先天性巨结肠RET基因的突变

酪氨酸激酶受体基因（ｒｅｃｅｐｔｏｒｔｙｒｏｓｉｎｅｋｉｎａｓｅｇｅｎｅ，ＲＥＴ基因）被定位于染色体１０ｑ１１．２上，其突变可导致３种多发性内分泌瘤综合征和先天性巨结肠的发生。为了探讨ＲＥＴ基因突变在先天性巨结肠发病中的作用，采用多聚酶链反应（ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅｃｈａｉｎｒｅａｃｔｉｏｎ，ＰＣＲ）及单链ＤＮＡ构象多态性分析（ｓｉｎｇｌｅ－ｓｔｒａｎｄｅｄＤＮＡｃｏｎｆｏｒｍａｔｉｏｎａｌｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍ，ＳＳＣＰ）的方法，对３４例散发先天性巨结肠基因组ＤＮＡ进行ＲＥＴ基因第６外显子突变筛查，并对电泳条带变异的ＰＣＲ产物进行了直接核苷酸序列分析。发现１例为ＧＡＣＴＣＡＧＡＣ→ＧＡＡＴＣＡＡＡＣ碱基突变，导致两个氨基酸发生改变。表明ＲＥＴ基因突变与先天性巨结肠发病有关。     

PCR直接测序在Wilson病基因第8外显子检出一个突变热点

目的寻找中国人Ｗｉｌｓｏｎ病（ＷＤ）基因突变热点。方法应用ＰＣＲ直接测序法对３０例Ｗｉｌｓｏｎ病患者ＷＤ基因第８外显子进行了突变筛查。结果在１４例患者中发现同一种错义突变Ａｒｇ７７８Ｌｅｕ，其中４例为这一突变的纯合，其余为杂合，突变率为３０％。结论ＷＤ基因第８外显子７７８位密码子（ＣＧＧ→ＣＴＧ）系中国人的突变热点之一。     

人B7-1(CD80)逆转录病毒表达载体的构建及其在人肿瘤细胞系的表达

应用分子克隆技术，构建了含全长人Ｂ７－１ｃＤＮＡ（８６７ｂｐ）的逆转录病毒表达载体ｐＬＮＣ－ｈＢ７－１。以ｐＣＤＭ８－ｈＢ７－１为模板，５＇引物为：ＡＣＣＣＴＡＡＧＣＴ，ＴＣＴＧＡＡＴＴＣＡＴＧＧＧＣＣＡＣＡＣ，内含ＨｉｎｄⅢ切点及起始密码ＡＴＧ，３’引物为：ＣＴＴＣＴＧＣＧＴＴＡＡＣＴＧ－ＴＴＡＴＡＣＡＧＧＧＣＧＴＡＣ，内含ＨｐａＩ切点和终止密码ＴＡＡ，经ＰＣＲ扩增及电泳回收后得到纯化ＰＣＲ产物，用内切每ＨｉｎｄⅢ和Ｈｐａｌ消化后，定向插入经同样内切酶消化的ｐＬＮＣＸ载体，获得含人Ｂ７－１ｃＤ…     

软骨发育不全FGFR3基因突变的研究

目的了解中国人软骨发育不全患者成纤维细胞生长因子受体３（ｆｉｂｒｏｂｌａｓｔｇｒｏｗｔｈｆａｃｔｏｒｒｅｃｅｐｔｏｒ３，ＦＧＦＲ３）基因变异情况。方法应用ＰＣＲ－ＳＳＣＰ和限制性内切酶酶切方法，分析辽宁地区７例软骨发育不全（ａｃｈｏｎｄｒｏｐｌａｓｉａ，ＡＣＨ）患者外周血ＤＮＡ标本中ＦＧＦＲ３基因第１０外显子区域。结果７例患者均检测到相同的Ｇ３８０Ｒ点突变。结论表明Ｇ３８０Ｒ为中国人ＡＣＨ患者常见突变。应用ＰＣＲ－ＳＳＣＰ和限制性内切酶酶切的方法检测ＦＧＦＲ３基因突变是产前诊断和早期诊断ＡＣＨ患者的简便、快速、可靠的手段     

