再生障碍性贫血患者外周血T细胞亚群检测

再生障碍性贫血患者外周血Ｔ细胞亚群检测唐晓文邵景章张学光张毅李建勇郑列琳谢炜王爱青再生障碍性贫血（再障）患者对免疫抑制治疗有效以及细胞毒性Ｔ淋巴细胞对造血细胞的体外抑制作用等临床及实验室结果均支持细胞介导的免疫反应在再障发病中所起的作用，然而对Ｔ细胞...     

再生障碍性贫血造血干细胞的研究现状

再生障碍性贫血(再障)的病因和发病机制复杂,但主要的病理生理学改变为造血干细胞(HSC)和造血祖细胞(HPC)的损伤,表现为干/祖细胞数量和质量的异常。我们主要针对原发性获得性再障的干细胞损伤及其机制综述如下。1 再障 HSC 数量和质量的异常1.1 再障干/祖细胞数量异常:再障患者 HSC/HPC 群体数量的减少已形成共识。在体外半固体琼脂培养系统中,再障患者的骨髓无或仅有很少的集落形成;后来的长期细胞培养(LTC)研究也证实,再障的 HSC/HPC 数量明显低于正常在再障出现明显的临床症状时,作为反映 HSC/HPC 的长期     

慢性再生障碍性贫血患者CD8+淋巴细胞中CD28的表达

免疫介导的造血抑制 ,尤其是T细胞功能的异常为慢性再生障碍性贫血 (CAA)的主要发病机制[1] 。共刺激信号对T细胞功能和细胞因子格局均有影响[2 ] 。我们测定了CAA患者外周血中共刺激信号CD2 8分子在CD8 淋巴细胞中的表达 ,现报告如下。对象和方法1　研究对象　CAA患者 30例 ,为 2 0 0 2年 10月～ 2 0 0 3年 5月在我院就诊患者 ,男 11例 ,女 19例 ,平均年龄 37(14～ 76 )岁 ,均符合国内诊断标准[3 ] ;正常对照组为健康人 15名 ,男 9名 ,女 6名 ,平均年龄 2 8(2 3～ 4 0 )岁。2　检测方法　淋巴细胞CD8、CD2 8、CD8 CD2 8 、CD8…     

再生障碍性贫血患者细胞免疫功能与造血细胞因子的研究

目的：进一步探讨再生障碍性贫血（再障）的免疫发病机制，阐明细胞免疫、造血细胞因子在再障患者中发生变化的基础与临床意义。方法：用单抗试剂盒，采用改良ＡＰＡＡＰ法及酶联免疫试剂盒，采用ＥＬＩＳＡ法对３８例再障患者及２０名正常人外周血Ｔ细胞亚群，ＨＬＡ－ＤＲ抗原表达以及外周血单个核细胞（ＰＢＭＮＣ）培养上清诱生Ｇ－ＣＳＦ、ＩＬ－６、ＴＮＦα、ＩＦＮα及ＩＬ－８水平进行测定。结果：再障患者外周血ＣＤ４细胞减低、ＣＤ８细胞增高、ＣＤ４／ＣＤ８降低或倒置，ＨＬＡ－ＤＲ抗原表达率增高。再障患者ＰＢＭＮＣ培养上清中Ｇ－ＣＳＦ阳性率减低，ＩＬ－６、ＴＮＦα、ＩＦＮα及ＩＬ－８水平增高。相关分析发现Ｇ－ＣＳＦ与ＣＤ４细胞及ＣＤ４／ＣＤ８呈正相关，而与ＩＦＮα呈负相关；ＩＬ－６与白细胞数及ＣＤ４细胞呈负相关；ＴＮＦα与ＣＤ８细胞呈正相关而与ＣＤ４／ＣＤ８呈负相关；ＩＬ－８与ＣＤ８细胞及ＨＬＡ－ＤＲ呈正相关。结论：细胞免疫功能异常及细胞因子网络失调在再障发病中起一定的作用。     

