应用半重叠TCRγ引物扩增TCRγ基因重排检测淋巴细胞白血病的研究

采用更加敏感的半重叠式T细胞受体（TCR）γ链特异性引物的多聚酶链反应（PCR）法,对28例急性淋巴细胞白血病（ALL）初治、完全缓解（CR）及骨髓移植（BMT）患儿的骨髓标本进行检测,用消化煮沸及酚抽提法分别对所有骨髓标本进行DNA提取,将PCR结果进行比较。结果表明,消化煮沸法用于微量标本的DNA提取优于酚抽提法。28例ALL患儿中16例检出TCRγ特异性条带,其中微小残留病（MRD）组18例;阳性检出12例,其中免疫分型标记为B细胞型的4例（25.0%）,免疫标记为T细胞型者全部出现TCRγ阳性条带。表明TCRγ基因重排并非克隆性T细胞增生所特有,部分ALL患儿存在双克隆重排。     

老年急性淋巴细胞白血病分子生物学改变的初步观察

目的 研究老年急性淋巴细胞白血病(ALL)的分子生物学特征。方法 应用多聚酶链反应技术(PCR)检测了16例老年ALL患者的bcr／abl融合基因、TCRγ基因重排(TCRγRA)以及IgH基因重排(IgHRA)。结果 16例患者中IgHRA11例，TCRγRA4例，两类基因重排均阴性1例；bcr／abl融合基因阳性9例，阳性率56．25％。结论 老年ALL以B—ALL为多，bcr／abl融合基因阳性率较高，可能是其治疗效果较差的原因之一。     

急性髓性白血病免疫球蛋白重链基因和T细胞受体γ基因重排的检测意义

免疫球蛋白重链基因(IgH)和T细胞受体(TCR)基因重排常被认为是淋巴细胞的克隆标志。但是，近年来的研究表明，急性髓性白血病(AML)细胞亦可出现IgH和TCR基因重排。为此，我们采集51例AML患者骨髓，利用PCR方法检测IgH及TCRγ基因重排，并初步探讨其临床意义。     

非霍奇金淋巴瘤患者外周血及骨髓中免疫球蛋白、T 细胞受体基因重排检测的意义

目的探讨非霍奇金淋巴瘤(NHL)患者骨髓及外周血中免疫球蛋白(Ig)、T细胞受体(TCR)基因单克隆重排检测的临床意义。方法以BIOMED-2引物系统及多重PCR方法对60例NHL患者骨髓或外周血标本进行Ig及TCR基因重排检测。结果 B细胞NHL中,39.02%检出Ig基因单克隆重排,T细胞NHL中36.84%检出TCR基因单克隆重排;14例早期与46例晚期患者的Ig和(或)TCR基因单克隆重排阳性率分别为28.57%和41.3%;11例低变恶性患者和49例中、高度恶性患者的Ig和(或)TCR基因单克隆重排阳性率分别为36.36%和38.78%;以上两者间比较差异均无统计学意义(P均>0.05)。53例NHL患者骨髓涂片检测骨髓侵犯阳性率为13.21%,明显低于骨髓基因重排检测阳性率(43.40%),两者比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论骨髓及外周血Ig及TCR基因重排PCR检测有助于早期发现骨髓侵犯及MRD。     

肺黏膜相关淋巴组织型淋巴瘤的表型和IgH基因重排的检测价值

目的探讨肺黏膜相关淋巴组织型淋巴瘤（MALTLoma）的免疫表型和免疫球蛋白重链（IgH）基因重排检测的意义。方法对12例肺MALTLoma患者的临床病理资料进行回顾性分析和免疫组化研究，7例进行IgH和T细胞受体γ链（TCRγ）基因重排检测，并对治疗后结果随访。结果12例中，开胸肺活检7例，经电视胸腔镜肺活检2例，细针肺穿刺活检3例。病理组织检查结果：瘤细胞主要由中心细胞样淋巴细胞、小淋巴细胞样瘤细胞组成；12例有淋巴上皮病变，11例有反应性淋巴滤泡，10例有淋巴滤泡的克隆化，9例有血管受侵，4例有胸膜受侵；瘤细胞表达B细胞相关抗原。7例行IgH基因重排检测，FR2阳性6例，FR3A阳性5例。TCRγ1和TCRγ2基因重排检测均为阴性。12例患者单纯化疗3例，手术切除8例，其中术后化疗6例，对症治疗1例；随访11例，随访时间1—12年，复发1例，死亡2例。结论组织病理学结合免疫组化检查能对大多数具有典型病变的肺MALTLoma进行诊断；在肺MALTLoma与肺良性淋巴组织增生性疾病的鉴别诊断上，IgH基因重排检测有重要的辅助价值。     

