时间分辨免疫荧光技术在检验医学中的发展现状

标记免疫分析法创立于60年代初期,是将多种标记示踪技术的高度敏感性和医学免疫学抗原抗体反应的高度特异性相结合的产物,包括放射免疫(RIA),酶联免疫分析法(EIA)、化学发光免疫分析法(CLIA)、电化学发光免疫分析法(ECLIA)、时间分辨荧光免疫分析(TRFIA)。TRFIA具有零本底、灵敏度高、重复性好、特异性强、线性范围宽和应用广泛等特点,是继放射免疫分析之后,标记免疫分析法发展的一个新的里程碑,是当代配基分析中最有发展前景的分析手段。本文就时间分辨免疫荧光分析技术作如下综述。     

稀土元素铕标记技术的应用研究

时间分辨荧光免疫分析法(time resolvedfluoroimmunoassay ,TRFIA)是2 0世纪70年代末即已建立的一种荧光免疫分析技术[1] 。1983年,Pettersson等和Eskola等先后报告用此法测定人绒毛膜促性腺激素和胰磷酯酶A2 [2 ] 。迄今,TRFIA已成为最有发展前途的非同位素标记免疫技术之一[3     

3种免疫方法测定甲胎蛋白的评价

甲胎蛋白(AFP)是胚胎发育时期一种主要血清蛋白,成人由肝细胞产生,正常血清中含量极微.AFP是肝细胞肝癌诊断和判断预后的首选血清肿瘤标记物[1],目前AFP的常用检测方法有酶联免疫吸附(ELISA)、放射免疫法(RIA)、电化学发光免疫分析法(ECLIA)和时间分辨荧光免疫分析法(TRFIA).ELISA法操作简单,但其线性范围较窄,而且存在"钩状效应",现已经逐渐被其他3种方法替代[2],本文分别用RIA、ECLIA、TRFIA 3种方法对AFP进行测定,并进行方法学评价和比较,报道如下.     

TRFIA与ELISA法检测乙肝病毒血清学标志物的分析与比较

时间分辨荧光免疫分析方法(TRFIA)是一种先进的免疫检验新技术,是用镧系元素标记抗原/抗体作为抗原-抗体反应体系示踪物,通过时间延迟和波长分辨将特异性荧光和非特异性荧光分辨开来,达到“零”本底,再根据特异性荧光强度和相对荧光强度的比值来判断反应体系中分析物浓度,达到定量分析的目的[1]。TRFIA法具有高准确度、高灵敏度(可达10-18mol/l)、稳定性好、标准曲线线性范围宽、试剂有效期长[1-3]等特点。酶联免疫吸附方法(ELISA)一直是临床诊断HBV感染的传统手段,为探讨二者在检测乙肝病毒血清标志物结果的符合程度、灵敏度、特异…     

时间分辨荧光免疫分析法定量检测845例乙型肝炎标志物结果分析

目的探讨时间分辨荧光免疫分析法定量检测乙型肝炎标志物的临床意义。方法用时间分辨荧光免疫分析法（TRFIA）与酶联免疫法（ELISA）同时检测845例临床诊断为乙型肝炎患者的乙型肝炎标志物,并对检测结果进行对比分析。结果两种方法检测结果经配对卡方检验差异无统计学意义（P〉0.05）。但TRFIA检测的线性范围更广,能检测出更多的乙型肝炎标志物模式。结论 TRFIA法检测乙型肝炎标志物具有可定量、特异性强、灵敏度高等优点,临床可根据定量检测结果进行疗效判断和选择治疗方案,具有良好的临床应用价值。     

不同方法检测乙型肝炎血清标志物结果评价分析

目的 探讨胶体金标记免疫层析技术(GICA)、酶联免疫吸附试验(ELISA)、时间分辨荧光免疫分析(TRFIA)、电化学发光免疫分析(ECLIA)检测乙型肝炎病毒表面抗原(HBsAg)、乙型肝炎病毒表面抗体(抗-HBs)、乙型肝炎病毒e抗原(HBeAg)、乙型肝炎病毒e抗体(抗-HBe)、乙型肝炎病毒核心抗体(抗-HBc)等乙型肝炎病毒(HBV)血清学标志物结果的一致性.方法用GICA、ELISA、TRFIA、ECLIA分别检测145例HBV感染患者以及70例正常体检者的HBsAg、抗-HBs、HBeAg、抗-HBe、抗-HBc,以ELISA为参考方法,评价GICA、ELISA、TRFIA等3种方法与ECLLA检测HBV血清学标志物结果之间的一致性.结果 GICA、ELISA、TRFIA等3种方法的检测结果与ECLIA的检测结果具有高度或者极强的一致性,TRFIA与ECLIA检测结果的一致性最佳,ELISA次之,GICA最差.结论 GICA、ELISA、TRFIA、ECLIA等4种方法检测HBV血清学标志物具有较好的一致性,TRFIA、ECLIA适用于HBV感染患者的疗效判断,ELISA适用于HBV感染患者的初筛.     