再生障碍性贫血患者T细胞亚群检测的临床意义

本研究探讨再生障碍性贫血(AA)患者外周血T细胞亚群的变化及其与AA发病、免疫抑制治疗之间的关系;为AA患者合理选择治疗方案提供依据。以88例临床确诊为AA、并分别接受常规和常规联合免疫抑制治疗的患者为对象,采用三色免疫荧光抗体标记法和流式细胞术检测外周血T淋巴细胞亚群及CD4 和CD8 比值,参考正常对照组水平将患者分为比值正常型、比值倒置型和比值超高型3个免疫亚型,分析和比较各亚型与病情、疗效之间的关系。结果表明:CD4 /CD8 比值正常型占39.8%、比值倒置型占44.3%、比值超高型占15.9%。免疫亚型、治疗方法与总有效率的关系为:单独常规治疗时,3个亚型组之间疗效无明显差异;当联合免疫抑制治疗时,比值正常型患者的总有效率与常规治疗相比无显著改变,而比值倒置型及免疫异常型(比值倒置型 比值超高型)患者有效率较同组常规治疗疗效均显著提高(84.2%vs45.5%及82.6%vs42.8%,p值均<0.05),也显著高于比值正常型患者(84.2%及82.6%vs52.6%,p值均<0.05)。结论:大多数AA患者存在严重的CD4 和CD8 比值失调,CD4 /CD8 异常既可表现为降低,也可以是异常增高,AA发病机制与免疫异常有密切相关性;T细胞亚群检测对临床了解病情和发病机制、合理选择治疗方案、提高诊断和治疗水平具有重要价值。     

CD3＋、CD4＋、CD8＋T淋巴细胞亚群在肿瘤患者外周血中检测的临床意义

目的探讨肿瘤患者外周血T淋巴细胞亚群（CD3＋、CD4＋、CD8＋、CD4＋／CD8＋）的变化及临床价值。方法测定100例肿瘤患者,其中肺癌40例,消化道肿瘤40例,其他肿瘤20例;及90名正常对照组外周血T淋巴细胞亚群绝对计数、免疫球蛋白（IgG、Iga、IgM）,比较与正常对照组间差异。结果肿瘤患者组T淋巴细胞外周血绝对计数CD3＋[（1041±358）个／μL]、CD41（689±263）个／μL]、CD4＋／CD8＋比值（1．15±0．40）与健康组比较明显下降（P〈0．05）;CD8＋[（602±223）个／止]与健康组比较略有升高（P〉0．05）。肿瘤患者组IgG、IgA、IgM均高于对照组。结论肿瘤患者存在免疫功能异常,T淋巴细胞亚群绝对计数的变化对肿瘤患者病情监测及预后判断具有重要意义。     

免疫磁珠正负筛选在分离外周血CD8+和 CD4+T细胞亚群中的应用

为了探讨免疫磁珠分离技术及其正、负筛选策略在人外周血T淋巴细胞亚群分离提纯中的应用,应用补 体细胞毒法和正负筛选策略相结合的免疫磁珠法分离健康人外周血中CD4 T细胞、CD8 T细胞;用流式细胞术法 比较两种分离方法分离的靶细胞纯度;台盼蓝染色染色法和细胞培养后平板计数法检测免疫磁珠法分离的CD4 T 细胞、CD8 T细胞的活力和生长情况。结果表明:补体细胞毒法分离后CD4 T细胞纯度、CD8 T细胞纯度分别为 (76.0±2.8)％和(77.0±3.0)％,明显高于分离前的(34.6±3.7)％和(32.0±3.7)％(P<0.05);免疫磁殊法 分离后CD4 T细胞和CD8 T细胞纯度为(94.2±1.4)％和(93.8±3.0)％,显著高于补体细胞毒法(P<0.05)。 磁珠分离法获得的CD4 T细胞、CD8 T细胞细胞活力分别为(96.0±2.4)％和(95.0±3.6)％;细胞计数法表明 磁珠分离法获得的CD4 T细胞、CD8 T细胞对植物血凝素(PHA)的刺激保持了良好的增殖能力。结论:免疫磁珠 法较补体细胞毒法分离效率高,不影响细胞的活力和增殖能力;正负筛选策略相结合的免疫磁珠法在同时获取高 纯度的CD4 T细胞、CD8 T细胞时可获得满意效果,尤其适应于只有较少量血标本的情况,为进一步研究CD4 T 细胞、CD8 T细胞的生物学特性创造了条件。     

外周血CD3+CD45+T细胞在原发性肝癌患者中的表达及意义

目的探讨原发性肝癌（Hepatocellular Carcinoma，HCC）患者外周血中CD3^＋CD56^＋T细胞、CD3^＋CD56^-T细胞、CD3^＋CD56^＋NK细胞在（HCC）细胞免疫中所发挥的作用。方法采用流式细胞技术对14例HCC患者及30例健康对照人群外周血中的CD3^＋CD56^＋T细胞、CD3^＋CD56^-T细胞、CD3^-CD56^＋NK细胞进行检测。结果14例HCC患者与30例正常对照组外周血测定结果比较发现：HCC患者外周血中CD3^＋CD56^-明显降低，CD3^＋CD56^＋则明显升高，与正常对照组比较差异具有极显著性（P均小于0．005）。HCC患者CD3^-CD56^＋（NK）较正常对照组下降，两组比较差异具有显著性（P小于0．05）。结论CD3^＋CD56^-T细胞在HCC患者外周血中增生活跃，提示高表达的CD3^＋CD56^-T细胞在肝癌免疫应答中具有重要意义。     

