弓形虫抗体免疫印迹试剂盒的研制

目的 研制敏感、特异的检测弓形虫IgM和IgG抗体免疫印迹试剂盒。 方法 收集人工感染RH株弓形虫速殖子昆明系小鼠的腹腔液，提取弓形虫胞质蛋白，采用十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）分离弓形虫可溶性抗原，并经电泳转印至硝酸纤维膜，以无毒灵敏的四甲基联苯胺（TMB）为底物分别检测30份弓形虫IgM和28份IgG阳性血清，40份健康人血清。通过比较抗原制备方法和使用剂量、封闭剂、洗涤和稀释剂、工作浓度、作用时间以及反应带出现率，选择最佳实验条件，以敏感性、特异性、Youden指数以及稳定性作为试剂盒评价标准。 结果 用免疫印迹试剂盒检测30份弓形虫IgM和28份IgG阳性血清，敏感性分别为90.0%（27/30）和85.7%（24/28），40份健康对照者血清的弓形虫IgM和IgG抗体均为阴性，特异性均为100%，Youden指数分别为0.9和0.86。试剂盒于4℃ 保存约6个月的检测结果一致。 结论 该免疫印迹试剂盒敏感性和特异性均较高，且操作简便、快速。     

一种检测弓形虫IgM抗体试剂盒的评价

目的 评价一种新近研发的国产弓形虫IgM抗体检测试剂盒的应用价值.方法 以进口弓形虫IgM试剂盒检测结果为标准,评价国产试剂盒的敏感性、特异性、符合率和约登指数,分析Kappa值和变异系数.结果 检测血样531份,国产试剂盒的敏感性为93.55%,特异性为100.0%,与进口试剂盒符合率为98.87%,约登指数为0.936,Kappa值为0.84,变异系数为1.67%.结论 国产试剂盒各项指标均较理想,检测效果达到国外同类试剂盒水平,其重现性和精密性极好,具有临床应用价值.     

几种弓形虫ELISA试剂盒初步检测结果比较

本文选用 5种国内弓形虫 EL ISA试剂盒检测已知同样样品 ,并且用国外试剂盒核查由该 5种试剂盒提供的阳性样品 ,作试剂盒质量比较。结果　 Ig G- EL ISA试剂 A、B盒阳性检出率 (敏感性 )均为 6 0 % ,A、B盒之间的符合率仅为5 0 % ,其特异性分别为 35 %和 90 % ;C、D、E阳性检出率 (敏感性 )分别为 30 %、6 0 %、70 % ,特异性分别为 75 %、5 4%、87%。核查 A、B、D、E盒提供的样品结果 :Ig G符合率较好 ,均在 90 %以上。 Ig M符合率均为 6 0 %。鉴于目前国内 EL ISA试剂盒的现状 ,本文分析后建议 ,除改进质量外 ,宜选择多种试剂盒联合应用 ,避免漏检和误诊。临床诊断孕妇弓形虫病应谨慎从事     

3种方法检测弓形虫IgG抗体的效能

目的 目的 比较3种不同的检验方法对弓形虫IgG抗体的检测效能, 并进行分析。方法 方法 采用临床上常用的金标法、 间接血凝试验 （IHA）、 酶联免疫吸附实验（ELISA）, 对304份血清标本进行弓形虫IgG抗体平行检测, 比较各检测方法的敏 感性、 特异性和Youden指数。结果 结果 金标法、 IHA、 ELISA这3种方法对弓形虫IgG抗体检测的敏感性分别为85.5%、 89.8% 和91.9%, 三者之间差异没有统计学意义 （χ2 = 4.12, P > 0.05）; 特异性分别是92.4%、 96.6%和97.5%, 差异亦无统计学意义 （χ2 =4.06, P > 0.05）。ELISA法的检测效率和Youden指数分别为94.1%和0.89, 高于IHA法和金标法。结论 结论 ELISA法检 测弓形虫IgG抗体的敏感性和特异性较高, 可自动化, 适合于大规模的弓形虫IgG抗体筛查。     