血清透明质酸时间分辨荧光免疫分析法的反应条件优化及其临床应用

目的优化血清透明质酸(HA)时间分辨荧光免疫分析法(TRFIA)的反应条件,并探讨其临床应用价值。方法采用TRFIA检测血清中HA的含量,确定参与HA-TRFIA的各反应成分的浓度。结果最佳反应条件为包被浓度10 mg/L、HA结合蛋白(HABP)1∶500稀释、铕标记HA(Eu3+-BSA-HA)1∶200稀释。敏感性为5.17μg/L,批内变异系数(CV)为2.21%~3.78%,批间CV为3.73%~5.40%,平均回收率为100.4%。该法HA测定值与放射免疫测定值显著相关,且与临床结果一致。结论本研究建立的血清HA-TRFIA是一种灵敏准确的分析方法,适合临床应用。     

时间分辨荧光免疫分析技术检测乙型肝炎病毒血清学标志物评价

目的时间分辨荧光免疫分析技术(TRFIA)检测乙型肝炎病毒感染者血清标志物的准确性、灵敏度及其临床应用价值。方法用TRFIA和酶联免疫吸附法(ELISA)对300例临床血清学标本进行检测,并对结果进行分析。结果 TRFIA对乙型肝炎表面抗原、乙型肝炎e抗原、乙型肝炎表面抗体、乙型肝炎e抗体、乙型肝炎核心抗体的阳性率分别为26%、8%、52%、29%、35%,ELISA阳性率分别为25%、7%、46%、24%、28%,两组差异有统计学意义(P<0.05)。结论 TRFIA检测乙型肝炎病毒血清标志物具有稳定性好、线性范围宽、不污染环境、操作简便等优点,其敏感性和特异性均达到放射免疫法和ELISA水平,可作为临床检测乙型肝炎病毒血清标志物的重要手段。     

乙肝病毒五项指标TRFIA定量测定与MEIA检测结果的相关性研究

乙肝病毒(Hepadts B veius HBV)感染是我国最常见的感染性疾病之一,应用免疫技术测定HBV特异性抗体是HBV感染诊断的主要手段。定量检测乙肝表面抗原(HBsAs),表面抗体(HBsAb),e抗原(HBeAg)、e抗体(HBeAb)、核心抗体(HBcAb)五项乙型肝炎血清学标志物(HBV-M),对乙肝类型的判断和治疗效果的观察具有重要价值。目前,定量测定HBV-M方法主要有微粒子酶免疫分析(micropaaicle enzymeimmunoassay,MEIA)和时间分辨荧光免疫分析(time resolvedfluorescence immunanssav TRFA)技术。TRFIA是近年来出现的一种很有前途的非放射性免疫分析法,该方法灵敏度高,特异性强,标记物稳定、测量范围广、结果重复性好,且自动化程度高[1,2]。本文应用MEIA技术和TRFIA技术分别对200例HBV感染者进行HBV-M五项指标检测。现将结果报告如下。1材料与方法1.1标本来源200例HBV感染者为随机选择2005年6月～10月本院住院或门诊患者。所有受试者均空腹静脉采血5ml。每份标本均用MEIA和TRFIA两种方法同...     

尿微量清蛋白时间分辨荧光免疫检测法的建立

目的建立尿微量清蛋白(UmALB)的时间分辨荧光免疫分析法(TRFIA)。方法以羊抗兔IgG包被板条,双功能螯合剂异氰酸苄基二乙烯三胺四乙酸络合Eu3+及标记清蛋白(ALB),采用竞争法建立UmALB-TRFIA检测方法。发光增强系统为以β-二酮体为主的增强液,数据采用双对数法数据处理程序。结果此法的批内和天间CV分别为4.8%和5.4%,平均回收率为100.93%,灵敏度为0.34μg/mL,线性范围为0.34~135μg/mL。本方法与β2-微球蛋白无交叉反应,血红蛋白浓度小于4 g/L时对本方法无干拢,同放免法比较,结果相关性好。结论尿微量清蛋白的时间分辨荧光免疫分析法的敏感度、特异性、准确度等指标符合临床诊断要求。     

