅠ复合物刺激小鼠腹腔巨噬细胞表达TNF-α、IL-1β、IL-6的效果,探讨Toll样受体4(TLR4)在其中的作用。方法对C3H/He N(TLR4正常)小鼠、C3H/He J(TLR4缺陷)小鼠腹腔注射非特异性兔Ig G(R-Ig G)、抗β2GPⅠ抗体,72 h后用细胞免疫荧光法检测小鼠腹腔巨噬细胞TNF-α、IL-1β、IL-6的表达水平;抗β2GPⅠ-β2GPⅠ复合物对小鼠腹腔巨噬细胞进行体外刺激,荧光定量PCR法检测细胞表达上述因子的mRNA水平,western blot法检测其蛋白质分泌水平。结果抗β2GPⅠ抗体刺激的C3H/He N小鼠腹腔巨噬细胞产生TNF-α、IL-1β、IL-6的水平明显高于C3H/He J小鼠,并经细胞免疫荧光法验证;经体外刺激后,荧光定量PCR法结果显示抗β2GPⅠ-β2GPⅠ复合物诱导C3H/He N小鼠腹腔巨噬细胞TNF-α、IL-1β、IL-6 mRNA表达水平高于空白组或C3H/He J刺激组(P均0.01);western blot结果显示C3H/He N来源细胞TNF-α、IL-1β、IL-6分泌均显著高于C3H/He J来源细胞(P均0.01)。结论抗β2GPⅠ-β2GPⅠ复合物能够促进小鼠腹腔巨噬细胞炎症因子TNF-α、IL-1β、IL-6的表达,TLR4为介导此过程的受体之一。     

Toll样受体4在失血性休克小鼠肺组织HO-1表达中的作用

目的 探讨Toll样受体4(TLR4)在失血性休克并发急性肺损伤(ALI)小鼠肺组织血红素加氧酶-1(HO-1)表达中的作用.方法 采用小鼠失血性休克复苏模型,48只TLR4基因突变型小鼠C3H/HeJ和野生型小鼠C3H/HeN随机分为2组:①假手术组;②失血休克复苏组.分别于失血性休克复苏后6 h、24 h和48 h取颈动脉血行血气分析,检测肺组织HO-1蛋白和mRNA的表达、肺组织IL-6含量及髓过氧化物酶(MPO)活性.采用方差分析进行数据统计.结果 失血休克复苏后24 h C3H/HeN和C3HL/HeJ的肺组织中HO-1 mRNA和蛋白含量的表达、IL-6含量、MPO活性与假手术组比较显著增加(P＜0.01或P＜0.05);与C3H/HeN鼠比较,休克复苏后24 h C3H/HeJ鼠的HO-1mRNA和蛋白含量、IL-6含量和MPO活性明显降低(P＜0.01或P＜0.05).C3HL/HeN鼠休克复苏后24 h并发ALI并且PaO2/FiO2＜300 mmHg.结论 TLR4受体激活在失血性休克致ALI肺组织HO-1的表达中扮演重要角色.     

失血性休克小鼠心肌Toll样受体2/4 mRNA的表达

目的 探讨无复苏对失血性休克小鼠心肌Toll样受体（TLR）表达变化的影响及其意义。方法 将45只C57BL／6小鼠随机分为失血性休克模型组、假手术组、脂多糖（LPS）组（由尾静脉注射LPS5mg／kg），每组15只；采用心脏穿刺法建立小鼠失血性休克模型。心肌TLR2mRNA和TLR4mRNA表达采用逆转录-聚合酶链反应（RT—PCR）方法进行分析；测定左室收缩末压（LVESP）以反映左室收缩功能。结果 ①与假手术组比较，失血性休克及LPS刺激后小鼠的动脉血压出现下降，均可导致左室收缩功能障碍；②失血性休克及LPS刺激后TLR2和TLR4的mRNA表达水平均出现不同程度上调，而假手术组在各时间点未见明显改变。结论 ①失血性休克及LPS刺激后心肌TLR2及TLR4的mRNA表达上调与心功能障碍存在密切联系，但这两种病理状态下的信号转导通路可能存在差异；②失血性休克和LPS刺激后TLR2、TLR4的mRNA升高增强了机体的天然免疫功能，提高了机体对急性炎症的应激能力，对机体具有保护作用，但其过度表达也可能对组织、器官功能产生损害。     

