用于胚胎干细胞培养的饲养层细胞

胚胎干细胞体外培养条件要求非常严格,在体外极易分化、死亡,保持其未分化状态生长是充分利用胚胎干细胞资源的前提。目前,要保持其未分化状态生长,必须在培养基中加入分化抑制因子-白血病抑制因子或将其培养在能分泌分化抑制因子且无增殖能力的饲养层细胞上,其中饲养层细胞已常规用于各种胚胎干细胞培养过程。     

枸杞多糖对精原干细胞体外增殖的影响

背景:精原干细胞移植对不育具有潜在的临床应用价值,体外建立精原干细胞的培养系统获得数量较多的精原干细胞,仍是目前研究中亟待解决的问题。目的:观察枸杞多糖对精原干细胞体外增殖的影响。方法:采用两步酶消化法获取出生4～6d雄性C57BL/6小鼠睾丸Sertoli细胞与精原干细胞,将精原干细胞接种在Sertoli细胞饲养层上,再加入枸杞多糖或联合细胞因子添加到细胞培养液中。1周后以流式细胞仪检测细胞周期及细胞活性率,并检测各组精原干细胞GFRa-1、Thy-1、c-kit的阳性率。结果与结论:单独加入枸杞多糖后精原干细胞数量明显增加,增殖明显,联合加入胶质细胞源性神经营养因子与白血病抑制因子精原干细胞增殖更加明显(P<0.05)。并发现体外培养1周后的精原干细胞仍保持其睾丸组织内的精原干细胞特征,大多仍维持在未分化状态。表明在枸杞多糖或枸杞多糖联合胶质细胞源性神经营养因子及白血病抑制因子作用下,可促进精原干细胞体外增殖。     

枸杞多糖对精原干细胞体外增殖的影响

背景：精原干细胞移植对不育具有潜在的临床应用价值,体外建立精原干细胞的培养系统获得数量较多的精原干细胞,仍是目前研究中亟待解决的问题。目的：观察枸杞多糖对精原干细胞体外增殖的影响。方法：采用两步酶消化法获取出生4～6d雄性C57BL/6小鼠睾丸Sertoli细胞与精原干细胞,将精原干细胞接种在Sertoli细胞饲养层上,再加入枸杞多糖或联合细胞因子添加到细胞培养液中。1周后以流式细胞仪检测细胞周期及细胞活性率,并检测各组精原干细胞GFRa-1、Thy-1、c-kit的阳性率。结果与结论：单独加入枸杞多糖后精原干细胞数量明显增加,增殖明显,联合加入胶质细胞源性神经营养因子与白血病抑制因子精原干细胞增殖更加明显（P〈0.05）。并发现体外培养1周后的精原干细胞仍保持其睾丸组织内的精原干细胞特征,大多仍维持在未分化状态。表明在枸杞多糖或枸杞多糖联合胶质细胞源性神经营养因子及白血病抑制因子作用下,可促进精原干细胞体外增殖。     

微电流脉冲体外诱导神经干细胞增殖分化的研究

目的探讨微电流脉冲对神经干细胞体外增殖分化的诱导作用。方法采用联合培养和微电流脉冲技术改变神经干细胞生长的微环境,通过免疫细胞化学技术及电子显微镜技术观察神经干细胞增殖分化情况。结果骨骼肌成肌细胞及微电流脉冲均可诱导神经干细胞分化(细胞ChAT阳性率分别为5.90%和6.48%),与神经干细胞自然分化组相比差异显著(细胞ChAT阳性率为4.03%)。结论微电流脉冲对神经干细胞的体外增殖分化具有一定的诱导作用。     

体外大鼠肝卵圆细胞的长期培养方法

背景：肝卵圆细胞是目前公认的成体肝干/祖细胞,但其体外长期培养时会不可避免地丢失干细胞的活性。目的：探索大鼠肝卵圆细胞体外长期培养的方法。方法：构建2-乙酰胺基芴/部分肝切除肝再生大鼠模型,通过酶消化和Percoll梯度离心分离纯化大鼠异质卵圆细胞并进行免疫染色鉴定,用含表皮生长因子、白血病抑制因子的培养基体外长期培养,后撤去表皮生长因子、白血病抑制因子,通过形态学的观察和分子标志物的检测判断其能否保持干/祖细胞活性。结果与结论：采用含表皮生长因子、白血病抑制因子的培养基体外培养卵圆细胞4个月后,大鼠异质卵圆细胞仍能表达肝细胞标志物ALB、胆管上皮细胞标志物CK-19,经不含表皮生长因子、白血病抑制因子的培养液继续培养后,卵圆细胞胎肝标志AFP表达量迅速下降。该研究结果表明大鼠肝卵圆细胞在表皮生长因子、白血病抑制因子等培养条件下可长期增殖并保持干细胞活性。     

