铁螯合剂诱导白血病细胞凋亡中caspase-3的变化

目的探讨铁螯合剂去铁胺（DFO）对诱导白血病细胞HL-60的分子机制。方法 2003年712月用钙黄绿素（calcein）检测HL-60细胞LIP。台盼蓝活细胞拒染实验进行活细胞计数及细胞存活率测定;光镜形态学观察及流式细胞仪（FCM）等方法检测HL-60细胞凋亡;比色法检测caspase-3（基于pNA标记底物的比色法）活性。结果①不同浓度的DFO作用于HL-60细胞后,随培养时间延长及DFO浓度的增加,动态铁池降低,细胞生存率逐渐下降,凋亡率增加,显示一定的时间剂量依赖性。②HL-60细胞在不同浓度的DFO作用下,caspase-3的活性逐渐升高。50、100μmol/LDFO作用于HL-60细胞24h,caspase-3酶活性升高明显,与对照组相比,有统计学意义（P〈0.001）;相关分析结果显示,HL-60细胞LIP的改变与caspase-3活性变化呈负相关系（r=-0.887,P〈0.05）。结论 DFO诱导白血病细胞凋亡的作用可能与螯合细胞内铁,降低细胞LIP,激活caspase-3,最终实施细胞凋亡密切相关。     

丙戊酸诱导白血病HL-60细胞凋亡及其对h-tert基因表达的影响

为了探讨丙戊酸（valproic acid,VPA）对白血病HL-60细胞诱导凋亡的作用及其可能的机制,采用细胞毒性试验（CCK-8法）观察不同浓度VPA在不同作用时间对HL-60细胞增殖的影响,采用荧光显微镜检及流式细胞术检测细胞凋亡,并观察VPA作用后HL-60细胞端粒酶亚单位h-tert基因、凋亡相关蛋白表达和caspase-3活性的变化。结果表明：VPA呈剂量依赖性抑制HL-60细胞增殖（r=-0.87）.,诱导细胞凋亡;同时,抗凋亡蛋白BCL-2表达明显下降,促凋亡蛋白BAX表达上调,caspase-3活性增强,h-tert mRNA表达逐渐下降,HL-60细胞的凋亡率与h-tert mRNA表达呈负相关。结论：VPA可抑制白血病HL-60细胞增殖,诱导细胞凋亡;VPA可能通过下调h-tert mRNA、BCL-2蛋白表达,上调BAX表达及增强caspase-3活性而发挥抗白血病作用。     

细胞色素C对HL-60细胞凋亡作用及其与相关bcl-2、bax基因的关系

为了探讨细胞色素C在体外作用于HL-60细胞时细胞发生的变化及其相关凋亡基因的bcl-2、bax表达变化的机制，用不同浓度的细胞色素C作用于HL-60细胞24小时，然后分别用肌检测细胞色素C对HL-60细胞的抑制率；应用光学显微镜、荧光显微镜观察HL-60细胞形态的变化；用流式细胞术检测细胞凋亡率和细胞周期的变化；用DNA凝胶电泳检测HL-60细胞的凋亡；用RT—PCR检测bcl-2、bax基因的表达的变化。结果表明：在细胞色素C浓度为0—150mg／L时，细胞抑制率随着浓度的增加而增加；当细胞色素C浓度在0—37．5mg／L时，细胞凋亡率逐渐增加，可见典型的凋亡细胞和明显DNA梯形条带，同时，在该浓度范围内bcl-2表达逐渐减少，而bax表达逐渐增加；当细胞色素C浓度大于37．5mg／L时，细胞凋亡率增加不明显，但细胞出现坏死。结论：细胞色素C能诱导HL-60细胞发生凋亡，细胞色素C对细胞周期的作用是将细胞阻滞于G1期，并且细胞凋亡率、bcl-2、bax基因的表达的变化与细胞色素C浓度呈一定的量效依赖关系，细胞色素C诱导HL-60凋亡可能与bax的激活和bcl-2的抑制有关。     