大车前苷作用于脂多糖诱导的小鼠脓毒症心肌损伤实验研究

目的 探讨大车前苷在小鼠脓毒症心肌损伤中的作用。方法 选取8～10周龄的雄性C57/BL6小鼠40只,根据处理方式不同将小鼠随机分为4组：生理盐水+生理盐水组、生理盐水+大车前苷组、脂多糖+生理盐水组、脂多糖+大车前苷组,每组10只。脂多糖+生理盐水组与脂多糖+大车前苷组小鼠接受单次腹腔注射脂多糖(10 mg/kg),以构建小鼠脓毒症模型;生理盐水+生理盐水组与生理盐水+大车前苷组小鼠接受同等体积生理盐水腹腔注射。生理盐水+大车前苷组与脂多糖+大车前苷组小鼠给予连续5 d的大车前苷50 mg/(kg·d)灌胃干预,生理盐水+生理盐水组与脂多糖+生理盐水组进行同等体积生理盐水灌胃。实验第1天,先给予小鼠连续5 d大车前苷50 mg/(kg·d)或生理盐水灌胃,第5天给予小鼠单次腹腔注射脂多糖(10 mg/kg)或者等体积生理盐水,饲养12 h后检测心功能并取材。采用实时荧光定量聚合酶链反应检测超氧化物歧化酶2 (SOD-2)、谷胱甘肽过氧化物酶-1 (GPX-1)和过氧化氢酶(CAT)和相关炎症因子[白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-6 (IL-6)、肿瘤坏死因子-α (TNF...     

白细胞介素-1β在脓毒症鼠心肌中的表达及p38MAPK的调控作用

目的探讨白细胞介素-1β（IL-1β）在脓毒症鼠心肌损伤中的作用及p38MAPK的调控机制。方法采用盲肠结扎并穿刺（CLP）来制作脓毒症模型，并在不同时相点观察大鼠血清CPK-MB、IL-1β浓度及其mRNA在心肌的表达、心肌p38MAPK的活性。结果CLP术后血清IL-1β浓度进行性升高，CPK—MB显著提高。正常心肌组织微量表达IL-1β mRNA，脓毒症时可见大量表达，且p38MAPK明显激活。血清IL-1β的水平及其mRNA在心肌中的表达与CPK-MB呈显著正相关。应用p38MAPK抑制剂SB203580后，p38MAPK激活受抑，血清IL-1β浓度显著降低，IL-1β在心肌中的表达减少，心肌损害明显减轻。结论IL-1β的大量释放及其在心肌中显著表达是脓毒症鼠心肌损伤的原因之一，而通过调控p38MAPK信号通路可对心肌起保护作用。     

2型糖尿病大鼠心肌转化生长因子β1表达与马来酸罗格列酮干预的影响

目的：观察马来酸罗格列酮对2型糖尿病大鼠心肌转化生长因子β1表达的影响。方法：实验于2004—12／2005—06在同济医学院附属协和医院心血管研究所实验室进行。取42只Wistar大鼠以高热量饮食喂养1个月后（体质量约230g）单纯随机分为：正常组（n=6）、马来酸罗格列酮组（n=12）、格列齐特组（n=12）及糖尿病未治疗组（n=12）。后3组大鼠以33．3mg／kg链脲佐菌素腹腔一次性注射建立实验性2型糖尿病大鼠模型。造模成功后马来酸罗格列酮组大鼠给予马来酸罗格列酮片2mg／kg，格列齐特组给予格列齐特25mg／kg，均为灌胃给药，1次／d，其他2组不干预。造模后所有大鼠为普通饮食喂养，给药12周后断颈处死大鼠。应用投射电镜评价各组心肌重构情况，并应用免疫组化方法和反转录-聚合酶链反应方法分别检测心肌转化生长因子β1蛋白和mRNA表达水平。结果：33只大鼠进入结果分析。①糖尿病模型大鼠心肌均存在明显的心肌重构，但马来酸罗格列酮组病变较轻。②心肌转化生长因子β1蛋白和mRNA水平：马来酸罗格列酮组、格列齐特组及糖尿病未治疗组明显高于正常组（P〈0．01，0．05）．马来酸罗格列酮组明显低于糖尿病未治疗组（P〈0．05）。结论：马来酸罗格列酮能够明显改善糖尿病大鼠早期心肌重构，机制可能与抑制心肌转化生长因子β1的表达有关。     

