人永生化成骨细胞hFOB1.19恶性转化的研究

目的 建立人胚永生化成骨细胞系(hFOB1.19)的恶性转化模型, 作为骨肉瘤癌变过程细胞分子生物学研究的模型.方法 通过克隆形成率实验确定N-甲基-N'-硝基-N-亚硝基胍(N-methyl-N'-nitro-N-nitrosoguanidine, MNNG)对hFOB1.19细胞转化浓度后,以MNNG作启动剂,佛波酯(12-0-Te-tradecanoyl phorbol 13-acetate, TPA)作促进剂对hFOB1.19细胞进行转化,90 d后通过细胞形态、DNA含量分析、软琼脂集落形成试验和裸鼠体内致瘤试验鉴定细胞恶性转化程度.结果 经MNNG和TPA协同处理hFOB1.19细胞90 d后,细胞中出现形态异常的转化灶,转化灶细胞失去接触抑制; 高倍体细胞数,转化组(81.08%) 高于对照组(55.03%);软琼脂克隆形成率明显增加;转化细胞在裸鼠皮下成瘤,病理组织学证实为低分化骨肉瘤.结论 模拟人体细胞发生恶性转化的过程,建立了人胚永生化成骨细胞系的恶性转化模型.     

大鼠肠上皮细胞系IEC-6的恶性转化研究

目的建立N-甲基-N’-硝基-N-亚硝基胍（N-methyl-N’-nitro-N-nitrosoguanidine,MNNG）、佛波酯（12-O-tetradecanoylphorbol-13-acetate,PMA）对大鼠肠上皮细胞系IEC-6的恶性转化模型。方法通过克隆形成率实验确定MNNG、PMA对IEC-6细胞转化浓度,对IEC-6细胞进行分阶段多次干预。用软琼脂集落形成实验和裸鼠体内致瘤实验鉴定细胞恶性转化程度。结果经MNNG、PMA多次处理IEC-6细胞至24次后,细胞生长速度加快,排列紊乱,失去接触抑制,出现复层生长,并可在软琼脂上生长,且呈剂量反应关系,但在第24次之前的细胞则不能在软琼脂上生长。转化细胞在裸鼠体内形成瘤,病理组织学证实为低分化肠上皮细胞癌。结论MNNG、PMA具有使IEC-6细胞发生恶性转化的能力。     

亚硝胺类化合物MNNG诱导人胃粘膜上皮细胞系GES－1恶性转化的研究

本文首次报道以人胃粘膜上皮细胞系ＧＥＳ—１为靶细胞，用与人类胃癌相关的亚硝胺美化合物Ｎ—甲基—Ｎ—硝基—Ｎ—亚硝基胍（ＭＮＮＧ）对人胃粘膜上皮细胞系ＧＥＳ－１做进一步的恶性转化，从细胞形态学及细胞生长特性的变化、染色体数及结构等方面进行了观察、分析。结果表明，ＧＥＳ—１细胞经ＭＮＮＧ处理后（命名为ＭＣ），细胞形态及生长特性均发生了改变。随着传代的延续，细胞从上皮样变为梭形，呈典型的“岛样”克隆生长，获得在半固体琼脂中生长的能力。ＭＣ细胞染色体数目增多，而且有各种异常结构染色体出现。     

17β—雌二醇对人的类成骨细胞HOS TE85胞内游离钙,IP3及？…

目的 观察１７β－雌二醇（Ｅ２０）对成骨细胞内游离钙（「Ｃａ＾２＋」ｉ）１,４,５,－三磷酸肌醇（ＩＰ３）含量及钙调蛋白（ＣａＭ）含量的影响。方法 以Ｆｌｕｏ－３／ＡＭ为钙荧光指示剂,采用激光共聚焦显微系统测定细胞内钙荧光值的改变,以反映「Ｃａ＾２＋」ｉ含量的变化。用阳离子交换法测定ＩＰ３含量。以测定钙依赖的磷酸二酯酶活性方法测定ＣａＭ含量。     