从再生障碍性贫血患者检出阵发性睡眠性血红蛋白尿症异常细胞的观察

目的：探讨在再生障碍性贫血（再障）患者中检出阵发性睡眠性血红蛋白尿症（ＰＮＨ）异常细胞的发生率。方法：用荧光标记的抗ＣＤ５９抗体，以流式细胞仪检测缺失ＣＤ５９的异常细胞。结果：１０名正常人骨髓单个核细胞及外周血红细胞和中性粒细胞的ＣＤ５９标记率均＞９５％。２３例再障患者中约２／３标记率正常，另外１／３患者的标记率有不同程度的减低。结论：该法是从再障患者检出少量ＰＮＨ异常细胞的良好手段，可用以早期发现再障－阵发性睡眠性血红蛋白尿症综合征。     

细胞形态学在巨幼细胞性贫血与难治性贫血、再生障碍性贫血与骨髓稀释中的鉴别诊断意义

[目的]鉴别分析两组疾病包括巨幼细胞性贫血（MA）与难治性贫血（MDS—RA），再生障碍性贫血（AA）与骨髓稀释。[方法]分别对各组病例进行回顾分析血象，骨髓象及特殊染色的特征。[结果]MDS与MA在骨髓象中粒系细胞、红系细胞病态造血、外周血核右移等方面有显著差异（P〈0．005）；AA与骨髓稀释在骨髓造血分叶核细胞总数、非造血细胞中淋巴细胞总数及骨髓外观特征等方面均有显著性差异（P〈0．05）。[结论]巨幼细胞性贫血与难治性贫血形态学鉴别诊断的关键是有无细胞病态造血，再障与骨髓稀释鉴别关键不但要注意观察骨髓外观还要对骨髓造血与非造血细胞分类进行分析比较。     

CD3~+、CD4~+、CD8~+T细胞水平在胃癌患者外周血中的变化

目的探讨T淋巴细胞亚群CD3+、CD4+、CD8+和CD4+/CD8+比值水平在胃癌患者外周血中的表达及意义。方法采用血液分析仪技术,检测40例胃癌手术前患者(按临床分期为Ⅰ～Ⅱ级组18例,Ⅲ～Ⅳ级组22例)及25名正常对照组外周血CD3+、CD4+、CD8+细胞和CD4+/CD8+比值T细胞水平。结果胃癌患者外周血CD3+、CD4+细胞、CD4+/CD8+比值分别为0.78%±0.35%、0.37%±0.21%、0.61%±0.42%,明显低于正常对照组(P<0.05);胃癌Ⅲ～Ⅳ级组CD3+、CD4+细胞CD4+/CD8+比值分别为0.42%±0.27%、0.21%±0.17%、0.29%±0.25%,明显低于Ⅰ～Ⅱ级组(0.95%±0.35%、0.45%±0.19%、0.76%±0.30%,P<0.05)。结论检测胃癌患者手术前外周血CD3+、CD4+、CD8+细胞和CD4+/CD8+比值T细胞水平,可以初步评估胃癌患者机体免疫状态,也为肿瘤的免疫增强治疗提供了理论依据。     

骨髓间充质干细胞对再生障碍性贫血患者体内T细胞活化影响的临床分析与研究

目的探讨骨髓间充质肝细胞对再生障碍性贫血(AA)患者体内T细胞活化的影响。方法回顾性分析2008年9月至2011年9月的60例骨髓间充质干细胞AA患者的临床资料,从该组患者骨髓中分离并培养间充质肝细胞,采用尼龙棉柱对其中T淋巴细胞予以分离,以不同数量间充质干细胞加入至植物血凝素刺激的再生障碍性贫血患者T淋巴细胞活化体系之中。通过流式细胞仪对数据加以获取,并计算出CD3+CD25+与CD3+CD38+T淋巴细胞的表达率。结果当骨髓间充质干细胞为1×104/孔,与单独培养的再生障碍性贫血患者T淋巴细胞(对照组)比较,间充质干细胞对再生障碍性贫血患者的T淋巴细胞CD25以及CD38的表达呈现出明显的抑制作用(P<0.01);当骨髓间充质干细胞为1×103/孔时,与对照组相比无显著差异,P>0.05。结论对于再生障碍性贫血患者而言,其体内T淋巴细胞受到骨髓间充质在体外间充质干细胞的抑制作用,而且这种抑制作用需要在一定数量的骨髓间充质下才会实现。     