黄芩苷诱导HL-60细胞凋亡的分子机制研究

本研究旨在探讨黄芩苷对急性髓系白血病HL-60细胞增殖及凋亡的影响及其作用机制。CCK-8法检测黄芩苷对HL-60细胞增殖抑制情况;普通光学显微镜和Hoechst 33342染色后荧光显微镜下观察细胞形态学变化;流式细胞术检测细胞凋亡率;RT-PCR方法检测凋亡相关基因caspase-3、caspase-9、Bcl-2、Bax mRNA表达;Westernblot检测Bcl-2、Bax、caspase-8及caspase-3剪切片段的蛋白表达。结果表明,黄芩苷对HL-60细胞具有明显的增殖抑制作用,呈浓度和时间依赖性;在光学显微镜和荧光显微镜下细胞均呈凋亡的形态学改变;AnnexinⅤ/PI法检测到细胞早期凋亡;caspase-3、caspase-9、Bax基因mRNA表达水平呈上升趋势,Bcl-2 mRNA表达水平呈下降趋势,Bax、caspase-8及capsase-3剪切片段蛋白表达上调,同时Bcl-2蛋白表达下调,Bcl-2/Bax比值降低。结论:黄芩苷显著抑制HL-60细胞增殖并诱导其凋亡,其机制可能与降低Bcl-2/Bax比值,激活线粒体凋亡途径及死亡受体途径有关。     

人参总皂甙对HL-60细胞凋亡相关基因bax、bcl-xl表达的影响

本研究探讨人参总皂甙对凋亡相关基因表达的影响及其诱导HL-60细胞凋亡的作用机制。用人参总皂甙0、100、200、400、800及1600μg／ml作用于HL-60细胞48小时。用荧光显微镜检测HL-60细胞形态的变化，流式细胞仪、DNA凝胶电泳检测HL-60细胞凋亡，RT—PCR检测bax、bcl—xl基因表达的变化。结果表明：人参总皂甙浓度在100—400μg／ml时，HL-60细胞凋亡逐渐增加，可见典型的凋亡细胞形态和明显的DNA梯度。在该浓度范围内，bax表达逐渐增加、而bcl—xl表达逐渐减少；当人参总皂甙浓度大于400μg／ml时，出现细胞坏死．细胞凋亡下降．结论：一定浓度的人参总皂甙能诱导HL-60细胞发生凋亡，且细胞凋亡率与人参总皂甙浓度呈一定的量效依赖关系，bax、bcl—xl基因的表达变化在人参总皂甙诱导HL-60细胞凋亡可能起重要作用。     

重组人粒细胞集落刺激因子对阿糖胞苷诱导HL-60细胞凋亡的影响

为了研究重组人粒细胞集落刺激因子（rhG-CSF）对阿糖胞苷（Ara-C）诱导HL-60细胞凋亡的影响,体外培养HL-60细胞,加入rhG-CSF和（或）Ara-C,瑞氏染色观察细胞形态变化,吖啶橙/溴化乙锭双染色观察细胞凋亡情况,MTT实验检测细胞增殖活性.结果表明：加入rhG-CSF后Ara-C诱导的HL-60细胞的凋亡率升高（P＜0.01）,而MTT实验的OD值降低（P＜0.01）.结论：rhG-CSF有诱导HL-60细胞凋亡的作用,rhG-CSF可以促进Ara-c诱导HL-60细胞凋亡的作用.     

VPA增强ORI诱导HL-60细胞凋亡及机制研究

目的：探讨VPA与冬凌草甲素（oridonin,ORI）联合诱导HL-60细凋亡的作用及其机制。方法：CCK-8法选取ORI和VPA最佳协同作用剂量;VPA和ORI单独或联合作用于HL-60细胞后,Hoechst33342染色后荧光显微镜下观察细胞核形态学变化;Western blot检测凋亡相关基因caspase-3剪切片段的蛋白表达;预先加入或不加入caspase抑制剂处理HL-60细胞,采用Annexin V／PI流式试剂盒检测两药联合后细胞凋亡的变化。结果：Hoechst33342染色后荧光显微镜下,ORI＋VPA组比单独用药纽核碎裂数目明显增多;ORI和VPA单独作用组caspase-3活性片段表达较对照组高但均不如ORI＋VPA组明显;ORI＋VPA组细胞凋亡率（16．7±2．0）％。与对照组（1．2±1．5）％相比,具有显著差异（P〈0．05）;预先加入caspase抑制剂组细胞几乎没有凋亡,与对照组相比,不具有显著差异（P〉0．05）。结论：VPA确实能增强冬凌草甲素诱导HL-60细胞凋亡,且凋亡机制与caspase凋亡通路密切相关。     

