温育和洗板方式对ELISA测定结果的影响

目的了解ELISA操作过程中温育和洗涤方式对测定结果的影响。方法以HBsAg为例将样本应用样本分配仪加入微孔板,然后将通过不同的温育、洗涤方式、处理后检测样本的吸光度(A)值。结果全自动酶标仪和手工洗涤方式测定的HBsAg低值阳性标本有显著性差异(P<0.01);37℃干式温箱温育和37℃水浴结果没有明显差异。结论全自动酶标仪一体化检测效果为佳;温育方式对实验无明显干扰;如果对实验各环节进行标准化,排除潜在的影响因素,可以最大限度地降低检测的系统误差,以保证ELISA检测有较好的准确性。     

用单克隆抗体ELISA一步法检测人血清甲胎蛋白

<正> 检测人血清中甲胎蛋白(AFP)含量的方法,历经不断改进,其灵敏度已由 30000ng/ml提高到 0.1～10ng/ml,阳性率也从70％提高到90%以上。但目前所用抗体大多为异种动物免疫血清,生产工艺复杂,批间差异较大,难以标准化。单克隆抗体(McAb)的问世,为免疫学诊断提供了良好的工具。本文运用两种AFP McAb建成检测AFP的ELTSA一步法,以期开发新一代诊断试剂。     

不同温育时间对层粘连蛋白放免分析结果的影响

在已达到要求的温育时间范围内, 选择最佳温育时间, 稳定剂量反应曲线, 使结果稳定、可靠.方法为: (1)随机取30份肝病患者血清, 在4℃分别温育18h、20h、23h,血清测定层粘连蛋白(laminin, LN)浓度, 并对三个不同的温育时间所得的值进行显著性检验;(2)对温育18h、20h、22h、24h分别为四批的标准曲线所得的质控指标进行分析;(3)对不同温育时间的回收率及浓度进行分析;(4)随机取20份肝病患者血清, 每三批各做20份, 于温育20h, 对其所得的值进行显著性检验, 以观察批间误差.结果表明: (1)三个不同温育时间的30份血清LN测定值的t检验有显著性差异.P值分别小于0.01和小于0.05;(2)不同温育时间的标准曲线B0/T(%)、NSB/T(%)、相关系数(r)的均值良好, 无明显差异;温育20h的ED50的均值为118.4ng/mL(范围113.9-123.8ng/mL), 在正常参考范围内(药盒正常参考值为115.7±17.3ng/mL).其它三个温育时间的ED50均超也正常参考范围;(3)温育低于及高于20h回收率均低于温育20h.温育20h的回收率最好, 为95.2%.(4)随机取20份肝病患者血清, 三批温育20h的批间结果均无显著性差异, P值均大于0.05.实验结果表明, 本实验室测定LN在4℃时, 最佳温育时间为20h.建议各实验室最好根据本室的实验条件寻找出最佳的温育时间.     

酶联免疫吸附分析检测HBsAg假阳性现象的常见原因

酶联免疫吸附分析检测ＨＢｓＡｇ假阳性现象的常见原因王力平，黄开盛，庄惠福目前ＨＢｓＡｇ的检测已广泛使用酶联免疫吸附分析（ＥＬＩＳＡ）。在该法检测技术讨论中，人们较多地探讨了由于前带或后带及抗原抗体比例不适而造成高滴度阳性标本漏检的假阴性现象。但在实际...     

血清标本中HBsAg免疫复合物对检测HBsAg的影响

０．５ｍｏｌ／Ｌ ＨＣｌ处理１ｈ后解离ＨＢｓＡｇ－抗ＨＢｓ免疫复合物，并变性抗ＨＢｓＡｇ抗体而对ＨＢｓＡｇ免疫反应性无影响，３４例临床抗ＨＢｓ＾＋血清样品经ＨＣｌ处理前后，常规ＥＬＩＳＡ检测ＨＢｓＡｇ比较，结果；酸处理前ＨＢｓＡｇ阳性率为１１．７６％，处理后增加至４１．１８％，实验表明血清样品经酸处理后能明显提高临床乙肝ＨＢｓＡｇ检出率。     