检测弓形虫IgM抗体的3种试剂盒的比较分析

目的 评价用于检测弓形虫IgM抗体的3种市售的试剂盒。方法 用3种试剂盒检测125份孕妇的血清,比较各试剂盒的阳性检出率、敏感性、特异性和试验效率等。结果 125份血清经Bi、Di和So试剂盒检测,分别有12．8％、15．2％和12．0％阳性,3种试剂盒检测血清的阳性率之间无显著性差异（P＞0．05）。Bi、Di和So试剂的敏感性和特异性分别为88．9％与100％、100％与99．1％和83．3％与100％,试验效率分别为98．4％、99．2％和97．6％。用WHO国际生物标准化实验室的抗号形虫血清标准品定量测得3种试剂盒的灵敏度都是0．31IU／ml。Bi试剂盒与Di试剂盒的总符合率为97．6％;Di试剂盒与So试剂盒的总符合率为96．8％;Bi试剂盒与So试剂盒的总符合率为97．6％。结论 这3种试剂盒都能用于弓形虫IgM抗体的常规普筛和血清学诊断。     

金标渗滤法检测疟疾抗体的研究

目的建立一种适用于现场使用的疟疾抗体快速检测方法。方法以恶性疟原虫可溶性抗原作为包被抗原,胶体金标记羊抗人IgG为第二抗体,建立快速检测疟疾抗体的金标渗滤法(DIGFA)。采用双盲法,与间接荧光法(IFAT)平行检测23份恶性疟和45份间日疟患者血清以及101份健康对照者血清,比较敏感性、特异性、Youden指数以及其他试验条件,以评价检测效果。结果DIGFA对恶性疟和间日疟的检测敏感性分别为95.65%和71.11%,对健康对照者的特异性为97.03%,Youden指数分别为0.93和0.68;IFAT的敏感性分别为95.65%和84.44%,特异性为96.04%,Youden指数分别为0.92和0.80。两法总Youden指数分别为0.76和0.84,总符合率为90.48%。结论DIGFA操作简易,适用于现场疟疾抗体的检测和监测。     

快速胶体染料试纸条法检测弓形虫病IgM抗体的研究

目的　研制一种检测弓形虫病Ig M抗体的快速胶体染料试纸条法(DDIA) ,与国外进口试剂盒进行比较,以评价其临床应用价值。方法　以本实验室筛选的胶体染料D- 1标记兔抗人Ig M,以此标记物与弓形虫病人血清中的抗弓形虫Ig M抗体结合,用点有弓形虫可溶性抗原的硝酸纤维膜通过层析捕获染料标记兔抗人Ig M与弓形虫Ig M抗体的复合物,采用正交试验确定DDIA的最佳检测条件;对2 5份弓形虫Ig M抗体阳性血清和5 0份正常人血清进行检测;同时对弓形虫病流行病学筛查时的84份血清进行检测并与进口试剂盒的检测结果进行比较。结果　DDIA的最佳检测条件为:弓形虫可溶性抗原的点膜浓度为1mg/ m l,血清用量为10μl和兔抗人Ig M胶体染料检测液作1∶2 0稀释时的检测带清晰且背景较浅;2 5份弓形虫Ig M抗体阳性血清均为阳性,5 0份正常人血清有3份为Ig M抗体阳性;DDIA与进口试剂盒的总符合率为97.6 % ,其中阳性和阴性符合率分别为10 0 .0 % (35 / 35 )和95 .9% (47/ 4 9)。结论　DDIA简便快速,有较好的敏感性和特异性,同时与进口试剂盒有较高的符合率,表明该法具有较高的弓形虫病诊断价值。     