TNF相关凋亡诱导配体联合阿糖胞苷诱导HL-60细胞凋亡及其机制的研究

本研究探讨人重组可溶性肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体（hrsTRAIL）单用或联合阿糖胞苷（Ara—C）诱导HL-60细胞凋亡作用及其机制。在体外以人类急性白血病细胞株HL-60为研究对象，分5组进行细胞培养：对照组、Ara—C组、rsTRAIL组、同时给药组（Ara—C＋rsTRAIL）、先后给药组（Ara—C→rsTRAIL）。采用MTT比色法测定细胞生长抑制率；应用Annexin V／PI染色和流式细胞术检测细胞凋亡率；使用流式细胞术检测不同浓度的Ara—C对细胞表面DR5表达水平的影响及rsTRAIL单药组、先后给药组细胞表面DR5表达水平和细胞内caspase-8活性。结果表明：rsTRAIL能抑制HL-60细胞生长并诱导HL-60细胞凋亡。先后给药组诱导HL-60细胞凋亡率大于同时给药组。先后给药组细胞表面DR5表达水平和细胞内caspase-8的活性高于rsTRAIL组。5mg／L、10mg／LAra—C作用于HL-60细胞24小时，其细胞表面DR5表达水平升高，大于对照组。结论：rsTRAIL抑制HL-60细胞生长．诱导HL-60细胞凋亡。Ara—C上调HL-60细胞表面DR5表达水平。增强rsTRAIL诱导HL-60细胞凋亡的作用。Ara—C和rsTRAIL联合用药时，在先加Ara—C、再加rsTRAIL组诱导HL-60细胞凋亡的效果比同时给药组效果好，其机制可能与Ara—C上调细胞表面DIL5表达水平和（或）增强细胞内caspase-8的活性有关。     

黄芩苷对耐阿霉素白血病细胞株HL-60／ADR增殖、凋亡的影响

本研究探讨中药黄芩苷对耐阿霉素人髓系白血病细胞株HL-60／ADR增殖、凋亡的影响。应用MTT法绘制细胞生长曲线,观察黄芩苷对HL-60／ADR细胞增殖的影响;应用Annexin V FITC／PI双染流式细胞术、DNA片段化、TdT酶介导的原位缺口末端标记（TUNEL）法检测细胞凋亡;RT—PCR检测黄芩苷作用不同时段后c-myc、bcl-2等凋亡相关基因mRNA的表达水平;Western blot法检测凋亡及信号通路相关蛋白C—MYC、BCL-2、pro—caspase-3、PARP、BAD等的表达变化。结果表明,黄芩苷能明显抑制HL-60／ADR细胞增殖所测得的细胞倍增时间为48小时,半数抑制率为28μmol;Annexin V FITC／PI法检测到早期凋亡细胞、DNA片段化,TUNEL法检测到晚期凋亡细胞,细胞凋亡率呈浓度依赖性（20、40、80μmol／L）。黄芩苷作用HL-60／ADR细胞不同时段（12、24、48小时）后C-myc、bcl-2基因mRNA的表达,并随着作用时间的延长而逐渐减弱,C—MYC、BCL-2、procaspase-3、PARP（116kD）蛋白的表达逐渐下降,PARP（85kD）及BAD蛋白表达逐渐增强,呈时间依赖性。结论：黄芩苷能有效抑制HL-60／ADR细胞增殖,诱导其凋亡,上述凋亡相关基因及信号通路相关蛋白可能参与了黄芩苷抑制HL-60／ADR细胞增殖和诱导凋亡的过程：     

氨肽酶抑制剂Bestatin通过激活半胱天冬酶3诱导HL-60细胞凋亡

目的 研究半胱天冬酶3在国产氨肽酶N抑制剂Bestatin(商品名百士欣,BS）诱导人白血病细胞凋亡过程中的变化及其意义。方法 用光学显微镜观察细胞形态结构的改变,通过DNA片段原位末端标记法及流式细胞术（FCM）检测细胞凋亡。用发色底物法检测细胞半胱天冬酶3活性。Rhodamin(Rh)123染色后,采用FCM检测细胞线粒体跨膜电位。结果 典型的细胞形态改变、DNA片段化、DNA末端原位标记及FCM结果,均证实BS能诱导HL－60细胞凋亡。凋亡率与药物剂量和作用时间呈依赖关系。BS诱导细胞凋亡过程中,半胱天冬酶3活性明显升高,而AC0DEVD－CHO能抑制BS诱导的细胞凋亡。经BS处理的HL－60细胞出现线粒体跨膜电位（ΔΨm)下降。结论 BS通过激活半胱天冬酶3而诱导白血病细胞凋亡。     