17β-雌二醇对人的类成骨细胞HOS TE85胞内游离钙、IP3及钙调蛋白影响

目的观察１７β－雌二醇（Ｅ２）对成骨细胞胞内游离钙（［Ｃａ２＋］ｉ）、１,４,５－三磷酸肌醇（ＩＰ３）含量及钙调蛋白（ＣａＭ）含量的影响。方法以Ｆｌｕｏ－３／ＡＭ为钙荧光指示剂,采用激光共聚焦显微系统测定细胞内钙荧光值的改变,以反映［Ｃａ２＋］ｉ含量的变化。用阳离子交换法测定ＩＰ３含量。以测定钙依赖的磷酸二酯酶活性方法测定ＣａＭ含量。结果给予０．１、１．０ｎｍｏｌ／ＬＥ２后５０ｓ胞内钙荧光值分别增加４．７和６．１倍,持续８０～１６０ｓ;以１００ｎｍｏｌ／Ｌｔｈａｐｓｉｇａｒｇｉｎ预处理细胞,Ｅ２仅使胞内钙荧光值升高１．５倍。加入１．０ｎｍｏｌ／ＬＥ２,ＩＰ３含量在给药后２０～３０ｓ和６０～７０ｓ呈双峰升高。同样剂量的Ｅ２可使ＣａＭ含量增加８５．２％。他莫西芬不能阻断Ｅ２引起的胞内钙荧光值、ＩＰ３及ＣａＭ含量升高的作用,而磷脂酶Ｃ抑制剂使Ｅ２的作用部分或完全抑制。结论Ｅ２作用于胞膜引起胞外钙内流,并通过ＩＰ３导致［Ｃａ２＋］ｉ进一步增加,激活ＣａＭ从而调节细胞功能。     

胡麻油烟冷凝物致人胚肺二倍体细胞恶性转化的实验研究

目的研究胡麻油烟冷凝物致人胚胎二倍体细胞恶性转化作用.方法以人胚肺二倍体细胞株为靶细胞,建立体外转化系统,以胡麻油烟冷凝物作为受试物染毒人胚肺二倍体细胞,观察细胞转化情况,并对转化细胞进行生物学性状检测和鉴定.结果实验剂量范围内的胡麻油烟冷凝物（25～400μg/mL）能够诱导人胚肺二倍体细胞发生失去接触抑制性、饱和密度增大、血清需求降低,ConA凝集能力增强、锚着依赖性丧失等多种与肿瘤形成相关的表型改变,并且剂量-反应关系明显（r=0.972,P＜0.01）.结论胡麻油烟冷凝物具有诱导人胚肺二倍体细胞转化的作用.     

PM2.5长期暴露诱导人肺支气管上皮细胞恶性转化的研究

目的:研究PM2.5长期暴露诱导人肺支气管上皮细胞(16HBE细胞)恶性转化的能力.方法:使用100 μg· ml-1的PM2.5连续长期暴露16HBE细胞,并设立对照组.采用CCK-8法测定细胞增殖能力,EdU法检测细胞增殖活性,Transwell法评价细胞迁移与侵袭能力,集落形成实验检测细胞克隆形成能力.结果:CC...     

福尔奔胶囊对人成骨肉瘤细胞HOS TE85增殖及Ⅰ型胶原产生的影响

目的　通过体外培养的人成骨肉瘤细胞HOSTE85 ,观察福尔奔胶囊 (Fullbone)对成骨细胞增殖及Ⅰ型胶原产生的影响。方法　在体外培养的人成骨肉瘤细胞HOSTE85培养液中 ,加入Full bone (1～ 10 0 0 0 μg/L) ,分别培养 2 4、4 8、72、96h ,于结束培养前 6h ,加入3H -脱氧胸腺嘧啶检测细胞增殖 ;或于细胞开始培养时 ,加入3H -脯氨酸检测Ⅰ型胶原产生。结果　在 4 8、72h ,Fullbone明显抑制细胞增殖 ,量效关系显著 ;在 4 8、72、96h ,Fullbone明显刺激细胞Ⅰ型胶原产生 ,量效关系显著。结论　Fullbone对人成骨肉瘤细胞HOSTE85增殖具有抑制作用 ,对Ⅰ型胶原产生具有促进作用 ,这可能是其临床治疗更年期骨质疏松的作用机理。     

人骨髓间充质干细胞体外长期传代培养及恶性转化趋势实验研究

目的探讨人骨髓间充质干细胞体外长期传代培养、扩增及其生物学特性,观察其恶性转化趋势的可能性。方法采用密度梯度离心差速贴壁法对人骨髓来源的间充质干细胞进行分离纯化,并进行体外长期传代,观察细胞形态及生长方式;鉴定细胞分化能力;相关癌标志P53、Ki67的表达与成瘤性检测。结果经过长期体外培养的人间充质干细胞,至36代时,细胞逐渐老化;成骨分化诱导能力丧失;相关癌标志表达阴性;无成瘤性。结论人骨髓间充质干细胞在体外可以有限传代,无显著恶性转化趋势。     

Reversion effects of curcumin on multidrug resistance of MNNG/HOS human osteosarcoma cells in vitro and in vivo through regulation of P-glycoprotein

Background P-glycoprotein （P-gp） encoded by ATP-binding cassette sub-family B member 1 （ABCB1） gene is a kind of ATP-dependent drug transporter, which plays important roles in multidrug resistance （MDR） of human cancers, such as osteosarcoma. Curcumin is a natural phenolic coloring compound originating from the rhizomes of Curcuma Ionga, which is proved to possess antitumor biological activities including reversion of MDR. However, the effect and molecular mechanisms of curcumin to osteosarcoma MDR remain unclear.     

