ERK与TrkB在大鼠星形胶质细胞的表达(英文)

本文探讨了ERK(extracellular signal-regulated kinase)和TrkB(tyrosine kinase receptor B)在星形胶质细胞的表达。生后2~3d的SD大鼠在无菌条件下取脑,以胰蛋白酶消化制备细胞悬液。用GFAP免疫细胞化学方法鉴定星形细胞,通过免疫细胞化学与蛋白印迹方法检测TrkB,ERK1和ERK2在星形胶质细胞的表达。结果显示,星形胶质细胞的纯度达95%以上,在星形胶质细胞的细胞质观察到ERK1免疫阳性染色;TrkB免疫阳性染色位于细胞膜、细胞质和细胞核。化学发光法检测后ERK1和ERK2两条蛋白条带清晰可见。以上结果提示大鼠大脑皮质星形胶质细胞表达TrkB,ERK1和ERK2,TrKB/ERK通路可能与星形胶质细胞增殖有关。     

细胞外调节蛋白激酶在体外培养下大鼠大脑皮质星形胶质细胞的表达

目的:研究大鼠大脑皮质星形胶质细胞细胞外调节蛋白激酶(ERK)表达.方法:用生后2～3d SD大鼠,在无菌条件下取大脑皮质,制备细胞悬液,以GFAP鉴定星形胶质细胞;用免疫细胞化学方法研究星形胶质细胞ERK1表达.结果:星形胶质细胞的纯度达95%以上,ERK1免疫阳性物质呈棕黄色,分布于星形胶质细胞胞体与突起中.结论:培养的大鼠星形胶质细胞表达ERK1,其可能与星形胶质细胞信号转导有关.     

水通道蛋白-4 mRNA沉默可抑制离体缺氧星形胶质细胞水通道蛋白-4的表达

目的:研究水通道蛋白-4(AQP4) mRNA沉默对体外缺氧星形胶质细胞AQP4表达的影响.方法: 用氯化钴诱导体外星形胶质细胞缺氧,建立AQP4 mRNA沉默缺氧星形胶质细胞模型.随机分为正常组、对照组、缺氧组和干扰组,观察星形胶质细胞形态,免疫细胞化学、荧光定量PCR、免疫印迹法检测AQP4 mRNA 及蛋白表达....     

细菌脂多糖对培养星形胶质细胞中Src抑制的蛋白激酶C底物表达的影响

目的 研究细菌脂多糖(LPS)对培养的大鼠星形胶质细胞中Src抑制的蛋白激酶C的底物(SSeCKS)表达的影响.方法 培养的星形胶质细胞随机分为空白对照组、LPS单一刺激组、LPS联合PKC抑制剂(RO-31-8220)刺激组.运用荧光定量PCR(Real time RT-PCR)、免疫印迹和免疫细胞化学法分析SSeCKS的表达变化和亚细胞定位.结果 Real time RT-PCR显示,LPS可以上调SSeCKS mRNA水平,在作用浓度为100 μg/L和1 mg/L时与对照组有显著差异(P＜0.01).Western blotting表明,当LPS作用浓度为100 μg/L时,SSeCKS蛋白表达量明显上调;在此浓度作用下,SSeCKS表达于6 h达高峰并广泛磷酸化,至24 h其蛋白表达仍维持于较高水平.免疫细胞化学分析显示,正常情况下,SSeCKS散在分布于胞质,于胞膜略有浓集.在LPS单一刺激组,SSeCKS富集于核周;当LPS联合RO-31-8220共同作用时,SSeCKS的亚细胞定位与正常组无明显差异.结论 在体外培养的星形胶质细胞中,LPS可诱导SSeCKS表达,上调其磷酸化水平,影响其细胞内定位.这些改变与PKC的功能相关.提示SSeCKS可能参与星形胶质细胞中炎症信号的转导.     