Toll样受体4在抗β2GPⅠ抗体诱导小鼠血管表达黏附分子及组织因子中的作用

目的探讨Toll样受体4(TLR4)在抗β2糖蛋白Ⅰ(β2GPⅠ)抗体诱导小鼠动脉血管黏附分子及组织因子(TF)表达中的作用。方法腹腔注射抗β2GPⅠ抗体,分别刺激C3H/He N(TLR4正常)与C3H/He J(TLR4点突变)小鼠72 h,用免疫组织化学法观察血管内膜组织中细胞黏附分子-1(ICAM-1)、血管细胞黏附分子-1(VCAM-1)及E-选择素的蛋白质表达水平,用实时荧光定量PCR和western blot方法分别检测血管组织匀浆中ICAM-1、VCAM-1、E-选择素的mRNA和蛋白质表达水平,用实时荧光定量PCR和TF活性检测试剂盒分别检测血管组织匀浆中TF mRNA表达水平及其活性。结果免疫组化结果示抗β2GPⅠ抗体刺激后的C3H/He N小鼠血管内膜中ICAM-1、VCAM-1及E-selectin蛋白均表达增强。与生理盐水对照组相比,C3H/He N小鼠和C3H/He J小鼠经抗β2GPⅠ抗体刺激后,其血管组织匀浆中ICAM-1、VCAM-1、E-选择素的mRNA和蛋白质表达水平均显著增加(P均0.05);但C3H/He J小鼠的ICAM-1、VCAM-1、E-选择素的mRNA和蛋白质表达水平均明显低于C3H/He N小鼠(P均0.05)。经抗β2GPⅠ抗体刺激的C3H/He J小鼠血管匀浆中TF mRNA表达及生物学活性明显低于C3H/He N小鼠(P0.05)。结论 TLR4与抗β2GPⅠ抗体刺激上调小鼠动脉血管组织表达活性分子ICAM-1、VCAM-1、E-选择素及TF密切相关,其分子机制及其在抗磷脂综合征(APS)血栓形成中的病理机制有待深入研究。     

脑缺血-再灌注损伤后S100A8的表达及意义

目的 探讨脑缺血-再灌注(I/R)损伤后S100A8的表达变化及其与Toll样受体4(TLR4)的关系.方法 TLR4基因突变型小鼠C3H/HeJ(n=30)随机(随机数字法)分为模型组(n=18)和健康组(n=12),TLR4野生型小鼠C3H/HeN (n =30)随机分为模型组(n=18)和健康健康组组(n=12),采用线栓法制造局灶性脑缺血-再灌注损伤模型,再灌注12 h后进行神经功能缺损评分,通过TTC染色和HE染色评价各组脑组织损伤程度,实时定量PCR技术和免疫荧光成像检测各组S100A8 mRNA和蛋白的表达.结果 与C3H/HeN模型组比较,脑缺血-再灌注损伤12h后,C3H/HeJ模型组神经缺损评分明显减小(P＜0.01),脑梗死体积和神经细胞损伤程度也明显减轻(P＜0.01).与健康组比较,C3 H/HeJ和C3H/HeN模型组梗死侧脑组织中S100A8mRNA和蛋白表达显著上调,且C3H/HeN模型组脑组织中S100A8表达量较C3H/HeJ模型组增加更为明显(P＜0.01),提示S100A8表达与TLR4关系密切.结论 S100A8很有可能通过与TLR4相互作用在脑I/R炎症损伤早期过程中发挥重要作用.     