IRMA法检测乙肝表面抗原克服ELISA法的钩状效应

目前国内医院大多采用ELISA一步法检测HBsAg。用该法检测HBsAg时,当标本中HBsAg浓度高时会出现“钩状效应”(Hook)现象,出现假阴性,而造成漏检。当乙型肝炎病毒E抗原(HBeAg)和乙型肝炎病毒核心抗体(抗-HBc)阳性时,大多数都表现为HBsAg阳性,但极个别出现HBsAg阴性。为此,我们将HBsAg阴性,而HBeAg和抗-     

检测血清甲胎蛋白的双位点一步法ELISA及其临床应用

<正> 应用两种针对不同抗原位点的单克隆抗体(MeAb)建立的双位点一步法ELISA,简称两点一步法,检测抗原物质,不仅操作简便、快速,而且还可以达到改善检测系统灵敏度、精确性及重复性的目的。 1981年Votila首先报道用二点一步法检测人血清甲胎蛋白(AFP)含量,证明了这一方法的优越性。1986年刘杲等报道了抗人AFP McAb的制备、双位点夹心ELISA的建立及在检测血清AFP中的初步应用。1987年周鸣、刘杲报道了检测血清AFP的两点一步法。我们应用两种抗AFP不同抗原位点的McAb,通过选择合适的抗体提纯方法,应用马来酰亚胺法制备辣根过氧化物酶(HRP)-Fab’结合物以及选用灵敏的四甲基联苯胺(TMB)底物等方面的工作,建立了适合于临床检测用的血清AFP两点一步ELISA测定法。     

抗HBsAg单克隆抗体在诊断中应用错位点双单克隆抗体ELISA夹心法的建立

对5种过氧化物酶标记的抗HBsAg单克隆抗体和14种固相物包被用单克隆抗体做了筛选试验，以探讨实际应用中各单克隆抗体的较佳配用方案。试验结果表明，用正交法所得的安验结果中，最佳配用情况下，包被用抗体和主要的酶标记抗体的作同位点是错位的。即捕捉抗体与标记抗体分别作用在HBsAg的不同位点上，两者之间基本上没有位阻现象。这种双单克隆抗体央心去的本底很低．可以目测判定结果。敏感性和特异性较好。HBsAg阳性，滴度为1：16(对流电泳法)的患者血清稀释至2^19时仍可得到P／N比≥2．1的读数，目测判定结果对至少在2^18稀释度下可明确地判定出阳性结果。     

溶血标本对HBsAg检测影响的实验研究

乙型肝炎表面抗原(HBsAg)的检测,是诊断乙肝的主要指标。随着技术的不断发展,酶联免疫吸附试验(ELISA)被大多数实验室所采用。由于非特异性物质对ELISA试验的影响,致使实验结果出现假阳性或假阴性。因此,保证检测质量是实验室面临的重要任务。我室在监测ELISA法测定表面抗原试剂盒灵敏度的基础上,通过实验证实溶血标本(即血红蛋白,Hb)是引起非特异性反应的因素之一,并分析其机理。     

高低浓度HBsAg血清中7项乙肝标志物的表现模式分析

目的 分析不同浓度HBsAg血清中7项乙肝标志物表现模式,以揭示其在人群中的分布特征。方法 对252份低浓度和387份高浓度HBsAg血清标本的7项乙肝标志物进行检测;为表达方便,将乙肝标志物检测项目的第1－5项,依次用1、2、3、4、5作为该模式的代码。结果 高浓度HBsAg组和低浓度HBsAg组在人群中的比例分别为10．2％和0．7％左右,两组血清学乙肝标志物的表面模式分别有10种和7种,各模式在两组间的检出率不完全相同,且两组间各模式的Anti-HBc-IgM、HBV DNA检出率亦不尽相同,但两组各模式均以145模式为最高,其次为135和15模式。低浓度组中,约70％的145、15模式分布在1．0－2．0μg/L范围内,近65％的135模式分布在2．0－5．0μg/L范围内,其他模式则多数分布在≤1．0μg/L以下。结论 高浓度的低浓度HBsAg携带者的血清学乙肝标志物表现模式在人群中具有不同的分布特征,低浓度HBsAg感染人群宜引起重视,应将包括Anti-HBc-IgG在内的乙肝标志物检测列为常规检查项目。     

血清肌红蛋白两点一步法ELISA的建立和初步临床应用

血清肌红蛋白两点一步法ＥＬＩＳＡ的建立和初步临床应用朱鼎宏，曾瑞云，郑佐娅，王红，陶义训肌红蛋白（Ｍｂ）是一种含亚铁血红素的低分子色素蛋白，心肌内含量丰富，当心肌受损时，可迅速从受损细胞释放至血液中［１］，因此检测血清Ｍｂ能协助诊断急性心肌梗塞（Ａｃ...     

