细胞壁缺陷对伤寒沙门菌代谢特性影响

为了探讨细胞壁缺陷对细菌代谢特性的影响以及代谢演变的可能机制，我们对伤寒沙门菌L型变异后形成的细胞壁缺陷突变株(L菌株)和返祖型以及亲代细胞裂解物进行了无机离子、甘油三酯(TG)、胆固醇(Tch)定量检测和一些氨基酸、糖代谢有关酶活性检测，现报告如下。     

细胞壁缺陷型伤寒沙门菌染色体的PCR-SSCP分析

目的　了解伤寒沙门菌细胞壁缺陷突变株 (CWDMs)的染色体特点 ,探讨伤寒沙门菌CWDMs变异的分子机制。方法　对伤寒沙门菌CWDMs染色体DNA进行特异性PCR扩增及SSCP分析。结果　PCR SSCP显示伤寒沙门菌CWDMs具有与亲代细菌型相同的双链DNA和一条单链DNA ,但缺少了一条单链DNA。结论　伤寒沙门菌CWDMs仍保留了与其亲代细菌型一致的特异性染色体基因 ,但也发生了染色体基因的突变。     

伤寒沙门菌CWDMs染色体的限制性内切酶谱分析

目的了解伤寒沙门菌CWDMs染色体的特点,探讨限制性内切酶谱在伤寒沙门菌CWDMs检测的应用价值.方法对伤寒沙门菌CWDMs染色体的特异性PCR扩增产物进行限制性内切酶谱分析.结果限制性内切酶谱分析显示伤寒沙门菌CWDMs具有与其亲代细菌型相同的酶谱.结论可用限制性内切酶谱分析对伤寒沙门菌CWDMs进行检测.     

伤寒沙门菌CWDMs染色体的限制性内切酶谱分析

目的 了解伤寒沙门菌CWDMs染色体的特点，探讨限制性内切酶谱在伤寒沙门菌CWDMs检测的应用价值。方法 对伤寒秒门菌CWDMs染色体的特异性PCR扩增产物进行限制性内切酶谱分析。结果 限制性内切酶谱分析显示伤寒沙门菌CWDMs具有与其亲代细菌型相同的酶谱。结论 可用限制性内切酶谱分析对伤寒沙门菌CWDMs进行检测。     

伤寒沙门菌sRNA S2959增强细菌动力和生物膜形成能力

目的研究伤寒沙门菌小RNA(sRNA) S2959对细菌动力以及生物膜形成能力的影响。方法利用Red重组系统制备伤寒沙门菌sRNA S2959缺陷株(△S2959),同时制备sRNA S2959缺陷株的空载体株(△S2959-pBAD)和回补株(△S2959-p S2959)等相关菌株。通过sRNA S2959缺陷株和野生株的生长曲线实验观察sRNA S2959缺失后对细菌生长的影响;通过细菌sRNA S2959缺陷株、空载体株、回补株的泳动能力实验和生物膜实验观察sRNA S2959对细菌动力以及生物膜形成能力的影响;再用定量PCR(q PCR)方法检测细菌鞭毛相关基因在sRNA S2959相关菌株中的表达水平。结果成功制备sRNA S2959缺陷株和回补株; sRNA S2959缺陷株和野生株在LB和TSB液体培养基中的生长曲线无明显差异;与野生株相比,sRNA S2959缺陷株的泳动能力和生物膜形成能力下调(P0.05),而回补株的泳动能力和生物膜形成能力较缺陷株显著增加(P0.05); q PCR结果显示,高表达sRNA S2959后,细菌鞭毛相关基因(flh D、fli A和flj B)的mRNA水平分别上调大约4、3和6倍。结论伤寒沙门菌sRNA S2959促进鞭毛的表达,进一步上调伤寒沙门菌动力以及生物膜的形成能力。     