银杏叶提取物对脐静脉内皮细胞Toll样受体4／核因子-кB途径及细胞间黏附分子1表达的影响

目的：观察具有抗血小板活化因子、清除氧自由基、抗氧化作用的银杏叶提取物对脂多糖介导的人脐静脉内皮细胞Toll样受体4／核因子-κB信号途径及细胞间黏附分子、E-选择素表达的影响。 方法：①实验于2003-01／2004-12在大连医科大学附属第二医院实验中心完成。取健康产妇分娩后的新鲜婴儿脐带(由本院分娩的产妇自愿提供)，应用胶原酶消化人脐静脉内皮，收集内皮细胞进行培养。②将培养成融合状态的内皮细胞随机分为4组：对照组：M199培养基中不加其他干预物质；脂多糖组：M199培养基中加入脂多糖1mg／L；脂多糖+银杏叶提取物50组：预先加入银杏叶提取物50(80mg／L)，60min后加入脂多糖1mg／L；脂多糖+咖啡酸苯乙酯组：预先加入咖啡酸苯乙酯(20mg／L)30min。干预12h，收集细胞检测Toll样受体4和细胞间黏附分子1、E-选择素表达水平；干预1h，收集细胞提取核蛋白检测转录核因子κBp65活化变化。③采用反转录聚合酶链反应检测Toll样受体4和细胞间黏附分子1、E-选择素mRNA表达水平；采用蛋白质印迹技术检测Toll样受体4蛋白表达水平及核因子-KB活化的变化；采用酶联免疫吸附方法检测人脐静脉内皮细胞表面细胞间黏附分子1，E-选择素蛋白表达。④多个样本均数的比较采用方差分析，多个样本均数的两两比较采用q检验 结果：①人脐静脉内皮细胞Toll样受体4mRNA和蛋白表达(A值)：脂多糖组明显高于对照组(P<0．01)，脂多糖+银杏叶提取物组和脂多糖+咖啡酸苯乙酯组明显低于脂多糖组(p<0．05～0．01)。②人脐静脉内皮细胞细胞间黏附分子1、E-选择素mRNA和蛋白表达(A值)：脂多糖组明显高于对照组(P<0．01)，脂多糖+银杏叶提取物组和脂多糖+咖啡酸苯乙酯组明显低于脂多糖组(P<0．05～0．01)。③人脐静脉内皮细胞核蛋白核因子-κBp65活化(A值)：脂多糖组明显高于对照组(P<0．01)，脂多糖+银杏叶提取物组和脂多糖+咖啡酸苯乙酯组明显低于脂多糖组(P<0．05)。 结论：银杏叶提取物可能通过抑制核因子-κB活化，进而减弱Toll样受体4／核因子-κB途径从而抑制脂多糖介导的黏附分子表达及炎症反应。     

失血性休克小鼠心肌Toll样受体的表达

目的：探讨小鼠失血性休克（无复苏）对心肌Toll样受体（toll-like receptor,TLR）表达变化的影响及其可能的意义.方法：45只C57BL/6的小鼠随机分为3组：失血组、假手术组、脂多糖（LPS）组（尾静脉注射LPS 5mg/kg）,每组15只小鼠,采用心脏穿刺法建立小鼠失血性休克模型;心肌TLR-2 mRNA和TLR-4 mRNA的表达利用RT-PCR的方法进行分析;左室收缩功能以测定的左室收缩末压（left ventricular end-systolic pressure,LVESP）作为指标.结果：①与假手术组比较,失血性休克及LPS刺激后小鼠的动脉血压出现下降;②与假手术组比较,失血性休克及LPS刺激后均可导致左室收缩功能障碍;③失血性休克及LPS刺激后TLR2和TLR4基因的表达水平均出现不同程度的上调,而假手术组在各时间点未见明显改变.结论：①失血性休克及LPS刺激后心肌TLR2及TLR4基因表达的上调与心功能障碍存在密切联系,但这两种病理状态下的信号转导通路可能存在差异;②失血性休克和LPS刺激后TLR2、TLR4升高增强了机体的天然免疫能力,提高了机体对急性炎症的应激能力,对机体具有保护作用,但其过度表达也可能对组织、器官功能产生损害.     