再生障碍性贫血、骨髓增生异常综合征及急性髓系白血病患者骨髓基质细胞衍生因子-1及其受体CXCR4的表达水平和意义

目的:探讨基质细胞衍生因子-1及其受体CXCR4(SDF-1/CXCR4)在再生障碍性贫血(AA)、骨髓增生异常综合征(MDS)、急性髓系白血病(AML)发病中的作用。方法:应用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测MDS、AA、AML患者及对照组患者(缺铁性贫血3例,营养性贫血3例)骨髓上清液中SDF-1水平,应用流式细胞仪检测MDS、AA、AML患者及对照组骨髓CD34+细胞表面表达CXCR4的情况。结果:AML、AA、MDS患者和对照组骨髓上清液中SDF-1含量分别为8125.0、6429.5、10816.2和8846.5pg/mL,AA患者的SDF-1水平分别与MDS、MDS低危组有统计学差异(P=0.001,P=0.001),AML、AA、MDS患者的SDF-1水平与对照组均无统计学差异(P>0.05)。AML、AA及对照组骨髓CD34+细胞上表达CXCR4的百分率分别为(11+16)%、(70+26)%和(20+11)%,MDS为(32+31)%。MDS按IPSS评分分为低危组及高危组,CD34+细胞CXCR4表达百分率分别为(37+33)%、(15+17)%(P=0.025)。结论:骨髓造血微环境可能通过调节AA、AML及MDS患者骨髓CD34+细胞表达CXCR4水平,对疾病产生负反馈调节,从而抑制以上3种疾病的进展。     

慢性再生障碍性贫血患者T淋巴细胞亚群和粒-单核细胞集落形成单位的检测

目的探讨慢性再生障碍性贫血(CAA)发病的免疫因素,为CAA的临床治疗提供依据。方法采用骨髓细胞半固体集落培养法检测粒-单核细胞集落形成单位(GM-CFU),同时用流式细胞仪检测T淋巴细胞亚群。结果CAA骨髓细胞培养GM-CFU产率明显少于正常对照组,(7.9±0.5)个/ml vs(88.7±2.7)个/ml(P<0.01);CAA骨髓细胞加正常血清培养GM-CFU的产率与正常对照组比较差异无统计学意义,(82.4±2.6)个/ml vs(88.7±2.7)个/ml(P<0.05),其中有21例的GM-CFU的产率(60.1±2.1)个/ml与对照相比较明显减少;CAA血清与正常骨髓细胞培养的GM-CFU为(105.6±3.2)个/ml,显著高于正常组。CAA组的CD3 、CD4 和CD4 /CD8 均比对照组降低,分别为(49.8±0.6)%vs(64.3±0.9)%(、29.7±0.4)%vs(38.6±0.3)%和(1.2±0.1)%vs(1.7±0.1)%(均P<0.01);CD8 细胞明显高于正常,(28.9±0.3)%vs(24.5±0.3)%(P<0.01)。结论CAA患者普遍存在着T细胞亚群失衡的免疫异常;CAA患者骨髓细胞中可能有抑制患者GM-CFU形成的因素,而血清中存在着升高的粒-单核细胞集落刺激因子等,其临床意义尚需进一步观察。GM-CFU体外培养联合T细胞亚群检测,可作为CAA异常免疫机制的诊断指标。     

SARS患者外周血CD4+CD8+T淋巴细胞的变化

目的 观察严重急性呼吸综合征(severe acute respiratory syndrome，SARS)患者外周血CD4^ 和CD8^ T淋巴细胞的变化，探讨SARS患者机体的免疫状况。方法 10位健康人(对照组)和13例确诊为SARS患者于发病第1、2、3、4周采静脉血，用流式细胞仪检测CD4^ 、CD8^ T淋巴细胞。结果 与对照组比较，SARS患者从发病1至4周外周血CD4^ 、CD8^ T淋巴细胞百分比均有不同程度的降低，以病程发展的2周左右为最明显。结论 SARS患者外周血CD4^ 、CD8^ T淋巴细胞有不同程度的降低，机体呈异常的免疫反应。     