获自发热患者血液一株猪霍乱沙门菌L型的研究

目的分析获自发热患者血液的一株猪霍乱沙门菌L型的性质,探讨猪霍乱沙门菌L型感染的病原学诊断与治疗。方法采用细菌L型分离培养方法从常规细菌学分离培养阴性的发热患者血清中获得一株猪霍乱沙门菌L型,对其形态与培养、抗原、返祖及药物敏感性进行分析与研究。结果猪霍乱沙门菌L型在常规细菌学液体或固体培养基内均不能形成明显的生长现象,在L型琼脂培养基上形成细小菌落。猪霍乱沙门菌L型为革兰阴性的长丝、圆球或不规则形态,生化反应及诊断血清凝集反应不典型,抗生素敏感性与其亲代细菌型有差别。L型经多次传代培养后可发生返祖,返祖菌的生化反应、诊断血清凝集反应以及抗生素敏感性与原来细菌型一致。结论抗生素的不规范使用可导致猪霍乱沙门菌在患者体内形成L型,从而造成患者的临床症状不典型以及病原学诊断漏诊和影响治疗效果。对于反复发生的以及常规细菌学分离培养多次阴性的血液感染患者,应当高度注意细菌L型的分离培养。     

获自发热患者血液一株猪霍乱沙门菌L型的研究

目的分析获自发热患者血液的一株猪霍乱沙门菌L型的性质,探讨猪霍乱沙门菌L型感染的病原学诊断与治疗.方法采用细菌L型分离培养方法从常规细菌学分离培养阴性的发热患者血清中获得一株猪霍乱沙门菌L型,对其形态与培养、抗原、返祖及药物敏感性进行分析与研究.结果猪霍乱沙门菌L型 在常规细菌学液体或固体培养基内均不能形成明显的生长现象,在L型琼脂培养基上形成细小菌落.猪霍乱沙门菌L型为革兰阴性的长丝、圆球或不规则形态,生化反应及诊断血清凝集反应不典型,抗生素敏感性与其亲代细菌型有差别.L型经多次传代培养后可发生返祖,返祖菌的生化反应、诊断血清凝集反应以及抗生素敏感性与原来细菌型一致.结论抗生素的不规范使用可导致猪霍乱沙门菌在患者体内形成L型,从而造成患者的临床症状不典型以及病原学诊断漏诊和影响治疗效果.对于反复发生的以及常规细菌学分离培养多次阴性的血液感染患者,应当高度注意细菌L型的分离培养.     

细胞壁缺陷型淋病奈瑟菌cppB基因酶切图谱分析

目的探讨细胞壁缺陷对淋病奈瑟菌隐蔽性质粒B(cppB)基因的影响以及细胞壁缺陷型淋病奈瑟菌cppB的变异特点。方法用青霉素诱导淋病奈瑟菌成为细胞壁缺陷型并获得其纯培养物,cppB基因特异性引物PCR检测细胞壁缺陷型纯培养物的cppB基因,并对其cppB基因PCR扩增产物进行限制性核酸内切酶图谱分析。结果细菌型和细胞壁缺陷型均具有cppB基因扩增产物,经过限制性内切酶HindⅢ、HinfⅠ、HpaⅡ和MspⅠ消化和电泳,在5%PAGE凝胶电泳中,呈现出相同的电泳条带。结论淋病奈瑟菌细菌型及其细胞壁缺陷型对cppB基因限制性核酸内切酶(HindⅢ、HinfⅠ、MspⅠ、HpaⅡ)的分析没有发现淋病奈瑟菌L型具有与其亲代细菌型不同的图谱,提示细胞壁缺陷没有导致淋病奈瑟菌的cppB基因发生这些核酸酶切位点中核苷酸序列的改变。     

血清乳酸脱氢酶（LDH）同功酶测定方法的改进

乳酸脱氢酶（LDH）同功酶在临床上对心梗及肝脏病变具有较灵敏和特异的鉴别诊断价值,尤其是当血清LDH总活性正常时其同功酶活性变化仍可测出来。目前分离LDH同功酶的方法很多,如电泳、层析、免疫技术等,但最有效的方法还是用电泳分离,其中聚丙烯酸胺电泳最好、分离最清晰,但操作比较麻烦,而醋纤膜电泳比较简便、快速,而且分高清晰,易为常现临床实验室采用,为了提高LDH同功酶的分离及显色,我们对电泳中某些条件作了改进,现报告如下。1关于电泳槽缓冲液离子强度原法：pH8．6,μ0．075巴比妥缓冲液;在此离子强度溶液中泳动…     