应用重组抗原(rSAG1)检测IgM抗体诊断弓形虫病的研究

目的以刚地弓形虫RH株重组主要表面抗原1作为检测抗原,建立检测弓形虫IgM抗体的rSAG1-ELISA.方法用Ni2 螯合柱纯化重组抗原rSAGI;以不同浓度的rSAG1的包被聚苯乙烯酶标条,阳性和阴性混合血清分别作1:100和1:200稀释,以辣根过氧化物酶标记的羊抗人IgM为二抗,采用正交试验确定rSAG1-ELISA的最佳检测条件;按其最佳检测条件分别对弓形虫IgM阳性和阴性混合血清重复测20次进行精确度的检测;采用抗体抑制试验检测其特异性;同时对用进口试剂盒筛得的35份弓形虫IgM阳性血清和57份弓形虫IgM阴性血清进行检测.结果 制备的rSAG1重组蛋白纯度在90%以上;rSAG1-ELISA的最佳检测条件为:rSAG1的包被浓度为2.5μg/m1,血清稀释度1:100,酶标记的羊抗人IgM 1:4 000稀释;用rSAG1-ELISA对混合弓形虫IgM阳性和阴性血清的重复检测表明:IgM阳性混合血清检测值的变异系数(CV值)为13.8%,IgM阴性混合血清的CV值为7.7%;灵敏度检测表明血清稀释度在1:50～1:200均可检出阳性;特异性试验的抑制率为62.0%;rSAG1-ELISA与进口试剂盒的总符合率为88.0%,其中阳性和阴性符合率分别为82.9%(29/35)和91.2%(52/57).结论 rSAG1-ELISA具有较好的灵敏度和特异性,与进口试剂盒相比有较高的符合率,表明该法对弓形虫病早期诊断具有较高的价值,可进一步推广应用.     

对国内几种弓形虫IgG抗体检测试剂盒的再评估

根据文献资料〔1～ 7〕提出 ,我国市售弓形虫抗体检测试剂盒实验结果符合率低 ,敏感性和特异性不高而进口的不同试剂盒检测结果符合率高达 96%以上〔8〕。为进一步证实这一结果 ,又用国外试剂盒与国内 4种ＩｇＧ抗体检测试剂盒进行比较 ,结果如下。1　材料和方法1.1　试剂盒1. 1. 1　ＥＬＩＳＡＴｅｓｔＫｉｔＴｏｘｏｐｌａｓｍａＩｇＧ ,ＢｉｏＣｈｅｃｋ ,Ｉｎｃ Ｂｕｒｌｉｎｊｏｍａ ,ＵＳＡ 1.1.2　快速弓形虫ＩｇＧ抗体ＥＬＩＳＡ试剂盒 ,洛阳·华美。1.1.3　ＴＯＲＣＨＩｇＧ抗体ＥＬＩＳＡ试剂盒 ,深圳·晶美。1.1.4　弓形虫ＩｇＧ…     

7种单纯疱疹病毒Ⅱ型IgG抗体检测试剂盒的比较

目的比较7种单纯疱疹病毒Ⅱ型(HSV-2)特异性IgG抗体检测试剂盒的优劣。方法对来自体检和性病门诊的生殖器疱疹可疑者的189份血清,同时用3种进口试剂盒(A、B、C)和4种国产试剂盒(D、E、F、G)进行检测。结果以"扩大金标准"为判断标准,7种检测试剂盒的敏感性:A、B、C分别为94.6%、100%、100%,D、E、F、G分别为98.5%、93.9%、96.9%、30.8%;特异性:A～G分别为98.2%、96.4%、96.4%、9.1%、43.6%、18.2%、100%;受试者工作特性曲线(ROC)下面积:A～G分别为0.964(0.933～0.995)、0.982(0.953～1.011)、0.982(0.953～1.011)、0.529(0.434～0.623)、0.664(0.567～0.761)、0.517(0.416～0.618)、0.654(0.576～0.732)。结论三种进口试剂盒检测结果可信度高,可用于临床实验室的辅助诊断、流行病学调查等。     