补肾生血方对慢性再生障碍性贫血患者甲状腺等指标影响的观察

目的观察慢性再生障碍性贫血(CAA)患者血浆促甲状腺激素(TSH)、总三碘甲腺原氨酸(T3)、总甲状腺素(T4)、促肾上腺皮质激素(ACTH)、皮质醇(COR)水平及补肾生血方对其影响。方法选择CAA患者56例以补肾生血方为主治疗2个疗程,血细胞分析仪检测治疗前后外周血象,放射免疫法检测治疗前后CAA患者血浆TSH、T3、T4,ACTH、COR水平。结果治疗后外周血象血红蛋白、白细胞计数、血小板计数较治疗前明显升高;CAA患者血浆T3、T4水平明显低于正常对照组,TSH、ACTH、COR水平与正常对照组比较无显著性差异。CAA缓解后T3、T4水平明显升高,治疗前后CAA患者血浆TSH、ACTH、COR水平无显著变化。结论 CAA患者体内存在内分泌失调;补肾生血方对CAA具有良好的治疗作用。     

严重型再生障碍性贫血患者骨髓和外周血 HLA-DR~ T 细胞的变化及其淋巴细胞造血抑制活性的研究

目的：进一步阐明免疫紊乱在严重型再生障碍性贫血（ＳＡＡ）发病中的作用。方法：对１３例初诊ＳＡＡ、７例抗淋巴细胞球蛋白（ＡＬＧ）治疗后恢复期ＳＡＡ（ｒＳＡＡ）患者骨髓和外周血及对照组（包括９名骨髓对照和１１名外周血对照）的ＨＬＡ－ＤＲ＋Ｔ细胞进行检测，并对部分患者和对照组刺激的外周血去单核细胞的单个核细胞培养上清液（ＰＨＡ－ＬＹＣＭｓ）的造血活性进行检测。结果：初诊ＳＡＡ患者骨髓及外周血ＨＬＡ－ＤＲ＋Ｔ细胞显著高于对照组（Ｐ＜０．００１）；ＡＬＧ治疗后ｒＳＡＡ患者骨髓和外周血ＨＬＡ－ＤＲ＋Ｔ细胞较初诊ＳＡＡ下降，但仍高于对照组（Ｐ＜０．００１）；ＳＡＡ患者骨髓内ＨＬＡ－ＤＲ＋Ｔ细胞显著高于外周血（Ｐ＜０．００１）；与对照组比较，初诊的ＳＡＡ患者外周血ＰＨＡ－ＬＹＣＭｓ对正常骨髓ＢＦＵ－Ｅ和ＣＦＵ－ＧＭ具有显著的抑制作用（Ｐ＜０．００１），而ＡＬＧ治疗后ｒＳＡＡ患者ＰＨＡ－ＬＹＣＭｓ对正常骨髓ＢＦＵ－Ｅ和ＣＦＵ－ＧＭ的抑制作用明显减弱。结论：ＨＬＡ－ＤＲ＋Ｔ细胞在ＳＡＡ的发病中可能发挥重要的作用。     

MAG方案对恶性血液病患者造血干细胞动员作用的研究

目的　研究米托蒽醌 (MTZ)联合大剂量阿糖胞苷 (Ara C)、重组人粒细胞集落刺激因子(rhG CSF)组成MAG方案对恶性血液病患者外周血干细胞的动员作用。方法　 1995年 12月至2 0 0 3年 4月 ,采用MAG方案对 14例恶性淋巴瘤和 2 9例急性白血病患者外周血干细胞进行动员 ,其用量为MTZ 10mg/m2 ,第 2 ,3天 ;Ara C 2 g/m2 ,每 12h 1次 ,第 1,2天 ;rhG CSF 30 0 μg/d。首先用MA方案联合化疗 ,白细胞 <1.0× 10 9/L时开始用rhG CSF ,白细胞回升时用CS 30 0 0plus或CobeSpectra血细胞分离机采集外周血干细胞。结果　 14例恶性淋巴瘤患者除 1例外周血干细胞采集失败外 ,其余 13例均 1次性采集成功 ,所得单个核细胞 (MNC) (3.91± 2 .70 )× 10 8/kg ,CD34 细胞 (17.79± 12 .90 )× 10 6/kg。采集 2 9例急性白血病患者外周血干细胞平均 2 .13次 ,2 4例采集成功 ,5例采集失败 ,所得MNC (3.6 2± 2 .89)× 10 8/kg ,CD34 细胞 (7.37± 6 .6 0 )× 10 6/kg。rhG CSF平均使用时间为 7d。经MAG方案动员后 ,除 8例患者有胃肠道反应、14例患者骨髓抑制期合并感染外无明显不良反应 ,无动员相关死亡。MAG方案动员后进行微小残留病检测 ,部分病例转为阴性。结论　MAG方案在恶性淋巴瘤和急性白血病患者外周血干细胞动员中安全