蝎素组分Ⅲ对脂多糖刺激人白血病单核细胞系THP1细胞TLR4和p65的表达

背景:近年来研究表明,Toll样受体和核因子κB与白血病的发生发展关系密切。蝎毒对肿瘤细胞表面Toll样受体和细胞内核因子κB的影响还未见文献报道。目的:观察蝎素组分Ⅲ对人白血病单核细胞系THP1细胞Toll样受体4和p65表达的影响。方法:将THP1细胞接种于24孔细胞培养板中,实验分5组:对照组、脂多糖(终浓度为1mg/L)组及不同浓度蝎素组分Ⅲ处理组(脂多糖+蝎素组分Ⅲ终浓度为1,10,20mg/L)。Real-timePCR法检测THP1细胞Toll样受体4和p65mRNA的表达;Westernblot检测Toll样受体4和p65蛋白的表达。结果与结论:脂多糖组THP1细胞Toll样受体4、p65mRNA和蛋白的表达均显著高于对照组(P<0.01);不同浓度蝎素组分Ⅲ处理组Toll样受体4、p65mRNA和蛋白表达均低于脂多糖组(P<0.01),并呈剂量依赖性。提示蝎素组分Ⅲ能有效下调脂多糖诱导的THP1细胞中TLR4的表达,并可有效抑制核因子κB的活性,从而抑制细胞的增殖。     

青心酮对RAW264．7细胞可溶性Toll样受体4表达及炎症相关因子的影响

目的：观察活血化瘀中药秃毛冬青叶中有效成分青心酮对RAW264．7细胞炎症反应时可溶性TOU样受体4mRNA及蛋白表达、血红素氧和酶1mRNA表达、肿瘤坏死因子d分泌的影响。 方法：①实验于2004-03／2005-01在华中科技大学同济医学院病理生理教研室完成。②采用RAW264．7巨噬细胞株建立细胞炎症反应模型。观察下述4种情况下培养液血红素氧和酶1mRNA的变化：脂多糖刺激；青心酮[青心酮注射液，3，4-羟基苯乙酮40mg／支（2mL），实验用，北京制药三厂]预处理3h后加脂多糖刺激；青心酮和脂多糖同时加入；脂多糖刺激3h后加入青心酮。其他指标测定实验分为3组：空白对照组（正常细胞培养，加入等数量的培养基，不加入任何药物）；青心酮预处理组（先加入溶有青心酮1&;#215;10^-7mol／L的培养基培养3h，再加入脂多糖10μg/L刺激4，8h）；未处理组（加入等数量的培养基3h，再加入脂多糖10μg/L刺激4，8h）。③采用反转录聚合酶链反应分析可溶性TOU样受体4、血红素氧和酶1mRNA的变化；Western blot方法检测可溶性Toll样受体4蛋白水平的改变，用ELISA方法检测培养液肿瘤坏死因子α分泌的变化。④组间数据处理采用配对t检验。 结果：①可溶性TOU样受体4mRNA表达：青心酮预处理脂多糖刺激4h后明显高于未处理组（P〈0．01）。未处理组经脂多糖刺激4h后，明显低于空白对照组（P〈0．05）。②可溶性TOU样受体4蛋白表达：青心酮预处理组脂多糖刺激8h后明显高于未处理组（P〈0.05），但与空白对照组比较，差异不明显（P〉0．05）；未处理组脂多糖刺激8h后，明显低于空白对照组（P〈0，05）。③血红素氧和酶1mRNA表达：青心酮预处理后加脂多糖刺激和青心酮、脂多糖同时加入后明显高于脂多糖刺激后（P〈0．05）。④培养液中肿瘤坏死因子d：脂多糖刺激后明显增加（P〈0．01）；青心酮预处理脂多糖刺激后明显低于未处理组（P〈0．01）。 结论：青心酮预处理能有效的抑制炎症反应，可能与其上调可溶性TOU样受体4mRNA及蛋白表达，增加血红素氧和酶1mRNA表达，减少肿瘤坏死因子α分泌有关。     