不同抗囊尾蚴抗体检测试剂盒用于囊尾蚴病血清学诊断效果评价

目的　评价不同厂家生产的4种抗囊尾蚴IgG、IgG4和IgM抗体酶联免疫吸附试验（ELISA）检测试剂盒的诊断效果,为囊尾蚴病流行病学调查和临床检测提供参考。方法　采用A品牌3种抗囊尾蚴抗体（IgG、IgG4和IgM抗体）ELISA检测试剂盒以及B品牌抗囊尾蚴IgG抗体ELISA检测试剂盒,同时检测40份脑囊尾蚴病患者、100份健康人、30份斯氏并殖吸虫病患者、17份细粒棘球蚴病患者和19份皮下或脑裂头蚴病患者血清,比较不同试剂盒检测囊尾蚴病的敏感度、特异度和假阳性率。结果　A品牌抗囊尾蚴IgG、IgG4和IgM抗体ELISA试剂盒以及B品牌抗囊尾蚴IgG抗体ELISA试剂盒检测囊尾蚴病的敏感度分别为95.00%（38/40）、87.50%（35/40）、7.50%（3/40）和75.00%（30/40）,特异度分别为98.00%（98/100）、100.00%（100/100）、100.00%（100/100）和100.00%（100/100）;A品牌抗囊尾蚴IgG抗体ELISA试剂盒检测囊尾蚴病的敏感度高于B品牌（[χ2] = 6.28,P < 0.05）,两者特异度差异无统计学意义（[χ2] = 2.01,P > 0.05）。4种试剂盒检测并殖吸虫病、细粒棘球蚴病、裂头蚴病患者血清总假阳性率分别为37.88%（25/66）、22.73%（15/66）、62.12%（41/66）和15.15%（10/66）（[χ2] = 37.61,P < 0.05）;其中A品牌抗囊尾蚴IgM抗体ELISA试剂盒检测总假阳性率最高（[χ2] = 7.56,P' < 0.008）,A品牌抗囊尾蚴IgG抗体ELISA试剂盒检测总假阳性率高于B品牌（[χ2] = 8.75,P' < 0.008）。4种试剂盒检测并殖吸虫病患者血清假阳性率分别为40.00%（12/30）、16.67%（5/30）、76.67%（23/30）和13.33%（4/30）（[χ2] = 32.88,P < 0.05）,检测裂头蚴病患者血清假阳性率分别为21.05%（4/19）、26.32%（5/19）、73.68%（14/19）和15.79%（3/19）（[χ2] = 19.97,P < 0.05）,均以A品牌抗囊尾蚴IgM抗体ELISA试剂盒检测假阳性率最高（P' 均 < 0.008）。4种试剂盒检测细粒棘球蚴病患者血清假阳性率分别为52.94% （9/17）、29.41%（5/17）、23.53%（4/17）和17.65%（3/17）,差异无统计学意义（[χ2] = 8.24,P > 0.05）。A品牌抗囊尾蚴IgM抗体ELISA试剂盒检测并殖吸虫病、棘球蚴病和裂头蚴病患者血清假阳性率分别为76.67%（23/30）、23.53%（4/17）和73.68%（14/19）（[χ2] = 14.537,P < 0.05）,其中检测棘球蚴病患者血清假阳性率最低（[χ2] = 14.537,P' < 0.014）;其他3种试剂盒检测并殖吸虫病、棘球蚴病和裂头蚴病患者血清假阳性率差异均无统计学意义（P 均> 0.05）。 结论　不同囊尾蚴病免疫学诊断试剂各有优劣;A品牌抗囊尾蚴IgG抗体ELISA试剂盒敏感度较高,但需进一步解决与其他寄生虫病的交叉反应和稳定性问题。     