ERK参与调节人脐动脉平滑肌细胞内SMAD2/3蛋白及其mRNA的表达

目的了解ERK信号转导通路对人脐动脉平滑肌细胞(hUASMC)内SMAD2/3蛋白及其mRNA表达的影响。方法原代培养hUASMC,实验分四组:1)对照组,2)PDGF组,3)ERK阻断剂组,4)PDGF ERK阻断剂组。分别用免疫细胞化学和RT-PCR法测hUASMC内磷酸化SMAD2/3蛋白和SMAD2/3mRNA的表达。结果1)与对照组相比,PDGF组hUASMC细胞内磷酸化SMAD2/3蛋白的表达增强(P<0·01);2)四组hUASMC细胞内SMAD2/3mRNA的表达无明显差异。结论在hUASMC中,ERK通路可促进SMAD2/3蛋白的磷酸化,但对SMAD2/3mRNA的表达没有影响。     

新生小鼠嗅鞘细胞的分离纯化和生物学特性

目的研究新生小鼠嗅鞘细胞的生物学特性。方法自新生小鼠嗅球中分离并纯化嗅鞘细胞,用免疫细胞化学和RT-PCR对其进行检测。结果体外培养的新生小鼠嗅鞘细胞主要为双极或三极细胞,其纯度可以达到88.7%以上,污染细胞中有星形胶质细胞、神经元、少突胶质细胞和成纤维细胞。免疫细胞化学结果显示,嗅鞘细胞呈P75NGFR、NGF、BDNF和CNPase免疫阳性,GFAP和Nestin阴性。RT-PCR结果显示,嗅鞘细胞表达β-NGF、BDNF、NT-3、PDGF-B、bFGF、EGF、TrkA和TrkB的mRNA,而不表达NT-4。结论本研究对新生小鼠嗅鞘细胞的形态学、免疫细胞化学和分子生物学特性提供了部分实验数据。但不同动物来源、不同的取材时间和培养条件对嗅鞘细胞的影响尚需进一步研究。     

外周炎症性疼痛刺激诱导丘脑中胶质细胞激活及细胞因子的表达

目的:研究完全弗氏佐剂(CFA)外周刺激后,大鼠丘脑中线核群和板内核群中星形胶质细胞标记物(GFAP)、小胶质细胞标记物(Iba)以及细胞因子(IL-1β,TNF-α)的表达变化.方法:逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR),免疫印迹法,免疫组织化学.结果:在炎症刺激后的4 h、3 d和14 d,丘脑中线核群和板内核群中小胶质细胞的标记物CD14、细胞因子IL-1β,TNF-α的mRNA和蛋白均有增加;星形胶质细胞标记物GFAP在炎症后的3 d和14 d,其mRNA和蛋白有显著增加.结论:外周炎症性刺激能够相继激活丘脑中线核群和板内核群的小胶质细胞和星形胶质细胞,并使炎症前细胞因子表达增多.提示该部位的胶质细胞可能通过细胞因子参与对炎症性疼痛的调节.     

大鼠视神经损伤后大胶质细胞去分化及预变性腓总神经的诱导

目的研究视神经损伤后神经胶质细胞的去分化及其诱导。方法成年雄性SD大鼠,分为正常对照组、损伤组、移植组和压榨移植组,在视神经伤后3d、7d、14d和28d 4个不同时相点取视神经,用HE方法计数细胞数量,用免疫组织化学、免疫印迹、原位杂交组织化学结合计算机图像分析检测巢蛋白(Nestin)、胶质纤维酸性蛋白(GFAP)、髓鞘碱性蛋白(MBP)、神经丝(NF)、脑源性神经营养因子(BDNF)、Nogo-A及Nogo-A mRNA的表达,用免疫荧光双标组织化学法检测Nestin-GFAP和Nestin-MBP的共表达。结果损伤组细胞数量仅在伤后7d明显增多,Nestin、MBP、Nogo-A及其mRNA表达上调,GFAP、NF、BDNF下调,出现一些Nestin-GFAP双标细胞和少量Nestin-MBP双标细胞;与损伤组相比,移植组和压榨移植组一些时相点的细胞数量不同程度地增多,Nestin、GFAP、BDNF和NF表达上调,MBP、Nogo-A及其mRNA表达下调,Nestin-GFAP双标细胞有所增加,且28d组高于14d组。结论视神经损伤后,主要是星形胶质细胞发生去分化,大胶质细胞呈现一些不利于神经再生的基因表达变化;移植预变性周围神经能进一步诱导星形胶质细胞去分化,大胶质细胞的一些基因表达变化有利于神经再生。     

