抑制NF-κB活性下调高糖培养的大鼠肾小球系膜细胞血管紧张素原表达水平

在体外原代培养的SD大鼠肾小球系膜细胞中,观察高糖培养条件下血管紧张素原(AGT)表达和血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)水平变化,以及吡咯烷二硫代氨基甲酸酯(PDTC)的干预作用.结果 显示高糖上调ACT mRNA(0.29±0.07对0.20±0.05,P<0.05)和蛋白(0.66±0.23对0.37±0.15,P<0.05)表达以及AngⅡ分泌[(9.85+2.08对7.50±1.51)ps/ml,P<0.05]水平,PDTC通过抑制NF-κB活性下调其水平.     

罗格列酮对高糖诱导的大鼠系膜细胞NF-κB活性及MCP-1表达的抑制作用

采用正常糖（NG）、高糖（HG）及HG＋不同浓度罗格列酮培养大鼠系膜细胞株。发现HG组单核细胞趋化蛋白1（MCP-1）mRNA的表达量明显高于NG组，20μmol／L罗格列酮可显著抑制MCP-1mRNA的表达。HG刺激系膜细胞24h可引起系膜细胞核因子κB（NF-κB）的DNA结合活性增强25倍，高糖诱导的NF-κB活化可被罗格列酮所抑制。罗格列酮可通过抑制NF-κB信号转导途径降低高糖诱导的系膜细胞MCP-1的表达。为进一步认识和评价罗格列酮在糖尿病肾病防治中的作用提供了实验依据。     

内皮素-1、NF-κB及AP-1对高糖诱导大鼠肾小球系膜细胞纤维连接蛋白表达的影响

目的探讨高糖（HG）对大鼠肾小球系膜细胞（GMC）表达纤维连接蛋白（FN）的影响及内皮素-1（ET-1）、NF-κB和AP-1在FN表达中的作用。方法建立高糖培养条件下的大鼠肾小球系膜细胞模型,在mRNA水平及蛋白水平检测不同条件下的ET-1和FN表达。结果（1）HG组与正常糖浓度（NG）组比较,HG组ET-1及FN的mRNA和蛋白表达显著增加（P〈0.01）。（2）NG组加入ET-1（5nmol/L）后,FNmRNA及蛋白表达增加（P〈0.01）,加入ET-1受体拮抗剂PD142893（10μmol/L）后,HG及ET-1诱导的FNmRNA及蛋白表达均被明显抑制（P〈0.01）。（3）给予NF-κB抑制剂PDTC（10μmol/L）后,HG及ET-1诱导的FNmRNA及蛋白表达均被明显抑制（P〈0.01）。（4）给予JNK特异性抑制剂SP600125（10μmol/L）后,HG及ET-1诱导的FNmRNA及蛋白表达均被明显抑制（P〈0.01）。结论HG增强大鼠GMC表达FN的作用通过ET-1介导,NF-κB和AP-1参与调控ET-1介导的FN表达增加。     

高糖环境对肾系膜细胞NF-κB/IκB通路的影响及其调控机制

探讨高糖对肾系膜细胞IκB-α mRNA和IKB-α、NF-κB p65蛋白表达和NF-κB p65核转位的影响及作用途径.结果发现高糖促进IκB-α蛋白降解和NF-κB p65核转位,特异性泛素-蛋白酶体阻断剂MG132可明显逆转高糖导致的IκB-α蛋白降解和NF-κB p65核转位,提示高糖可通过泛素-蛋白酶体途径导致NF-κB信号通路的活化.     