3种抗棘球蚴抗体检测试剂盒用于棘球蚴病血清学诊断效果评价

目的　评价我国3种商品化抗棘球蚴抗体检测试剂盒用于棘球蚴病血清学诊断的效能。方法　收集142份细粒棘球蚴病、89份多房棘球蚴病确诊患者及39份健康对照者血清标本,分别采用试剂盒A[酶联免疫吸附试验（ELISA法）]、B（ELISA法）、C（胶体金法）检测,比较细粒棘球蚴病和多房棘球蚴病患者血常规和生化指标差异,分析采用试剂盒A和B检测的棘球蚴病患者血清特异性抗体吸光度值（A值）与血常规及生化指标的相关性,评价3种试剂盒检测棘球蚴病的效果。结果　细粒棘球蚴病和多房棘球蚴病患者白细胞计数（WBC）、中性粒细胞计数（NEU）、单核细胞计数（MONO）、嗜碱性粒细胞计数（BASO）、丙氨酸氨基转移酶（ALT）和天门冬氨酸氨基转移酶（AST）、总胆红素（TBIL）、直接胆红素（DBIL）、间接胆红素（IBIL）中位数差异无统计学意义（P均 > 0.05）,细粒棘球蚴病患者淋巴细胞计数（LYM）和白蛋白（ALB）中位数显著高于多房棘球蚴病患者（P均< 0.05）,而多房棘球蚴病患者嗜酸性粒细胞计数（EOS）中位数显著高于细粒棘球蚴病患者（P < 0.01）。采用试剂盒A检测的棘球蚴病患者血清特异性抗体A值与患者WBC（rs = 0.153,P < 0.05）、EOS（rs = 0.174,P < 0.05）呈线性正相关,与TBIL（rs = -0.134,P < 0.05）、IBIL（rs = -0.146,P < 0.05）呈线性负相关。采用试剂盒B检测的棘球蚴病患者血清特异性抗体A值与WBC（rs = 0.257,P < 0.01）、NEU（rs = 0.203,P < 0.01）、MONO（rs = 0.159,P < 0.05）、EOS（rs = 0.330,P < 0.01）、ALT（rs = 0.171,P < 0.01）、AST（rs = 0.160,P < 0.05）呈线性正相关,与ALB呈线性负相关（rs = -0.168,P < 0.05）。试剂盒A、B和C诊断棘球蚴病患者的总符合率分别为86.30%、69.63%和91.48%,敏感度分别为84.42%、64.94%和92.21%,特异度分别为97.44%、97.44%和87.18%,约登指数分别为0.82、0.62和0.79,Kappa值分别为0.600、0.337和0.750。试剂盒A、B和C诊断细粒棘球蚴病患者的总符合率分别为84.54%、64.64%和71.82%,敏感度分别为80.99%、55.63%和68.31%,特异度分别为97.44%、97.44%和87.18%,约登指数分别为0.78、0.53和0.56;试剂盒A、B和C诊断多房棘球蚴病患者的总符合率分别为92.19%、85.16%和85.16%,敏感度分别为89.89%、79.78%和84.27%,特异度分别为97.44%、97.44%和87.18%,约登指数分别为0.87、0.77和0.72。试剂盒C在诊断细粒和多房棘球蚴病时存在交叉反应。试剂盒A和B用于诊断棘球蚴病的受试者工作特征曲线（receiver operating characteristic curve,ROC）曲线下面积分别为0.970和0.948,差异无统计学意义（Z = 1.618,P > 0.05）,试剂盒A和B诊断棘球蚴病结果具有较好一致性（Kappa = 0.585,P < 0.01）。结论　3种抗棘球蚴抗体检测试剂盒对多房棘球蚴病血清学诊断效果均优于细粒棘球蚴病。试剂盒A诊断棘球蚴病具有较高敏感性和特异性,检测性能相对稳定、干扰因素相对较少,适合用于棘球蚴病术前初步诊断和术后患者血清抗体随访监测;试剂盒C诊断棘球蚴病具有较高敏感性和特异性,操作方便、报告率高,适用于棘球蚴病初步筛查。     

间接ELISA检测弓形虫感染鼠NTPase-Ⅱ抗体的研究

目的建立检测小鼠血清中刚地弓形虫NTPase-Ⅱ特异性IgGI、gM抗体的间接ELISA法,探讨用于弓形虫感染早期检测的应用价值。方法以刚地弓形虫NTPase-Ⅱ融合蛋白为包被抗原建立间接ELISA法,动态检测刚地弓形虫实验感染鼠血清NTPase-Ⅱ特异性IgGI、gM抗体变化。试验设脑囊虫病、血吸虫病及肺吸虫病病人血清对照。结果小鼠血清中的抗NTPase-Ⅱ抗体IgM于弓形虫感染后第3 d开始出现阳性反应,IgG抗体于感染后第7 d开始出现阳性反应,脑囊虫病、血吸虫病及肺吸虫病病人血清特异性IgG阳性率分别为0、1.92%和0。结论间接ELISA检测弓形虫感染鼠血清NTPase-Ⅱ抗体的敏感性和特异性较高,有望应用于人感染弓形虫的早期检测。     