基因扫描分析人T细胞受体CDR3谱型检测T细胞克隆技术的建立

目的建立人T细胞受体（TCR）互补决定区3（CDR3）基因谱型的基因扫描分析术,为分析T细胞克隆提供研究方法。方法分别以Jurkat和Raji细胞作为阳性和阴性对照,应用RT-PCR方法扩增5例健康志愿者外周血T细胞的34个TCR Vα亚家族和26个TCR Vβ亚家族的CDR3,并用基因扫描分析扩增产物以确定T细胞的克隆性。结果T细胞株Jurkat细胞仅表达TCR Vα1．1和Vβ8基因,且为单克隆,而B细胞株Raji细胞则不表达所有的TCR Vα和Vβ基因。5例健康人表达所有的TCR Vα和Vβ基因,均为多克隆T细胞。结论基因扫描分析人TCRCDR3基因谱型是检测T细胞克隆性的精确敏感方法。     

不明原因发热患者检测淋巴细胞IgH和TCR基因重排的意义

目的:探讨不明原因发热(FUO)患者淋巴细胞免疫球蛋白重链(Ig H)和T细胞受体-γ(TCR-γ)基因重排的临床意义。方法:采用半巢式PCR方法检测110例FUO患者骨髓淋巴细胞Ig H和TCR-γ基因重排的阳性率。结果:84例淋巴瘤发热患者中,Ig H基因重排阳性34例,TCR-r基因重排阳性29例,两者阳性率达75%;26例非淋巴瘤发热患者中,Ig H基因重排阳性0例,TCR-r基因重排阳性1例,基因重排阳性率3.8%,差异有统计学意义(P0.05)。结论:对于FUO患者行基因重排有助于淋巴瘤的早期诊断,特别是对无法取得病理组织的患者意义更大。     

急性淋巴细胞白血病患者FLT3基因及FLT3/ITD基因突变的检测及临床意义

目的:研究急性淋巴细胞白血病(ALL)患者FLT3基因及其内部串联重复(ITD)突变情况。方法:采用多聚酶链反应(PCR)联合单链构象多态性(SSCP)方法检测76例不同免疫分型ALL患者FLT3基因及FLT3/ITD基因突变。结果:76例ALL患者经PCR扩增发现46例(60.5%)FLT3基因检测阳性,其中前前B细胞ALL、前B细胞ALL、成熟B细胞ALL及T细胞系ALL患者FLT3基因检测阳性率分别为88.2%(15/17),73.9%(17/23),40.0%(6/15)和23.5%(4/17);前前B细胞ALL和前B细胞患者ALL FLT3基因检测阳性率80.0%,显著高于成熟B细胞ALL(40.0%)(P<0.01);B细胞系ALL患者FLT3基因检测阳性率为69.1%,显著高于T细胞系ALL患者(23.5%)(P<0.01)。76例ALL患者中仅有2例(2.6%)出现FLT3/ITD基因突变,此2例均为伴有2种髓系抗原表达,免疫学检查诊断为急性混合细胞白血病患者,均伴有外周血高白细胞数、骨髓中高白血病细胞比例及预后较差。结论:B细胞系ALL和T细胞系ALL患者均可检测出FLT3基因,但B细胞系ALL患者FLT3基因检测阳性率显著高于T细胞系ALL;B细胞系ALL中细胞分化越成熟则FLT3基因检测率阳性越低。ALL患者一般不出现FLT3/ITD基因突变,FLT3/ITD基因突变检测可能有助于急性白血病基因分型及预后判断。     