雷公藤红素诱导人骨肉瘤细胞系HOS凋亡及机制研究

目的探讨雷公藤红素对人骨肉瘤细胞HOS的杀伤作用及其机制。方法将人骨肉瘤细胞HOS用各种不同浓度的雷公藤红素治疗后,采用MTT法检测雷公藤红素对HOS细胞活力的抑制作用;采用流式细胞术检测HOS细胞凋亡及活性氧簇(ROS)的产生情况;Western blot检测HOS细胞cleaved caspase-9、cleaved caspase-3和磷酸化JNK的表达水平。结果雷公藤红素对HOS细胞活力的抑制效应呈剂量依赖性,1、2、3、4、5μmol/L的雷公藤红素组细胞活力抑制率分别为(23.6±3.5)%、(43.7±5.4)%、(57.8±6.9)%、(75.5±6.4)%、(83.7±7.3)%,各雷公藤组细胞活力抑制力与对照组的零抑制力比较,差异均有统计学意义(P均0.05);雷公藤红素可显著诱导HOS细胞发生凋亡,与对照组凋亡率(2.3±0.5)%比较,1、3μmol/L雷公藤红素组凋亡率分别为(17.2±2.2)%(P0.05)、(39.5±3.6)%(P0.05)。雷公藤红素可显著诱导HOS细胞ROS的产生,与对照组ROS阳性率(1.3±0.4)%比较,1、3μmol/L雷公藤红素组ROS阳性率分别为(13.6±1.5)%(P0.05)、(29.4±3.3)%(P0.05)。雷公藤红素处理后HOS细胞cleaved caspase-9、cleaved caspase-3和磷酸化JNK的表达水平均显著上升。结论雷公藤红素或通过ROS/JNK途径诱导人骨肉瘤细胞发生caspase依赖的凋亡。     

佛波酯对人卵巢癌细胞株SKOV3细胞体外生长的影响

[目的]探讨佛波酯（TPA）对体外培养的人卵巢癌细胞株SKOV3细胞增殖、形态、细胞周期的影响.[方法]试验设试剂对照组、肿瘤细胞阴性对照组及5种不同浓度的促癌剂实验组.用四甲基偶氮唑蓝（MTT）快速比色法分析TPA不同浓度及不同时间对人卵巢癌细胞株SKOV3生长的作用;光镜下观测细胞形态学的改变;透射电镜观察细胞超微结构的变化;流式细胞仪检测细胞的凋亡及细胞周期的变化率.[结果]TPA具有抑制人卵巢癌细胞株SKOV3细胞增殖的作用,呈剂量和时间依赖性.细胞周期发生G1→S期阻滞.[结论]TPA能抑制SKOV3细胞增殖,显著地抑制卵巢癌细胞SKOV3的体外生长.     

从TE 671细胞株提取人乙酰胆碱受体

目的 ]分离提取具有活性的人乙酰胆碱受体 .[方法 ]用摇动培养瓶大量培养表达人乙酰胆碱受体的TE 671细胞株 ,细胞经裂解制备人乙酰胆碱受体提取液 .应用放射免疫测定法检测提取的人乙酰胆碱受体与抗人乙酰胆碱受体抗体的结合活性 .[结果 ]提取的人乙酰胆碱受体能与抗人乙酰胆碱受体抗体结合 ,且结合活性很高 ,含量为 1 8× 10 10 个乙酰胆碱受体分子 / 10 0 μL提取液 .[结论 ]从TE 671细胞株提取的人乙酰胆碱受体具有与相应抗体结合的功能 ,可以作为抗原应用于重症肌无力的研究     