先天性尿道下裂与SRD5A2及SRY基因突变关系研究

目的　探讨中国人先天性尿道下裂的发生与５α还原酶２（ Ｓ Ｒ Ｄ５ Ａ２） 基因突变及 Ｓ Ｒ Ｙ 基因突变的关系。方法　收集先天性尿道下裂患儿静脉血２３ 例,抽提 Ｄ Ｎ Ａ。经 Ｐ Ｃ Ｒ 分别扩增 Ｓ Ｒ Ｄ５ Ａ２ 基因的第１ 至第５ 外显子及 Ｓ Ｒ Ｙ 基因的 Ｄ Ｎ Ａ 片段。对各扩增片段采用单链构象多态性诊断法（ Ｐ Ｃ Ｒ Ｓ Ｓ Ｃ Ｐ） ,筛选基因突变标本,有电泳异常的标本进行测序分析。结果　经 Ｐ Ｃ Ｒ Ｓ Ｓ Ｃ Ｐ 发现３ 例 Ｓ Ｒ Ｄ５ Ａ２ 基因的第４ 外显子 Ｄ Ｎ Ａ 扩增片段电泳带位置异常,经 Ｄ Ｎ Ａ 序列分析证实２ 例为纯合子型第２２７ 位密码子由 Ｃ Ａ Ａ 替代 Ｃ Ｇ Ａ（ Ａｒｇ２２７ Ｇｌｎ） ;１ 例为双重杂合子型突变,第２２７ 位密码子由 Ｃ Ａ Ａ 替代 Ｃ Ｇ Ａ,同时第１８６ 位密码子由 Ｔ Ｔ Ｇ 替代 Ｔ Ｔ Ｔ（ Ｐｈｅ１８６ Ｌｅｕ） 。 Ｐ Ｃ Ｒ Ｓ Ｓ Ｃ Ｐ 检测 Ｓ Ｒ Ｙ 基因片段未发现异常电泳带。结论　 Ｓ Ｒ Ｄ５ Ａ２ 基因突变,可能是先天性尿道下裂的病因之一, Ｓ Ｒ Ｄ５ Ａ２ 基因的第２２７ 位密码子可能为中国人该基因的突变热点,而尿道下裂中 Ｓ Ｒ Ｙ 基因的突变少见。     

不同肺腺癌细胞系N－ras、p53基因突变核酸测序分析

应用聚合酶链反应（ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅｃｈａｉｎｒｅａｃｔｉｏｎＰＣＲ）和ｄｓＤＮＡｃｙｃｌｅｓｅｑｕｅｎｃｉｎｇｓｙｓｔｅｍ技术对体外培养的人肺腺癌细胞系ＬＴＥｐ－ａ＿２和ｈＬＡ中Ｎ－ｒａｓ癌基因及ｐ５３抑癌基因外显子５、７进行核酸序列测定分析。结果表明Ｎ－ｒａｓ突变热点第１２、１３、６１密码子未见异常。ｐ５３抑癌基因第１５４密码子均发现ＧＧＣ→ＧＴＣ突变（Ｇｌｙ→Ｖａｌ变异）。经光盘检索（美国Ｓｉｌｖｅｒｐｌａｔｔｅｒ公司提供的ＣＯ－ＲＯＭＭＥＤＩＬＩＮＥ）分析了１９８８～１９９３年间的专题文献，尚未见肺癌ｐ５３基因第１５４密码子突变的报道。     

ApoE基因多态性与中国人非胰岛素依赖型糖尿病血脂水平的…

为研究ＡｐｏＥ基因对中国人非胰岛素依赖型糖尿病（ＮＩＤＤＭ）患者血脂水平的影响，应用聚合酶链反应（ＰＣＲ）扩增出ＡｐｏＥ基因第４外显子内的２９２ｂｐ片段，继以限制性内切酶ＨｈａⅠ酶解消失，最后行８％聚丙烯酰胺凝胶电泳，根据电泳带型判断ＡｐｏＥ基因型。共检测了１１２例非胰岛素依赖型糖尿病患者的ＡｐｏＥ基因型。通过比较不同ＡｐｏＥ基因与血脂水平的关系发现：ＡｐｏＥ基因多态性与ＴＧ，ＨＤＬ－Ｃ，ＡｐｏＡ     