两种血清甲胎蛋白定量分析方法评价

目的比较时间分辨荧光免疫分析法(TRFIA)和酶联免疫吸附法(ELISA)测定甲胎蛋白(AFP)对原发性肝癌(PHC)诊断的临床价值。方法选择66例肝癌病人和60例健康体检者,分别用TRFIA和ELISA测定AFP含量,比较两种方法的相关性、线性、精密度、特异性和敏感性。结果 TRFIA和ELISA测定66例肝癌病人血清中AFP含量分别为(185.36±118.22)ng/ml和(216.25±193.20)ng/ml,敏感性分别为78.78%和68.18%。检测60例对照组AFP含量分别为(5.31±3.57)ng/ml和(14.75±6.80)ng/ml,特异性分别为98.33%和96.66%,经统计学分析TRFIA敏感性高于ELISA(P<0.05),TRFIA和ELISA的特异性无明显差异(P>0.05)。TRFIA在0.73～1 066.00 ng/L范围内呈现良好线性,ELISA在4.22～534.00 ng/L范围内呈现良好线性,两种方法有良好的正性相关性;TRFIA比ELISA有更宽的检测范围和更小的批间变异和批内变异。结论 TRFIA和ELISA均可适用于临床测定AFP,但TRFIA的敏感性、线性、精密度均优于ELISA。     

三种血清胃蛋白酶原检测方法在胃癌筛查中的比较分析

目的对目前用于胃癌筛查项目中应用血清胃蛋白酶原(PG)三种检测方法的敏感度和特异度作分析比较,为临床应用提供参考。方法采用时间分辨荧光免疫分析法(TRFIA)、酶联免疫吸附试验(ELISA)、乳胶增强免疫比浊法三种方法检测127例胃癌患者及155名正常对照者血清中PG 2个亚群PG1和PG2含量及两者比值(PGR)。结果 TRFIA、ELISA、乳胶增强免疫比浊法的敏感度分别为70.9%、63.0%、67.7%,特异度分别为74.8%、82.6%、77.4%。三种检测方法敏感度及特异度比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。结论有时间分辨荧光免疫分析仪的大医院检测PG可首选TRFIA;有全自动生化分析仪的大、中医院可选用乳胶增强免疫比浊法检测PG;而ELISA则可作为基层医院检测PG首选。     

应用TRFIA在31万余新生儿中筛查先天性甲状腺功能低下症

目的开展新生儿先天性甲状腺功能低下症(CH)筛查,降低残疾儿童的发生率,提高我国人口素质.方法应用先进的时间分辨荧光免疫法TRFIA检测新生儿促甲状腺素的浓度筛查CH.结果筛查新生儿CH 315472名,确诊66例,筛查阳性率为1/4780.结论应用TRFIA筛查CH,是理想的非放射性免疫分析法.接受国际和国内新生儿筛查实验室质量监控,是对大批量筛查标本质量的有效保证.选用该法筛查CH能逐渐适宜于我国经济实力不断发展的国情.     

时间分辨荧光免疫分析法与ELISA检测丙型肝炎病毒抗体的比较

目的探讨时间分辨荧光免疫分析法(TRFIA)与酶联免疫吸附试验(ELISA)检测丙型肝炎病毒抗体(抗-HCV)的临床应用价值。方法对189例HCV疑似感染者血清标本,同时采用TRFIA和ELISA进行抗-HCV检测。结果在189例标本中,TRFIA检测抗-HCV阳性53例,ELISA阳性45例,两种方法差异无统计意义(P0.05),符合率为95.77%。当标本中抗-HCV的S/CO≥2时,两种方法差异无统计学意义(P0.05),但当1≤S/CO2时,两种方法阳性检出率差异有统计学意义(P0.05)。结论 TRFIA检测抗-HCV与ELISA相比,特异性好、灵敏度高,提高了临床检测水平,具有较高的临床应用价值。     