健心方对核因子-kB活性的影响

目的；观察脂多糖对CHO-K1细胞核因子-kB活性的影响及健心方含药血清对脂多糖刺激的调节作用。 方法：①实验于2005-03／05在解放军广州军区武汉总医院实验中心和南方医科大学附属南方医院肿瘤中心实验室完成。选用清洁级SD大鼠12只。随机将鼠分为2组：动物治疗组和动物对照组，每组6只。②动物治疗组给予3．2kg／L健心方口服液（水煎醇提法制备，主要成分：黄芪、太子参、川芎、当归、葶苈子、云苓、桂枝、香附等），动物对照组用等量生理盐水以获得空白对照血清。灌胃体积均为10mL／kg。1d剂量分2次服。连续给药3d，第4天1次服用全天剂量后采血制备含药血清和空白对照血清。③体外培养CHO-K1细胞，分为6组：对照组：转染质粒（pNF-kB-TA-Lue和pCMV-β-半乳糖苷酶共0．5μg）后加用脂多糖刺激；感染1组：转染质粒并加含Toll样受体4全长的重组腺病毒感染；刺激1组：转染质粒并加含Toll样受体4全长的重组腺病毒感染后用脂多糖刺激；治疗组：转染质粒、加含Toll样受体4全长的重组腺病毒感染并用脂多糖刺激后加用古药血清干预；感染2组：转染质粒并加含Toll样受体4细胞外段的重组腺病毒感染；刺激2组：转染质粒并加含Toll样受体4细胞外段的重组腺病毒感染后用脂多糖刺激。（4）检测各组细胞核因子-kB相对活性，即相对发光值（荧光索酶强度值/β-半乳糖苷酶值）。⑤数据作完全随机设计方差分析，组间比较用LSD检验和Dunnett（双侧）检验。 结果：大鼠12只均进入结果分析。荧光素酶报告基因检测结果表明，相对发光值：对照组细胞明显高于感染1组（3560&;#177;57，1634&;#177;38，P〈0．05）；刺激1组细胞明显高于对照组、感染1组（8767&;#177;82，P〈0．05，0．01）；感染2组、刺激2组细胞明显低予对照组（530&;#177;74，536&;#177;71，P〈0．05）；治疗组明显低于刺激1组（1820&;#177;24，P〈0．05），但明显高于刺激2组（P〈0．05），略低于转染后对照组，但差异不明显（P〉0．05）。 结论：健心方古药血清可部分拮抗脂多糖导致的核因子-kB激活作用；Toll样受体4是脂多糖激活细胞的关键受体，健心方含药血清的拮抗作用可能是通过阻断了Toll样受体4对脂多糖的识别造成的。     

脂多糖性肺损伤小鼠肺组织结构改变及中药复方四毒清的干预效果

目的：探讨中药复方四毒清对脂多糖攻击小鼠肺组织结构及细胞间黏附分子1 mRNA表达的影响。方法：实验于2003-10／2004-01在暨南大学医学院国家中医药三级科研实验室完成，选择健康雄性昆明小鼠60只，体质量21～26g。取40只小鼠，随机分成4组，每组10只。①对照组：用蒸馏水(20mL／kg)灌胃3d，2次／d。第3d灌胃后2h，腹腔注射20mL／kg生理盐水。②脂多糖组：除腹腔注射生理盐水改为注射脂多糖(30mg／kg，20mL／kg)外，其余处理同对照组。③四毒清防治组，用四毒清方药(由黄连、黄芩、赤芍、白薇、枳实、柴胡、三七组成，1g生药／mL，20mL／kg)灌胃3d，2次／d。第3d灌胃后2h，腹腔注射脂多糖(30mg／kg，20mL／kg)。④四毒清组，除腹腔注射改为生理盐水外，其余处理同四毒清防治组。于腹腔注射脂多糖或生理盐水12，36h后。各组分别处死5只小鼠，取肺组织切片，苏木精-伊红染色后在光学显微镜下观察其组织结构变化。另20只小鼠分批实验，分组及给药同上，每组5只。在腹腔注射脂多糖或生理盐水5h后，处死小鼠，提取肺组织RNA。应用反转录聚合酶链反应，以细胞间黏附分子条带的积分吸光度值与甘油醛-3-磷酸脱氢酶条带的积分吸光度值之比代表细胞间黏附分子1 mRNA的表达量。结果：60只小鼠全部进入结果分析。①各组小鼠肺组织结构变化情况：脂多糖攻击12h后，脂多糖组出现急性肺损伤。组织学检查表现为肺水肿、出血和炎症细胞浸润。脂多糖组肺出血发生率高于四毒清防治组[80％，0，(X^2=3．352，P&;lt;0．05)]。脂多糖注射后36h，脂多糖组有2只小鼠存活，肺泡充满大量炎症细胞。出现肺实变。四毒清方药防治组，有3只小鼠存活，未见明显的肺实变。②各组小鼠肺组织细胞间黏附分子1 mRNA的表达情况：脂多糖组明显高于对照组[1．21&;#177;0.26，0.68&;#177;0．03，(F=19．951，P&;lt;0．05)]，四毒清防治组(0．78&;#177;0．03)明显低于脂多糖组(F=14．72，P&;lt;0．05)。结论：脂多糖攻击后，小鼠出现肺损伤及肺组织细胞间黏附分子1 mRNA表达增加。中药复方四毒清能防治脂多糖性肺损伤，可能与其抑制脂多糖诱导的细胞间黏附分子1 mRNA的表达有关。     