ApoE 基因多态性与中国人非胰岛素依赖型糖尿病血脂水平的关系

为研究ＡｐｏＥ基因对中国人非胰岛素依赖型糖尿病（ＮＩＤＤＭ）患者血脂水平的影响，应用聚合酶链反应（ＰＣＲ）扩增出ＡｐｏＥ基因第４外显子内的２９２ｂｐ片段，继以限制性内切酶ＨｈａⅠ酶解消化，最后行８％聚丙烯酰胺凝胶电泳，根据电泳带型判断ＡｐｏＥ基因型。共检测了１１２例非胰岛素依赖型糖尿病患者的ＡｐｏＥ基因型。通过比较不同ＡｐｏＥ基因型与血脂水平的关系发现：ＡｐｏＥ基因多态性与ＴＧ，ＨＤＬ－Ｃ，ＡｐｏＡⅠ，ＡｐｏＢ及Ｌｐ（ａ）水平无相关性，而与ＴＣ（Ｐ＝０．００２９）及ＬＤＬ－Ｃ（Ｐ＝０．００２１）水平相关，携带ε４等位基因者具有较高的ＴＣ及ＬＤＬ－Ｃ水平，而携带ε２等位基因者具有较低的ＴＣ及ＬＤＬ－Ｃ水平。     

用反向点杂交法对广东地区35例重型β地中海贫血患儿及双亲的基因突变研究

为探讨临床对β地中海贫血（β－地贫）的快速基因诊断方法，应用ＰＣＲ反向点杂交（ｒｅｖｅｒｓｅｄｏｔｂｌｏｔ，ＲＤＢ）技术，对广东地区３５例重型β地贫患儿及其双亲的基因突变特征进行了研究。结果显示：（１）广东重型β地贫基因突变可见７种类型：ＣＤ４１－４２（－ＴＣＴＴ），ＩＶＳ２ｎｔ６５４（Ｃ→Ｔ）。ＴＡＴＡｂｏｘ－２８（Ａ→Ｇ），ＣＤ１７（Ａ→Ｔ），βＥ（２６）（Ｇ→Ａ），ＣＤ７１－７２（＋Ａ）及ＣＤ１４－１５（＋Ｇ），其结构比依次为：４０％，２８．６％，１１．４％，７．１％，７．１％，７．１％，４．３％及１．４％，和１３种基因组合形式；（２）基因突变类型不同致临床表型不同，β°纯合子临床多表现重症，发病早（３～６个月），靠输血维持生命；β°／β－（Ｅ或－２８）双重杂合子多表现中间型或重型，发病年龄较晚，贫血较轻，输血较少，ＰＣＲ－ＲＤＢ技术不需依赖同位素、操作简便、快速，宜于临床推广应用。     

Pfeiffer综合征的遗传异质性研究

目的为揭示Ｐｆｅｉｆｅｒ综合征的分子病理缺欠。方法采用ＳＳＣＰ－ＤＮＡ直接测序及ＰＣＲ－限制性内切酶酶切技术，对４个Ｐｆｅｉｆｅｒ综合征家系的外周血ＤＮＡ进行了分析。结果２个家系是由ＦＧＦＲ２基因突变所致：１例发生在ＦＧＦＲ２基因第８内含子３′剪切位点部位Ａ→Ｇ突变；１例为ＦＧＦＲ２基因第９外显子Ａｓｐ３２１Ａｌａ突变。另外１个家系是由ＦＧＦＲ１基因第５外显子Ｐｒｏ２５２Ａｒｇ突变所致。结论该项研究结果表明了Ｐｆｅｉｆｅｒ综合征的遗传异质性，为该病的病因学研究和临床研究提供了有用的资料     