In vitro study of the apoptosis effect of DNR on HL-60 cells and its relationship with ROS, CER and NF-kappaB]

OBJECTIVE: To study the effect of DNR on HL-60 cells apoptosis in vitro and the related mechanism. METHODS: The apoptosis of HL-60 was observed by microscope, flow cytometry (FCM) and DNA electrophoresis and various apoptosis-associated proteins expression by immunocytochemistry (IC) and FCM assays; the changes of apoptosis in HL-60 cells treated with DNR or suppressors PDTC or FB1 were also observed. RESULTS: When treated with 0.2 approximately 2.0 micro mol/L DNR, the percentage of apoptotic HL-60 cells increased with the dose increasing and the time extending, and the typical apoptotic cells and the appearance of apoptotic DNA ladder were observed. It was shown that after treatment with 1 micro mol/L DNR, the fluorescence intensity index (FI) of both bcl-2 and c-myc in HL-60 cells decreased, the FI of Bax, caspase-3 increased at 2 h, but decreased at 5 h, the FI of NF-kappaB increased. After adding PDTC, the apoptosis percentage of HL-60 cells decreased, but FB1 didn't present these effect. CONCLUSION: It suggested from the results that at certain concentration, DNR can induce the apoptosis of HL-60 cells in vitro. The mechanism was supposed by suppressing the expression of bcl-2 and c-myc and activating the expression of Bax and caspase-3, NF-kappaB and ROS had the marked correlation with the apoptosis process, but the ceramide synthase wasn't associated with it.     

尼莫地平对阿糖胞苷诱导HL-60细胞凋亡机制影响的研究

为了研究尼莫地平对阿糖胞苷诱导HL-60细胞凋亡机制的影响，采用琼脂糖凝胶电泳检测其DNA凋亡带，用细胞免疫组织化学方法检测细胞凋亡相关基因bcl-2、bax的蛋白表达。结果表明，实验组自培养8小时起琼脂糖凝胶电泳显示典型的DNA梯形凋亡带。Bcl-2蛋白表达在各实验组随培养时间延长逐渐下降，而Bax蛋白的表达则逐渐增加，Bcl-2／Bax比值逐渐下降，8小时就与对照组出现差异（P〈0.05）。结论：尼莫地平及阿糖胞苷均能促进HL-60细胞凋亡，诱导其凋亡的机制与下调bcl-2及上调bax基因的蛋白表达有关。尼莫地平能加强阿糖胞苷促进HL-60细胞凋亡，其机制与协同下调bcl-2的表达有关。     

蛋白酶体抑制剂MG132诱导髓系白血病细胞HL-60细胞凋亡机制的研究

本研究探讨蛋白酶体抑制剂MG132诱导HL-60细胞的凋亡、凋亡途径及其对混合淋巴细胞反应的作用。流式细胞术检测MG132诱导HL-60细胞凋亡、阻断caspase-8和caspase-9通路、MG132诱导HL-60细胞凋亡的变化;Western blot检测MG132作用于HL-60细胞后P21、P27和P53蛋白的表达;应用75 Gy照射经MG132作用的HL-60细胞,然后用CCK-8检测HL-60细胞对健康人单个核细胞的增殖作用。结果表明:大剂量MG132可诱导HL-60细胞凋亡;阻断caspase-8和caspase-9通路后MG132诱导HL-60细胞的凋亡无明显变化,P21蛋白、P27蛋白在MG132作用于HL-60细胞后表达升高,小剂量MG132诱导的HL-60细胞对健康人单个核细胞有增殖作用。结论:大剂量MG132诱导HL-60细胞凋亡,对HL-60细胞有直接杀灭作用,MG132诱导的HL-60细胞凋亡不通过caqspase-8和caspase-9途径,P21和P27蛋白可能参与了MG132诱导的HL-60细胞凋亡,小剂量MG132促进健康人单个核细胞的增殖作用,提高机体的免疫性。     