前列腺炎和阴道炎患者中细菌L型感染情况的调查

目的　调查慢性细菌性前列腺炎和阴道炎患者中细菌L型感染情况 ,以引起临床医师的注意。方法　分别取受检者的前列腺液和阴道分泌物标本按常规作需氧菌、厌氧菌及细菌L型培养。培养所得的细菌L型菌株进行返祖和鉴定。并对其中 5 0例细菌L型培养阳性患者经一年抗菌治疗后复查 ,将复查培养所得的细菌L型除返祖鉴定外再通过涂片、细胞壁染色加以确诊。结果　 63 1例患者标本中细菌L型培养阳性 2 78例( 44 .0 % ) ,其中 2 68例经返祖证实与变异前的原始菌混合感染 ;单纯细菌L型培养阳性 10例 ( 3 .6% ) ;2 78株细菌L型经返祖试验及鉴定分别为 :金黄色葡萄球菌 2 3 0例 ( 82 .7% )、粪链球菌 2 6例 ( 9.4% )、大肠埃希菌 18例( 6.5 % )、铜绿假单胞菌 4例 ( 1.4% )。经一年抗菌治疗后复查的 5 0例原细菌L型阳性患者中有 5例细菌培养阴性 ,45例单纯细菌L型培养阳性 ,占 90 % ,经涂片、细胞壁染色证实大部分 (约 80 %以上 )菌体无细胞壁 ,呈多形态。结论　提示对前列腺炎和阴道炎患者增加细菌L型常规检查 ,可与细菌培养的结果互补 ,提高检出率 ;细菌L型对常规抗菌药物敏感性低     

前列腺炎和阴道炎患者中细菌L型感染情况的调查

目的调查慢性细菌性前列腺炎和阴道炎患者中细菌L型感染情况,以引起临床医师的注意.方法分别取受检者的前列腺液和阴道分泌物标本按常规作需氧菌、厌氧菌及细菌L型培养.培养所得的细菌L型菌株进行返祖和鉴定.并对其中50例细菌L型培养阳性患者经一年抗菌治疗后复查,将复查培养所得的细菌L型除返祖鉴定外再通过涂片、细胞壁染色加以确诊.结果 631例患者标本中细菌L型培养阳性278例(44.0%),其中268例经返祖证实与变异前的原始菌混合感染;单纯细菌L型培养阳性10例(3.6%);278株细菌L型经返祖试验及鉴定分别为金黄色葡萄球菌230例(82.7%)、粪链球菌26例(9.4%)、大肠埃希菌18例(6.5%)、铜绿假单胞菌4例(1.4%).经一年抗菌治疗后复查的50例原细菌L型阳性患者中有5例细菌培养阴性,45例单纯细菌L型培养阳性,占90%,经涂片、细胞壁染色证实大部分(约80%以上)菌体无细胞壁,呈多形态.结论提示对前列腺炎和阴道炎患者增加细菌L型常规检查,可与细菌培养的结果互补,提高检出率;细菌L型对常规抗菌药物敏感性低.     

两类同工酶谱在凝胶板上同时显色法

本文报道一种能使乳酸脱氢酶(LDH)和超氧化物歧化酶(SOD)同工酶在同一块电泳凝胶板上经同种染色液一次处理,同时显色的方法。显色结果,两者一目了然。区带互不重叠,LDH泳动慢为有色区带,SOD泳动块为无色透明区带。此法节时省力,结果准确可靠,有利于同一样品同时进行两种同工酶电泳分析,达到一举两得的结果。     

蔗糖发酵型伤寒杆菌生化变异的鉴定

根据国际微生物学会对沙门菌属细菌的定义 ,沙门菌属细菌的生化反应特点之一 ,是对蔗糖不发酵和硫化氢试验一般为阳性。我们自 1996～ 1998年先后检出 12株蔗糖发酵迅速而硫化氢试验阴性的伤寒沙门菌 ,经生化鉴定及血清凝集鉴定试验 ,符合伤寒沙门菌 ,按伤寒沙门菌感染治疗 ,患者在短期内治愈出院。现报告如下。一、材料和方法1 标本来源 :12株蔗糖发酵型伤塞沙门菌 ,均来自我院住院患者的血液 (7株 )、骨髓 (3株 )、粪便 (2株 )标本。2 培养与鉴定 :将上述标本按常规方法进行培养后 ,取无色透明或半透明的菌落按肠杆菌科生化试验进行鉴定…     

目前沙门菌属如何分类?