免疫分型结合基因重排对成人急性淋巴细胞白血病诊断及预后的判断价值

目的：探讨用免疫分型组合免疫球蛋白重链（IgH)及T细胞受体γ（TCRγ）基因重排对急性淋巴细胞白血病（ALL）的分型诊断及预后的判断价值。方法：免疫分型采用碱性磷酸酶抗性磷酸酶复合物（APAAP）免疫组化法,基因重排采用多聚酶链反应技术（PCR法）检测58例初治成人ALL患者。结果：①通过免疫分型检测,58例ALL中,43例（74．1％）为不带髓系相关标记的ALL（My^-ALL),15例（25．9％）为带髓系相关标记的ALL（My^ ALL),以CD15最常见。②采用PCR法检测IgH基因重排和TCRγ基因重排发现,58例ALL中有79．3％（46／58）免疫分型与基因重排结果完全吻合,即T－ALL出现TCRγ基因重排阳性,B－ALL出现IgH基因重排阳性,20．7％（12／58）基因重排结果与免疫分型不能完全吻合。③58例ALL经DOLP或DOCP方案1个疗程后,My^-ALL CR为72．1％（31／43）,My^ ALL为66．7％（10．15）;ALL不同阶段CR率分别是：T－ALL为82．4％（14／17）,ProB-ALL为50．0％（3／6）,C－ALL为90．5％（19／21）,RreB-ALL为33．3％（4／12）,成熟B－ALL为50．0％（1／2）;经基因重排检测与免疫分型吻合的ALL CR率为71．7％（33／46）,不吻合的ALL66．7％（8／12）。结论：对于白血病的分型应在FAB分型的基础上加用免疫分,可提高确诊率且对预后判断有价值;基因重排诊断仅有参考价值,对预后尚无指导意义。     

经卡介苗刺激后结核性胸腔积液中记忆性γδT细胞的细胞因子水平及其受体表达

目的 观察卡介苗刺激后结核性胸膜炎患者的胸腔积液细胞中γδ T细胞的细胞因子及细胞受体表达,了解γδ T细胞在结核病局部细胞免疫应答中的作用.方法 分离结核性胸膜炎患者的胸腔积液细胞,经卡介苗刺激后检测γδ T细胞的细胞因子分泌、细胞亚群、细胞表型及细胞受体表达特征,并提取mRNA,利用3种Vγ和8种Vδ引物,经逆转录PCR扩增cDNA,将PCR产物进行基因扫描分析γδ T细胞各亚家族克隆性.结果 卡介苗刺激胸腔积液细胞后,CD4+和γδ T细胞分泌γ-干扰素的阳性率分别为0.38%和5.35%,且γδ T细胞分泌γ-干扰素的阳性率远高于CD4+ T细胞,分泌γ-干扰素的γδ T细胞主要表达白细胞共同抗原(CD45RO),其阳性率为73.5%.此外,δ2细胞也分泌γ-干扰素(11.1%)和肿瘤坏死因子-α(25.5%).与未刺激者相比,卡介苗选择性扩增δ2细胞,由多克隆或双克隆转变为寡克隆.结论 卡介苗刺激结核性胸膜炎患者的胸腔积液细胞能诱导记忆性γδT细胞分泌细胞因子,卡介苗体外扩增γδT细胞后,基因扫描显示Vδ2出现寡克隆性.     

弥漫大B型非霍奇金淋巴瘤患者外周血TCR Vβ亚家族T细胞分布和克隆性增生特点

目的：了解弥漫大B淋巴瘤（DLBL）患者外周血T细胞的TCRVβ基因谱系及克隆性增殖情况。方法：利用RT-PCR方法扩增6例DLBL患者外周血单个核细胞中24个TCRVβ基因的互补决定区3（CDR3）,PCR产物进一步经荧光标记和基因扫描分析CDR3长度而确定T细胞的克隆性。结果：6例DLBL患者分别表达9-20个TCRVβ亚家族。患者均存在1个或多个Vβ亚家族的克隆增殖T细胞,增殖形式包括寡克隆、寡克隆增殖趋势及双克隆。Vβ13和Vβ15亚家族出现克隆增殖性T细胞的频率较高（66.7%）。结论：DLBL患者外周血TCRVβ亚家族T细胞的分布具有特点,表现为TCRVβ亚家族T细胞呈限制性选用和克隆性增殖,这可能是淋巴瘤患者机体对淋巴瘤相关抗原产生的特异性免疫反应。     

血清及血浆标本IgH基因重排对B细胞淋巴瘤患者的诊断价值

目的探讨以血清、血浆为标本,免疫球蛋白重链(IgH)基因重排对B细胞淋巴瘤(BNHL)早期诊断的意义。方法收集病理活检确诊的BNHL患者的血清、血浆,提取肿瘤细胞释放的可溶性DNA。针对IgH基因第三互补决定簇(CDRⅢ)序列,设计引物扩增Fr3和JH区,PCR检测IgH基因重排的比率。结果以BNHL细胞系Raji细胞作为阳性对照,30例确诊的BNHL患者中25例阳性,阳性率83.3%。健康成人及慢性淋巴结炎患者呈阴性结果。IgH基因重排的检出率与患者临床表现、临床分期及肿瘤负荷不具有明显的相关性。结论以血清、血浆为标本,检测IgHCDRⅢ基因重排在临床具有较高的阳性率。标本取材方便,不受淋巴结肿大部位的限制,对BNHL患者的早期诊断具有一定的价值。     