手霉素通过线粒体凋亡途径诱导U937和HL-60细胞凋亡

目的 研究法尼酰基转移酶抑制剂手霉素（Manumycin）诱导白血病细胞凋亡的机制。方法 用2μmol／L手霉素处理白血病细胞系U937和HL-60细胞不同时间，用流式细胞术检测细胞凋亡。免疫印迹技术检测细胞色素C、caspase9、caspase8、caspase3的表达。用荧光染料JC-1检测法测定线粒体膜电位（Δψm），并用caspase抑制剂Z—VAD—fmk阻断caspase的活化，探讨caspase在手霉素诱导白血病细胞凋亡中的作用。结果 2μmol／L手霉素处理U937和HL-60细胞16h，Δψm显著下降，相对值分别是0．51±0．07和0．41±0．06（P〈0．01）。手霉素诱导细胞色素C从线粒体释放到细胞质，激活caspase-9、caspase8和caspase-3。50μmol／L的Z—VAD—fmk可完全阻断caspase激活，但仅部分阻断手霉素诱导的U937和HL-60细胞凋亡，细胞凋亡率分别减少51．69％和56．47％。结论 手霉素通过线粒体途径诱导U937和HL-60细胞凋亡。     

维生素K2对骨髓增生异常综合征细胞株MDS-JSN04生长抑制作用及其机理研究

为了探讨维生素K2（VK2）对骨髓增生异常综合征细胞株MDS-JSN04生长的抑制作用及其作用机制,采用细胞形态学方法观察VK2处理后细胞形态的改变;应用四甲基偶氮唑蓝（MTT）比色法检测VK2对细胞生长的抑制作用;流式细胞术分析细胞凋亡、细胞周期变化和髓系分化抗原CD11b、CD13的表达情况;RT-PCR技术检测抗凋亡基因bcl-2、survivin和促凋亡基因bax的表达;用发光比色法检测caspase-3活性.结果表明：VK2作用细胞株72小时后,细胞呈现典型的凋亡细胞的形态特征;细胞的凋亡率随着VK2浓度的增加和作用时间的延长而逐渐增高,经统计学处理与对照组比较有显著性差异（P＜0.01）;S期和G2期细胞随着药物浓度的增加而逐渐减少,G0/G1期细胞逐渐增多,与对照组比较有显著性差异（P＜0.01）,细胞被阻滞在G0/G1期,而且在G0/G1期前出现明显的亚G1期细胞即凋亡峰;抗凋亡基因bcl-2、survivin表达随着VK2浓度的增高而明显下调（（P＜0.05）,而促凋亡基因bax表达无明显变化（（P＞0.05）,caspase-3的活性随着VK2浓度的增加和作用时间的延长而逐渐增强.结论：VK2主要是通过激活caspase-3途径诱导MDS-JSN04细胞发生凋亡,同时抗凋亡基因bcl-2和survivin也参与了凋亡调控过程.     

阿霉素对K562细胞Gfi-1表达的影响及其与相关凋亡基因关系的研究

本研究探讨阿霉素体外作用于K562细胞的细胞效应及癌基因Gfi-1和相关凋亡基因表达变化的机制。用不同浓度的阿霉素作用于K562细胞24小时,然后应用DNA电泳和流式细胞术检测K562细胞凋亡;用RT-PCR、流式细胞术检测Gfi-1、Bcl-2、bax基因和蛋白表达的变化。结果表明：当阿霉素浓度在0、0.5、2.0mg/L作用K562细胞24小时,细胞凋亡增加,可见典型的DNA断裂电泳条带;同时,当ADM浓度自0.5增为2.0mg/L时,Gfi-1表达减少,bax表达增加;Bcl-2表达在ADM0.5-2.0mg/L之间变化不明显,mRNA及蛋白水平均无统计学差异;当阿霉素浓度大于2.0mg/L时,细胞凋亡率并不增加,而是下降,且出现细胞坏死。结论：一定浓度阿霉素能诱导K562细胞凋亡,细胞凋亡率表达的变化与阿霉素浓度呈一定的量效依赖关系,阿霉素诱导K562细胞凋亡可能与抑制Gfi-1基因的表达和激活bax基因的表达有一定的关系。