时间分辨荧光免疫技术检测HBV血清标志物临床应用评价

目的 对时间分辨荧光免疫分析技术（TRFIA）检测乙型肝炎病毒（HBV）血清标志物进行临床应用评价。方法 用TRFIA、微粒子酶免疫分析（MEIA）和酶联免疫吸附试验（ELISA）同时检测86例HBV感染者和50例正常人血清的HBsAg、抗-HBs、HBeAg、抗-HBe和抗-HBc,对三种方法的检测结果进行比较分析。结果 TRFIA法同MEIA法比较,五项标志物的Kappa值分别为1.000、0.847、0.934、0.698、0．877,均显示二者之间结果的高度一致性;TRFIA法同ELISA法比较,五项标志物的阳性检出数前者均高于后者。结论 TRFIA技术检测HBV血清标志物灵敏度高、特异性强,可替代MEIA和ELISA而成为一种常规检测方法。     

时间分辨荧光免疫技术检测梅毒特异性抗体的应用评价

目的探讨时间分辨荧光免疫技术(TRFIA)检测梅毒特异性抗体在梅毒诊断、疗效判断和预后评价方面的应用价值。方法对986份血清同时用TRFIA、梅毒明胶颗粒凝集试验(TPPA)和梅毒甲苯胺红试验(TRUST)检测,比较各种检测结果的异同。结果 TRFIA阳性121例,阳性率12.3%;TPPA阳性118例,阳性率12.0%;TRUST阳性93例,阳性率9.4%;三种检测结果差异无统计学意义(P>0.05)。结论利用TRFIA检测梅毒特异性抗体,与TPPA结果有很好的符合率,准确可靠,且智能化程度较高,值得推广应用。     

可溶性细胞间粘附分子-1时间分辨荧光免疫分析法的建立及对肺癌诊断的临床应用

目的建立可溶性细胞间粘附分子-1生物素-亲和素系统（BSA）时间分辨荧光免疫分析方法 ,并对其方法学及对肺癌诊断临床应用价值进行评价。方法用2株匹配的单克隆抗体分别作为捕获抗体和检测抗体,利用制备的铕标记链亲和素（SA-Eu3＋）作为示踪物并与生物素化的检测抗体特异结合,建立双位点多层夹心法BSA-TRFIA法,检测68例正常对照者和61例肺癌患者血清sICAM-1水平,对其方法学和临床应用价值进行评价。结果 sICAM-1TRFIA检测灵敏度为1.32μg/L,批内和批间CV分别为4.24%和6.83%,平均回收率为99.87%,与ELISA法测定值的相关系数为0.939,可测范围为2.5-933μg/L,肺癌组与健康对照组比较具有显著性差异（P〈0.01）。结论 sICAM-1时间分辨荧光免疫分析（TRFIA）是一种新型非放射性标记免疫分析法,具有良好的特异性、准确度、稳定性,可作为肺癌的辅助诊断指标。     

乙肝血清学标志物与HBV-DNA含量检测的临床意义

正乙肝血清学标志物检测已从酶联免疫吸附法定性试验发展到时间分辨荧光免疫分析定量分析,为临床判断患者的病情、传染性和疗效提供重要的依据。本研究采用酶联免疫吸附法(ELISA)、时间分辨荧光免疫分析(TRFIA)、荧光定量法PCR(FQ-PCR)分别检测492例乙肝患者     

尿中微量白蛋白测定技术的研究进展

尿中微量白蛋白(mAIb)测定对糖尿病肾病、高血压肾病、子痫及各种因素所致的肾小球损伤都具有重要的诊断价值，是早期肾损伤监测和追踪的重要生化检测指标。本文对放射免疫测定法(RIA)、免疫比浊法(IT)、荧光免疫测定法(FIA)、酶免疫测定法(EIA)、时间分辨荧光免疫测定法(TRFIA)、间接胶乳凝集试验、Micral—Test、激光──荧光法和溴酚蓝(BPB)染料结合法测定尿mAlb的基本原理、进展及优缺点进行了综述。     

两种方法检测乙型肝炎病毒血清学标志物的比较

目的 研究时间分辨荧光免疫分析技术(TRFIA)在HBV感染者血清免疫学标志物检测中的应用及其与ELISA法的比较.方法 用TRFIA和ELISA法对200例临床血清学标本进行检测,并对结果进行分析.结果 TRFIA和ELISA法比较,HBsAg、HBeAg、抗-HBe结果符合率分别为97%、99%、94%,经配对χ2检验,P＞0.05,差异无统计学意义.抗-HBe、抗-HBc结果符合率均为86%,P＜0.01,差异有统计学意义.结论 TRFIA与ELISA法检测乙型肝炎两对半相比,其特异性和敏感性高.TRFIA法作为一种高灵敏度的方法,其定量检测结果对HBV感染的诊断、临床分型、治疗和疗效评价都将起着十分积极的作用,为临床提供更可靠的依据.