肠病型T细胞淋巴瘤临床分析(附5例报道)

肠病型T细胞淋巴瘤(ETCL)是一种临床少见、预后差的疾病,了解其临床病理特征对诊断和治疗有重要的临床意义.目的:通过分析ETCL患者的临床表现、病理改变和分子生物学特征及其与EB病毒(EBV)感染的关系,提高临床医师和病理医师对ETCL的认识,以期改善患者的生存率.方法:回顾我院2001年7月～2004年1收治的5例ETCL患者的内镜活检或手术切除标本的临床和组织病理学表现;采用免疫组化方法标记CD45RO、CD3、CD56、CD20、CD79α、CD68、Lys;采用聚合酶链反应(PCR)检测EBV感染和T细胞受体(TCR)-γ基因重排情况.结果:5例ETCL患者均无肠病史,多发生于青年男性,4例发病年龄为24～38岁,病程进展迅猛,确诊后4个月内死亡.病变多发生于结肠和小肠,1例与胃部同时发生,均为多发性溃疡性病变.肿瘤细胞为多形性T细胞,组织学形态为多形性淋巴细胞弥散分布,有血管中心性浸润,淋巴上皮病变,大片或多灶性坏死为特征.5例患者肿瘤组织CD45RO和TCR-γ基因重排均为阳性,1例CD56阳性且EBV阳性.结论:ETCL多发生于青年男性,临床症状多无特异性,病程发展迅猛,预后差,病损肠管表现为多发性溃疡,TCR-γ链克隆性重排,多数为自然杀伤(NK)样T细胞淋巴瘤和外周T细胞淋巴瘤非特殊型;有EBV感染的ETCL为NK样T细胞淋巴瘤.     

Castleman病10例IgH基因重排检测结果分析

用PCR技术检测10例Castleman病（CD）患者淋巴结组织免疫球蛋白重链（IgH）基因重排情况,免疫组化法观察其细胞表型;对7例患者进行96个月随访。结果1例IgH基因重排阳性,24个月时确诊为B系非霍奇金淋巴瘤,3个月后死亡;6例基因重排阴性,其中3例10～85个月死亡,余3例随访至今仍存活。提示CD可能不是一种单纯的良性淋巴组织增生性疾病,而为交界性具有恶变潜能的疾病,特别是多灶性CD（MCD）。组织学判断CD的恶变倾向困难,基因重排对判定CD的病变性质有重要作用。     

聚合酶链式反应用于急性淋巴细胞白血病基因诊断的研究

采用ＰＣＲ方法分析２０例急性淋巴细胞白血病患者ＩｇＨ基因重排和ＴＣＲγ基因重排。结果１５例Ｂ淋巴细胞白血病均发生ＩｇＨ基因重排，并有２例出现两种基因扩增产物，大小７０－１４０ｂｐ。另５例Ｔ淋细胞白血病中２例发生ＴＣＲγ基因重排，扩增产物大小１７０－２３０ｂｐ。     

系统性红斑狼疮患者外周血γ/δ T细胞的表达作用及受体多态性

目的 探讨γ／δT细胞在自身免疫病中的表达、作用及受体多态性。方法 ①检测正常对照、系统性红斑狼疮（SLE）活动期和稳定期患者各12例的外周血总γ／δ、Vγ1、Vγδ2细胞的表达情况。②用γ／δ细胞特异性抗原刺激外周血单个核细胞（PBMC）,了解该细胞在SLE患者中功能情况。③用分子生物学单链构象多态性（SSCP）方法分析SLE患者γ／δTCR的δ链基因及其第3互 补决定区（CDR3）长度的多态性。结果 SLE活动期患者的γ／δT细胞及亚群数量明显减少,而稳定期患者则正常。经抗原刺激后SLE的γ／δT细胞均无增生。SLE患者δ链CDR3基因表达有一定的限制性,全部患者均表达Vδ2,Vδ2的CDR3绝大多数都为克隆表达。结论 γ／δT细胞数目与SLE活动性相关,在其发病中可能起抑制性T 细胞的作用并存在功能缺陷。SLE患者TCRδ基因虽存在一定限制性表达,但尚不能肯定为某一特异性抗原刺激γ／δT细胞增生而引起SLE发病。     