岩藻聚糖硫酸酯对高糖培养肾小球系膜细胞的影响

目的 探讨岩藻聚糖硫酸酯(FPS)对高糖培养大鼠肾小球系膜细胞(GMCs)增殖和细胞外基质(ECM)积聚的影响.方法 购自威海地区的干海带,经过水提取、层析分离制备FPS.体外培养大鼠GMCs并分为正常组、高糖损伤组、缬沙坦(Val)对照组、FPS治疗组.通过MTT法观察药物对GMCs增殖的影响,ELISA法检测TGF-β1的含量,免疫组化法检测IV-胶原(Col-Ⅳ)表达量.结果 FPS提取率为1.01%,平均分子量为83万D,总糖含量为67.03%,硫酸根的含量为38.29%.与正常对照组相比:自行制备的FPS高剂量组能够显著抑制高糖培养的大鼠GMCs的增殖(P＜0.01),抑制TGF-β1的过量分泌(P＜0.01)和Col-Ⅳ的过多表达(P＜0.01).与阳性对照组相比,其效果没有差异.结论 FPS能显著抑制GMCs增殖、TGF-β1的过量分泌和Col-Ⅳ的过多表达,对糖尿病肾病具有保护作用.     

罗格列酮对高糖诱导的系膜细胞核因子-κB活性及细胞间黏附分子1表达的影响

目的探讨罗格列酮对高糖诱导的大鼠系膜细胞表达细胞间黏附分子1(ICAM-1)的影响及其可能机制。方法采用正常糖(NG)、高糖(HG)及HG 不同浓度罗格列酮培养大鼠系膜细胞。以RT-PCR检测ICAM-1 mRNA的表达,采用ELISA检测培养细胞上清中ICAM-1蛋白的浓度。采用凝胶电泳迁移率改变法检测NF-κB的活性。结果HG组ICAM-1/GAPDH吸光度是NG组的2.9倍(P<0.01)。5μmol/L及20μmol/L罗格列酮均可显著抑制ICAM-1 mRNA的表达。HG刺激系膜细胞1 h可使NF-κB活性增强2.5倍(P<0.01),高糖诱导的NF-κB的活化可被罗格列酮(20μmol/L)所抑制(0.8±0.2vs2.5±0.3,P<0.01)。结论罗格列酮可通过抑制NF-κB信号传导途径降低高糖诱导的系膜细胞ICAM-1的表达。     

高糖和泛素蛋白酶体抑制剂MG132对大鼠肾系膜细胞IκB-a蛋白表达的影响

目的探讨泛素蛋白酶体途径对高糖刺激的肾系膜细胞IκB-a蛋白表达的影响。方法体外培养大鼠HBZY-1肾系膜细胞,高糖作为刺激因子,MG132作为干预因素。分别设正常对照组、高糖组（10,20,30mmol／L葡萄糖）、甘露醇组以及MG132加高糖（30mmol／L）组,分别作用12、24、48小时,用Western blot法测各组IκB-a蛋白的表达。结果（1）与正常对照组比较,高糖作用后IκB-a蛋白的表达呈时间、浓度依赖性下降。（2）与高糖组比较,高糖加入MG132后,IκB-a蛋白的表达下降被明显逆转。结论高糖可通过泛素蛋白酶体途径促进肾系膜细胞IκB-a蛋白泛素化降解。     

高糖对体外培养大鼠肾小球系膜细胞VEGF和PEDF表达的影响

目的观察高糖环境对肾小球系膜细胞(HBZY-1)血管内皮生长因子(VEGF)和色素上皮衍生因子(PEDF)表达的影响,进一步探讨糖尿病肾病的发生、发展机制。方法体外常规培养HBZY-1,传代后分五组培养:对照组培养液葡萄糖浓度5.6 mmol/L,高糖a、b、c、d组培养液葡萄糖浓度分别为10、15、20、30 mmol/L;分别作用24、48 h后RT-PCR法测定各组细胞VEGF和PEDF mRNA表达水平;用ELISA法测定各组细胞培养液中VEGF和PEDF蛋白含量。结果与对照组相比,高糖各组细胞VEGF mRNA及VEGF蛋白的表达均升高,PEDF mRNA及PEDF蛋白表达均降低(P<0.05);高糖各组随葡萄糖浓度升高,VEGF表达升高、PEDF表达降低,呈浓度依赖性。结论高糖可导致肾小球系膜细胞VEGF和PEDF表达失衡,可能为糖尿病肾病微血管病变及肾小球硬化发生发展的机制之一     