小鼠心肌转化生长因子β1表达与依普利酮的影响

目的：观察高选择性醛固酮受体拮抗剂依普利酮对鸟苷酸环化酶偶联受体-A基因敲除小鼠心肌转化生长因子β1表达的影响，并对其逆转心室重构的分子机制进行探讨。 方法：实验于2005-06／2006-04在河北省人民医院心内科、日本奈良县立医科大学第一内科完成。①实验材料：鸟苷酸环化酶偶联受体-A基因敲除小鼠20只由日本国立循环器病中心岸本一郎教授馈赠，雄性，12周龄，基因背景为清洁级C57BL／6小鼠，随机数字表法分为空白对照组6只、依普利酮组7只、肼苯哒嗪组7只。另取同龄野生型小鼠7只作为野生组。实验过程中对动物的处置符合动物伦理学标准。②实验方法：依普利酮组每天通过饲料给予100mg／kg依普利酮，肼苯哒嗪组每天通过饮用水给予10mg／kg肼苯哒嗪，均给药4周。空白对照组与野生组不进行任何干预。③实验评估：每周检测小鼠尾动脉收缩压及体质量。各组小鼠于16周龄时采用腹主动脉抽血法处死，称取心脏重量，计算心脏重量与体质量的比值。心脏切片行Masson三色染色，并利用图像分析系统测量心肌胶原容积分数、心肌血管周围胶原面积和管腔面积之比。实时定量PCR法检测心室胶原纤维Ⅰ、胶原纤维Ⅲ、心肌转化生长因子β1 mRNA在心肌组织的表达。 结果：①心室重构指标检测：与野生组比较，空白对照组收缩压、心脏重量，体质量、心肌胶原容积分数、心肌血管周围胶原面积，管腔面积均显著升高（P〈0．01）。与空白对照组比较，依普利酮组上述4项指标均显著下降（P〈0．05或0．01）；肼苯哒嗪组收缩压明显下降（P〈0．01），心脏重量，体质量、心肌胶原容积分数、心肌血管周围胶原面积，管腔面积则明显升高（P〈0.05）。②心肌纤维化情况：与空白对照组比较，依普利酮治疗4周后小鼠心肌纤维化得到改善，?     