直接从中国人胎肝染色体DNA中克隆粒细胞集落刺激因子（G－CSF）外显子及其在大肠杆菌中的高效表达

利用聚合酶链反应（ＰＣＲ）技术，直接从正常人胎肝染色体ＤＮＡ库中分离克隆了中国人粒细胞集落刺激因子（ｃ－ＣＳＦ）外显子，全长５３７ｂｐ，它包括除信号肽氨基酸外的所有编码区，为了使克隆的Ｇ－ＣＳＦ外显子在大肠杆菌中高效表达，对其５’端进行了修饰，去除第１个编码Ｔｈｒ的密码子，在不改变氨基酸的前提下，变换为ＡＴ丰富的密码子；并将某些密码子换成大肠杆菌喜用的密码子。对于每段目的ＤＮＡ所进行的２次独立的ＰＣＲ反应所获得的产物分别进行了核苷酸序列测定。结果完全一致，证明所克隆的Ｇ－ＣＳＦ外显子的序列是可靠的，与国外发表的Ｇ－ＣＳＦ外显子序列相比，未发现变异。将上述人Ｇ－ＣＳＦ外显于基因插入ｐＢＶ２２０表达载休，构建了ｐＢＶ２２０／Ｇ－ＣＳＦ质粒，将其转化入ＤＨ５ａ菌，ＳＤＳ－ＰＡＧＥ表明其表达量约占菌体总蛋白量的２０％，用依赖性细胞系ＮＦＳ－６０进行测定，活性为５ｘ１０ｖＩＵ／Ｌ。     

抗体轻链可变区基因真核表达框架及抗CD3鼠／人嵌合…

利用抗乙肝表面抗原的单抗２Ｈ１的轻链可变区基因的一部分，以核酸定点突变法引入ＭｌｕＩ限制性内切酶识别位点，构建了含有启动子、前导肽序列以及剪接共体信号等真核表达元件和“ＥｃｏＲＶ－ＭｌｕＩ”外显子克隆“匣”的通用的抗体轻链可变区基因真核表达框架ｐＧＥＭ－ＬＰＣＲ。从分泌ＣＤ８单抗的杂交瘤细胞中提取基因组ＤＮＡ，通过ＰＣＲ扩增及序列分析证实获得了ＣＤ３单抗轻链可变区基因的外显子。将其克隆到ｐＧＥＭ－     

中国西北三省区β地中海贫血的基因突变类型及其分布特点

目的总结丝绸之路沿线西北三省区β地中海贫血的基因分析结果，讨论突变类型特点及其分布规律。方法采用ＤＮＡ扩增结合等位基因特异的寡核苷酸探针杂交（ＰＣＲ／ＡＳＯ）技术。结果对８５例β地中海贫血先证者进行了基因分析，从５个民族中共确定１２种基因突变型，除中国人常见的类型外，还首次从该地区检出了ＣＤ８（－ＡＡ）、ＣＤｓ８－９（＋Ｇ）、ＣＤｓ２７－２８（＋Ｃ）杂合子和［－２８（Ａ→Ｇ）。ＣＤ１７（Ａ→Ｔ）／Ｎ］双重杂合子，其中［－２８（Ａ→Ｇ）、ＣＤ１７（Ａ→Ｔ）／Ｎ］为同一染色体上的双重基因突变，极为罕见。结论丝绸之路地区β地中海贫血的基因突变类型有明显的地区差异和显著的民族特点，是我国一个较为特殊的地贫分布区域     

昆明地区葡萄糖-6-磷酸脱氢酶基因突变型研究

目的;研究昆明地区葡萄糖－６－磷酸脱氢酶（Ｇ６ＰＤ）缺乏症患者的基因突变型。方法：应用突变特异性扩增系统（ＡＲＭＳ）和错配扩增酶切法,检测７６例昆明地区Ｇ６ＰＤ缺乏症患者中Ｇ１３７６Ｔ,Ｇ１３８８Ａ,Ａ９５Ｇ,Ｃ１０２４Ｔ,Ｇ３９２Ｔ,Ｃ５９２Ｔ６种Ｇ６ＰＤ基因突变类型。     

α1抗胰蛋白酶变异型Etokyo的基因结构特征

Ｅｔｏｋｙｏ型是东北亚地区蒙古人种特有的α１抗胰蛋白酶（α１－ＡＴ）变异型，也是我国北方汉族人群中最常见的α１－ＡＴ变异型。采用ＰＣＲ直接测序技术首次对Ｅｔｏｋｙｏ型的基因结构特征进行了分析，结果表明Ｅｔｏｋｙｏ基因的编码区的第２８０位密码子发生了单碱基替换，即：ＧＡＣ→ＴＡＣ，所编码氨基酸由天门冬氨酸＾２８０变为酪氨酸，讨论了Ｅｔｏｋｙｏ基因突变性质及该型在人群中的分布特点。     