微波辐射对PC12细胞突触素Ⅰ表达的影响及其机制

目的:探讨微波辐射对PC12细胞突触素Ⅰ表达及其磷酸化水平的影响,并通过对其相关影响因子BDNF及其受体TrkB改变的探讨,初步揭示突触素Ⅰ改变的机制.方法:采用30 mW/cm2微波辐射PC12细胞,于辐射后1 h,通过HPLC检测氨基酸递质释放的改变;于辐射后3 h、9 h、1 d和2 d,通过RT-PCR、Western blot和免疫细胞化学检测突触素Ⅰ,BDNF和TrkB表达以及突触素Ⅰ磷酸化的改变;通过免疫共沉淀检测BDNF和TrkB相互作用的改变.结果:30 mW/cm2微波辐射后1 h,PC12细胞释放的Asp、Glu、GABA和Gly均减少(P<0.01);突触素Ⅰ mRNA于辐射后3～9 h减少,1 d增加(P<0.01或P<0.05),2 d基本恢复;其蛋白于辐射后9 h～2 d减少(P<0.01或P<0.05);磷酸化的突触素Ⅰ在辐射后3～9 h减少,1 d增加,2 d又见减少(P<0.01或P<0.05).BDNF mRNA于辐射后3～9 h减少,1 d增加,2 d又见减少(P<0.01或P<0.05);其蛋白于辐射后3 h减少,1～2 d又见增加(P<0.05或P<0.01).TrkBmRNA在辐射后3 h和2 d减少;其蛋白于辐射后3 h～1 d增加(P<0.05或P<0.01),2 d基本恢复.BDNF和TrkB的相互作用于辐射后3～9 h增强,1～2 d减弱(P<0.05或P<0.01).结论:微波辐射可引起PC12细胞氨基酸递质释放障碍,突触素Ⅰ表达及其磷酸化水平降低,BDNF和受体TrkB表达及其相互作用异常,参与微波辐射所引起的PC12细胞信息传递障碍及其修复过程.     

碱性成纤维细胞生长因子经ERK信号通路抑制卵巢癌CAOV3细胞凋亡

目的:研究卵巢癌CAOV3细胞中碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)经MEK/ERK1/2信号转导通路对CREB、Bcl-2表达以及对细胞凋亡的影响作用。方法:无血清饥饿诱导细胞凋亡。分为对照组、bFGF组、bFGF PD98059组。Annexin-EGFP/PI荧光双染法检测细胞凋亡。Western印迹法检测ERK1/2、CREB以及Bcl-2蛋白表达。RT-PCR法检测Bcl-2的mRNA表达。结果:bFGF可抑制无血清饥饿诱导的细胞凋亡;时效依赖性地诱导ERK1/2活性增高、刺激CREB磷酸化、促进Bcl-2的mRNA及蛋白表达增加。bFGF作用CAOV3细胞15 min时ERK1/2活性达高峰;45 min时CREB磷酸化达峰值;Bcl-2的mREN表达高峰为6h,8h时蛋白表达最高。MEK1抑制剂PD98059可抑制bFGF的上述作用。结论:bFGF可能通过激活MEK/ERK1/2/CREB/Bcl-2信号转导途径抑制卵巢癌CAOV3细胞凋亡。     

可卡因－苯丙胺调节转录肽激活ERK促进海马神经元合成BDNF

目的： 探讨细胞外信号调节激酶(ERK)通路在可卡因－苯丙胺调节转录肽（CART）上调大鼠海马神经元脑源性神经营养因子（BDNF）表达中的作用。方法： 取18 d的SD大鼠胚胎（E18），分离海马神经元,体外原代培养7 d，以不同剂量CART处理细胞，用Western blotting方法分别检测不同处理时点p-ERK表达。再以ERK通路特异性阻断剂PD98059（25 μmol/L）预处理细胞，进一步观察CART对p-ERK表达及BDNF合成的影响。 结果： 同对照组比较，CART处理组海马神经元p-ERK表达明显增高（P<0.01），BDNF合成增加。PD98059能阻断内源性ERK磷酸化、也能阻断CART诱导的ERK磷酸化，同时抑制CRAT引起的BDNF合成。结论： CART通过激活ERK促进海马神经元BDNF的合成，从而发挥神经营养作用。     