问:目前沙门菌属如何分类? 答:沙门菌属的分类经历了复杂的过程.Kauffmann根据沙门菌的O、H抗原建立"1个血清型1个种”的分类方法.1973年Crosa等依DNA-DNA杂交结果表明,绝大多数血清型,Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ亚属及亚利桑那均属于同一种,只有邦戈尔沙门菌(即Ⅱ亚属)与之不同.由于猪霍乱沙门菌为细菌名称批准名录中沙门菌的典型种,故将沙门菌分为两个种:猪霍乱沙门菌(S.choleresuis)和邦戈尔沙门菌(S.bongori). 猪霍乱沙门菌中依表型及基因可分为6个亚种.即猪霍乱亚种、萨拉姆亚种(Subsp.Salamae)、亚利桑那亚种(Subsp.arizonae)、双相亚利桑那亚种(Subsp.diarizonae)、浩敦亚种(Subsp.houtenae)、因迪卡亚种(Subsp.indica). 但原猪霍乱血清型与大多数沙门菌血清型的生化反应并不一致.它的阿拉伯糖和菌藻糖为阴性.1986年14届国际微生物学大会中,系统细菌学委员会的肠杆菌科分委员会建议将猪霍乱改名为肠道沙门菌(S.enterica).1987年美国CDC接受此一建议,其分类法:沙门菌的种与亚种分为肠道沙门菌肠道亚种Ⅰ型、萨拉姆亚种Ⅱ型、亚利桑那亚种Ⅲa型、双相亚利桑那亚种Ⅲb型、浩敦亚种Ⅳ型、因迪卡亚种Ⅵ型及邦戈尔沙门菌Ⅴ型,含血清型数分别为1 454,489,94,324,70,12,20,合计2 463.寄生处除肠道沙门菌肠道亚种Ⅰ型为温血动物外,其余均为冷血动物环境中.与人类感染有关的沙门菌各血清型均在肠道亚种内,故原有名称均可继续使用.只是前面应加"血清型”(Serotype或Ser)继之O、H抗原型.如惯用的伤寒沙门菌的全名应为肠道沙门菌肠道亚种鼠伤寒血清型(或简称沙门菌伤寒血清型),鼠伤寒沙门菌的全名为肠道沙门菌肠道亚种鼠伤寒血清型(或简称沙门菌鼠伤寒血清型),亚利桑那沙门菌的全名应为肠道沙门菌亚利桑那亚种血清型18:z4,z23:-(或简称沙门菌Ⅲa,18:z4,z23:-)等.     

开菲尔来源乳杆菌益生作用的实验研究

目的 了解开菲尔来源乳杆菌抑制肠道病原菌黏附的效果以及对肠道正常菌群大肠埃希菌的影响.方法 分离纯化乳杆菌,待人结肠腺癌细胞株(Caco-2)培养至单层细胞后,将乳杆菌及其代谢产物分别与伤寒沙门菌、大肠埃希菌混合培养进行黏附和黏附抑制试验,记数50个Caco-2细胞黏附的细菌数目,取平均值,计算黏附抑制率,组内、组间相比较,对结果进行统计学分析.结果 与普通乳杆菌混合培养的伤寒沙门菌数相比,经开菲尔来源乳杆菌RG1,RG2混合培养的伤寒沙门菌数下降明显,差异具有统计学意义(P<0.05);经普通乳杆菌混合培养的大肠埃希菌数与RG1,RG2混合培养的大肠埃希菌数相比差异无统计学意义(P＞0.05),另外它们各自代谢产物在酸、中性环境下的抑制效果也有相同趋势.结论 RG1,RG2能抑制伤寒沙门菌的黏附,且抑制能力明显较普通乳杆菌强;另外其代谢产物也能抑制伤寒沙门菌的黏附;而RG1,RG2及其代谢产物对大肠埃希菌均无明显抑制效果.     

鼠伤寒沙门菌分子分型及耐药性特点

目的了解广州市鼠伤寒沙门菌的分子分型以及耐药性特点。方法利用脉冲场凝胶电泳(PFGE)分型技术对鼠伤寒沙门菌进行分子分型,采用纸片扩散(K-B)法进行药敏试验,且采用WHONET 5.6软件对药敏结果进行耐药分析。结果 PFGE结果聚类分析将44株鼠伤寒沙门菌分为15型,其中PFGE9型、PFGE8型、PFGE3型为广州市的优势菌型,菌株比例为54.5%(24/44)。耐药表型分型可将其分为21型,多重耐药菌占61.4%(27/44)。结论广州市鼠伤寒沙门菌分子分型呈多样性,分离株的多重耐药较为严重。     