用PCR-SSCP分析检测睾丸女性化综合征患者雄激素受体基因突变

为进一步探讨睾丸女性化（Ｔｆｍ）综合征患者发病的分子机理，并为研究雄激素受体（ＡＲ）结构与功能关系提供资料，应用银染聚合酶链式反应－单链构象多态性（ＰＣＲ－ＳＳＣＰ）分析方法对４例Ｔｆｍ患者的ＡＲ基因８个外显子中的７个（Ｂ～Ｈ）分别进行了研究。结果表明，所有患者ＡＲ基因的上述外显子经ＰＣＲ扩增后均出现与外显子相应长度一致的条带，表明没有明显的缺失或插入突变。２例患者外显子Ｇ片段在行ＳＳＣＰ分析时分别有泳动变位，经ＤＮＡ双链循环测序证实两外显子各有一点突变（Ｖａｌ８６６Ｍｅｔ，Ｔ２９１９→Δ），这些突变均位于ＡＲ的雄激素结合区内。其中的缺失突变为国际上尚未报道过的新突变。研究表明，ＰＣＲ－ＳＳＣＰ分析是检测ＡＲ基因突变的快速、简便、可靠的方法。     

卵巢癌p53基因第7,8外显子突变的研究

为了解ｐ５３基因与卵巢癌的关系，采用ＰＣＲ产物－直接测序技术，初步分析了１５例卵巢恶性肿瘤ｐ５３基因第７、８外显子的突变。结果有２例第７外显子的２５２位密码子发生改变。１例为缺失第３位碱基Ｃ导致移码突变，另一例为第２位碱基Ｔ→Ａ颠换，导致错义突变。提示２５２位密码子可能在中国人卵巢癌中突变率较高，且易发于浆液性囊腺癌。     

人大肠癌细胞系HR 8348和HCe 8693 K－ras基因的点突变分析

本文采用修饰引物的聚合酶链式反应（ＰＣＲ）所建立的限制性片段长度多态性（ＲＦＬＰ），并结合ＰＣＲ直接测序方法，首次分析了我国建株大肠癌细胞系ＨＲ８３４８和ＨＣｅ８６９３的Ｋ－ｒａｓ基因点突变。发现该两细胞系均存在ｋ－ｒａｓ第１２密码子的点突变，其方式均为ＧＧＴ→ＧＡＴ；但未发现Ｋ－ｒａｓ第１３和６１密码子的突变。     

天津地区G6PD缺陷患者常见基因突变分析

目的研究北方地区葡萄糖－６－磷酸脱氢酶（ｇｌｕｃｏｓｅ－６－ｐｈｏｓｐｈａｔｅｄｅｈｙｄｒｏｇｅｎａｓｅ，Ｇ６ＰＤ）基因突变类型、基因突变与人口变迁。方法采用“错配引物”介导的聚合酶链反应／限制性酶切分析法和双脱氧核苷酸指纹印迹检测法，对天津地区２２例Ｇ６ＰＤ缺陷患者进行３种中国南方人群常见的Ｇ６ＰＤ基因突变的分析。结果８例患者（８／２２，３６．４％）有Ｒ４５９Ｌ（１３７６Ｇ→Ｔ）突变；７例患者（７／２２，３１．８％）有Ｒ４６３Ｈ（１３８８Ｇ→Ａ）突变；７例（７／２２）无１３７６和１３８８位点突变病例中，有３例做了Ｈ３２Ｒ（９５Ａ→Ｇ）突变分析，提示１例有该位点突变。结论北方地区也存在中国南方人群常见的３种Ｇ６ＰＤ基因突变，大多数中国北方Ｇ６ＰＤ缺陷患者是由于中国南方移民迁移造成的。     

p53基因第7外显子点突变与乳腺癌的关系

目的：研究ｐ５３基因点突变与乳腺癌发生发展关系。该当：应用多聚酶链反应－限制性片段长度多态性（ＰＣＲ－ＲＦＬＰ）检测７５例人乳腺癌标本ｐ５３基因第７外显子内２４８，２４９位密码子的点突变，结果：７５例乳腺癌标本ｐ５３基因第７外显子全长序列ＣＲ扩增产物经限制性内切酶ＭｓｐＩ酶切后，发现２例为突变型，用ＨａｅⅡ酶切后未发现有突变，结论：上述结果揭示ｐ５３基因第７外显子内２４８位密码子的突变为乳腺癌ｐ５