TGF-β1激活的p38MAPK在TGF-β1上调人卵巢癌细胞PAI-1表达中的作用

目的:纤溶酶原激活物抑制剂1(PAI-1)在凝血、创伤修复、炎症和肿瘤转移中起重要作用。已有报道转化生长因子β1(TGF-β1)能通过Smad通路诱导PAI-1表达,但TGF-β1能否通过激活非Smad通路诱导PAI-1表达尚不清楚,因此本研究探讨了在卵巢癌细胞中TGF-β1激活的非Smad通路p38丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)和细胞外信号调节激酶(ERK)与TGF-β1上调PAI-1表达的关系。方法:用10μg/L TGF-β1处理卵巢癌SKOV3细胞和HO-8910细胞后,采用real-time PCR和Western blotting的方法检测PAI-1的表达,用磷酸化p38MAPK的抗体和磷酸化ERK的抗体检测p38 MAPK和ERK的激活情况,用p38 MAPK和ERK的特异性抑制剂SB203580和PD98059分别抑制其活性后,检测PAI-1的表达。结果:TGF-β1在卵巢癌细胞中可明显上调PAI-1mRNA和蛋白的表达,并可快速激活p38 MAPK和ERK。用p38 MAPK的抑制剂可以明显抑制TGF-β1上调PAI-1表达,但是抑制ERK活性对TGF-β1上调PAI-1表达没有明显影响。结论:TGF-β1激活的p38 MAPK通路参与了TGF-β1上调PAI-1的表达。     

Tension Force Downregulates Matrix Metalloproteinase Expression and Upregulates the Expression of Their Inhibitors through MAPK Signaling Pathways in MC3T3-E1 cells

Objective: Matrix metalloproteinases (MMPs), produced by osteoblasts, catalyze the turnover of extracellular matrix (ECM) molecules in osteoid, and the regulation of MMP activity depends on interactions between MMPs and tissue inhibitors of metalloproteinases (TIMPs). We focused on the degradation process of ECM in osteoid that was exposed to mechanical strain, and conducted an in vitro study using MC3T3-E1 osteoblastic cells to examine the effects of tension force (TF) on the expression of MMPs and TIMPs, and activation of mitogen-activated protein kinase (MAPK) pathways.Design: Cells were incubated on flexible-bottomed culture plates and stimulated with or without cyclic TF for 24 hours. The expression of MMPs and TIMPs was examined at mRNA and protein levels by real-time RT-PCR and Western blotting, respectively. The phosphorylation of extracellular signal-regulated kinase (ERK) 1/2, p38 MAPK, and stress-activated protein kinases/c-jun N-terminal kinases (SAPK/JNK) were examined by Western blotting.Results: TF decreased the expression of MMP-1, -3, -13 and phosphorylated ERK1/2. In contrast, TF increased the expression of TIMP-2, -3 and phosphorylated SAPK/JNK. The expression of MMP-2, -14, TIMP-1, -4 and phosphorylated p38 MAPK was unaffected by TF. MMP-1, -3 and -13 expression decreased in cells treated with the ERK inhibitor PD98059 compared with untreated control cells. The JNK inhibitor SP600125 inhibited the TF-induced upregulation of TIMP-2 and -3.Conclusions: The results suggest that TF suppresses the degradation process that occurs during ECM turnover in osteoid via decreased production of MMP-1, -3 and -13, and increased production of TIMP-2 and -3 through the MAPK signaling pathways in osteoblasts.     

牛膝多肽促大鼠海马神经元突起的生长

目的 研究牛膝多肽(ABPP)对体外培养的大鼠海马神经元突起生长的促进作用及其对生长相关蛋白-43 (GAP-43)和神经丝蛋白(NF-H)mRNA和蛋白表达的影响. 方法 以体外原代培养的胎鼠海马神经元为研究模型,通过四甲基偶氮唑盐(MTT)检测ABPP对海马神经元细胞活性的影响,通过免疫荧光细胞化学法,采用Image-Pro Express软件测量不同浓度ABPP(0.1mg/L、0.5mg/L、1.0mg/L)加药24h,对海马神经元神经突起生长的影响;通过实时荧光定量PCR法定量分析不同浓度ABPP(0.1mg/L、0.5mg/L、1.0mg/L)加药6h,对海马神经元GAP-43和NF-H基因表达的影响;采用免疫印迹法观察不同浓度ABPP(0.1mg/L、0.5mg/L、1.0mg/L)加药24h后,对海马神经元GAP-43 和NF-H蛋白表达的影响.同时应用胞外信号调节激酶(ERK)特异性拮抗剂PD98059与ABPP共培养海马神经元,分析ABPP对海马神经元的作用与ERK通路的关系. 结果 ABPP可有效地促进海马神经元突起的生长,加药后24h浓度为1.0mg/L,作用最强;实时荧光定量RT-PCR、免疫荧光细胞化学法和免疫印迹检测的结果表明,ABPP能增加体外培养的海马神经元GAP-43和NF-H的mRNA和蛋白表达,PD98059可抑制该过程. 结论 ABPP能促进体外培养的海马神经元神经突起的生长,其作用与上调GAP-43和NF-H 基因的表达相关,并可能与ERK通路有关.     