LDH_5对胆囊炎的辅助诊断意义初探

乳酸脱氢酶催化反应是碳水化合物代谢中无氧糖酵解的最终反应,广泛存在于人体各种组织之中。以人体各种组织进行乳酸脱氢酶同功酶电泳可得5条同功酶的区带,分别称为:LDH_1;LDH_2;LDH_3;LDH_4;LDH_5(以下简称为LDH_(1～5))。因LDH_(1～5)     

食源性沙门菌感染的实验室诊断及鼠伤寒沙门菌同源性分析

目的用改良的沙门菌分离鉴定方法提高肠道沙门菌的检出率,初步掌握上海市主要沙门菌流行状况及菌型分布,建立沙门菌脉冲场凝胶电泳(PFGE)分型数据库,以便在发生沙门菌病时快速溯源,为控制该病的传播提供技术支撑。方法用改良的沙门菌鉴定方法对可疑肠道粪便标本进行分离、培养和鉴定;用PFGE对鼠伤寒沙门菌进行DNA分子分型,分析试验菌株的同源性。结果用改良的沙门菌鉴定方法分离出的沙门菌中以肠炎沙门菌为主,占全部菌株的42.1%,其次为鼠伤寒沙门菌,占13.2%。PFGE分析的10株鼠伤寒沙门菌分成A、B 2个PFGE型,其中A型菌株6株,B型菌株4株。A型菌株有4个亚型。结论改良的沙门菌鉴定方法可以有效提高沙门菌的检出率;PFGE是一种研究鼠伤寒沙门菌分子分型的有效方法,鼠伤寒沙门菌的分型结果显示了相对集中的亲缘关系。     

2014—2018年仙桃市伤寒沙门菌分子分型及耐药性分析

目的了解仙桃市伤寒沙门菌的耐药性及分子分型特征。方法收集2014—2018年分离的29株伤寒沙门菌开展药敏试验、脉冲场凝胶电泳(PFGE)分型及多位点序列分型(MLST)分析。结果药敏结果显示,29株伤寒沙门菌中27株菌对26种临床常见抗菌药物均为敏感/中度敏感,余2株菌有不同程度的耐药性,其中1株菌株耐药谱分布较广,对β-内酰胺/β-内酰胺抑制剂复合物类药物耐药。PFGE结果显示,29株伤寒沙门菌可分为6种PFGE型别,其中流行优势型为HuBXTSal003型别。MLST分型显示,29株菌株共有2种序列型,其中ST2为优势ST型。结论仙桃市伤寒沙门菌株存在优势PFGE带型及优势ST型,有多重耐药菌株出现。     

上海市鼠伤寒沙门菌单相变异株的鉴定和耐药谱分析

目的了解2013—2015年上海市流行的鼠伤寒沙门菌单相变异株的基因型和耐药谱。方法对2013—2015年上海市疾病预防控制中心细菌检测实验室保存的1 179株分离自腹泻患者的沙门菌进行血清分型复核,结合聚合酶链反应(PCR)筛选、鉴定鼠伤寒沙门菌单相变异株。采用PCR检测鼠伤寒沙门菌单相变异株基因型。采用改良纸片扩散法对鼠伤寒沙门菌双相株和单相株进行14种抗菌药物体外药物敏感性试验,参考美国临床实验室标准化协会(CLSI)标准判断结果。结果 1 179株沙门菌中共检出鼠伤寒沙门菌单相变异株52株,在沙门菌和鼠伤寒沙门菌中的阳性率分别为4.4%和23.3%,病例来源主要为上海郊区,且以青中年人群为主。在52株鼠伤寒沙门菌单相变异株中,有44株(84.6%)fljB基因缺失;在8株fljB基因未缺失株中,有2株(3.8%)基因型为fljB+fljA-hin-,6株(11.6%)为fljB+fljA+hin+。药物敏感性试验结果显示,耐3类以上抗菌药物的单相株有40株(76.9%),耐4类以上抗菌药物的单相株有36株(69.2%),并且鼠伤寒沙门菌单相株对氨苄西林-链霉素-磺胺类药-四环素(ASSu T)的耐药率(61.54%)和对氨苄西林-氯霉素-链霉素-磺胺类药-四环素(ACSSu T)的耐药率(19.23%)均远高于双相株(10.6%)(P0.05)。结论上海市鼠伤寒沙门菌单相变异株检出率较高且人群分布不均,多重耐药性严重,在疾病防控中应注意合理布局资源和使用药物。