无锡地区孕妇弓形虫感染及危险因素调查

目的 调查江苏省无锡市孕妇弓形虫感染情况及其危险因素,为制定预防控制孕妇弓形虫感染措施提供参考依据。 方法 2011-2014年采用酶联免疫吸附试验（ELISA）对3 014例孕妇进行抗弓形虫IgM和IgG抗体检测并追踪随访,观察其妊娠结局;采用问卷调查孕妇弓形虫感染的危险因素。 结果 3 014例被调查的孕妇中,弓形虫抗体检测阳性215例,抗体阳性率为7.13%,其中IgM抗体阳性49例（占22.79%）,IgG抗体阳性166例（占77.21%）。随访结果表明,215例感染弓形虫的孕妇中46例出现不良妊娠结局（占21.40%）,其中35例IgM抗体阳性（76.09%）,11例IgG抗体阳性（23.91%）。275例未感染弓形虫孕妇中,7例出现不良妊娠结局（占2.55%）。弓形虫感染和未感染孕妇不良妊娠结局发生率差异有统计学意义（P < 0.01）。单因素分析显示,与动物密切接触、喜吃生肉、喜吃火锅或烧烤、品尝生肉馅等是孕妇感染弓形虫的重要危险因素（与未感染组比较,P < 0.01）。 结论 孕妇弓形虫感染可导致不良妊娠结局的发生,减少动物密切接触、养成良好的饮食卫生习惯以及做好孕期弓形虫感染监测工作等是避免不良妊娠结局的有效途径。     

弓形虫既往感染在孕期内对胎儿的影响

目的探讨既往感染者孕期内弓形虫的活动情况及对胎儿的影响。方法对68例抗弓形虫抗体IgG阳性、IgM阴性孕妇的血清、脐血采用酶联免疫吸附试验检测弓形虫抗体IgG、IgM、弓形虫循环抗原（CAg）,PCR法检测虫体DNA;胎盘样本采用直接涂片、匀浆涂片及PCR法观察弓形虫感染情况。结果68例弓形虫抗体IgG阳性孕妇中脐血弓形虫抗体IgG阳性28例,IgG胎盘垂直传播率41.2%;脐血弓形虫DNA阳性6例,宫内感染发生率8.8%;胎盘组织中虫体DNA阳性9例,宫内感染发生率13.2%。结论既往弓形虫感染孕期内仍可导致垂直传播。     

弓形虫感染者血清IgM和IgG抗体免疫印迹谱分析

目的探索近期和慢性弓形虫感染的免疫诊断标志物。方法采用无毒灵敏的TMB为底物的酶联免疫印迹技术,分析弓形虫感染者IgM或IgG抗体阳性血清与弓形虫速殖子可溶性抗原的免疫反应谱。结果IgM抗体对p35、p38和p22的识别比例达80%以上,且反应带出现率较其它抗原组分高,而p32、p30与IgG抗体的反应带出现率和识别比例也分别高达40%和80%以上。其中,反应最强烈最具代表性的分别属p35(出现率81.5%,P<0.0001)和p32(出现率57.1%,P<0.0001)。结论p35、p38、p22可能为近期弓形虫感染的诊断标志物,p32和p30则可能是慢性弓形虫感染的诊断标志物。     

两种抗原检测弓形虫病IgM的效果

目的观察弓形虫P30重组抗原及可溶性抗原检测弓形虫病IgM的效果。方法建立斑点免疫金渗滤法（DIGFA）。采用2种抗原分别包被在两条硝酸纤维素膜（NC）上,与待检血清中的相应IgM抗体结合,通过金标记兔抗人IgM直接显色,以检测弓形虫病IgM。2种抗原的DIGFA分别检测弓形虫IgM抗体阳性、类风湿、支原体肺炎、血吸虫病人和正常人血清。结果两种抗原建立的DIGFA检测试剂共检测5种血清样本166份,其中弓形虫感染IgM抗体阳性病人血清38份,弓形虫P30DIGFA敏感性为92.1%（35/38）,可溶性抗原DIGFA敏感性为81.6%（31/38）,差异无统计学意义（P〉0.05）。正常人群对照血清63份,检测全部阴性,特异性为100%。检测类风湿病人血清30份、血吸虫病人血清25份及支原体肺炎病人血清10份,仅类风湿病人血清出现阳性交叉反应,其中弓形虫P30DIGFA阳性2例,可溶性抗原DIGFA阳性3例。结论弓形虫P30重组抗原检测弓形虫病人血清IgM的DIGFA试剂可用于临床早期或急性期弓形虫病的诊断。