紫癜性肾炎患者外周血单个核细胞Toll样受体3和4的信号转导途径

背景：目前关于Toll样受体3和Toll样受体4介导的信号转导通路在紫癜性肾炎的发病机制中的作用尚不清楚。 目的：分析Toll样受体3和Toll样受体4在过敏性紫癜和紫癜性肾炎发病机制中的作用。方法：选取过敏性紫癜患儿64例,分为过敏性紫癜无肾损害组36例及过敏性紫癜性肾炎组28例,另选健康儿童30例作为正常对照组。实时荧光定量PCR检测外周血单核细胞Toll样受体3、Toll样受体4、髓样分化蛋白2、髓样细胞分化因子88、白细胞介素1β、白细胞介素6、白细胞介素12 mRNA的基因相对表达量;应用流式细胞术检测外周血单核细胞Toll样受体3、Toll样受体4蛋白表达率。结果与结论：①过敏性紫癜患儿Toll样受体4 mRNA及蛋白表达显著高于正常对照组（P 〈 0.05）。紫癜性肾炎组Toll样受体4 mRNA及蛋白表达均显著高于紫癜无肾损害组（P 〈 0.05）。②过敏性紫癜组髓样分化蛋白2、髓样细胞分化因子88、白细胞介素1β、白细胞介素6 mRNA的表达均显著高于正常对照组（P 〈 0.05）,白细胞介素12 mRNA的表达显著低于正常对照组（P 〈 0.05）;紫癜性肾炎组髓样分化蛋白2、髓样细胞分化因子88、白细胞介素1β、白细胞介素6 mRNA的表达显著高于紫癜无肾损害组（P 〈 0.05）,紫癜性肾炎组白细胞介素12 mRNA的表达显著低于紫癜无肾损害组（P 〈 0.05）。③过敏性紫癜组患儿外周血单核细胞Toll样受体4 mRNA与蛋白表达呈正相关（r=0.60,P 〈 0.01）;过敏性紫癜患儿Toll样受体4 mRNA与髓样分化蛋白2、髓样细胞分化因子88、白细胞介素1β、白细胞介素6表达均呈正相关（P 〈 0.01）,与白细胞介素12 mRNA表达呈负相关（r=-0.66,P 〈 0.01）。提示Toll样受体4可能通过髓样细胞分化因子88依赖信号转导途径介导过敏性紫癜的免疫发病机制,Toll样受体4的过度活化可能与过敏性紫癜的肾损伤有关。     

青心酮对RAW264.7细胞可溶性Toll样受体4表达及炎症相关因子的影响

目的:观察活血化瘀中药秃毛冬青叶中有效成分青心酮对RAW264.7细胞炎症反应时可溶性Toll样受体4mRNA及蛋白表达、血红素氧和酶1mRNA表达、肿瘤坏死因子α分泌的影响。方法:①实验于2004-03/2005-01在华中科技大学同济医学院病理生理教研室完成。②采用RAW264.7巨噬细胞株建立细胞炎症反应模型。观察下述4种情况下培养液血红素氧和酶1mRNA的变化:脂多糖刺激;青心酮[青心酮注射液,3,4-二羟基苯乙酮40mg/支(2mL),实验用,北京制药三厂]预处理3h后加脂多糖刺激;青心酮和脂多糖同时加入;脂多糖刺激3h后加入青心酮。其他指标测定实验分为3组:空白对照组(正常细胞培养,加入等数量的培养基,不加入任何药物);青心酮预处理组(先加入溶有青心酮1×10-7mol/L的培养基培养3h,再加入脂多糖10μg/L刺激4,8h);未处理组(加入等数量的培养基3h,再加入脂多糖10μg/L刺激4,8h)。③采用反转录聚合酶链反应分析可溶性Toll样受体4、血红素氧和酶1mRNA的变化;Westernblot方法检测可溶性Toll样受体4蛋白水平的改变,用ELISA方法检测培养液肿瘤坏死因子α分泌的变化。④组间数据处理采用配对t检验。结果:①可溶性Toll样受体4mRNA表达:青心酮预处理脂多糖刺激4h后明显高于未处理组(P<0.01)。未处理组经脂多糖刺激4h后,明显低于空白对照组(P<0.05)。②可溶性Toll样受体4蛋白表达:青心酮预处理组脂多糖刺激8h后明显高于未处理组(P<0.05),但与空白对照组比较,差异不明显(P>0.05);未处理组脂多糖刺激8h后,明显低于空白对照组(P<0.05)。③血红素氧和酶1mRNA表达:青心酮预处理后加脂多糖刺激和青心酮、脂多糖同时加入后明显高于脂多糖刺激后(P<0.05)。④培养液中肿瘤坏死因子α:脂多糖刺激后明显增加(P<0.01);青心酮预处理脂多糖刺激后明显低于未处理组(P<0.01)。结论:青心酮预处理能有效的抑制炎症反应,可能与其上调可溶性Toll样受体4mRNA及蛋白表达,增加血红素氧和酶1mRNA表达,减少肿瘤坏死因子α分泌有关。