高糖及血管紧张素Ⅱ对大鼠肾小球系膜细胞结缔组织生长因子表达的影响

糖尿病肾病 (ＤＮ)是糖尿病常见而且严重的慢性并发症 ,高血糖和血管紧张素Ⅱ (ＡｎｇⅡ )是导致ＤＮ肾纤维化最主要的两种物质 ,它们通过共同的信号传导途径参与了肾纤维化的发生发展〔1,2〕。近年来 ,国外研究发现结缔组织生长因子 (ｃｏｎｎｅｃｔｉｖｅｔｉｓｓｕｅｇｒｏｗｔｈｆａｃｔｏｒ,ＣＴＧＦ)对肾细胞增殖、表型改变及细胞外基质 (ＥＣＭ )具有较强调控作用 ,其异常表达在ＤＮ肾纤维化进程中起了重要作用。本研究拟用高糖和ＡｎｇⅡ刺激体外培养的系膜细胞 ,测定其ＣＴＧＦｍＲＮＡ的表达情况 ,以探讨高糖和ＡｎｇⅡ对系膜细胞…     

NF-κB与细胞凋亡

NF-kB家族及其介导的细胞信号转导通路在细胞凋亡中的作用是国内外研究的热点.研究发现,NF-kB信号转导途径可以通过多种途径抑制细胞凋亡,与IAPs家族、Bcl-2家族、TRAF家族、JNK、FLIP、A20、Gadd45β、MnSOD等有很大关系,但其具体机制尚未完全清楚.通过抑制NF-kB信号转导途径的激活,促进细胞凋亡,可能成为治疗免疫、炎症、肿瘤等疾病的新途径.此外,近年的研究证明NF-kB尚具有促细胞凋亡的作用,并发现NF-kB亚单位的种类及数量在细胞凋亡中起着决定性的作用,为疾病的治疗提供了新的策略.本文就NF-kB与细胞凋亡关系的研究进展作一综述.     

高糖和泛素蛋白酶体抑制剂MG132对大鼠肾系膜细胞IκB-α蛋白表达的影响

目的 探讨泛素蛋白酶体途径对高糖刺激的肾系膜细胞IκB-α蛋白表达的影响.方法 体外培养大鼠HBZY-1肾系膜细胞,高糖作为刺激因子,MG132作为干预因素.分别设正常对照组、高糖组(10,20,30mmol/L葡萄糖)、甘露醇组以及MG132加高糖(30mmol/L)组,分别作用12、24、48小时,用Western blot法测各组IκB-α蛋白的表达.结果 (1)与正常对照组比较,高糖作用后IκB-α蛋白的表达呈时间、浓度依赖性下降.(2)与高糖组比较,高糖加入MG132后,IκB-α蛋白的表达下降被明显逆转.结论 高糖可通过泛素蛋白酶体途径促进肾系膜细胞IκB-α蛋白泛素化降解.     

洛伐他汀对系膜细胞增生及细胞外基质分泌的影响

目的：观察洛伐他汀对系膜细胞增生及细胞外基质分泌的影响,并探讨其作用的可能机制。方法：用MTT法检测细胞增生、流式细胞仪检测细胞周期,ELISA检测细胞外基质胶原Ⅳ和层粘连蛋白。结果：洛代他汀可剂量依赖性地抑制系膜细胞增生,影响细胞周期,使G0－G1期细胞增多,S期细胞减少,并能明显抑制胶原Ⅳ和层粘连蛋白分泌（P＜0．01）,而香叶基香叶基焦磷酸可阻止洛伐他汀对系膜细胞增生的抑制作用。结论：洛伐他汀可显著抑制系膜细胞增生及细胞外基质分泌,其机制可能与抑制香叶基香叶基焦磷酸产生而阻止信号传导有关。     