不同配方的神经营养因子对神经干细胞存活和增殖能力的影响

目的:探讨由营养因子碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)、表皮生长因子(EGF)及N2添加剂所组成的配方中最适合神经干细胞存活和增殖的组合。方法:分离培养大鼠脑神经干细胞,免疫荧光细胞染色加以鉴定,采用不同组合配方的培养液培养细胞,通过计数神经干细胞球数,判定其对神经干细胞存活和增殖的影响。结果:在bFGF,EGF和N2组成的8种不同配方培养液中,bFGF组是神经干细胞存活和增殖的最适配方,是8周中与对照组比较所有P<0.05的惟一配方;EGF具有促进神经干细胞分化的作用,而促增殖能力不如bFGF;相比之下,N2对神经干细胞增殖的影响最弱。结论:bFGF对神经干细胞增殖及较长期存活具有重要的作用,其作用较EGF和N2强,EGF还具有促神经干细胞分化的作用。     

新生小鼠海马神经干细胞体外培养条件下的增殖与分化

背景：神经干细胞移植可用于中枢神经损伤的临床治疗。目的：观察新生小鼠海马神经干细胞在体外培养条件下的增殖和分化。方法：从新生昆明小鼠海马取材,采用机械分离法对原代细胞进行无血清培养,采用机械法复合酶消化法对原代细胞进行传代,以体积分数为10%胎牛血清诱导分化。免疫荧光行巢蛋白、β-微管蛋白Ⅲ和胶质纤维酸性蛋白染色,对培养的细胞进行鉴定。CCK-8法检测神经干细胞增殖能力。结果与结论：从新生小鼠海马分离得到的细胞具有连续传代形成克隆球的能力,克隆球呈巢蛋白免疫反应阳性;加入胎牛血清可诱导分化为β-微管蛋白Ⅲ和胶质纤维酸性蛋白阳性细胞。提示实验成功建立了体外培养新生小鼠海马组织分离和培养神经干细胞的方法,培养的神经干细胞在体外培养条件下保持着自我增殖和分化的潜能。     

新生小鼠海马神经干细胞体外培养条件下的增殖与分化

背景:神经干细胞移植可用于中枢神经损伤的临床治疗。目的:观察新生小鼠海马神经干细胞在体外培养条件下的增殖和分化。方法:从新生昆明小鼠海马取材,采用机械分离法对原代细胞进行无血清培养,采用机械法复合酶消化法对原代细胞进行传代,以体积分数为10%胎牛血清诱导分化。免疫荧光行巢蛋白、β-微管蛋白Ⅲ和胶质纤维酸性蛋白染色,对培养的细胞进行鉴定。CCK-8法检测神经干细胞增殖能力。结果与结论:从新生小鼠海马分离得到的细胞具有连续传代形成克隆球的能力,克隆球呈巢蛋白免疫反应阳性;加入胎牛血清可诱导分化为β-微管蛋白Ⅲ和胶质纤维酸性蛋白阳性细胞。提示实验成功建立了体外培养新生小鼠海马组织分离和培养神经干细胞的方法,培养的神经干细胞在体外培养条件下保持着自我增殖和分化的潜能。     

白血病干细胞研究的临床应用

急性白血病是以白血病细胞无限制增殖为其特征。白血病祖细胞(leukemic blast pro-genitors)在体外形成白血病集落,再次培养时形成二次性集落,前者表示白血病祖细胞的分化增殖能力,后者反映自我更新能力(白血病祖细胞具有干细胞的上述二个特征,故下     

不同配方的神经营养因子对神经干细胞存活和增殖能力的影响

目的：探讨由营养因子碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)、表皮生长因子(EGF)及N2添加剂所组成的配方中最适合神经干细胞存活和增殖的组合。方法：分离培养大鼠脑神经干细胞，免疫荧光细胞染色加以鉴定，采用不同组合配方的培养液培养细胞，通过计数神经干细胞球数，判定其对神经干细胞存活和增殖的影响。结果：在bFGF，EGF和N2组成的8种不同配方培养液中，bFGF组是神经干细胞存活和增殖的最适配方，是8周中与对照组比较所有P&;lt;0.05的惟一配方；EGF具有促进神经干细胞分化的作用，而促增殖能力不如bFGF；相比之下，N2对神经干细胞增殖的影响最弱。结论：bFGF对神经干细胞增殖及较长期存活具有重要的作用，其作用较EGF和N2强，EGF还具有促神经干细胞分化的作用。     

疗养护理病历存在的缺陷分析及防预对策

目的调查疗养护理病历存在的缺陷,探求提高护理疗案质量的改进措施。方法对2002年10月至2004年10月的护理病历检查结果进行归纳分析。结果医嘱记录单存在的质量缺陷146次,一般护理记录单存在的质量缺陷142次,体温单存在的质量缺陷68次。结论注重护士的在职培训、实施有效的监督管理是护理疗案质量的保障。