简要分析标本溶血对ELISA检测血清乙肝表面抗原的影响

乙型肝炎表面抗原（HBsAg）的检测是诊断乙型肝炎的主要指标。ELISA一步法检测HBsAg,因其操作简便、灵敏度高、特异性强、实验条件要求不高,各级医院检验科普遍采用。在临床检测中,常常遇到溶血的标本。溶血对ELISA检测HBsAg的影响,各文献报道很不一致,本文就溶血标本对HBsAg结果的影响进行简要的分析。     

排溢法ELISA,一种改进的二步法标记免疫实验技术

目的:建立一种简便的血清HBsAg检测二步法标记免疫试验.方法:在既往G6 ELISA的基础上建立血清HBsAg检测排溢法ELISA,采用系列稀释实验对方的相对显色强度,敏感性,及其对Hooks效应的拮抗能力进行考核,将其用于对一组临床标本的检测,并与经典二步法及一步法ELISA进行比较.结果:在大致相同的实验条件下排溢法,二步法及一步法ELISA 三者实验信号的强度大致相当;其敏感性分别为19.2、12.6及14.5 pg/ml.当被检标本HBsAg浓度在37.5 μg/ml时一步法ELISA开始显现Hooks效应,至2 400 μg/ml时测值已接近阈值;而排溢法及经典二步法ELISA两者对Hooks效应则表现出相似的拮抗.对231例临床标本进行检测,112例高滴度阳性标本(经稀释实验证实)中出现中重度Hooks效应者一步法ELISA 17例,占15.2%,而排溢法及其二步法ELISA 则未见Hooks效应的影响.结论:在保证实验结果的前提下,排溢法ELISA在操作程度简化上与一步法相当,但可完全克服Hooks现象的干扰.     

HBsAg对树突状细胞免疫表型及CTL杀伤活性的影响

宿主的免疫反应在持续性HBV感染中起关键作用。最近有人用HBsAg及其相关蛋白治疗慢性HBV感染，取得了一定的疗效。提示HBsAg有可能作为治疗慢性持续性HBV感染的药物之一。     

ELISA检测胰岛素的进一步研究

ＥＬＩＳＡ检测胰岛素的进一步研究石国富，张洪德，王丽娟，葛永新辣根过氧化物酶（ＨＲＰ）是酶联免疫吸附法（ＥＬＩＳＡ）中应用最为广泛的标记酶，邻苯二胺（ＯＰＤ）是ＨＲＰ最为敏感的底物之一，但其最大的缺点是有致癌性［１，２］。目前国内生产的各种ＥＬＩＳＡ...     

标本久置对ELISA法检测乙型肝炎表面抗原结果的影响分析

目的：探讨标本久置对ELISA法检测乙型肝炎表面抗原的影响。方法筛选强阳性、弱阳性及阴性标本若干份,用ELISA法对同一标本进行当天和隔日检测。结果强阳性及阴性标本放置前后,乙型肝炎表面抗原检测结果相同,无明显差异,而弱阳性标本放置后,出现假阴性。结论标本久置会使乙型肝炎表面抗原的免疫活性减弱,从而遗漏乙型肝炎表面抗原弱阳性者。     

HBsAg阴性孕妇血清中HBV-DNA检测的临床意义

目的检测乙型肝炎表面抗原（HBsAg）阴性孕妇血清中HBV-DNA存在情况。方法用荧光定量PCR方法检测HBsAg阴性孕妇血清中HBV-DNA。结果检测680例HBsAg阴性孕妇血清HBV-DNA,阳性53例,阳性率7.8%。结论HBsAg阴性孕妇血液中有相当一部分人存在乙型肝炎病毒（HBV）,使用PCR法对HBsAg阴性孕妇进行血清中HBV-DNA检测筛查,有利于对HBV-DNA阳性孕妇早期进行免疫阻断,以减少宫内感染、阻断HBV母婴垂直传播有重要意义。