“荧光定量PCR溶解曲线法”监测HIV感染者TCR α链CDR3谱系漂移的研究

目的利用"荧光定量PCR溶解曲线分析技术"监测HIV感染者外周血T细胞TCRα链CDR3谱系漂移(单/寡/多克隆增生)。方法提取6例HIV感染者、4例健康者外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cell,PBMC)中的总RNA,逆转录成cDNA,设计人32个TRAV基因家族上、下游引物,荧光定量PCR(FQ-PCR)扩增32个TRAV基因各家族CDR3谱系,溶解曲线法分析各家族CDR3谱系的单/寡/多克隆增生。结果健康者外周血T细胞TCRα链32个家族CDR3表达频率不一致,各家族PCR产物的"溶解曲线谱型图"显示多克隆增生的高斯分布,呈现溶点不同的CDR3多态性,6例HIV感染者的外周血TCRα链CDR3谱系的32个家族CDR3表达频率不一致,患者各家族PCR产物的"溶解曲线谱型图"显示多数家族为多克隆增生的高斯分布,但每个患者均出现数量不等的单克隆和寡克隆增生家族。结论荧光定量PCR溶解曲线法监测人TCRα链CDR3谱系漂移的方法稳定、简便,可以用来监测健康者和HIV感染者外周血T细胞TCRα链CDR3谱系漂移。     

颈部复合性淋巴瘤临床病理特征及文献复习

目的:探讨罕见的复合性淋巴瘤的临床病理特征。方法:采用形态学、免疫组织化学及分子遗传学方法对1例颈部复合性的黏膜相关淋巴组织淋巴瘤及外周T细胞淋巴瘤进行临床病理分析并复习文献。结果:本例复合性B与T细胞淋巴瘤在形态上有黏膜相关淋巴组织淋巴瘤和外周T细胞淋巴瘤的特征,且IgH和TCR基因重排。结论:复合性淋巴瘤罕见,诊断需结合形态、免疫表型和分子遗传学特征。     

成年发病狼疮鼠的T细胞受体Vβ基因测序分析

目的分析MRL/lpr和(NZB×NZW)F1两种狼疮鼠成年发病时,广泛浸润于多脏器的T细胞克隆T细胞受体(TCR)Vβ基因编码的氨基酸基序特点,揭示该T细胞克隆的抗原特异性。方法用反转录聚合酶链反应(RT-PCR)分别扩增不同成年发病狼疮鼠个体的肾脏、大脑中的TCRVβ6基因,对扩增产物进行基因克隆和DNA测序分析;单链构象多态性分析法(SSCP)鉴定广泛浸润的T细胞克隆TCRVβ6基因编码的氨基酸基序。结果两种成年发病狼疮鼠的不同个体之间,广泛浸润于多脏器的T细胞克隆TCRVβ6基因的互补决定区3(CDR3)中出现相同的氨基酸基序。结论不同个体成年发病狼疮鼠的多脏器中广泛浸润的T细胞克隆TCRVβ基因的CDR3中出现相同的氨基酸,表明该克隆针对特定的自身抗原。     

丙型肝炎病毒1b型NS5A区基因复杂性与干扰素α疗效的关系

目的 探讨丙型肝炎病毒1b型（HCV-1b)NS5A区基因的复杂性与干扰素α（IFN-α）治疗效果之间的关系。方法 以13例接受IFN-α治疗的HCV-1b感染患者为研究对象，治疗前血清提取的RNA采用逆转录套式PCR（RT-nested-PCR)扩增HCVNS5A区基因，PCR产物纯化后与T载体连接并克隆入大肠杆菌，随机挑选30个阳性克隆菌落，每一克隆菌落再进行PCR扩增，30个克隆的PCR产物的同一聚丙烯酰胺凝胶上采用单链构象多态性分析（SSCP）分析和异源性双体分析（HD）筛选HCVNS5A区克隆型，克隆型的多少反映HCVNS5A区基因的复杂程度。结果 完全应答组平均6.3种克隆型；部分应答组平均8.6种克隆型；无应答组平均15.8种克隆型。结论 HCVNS5A区基因的复杂程度与IFN-α的治疗效果呈负相关。