白细胞介素1β与地塞米松联合应用对人成骨细胞芳香化酶活性影响

目的探讨白细胞介素1β(IL-1 β)与地塞米松联合应用对人成骨细胞(Human Osteoblast-likecells HOS)芳香化酶活性的影响.方法对人的成骨细胞进行培养,设立实验组,分别加入IL-1β 1ng/mL(实验Ⅰ组)、10 ng/mL(实验Ⅱ组)、50 ng/mL(实验Ⅲ组);分别加地塞米松浓度0.1 uM(实验Ⅳ组)、1.0 uM(实验Ⅴ组)、10.0 uM(实验Ⅵ组);地塞米松浓度0.1 uM和IL-1β 1ng/mL(实验Ⅶ组);IL-1 β10 ng/mL和IL-1ra 500 ng/mL(实验Ⅷ组),对照组加培养液,采用氚水法检测芳香化酶活性.结果实验组Ⅰ,Ⅱ,Ⅲ组氚水放射强度与对照组比较放射强度明显增加,差异显著(P＜0 05).实验Ⅳ,Ⅴ,Ⅵ组放射强度与对照组比较有非常显著性差异(P＜0.001).实验Ⅶ组与对照组间差异无统计学意义.实验Ⅷ组放射强度高于对照组及实验组Ⅰ和Ⅳ,差异非常显著(P＜0.001).结论人成骨细胞中IL-1 β、地塞米松分别可以增加芳香化酶的活性.IL-1β是通过与成骨细胞的IL-1受体相结合而起作用.地塞米松和IL-1β联合应用使芳香化酶活性增加,它们相互作用影响着骨骼中雌激素合成.     

鬼臼毒素衍生物ZM对人骨肉瘤细胞HOS增殖及PCNA基因表达的影响

【目的】研究鬼臼毒素衍生物ZM对HOS细胞增殖及PCNA表达影响。【方法】培养HOS细胞,实验随机分为正常对照组、鬼臼毒素衍生物ZM组和阳性对照组。用MTT法检测鬼臼毒素衍生物ZM对HOS细胞的生长抑制作用,DNA Ladder凝胶电泳法分析鬼臼毒素衍生物ZM的诱导凋亡作用,RT-PCR检测PCNA基因的表达。【结果】与正常对照组相比,鬼臼毒素衍生物ZM能明显抑制HOS细胞的生长,且与浓度、时间呈依赖性,其IC50(48 h)为(1.32±0.3)μmol/L;鬼臼毒素衍生物ZM处理HOS细胞后,DNA凝胶电泳结果显示呈明显的梯状条带,RT-PCR结果显示PCNA表达显著下调。【结论】鬼臼毒素衍生物ZM对人骨肉瘤细胞HOS有明显的生长抑制作用,该作用可能与诱导凋亡和PCNA基因的表达下调有关。     

利福平对人SaoS-2成骨样细胞增殖和代谢的影响

目的 研究利福平对人SaoS-2 成骨样细胞增殖及乳酸(LD)、乳酸脱氢酶(LDH)和DNA 合成的影响.方法 对人SaoS-2 成骨样细胞株常规培养,分别加入不同浓度(50、250、500、750、1 000μg / ml)的利福平,然后用四唑盐(MTT)法测定24、48h 细胞增殖率,试剂盒比色法测定24h 细胞外液的LD 和LDH 含量,ELISA 法测定细胞5- 溴脱氧尿嘧啶核苷(BrdU)含量.结果 不同浓度利福平均可抑制细胞增殖,且呈剂量±赖性;并使细胞外液LD 和LDH 含量增加,细胞DNA 合成量降低.结论 高浓度利福平可以明显抑制细胞的增殖和DNA 合成并影响细胞的代谢能力,用于骨与关节结核治疗的局部用药时应注意控制药物浓度.     

人骨肉瘤细胞HOS锎-252中子放射敏感性的研究

目的观察锎-252中子治疗骨肉瘤的效果.方法人骨肉瘤细胞HOS用铱-192γ射线和锎-252中子射线分别以不同的剂量照射,MTr法绘出细胞存活曲线,经典的克隆形成分析测算D0、Dq和SF2值,彗星分析法检测照射后细胞的DNA损伤情况.结果MTT法、克隆形成分析和彗星分析法3种方法的实验结果均表明HOS细胞对锎-252中子射线更为敏感.由克隆形成分析得到锎-252中子射线和铱-192γ射线照射HOS细胞的D0值分别是2.80和3.34,Dq值分别是2.66和3.07,SF2值分别是0.596和0.684.锎-252中子射线和铱-192γ射线以200、500、1 000 cGy 3个剂量照射HOS细胞后,碱性彗星尾力矩分别是(6.664±0.648)、(20.322±1.433)、(33.909±1.245)和(4.760±O.528)、(15.203±1.272)、(27.375±1.315)(P＜0.05).结论锎-252中子对HOS细胞的杀伤效果优于铱-192γ射线,说明锎-252中子放射治疗骨肉瘤可能是一种具有发展潜力的放射治疗方法.