DXM对大鼠星型胶质细胞P53和Bax表达的影响

目的探讨DXM(地塞米松dexamethasone)引起体外纯化培养的大鼠大脑皮质星型胶质细胞凋亡的机制。方法出生1～2 d的新生Wistar大鼠,在无菌条件下取脑,胰蛋白酶消化数分钟,制备星形胶质细胞悬液,以神经胶质纤维酸性蛋白(GFAP)鉴定星形胶质细胞;用不同浓度的DXM(浓度为10-5、10-4、10-3 mol/L)与纯化培养的大鼠大脑皮质星形胶质细胞共同孵育24 h后,用免疫细胞化学方法检测P53、Bax在星型胶质细胞内的表达情况,表达的强弱用平均光密度表示。结果星形胶质细胞的纯度达95%以上,P53和Bax的表达随着DXM浓度的升高而增强,与对照组比较各组均有极显著性差异(P0.01)。结论上述结果提示P53和Bax的表达增强可能是大剂量DXM引起星型胶质细胞凋亡的主要因素。     

创伤后应激障碍模型大鼠内侧前额皮质磷酸化细胞外信号调节激酶1/2及c-fos的变化

目的探讨创伤后应激障碍(PTSD)模型大鼠内侧前额皮质(mPFC)磷酸化细胞外信号调节激酶1/2(pERK1/2)和c-fos的表达变化。方法将30只成年健康雄性Wistar大鼠随机分为对照组(15只)和PTSD模型组(15只),采用无连续单一应激(SPS)方法制备PTSD模型。用免疫组织化学和免疫印迹法检测mPFCpERK1/2的表达变化,RT-PCR检测c-fosmRNA表达变化。结果免疫组织化学分析显示,对照组和模型组pERK1/2阳性细胞数分别为10.4±2.07、48.8±10.08,阳性信号吸光度值分别为24.955±3.691、110.810±10.643,差异有统计学意义(P0.01);免疫印迹分析显示,对照组和模型组pERK/2相对表达量分别为0.510±0.052和1.109±0.106,差异有统计学意义(P0.01);RT-PCR分析结果显示,对照组和模型组c-fosmRNA相对表达分别为0.267±0.067和1.049±0.131,差异有统计学意义(P0.01)。结论mPFCpERK1/2和c-fos表达增高,可能参与了PTSD模型大鼠的病理生理过程。     

肾素前体激活人肾系膜细胞ERK1/2诱导TGF-β的表达

目的:观察肾素前体(prorenin)能否激活体外培养的人肾系膜细胞(HRMCs)膜表面的肾素(前体)受体[(P)RR],从而活化细胞外信号调节激酶1/2(ERK1/2)信号通路。方法:体外培养HRMCs。以血管紧张素Ⅱ1型受体(AT1)阻断剂olmsartan和血管紧张素Ⅱ2型受体(AT2)阻断剂PD123319孵育细胞,再以prorenin刺激细胞,并用ERK1/2抑制剂PD98059和HRP(handle region peptide)干预。用免疫蛋白印迹方法(Western blotting)和酶标记免疫吸附测定方法(ELISA)测定目的蛋白水平,以逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法测定mRNA水平。结果:Prorenin作用于体外培养的HRMCs后,在阻断AT1和AT2受体时,能激活(P)RR使ERK1/2磷酸化增强、转化生长因子(TGF-β)水平增高。这种ERK1/2信号通路的激活是(P)RR激活后效应,并可被ERK1/2信号通道阻断剂PD98059阻断。HRP不能阻断(P)RR激活所致的ERK1/2磷酸化,不能使TGF-β表达降低。结论:在体外培养的HRMCs中,prorenin能够激活(P)RR,使ERK1/2信号通道活化导致TGF-β水平增高。而HRP不能阻断(P)RR激活后ERK1/2的磷酸化及TGF-β表达的增多。