自拟消渴一号方对糖尿病肾病模型大鼠NF-κB和TNF-α影响的实验研究

目的初步探究自拟消渴一号方对糖尿病肾病模型大鼠肾脏保护作用的免疫炎症反应抑制机制。方法在2011年9月—2012年9月的实验研究过程中,将45只SD大鼠随机分为3组,每组15只:空白对照组(A)、中药组(B)、模型组(C)。A组不予任何处理,正常饲养,B、C两组采用高糖高脂饮食联合单侧肾切除加小剂量STZ方法复制糖尿病肾病大鼠模型成功后,分别给予自拟消渴一号方和等量生理盐水灌胃治疗,连续治疗4周后,检测各组大鼠肾脏组织中NF-κB和TNF-α的变化。与空白对照组比较,DN模型组大鼠肾脏组织中NF-κB蛋白表达及TNF-α含量显著上调(P<0.01),而自拟消渴一号方能够有效下调二者的表达,与模型组比较有统计学意义(P<0.01)。结论自拟消渴一号方对糖尿病肾病模型大鼠的肾脏具有保护作用,其作用机制可能与抑制糖尿病肾病模型大鼠的免疫炎症反应有关。     

依达拉奉对脑出血大鼠细胞凋亡及NF-κB表达的影响

目的研究依达拉奉对脑出血大鼠血肿周围脑组织细胞凋亡及核转录因子（NF—κ）表达的影响．探讨其抑制脑出血后细胞凋亡的可能机制。方法36只SD大鼠随机分为依达拉奉组、出血组和假手术组。用自体血尾状核注射法建立脑出血模型;检测丙二醛（MDA）水平,以TUNEL法及免疫组化法检测神经细胞凋亡数及NF-κB蛋白表达的变化。结果．出血组MDA水平、细胞凋亡数和NF—κB表达水平均明显高于假手术组;与出血组相比,依达拉奉组上述指标均明显下降。结论依达拉奉可抑制脑出血后血肿周围神经细胞凋亡,可能与其减轻氧化应激、减少血肿周围脑组织过度表达NF-κB有关。     

尼卡地平对大鼠肾小球系膜细胞凋亡的诱导

目的探讨尼卡地平体内对大鼠系膜细胞凋亡的诱导作用。方法分别用脱氧核糖核酸（ＤＮＡ）片断电泳、油镜观察细胞凋亡，浸条法测定蛋白尿和血尿。结果尼卡地平体内能诱导大鼠系膜细胞凋亡，同时伴轻度蛋白尿。结论尼卡地平在体内有诱导大鼠系膜细胞凋亡的作用。这可能是治疗系膜增生性肾小球肾炎的有效药物。     

亚硒酸钠对大鼠肾小球系膜细胞表达环氧化酶2的影响

分别以高葡萄糖、高胰岛素、过氧化氢和糖基化终产物孵育大鼠肾小球系膜细胞（RGMC），均可使RGMC环氧化酶（COX）-2mRNA和蛋白表达增加（均P〈0．01）；亚硒酸钠预处理后可抑制上述4种因素诱导的COX-2 mRNA和蛋白表达。亚硒酸钠可能通过抑制COX-2在RGMC的表达，从而在防治糖尿病肾病发生发展过程中发挥重要作用。     

罗格列酮对高糖诱导下大鼠肾小球系膜细胞增殖及细胞周期的影响

以大鼠肾小球系膜细胞株(HBZY-1)为靶细胞,观察不同浓度不同时间罗格列酮(RSG)对高糖培养的系膜细胞的作用,发现RSG在一定范围内以剂量和时间依赖关系抑制高糖诱导的肾小球系膜细胞增殖,阻止系膜细胞由G1期进入S期,并诱导细胞凋亡。RSG有效减轻了高糖诱导的肾小球系膜细胞的病理损伤。     

高胰岛素对人类肾小球系膜细胞的影响

有报道胰岛素可以导致大鼠肾小球系膜中纤维连接蛋白 (Ｆｎ)堆积[1] ,提示高胰岛素血症可能在糖尿病肾病 (ＤＮ)发生发展中有其作用。本研究拟建立人类肾小球系膜细胞 (ＧＭＣ)培养 ,观察高胰岛素对人类ＧＭＣ增生及Ｆｎ生成 ,ＧＭＣ内游离Ｃａ2 ([Ｃａ2 ]ｉ)水平的影响 ,以探讨ＤＮ发病机制及其防治的实验依据。1　材料和方法[2 ]1.1　ＧＭＣ培养及鉴定　取人类肾移植废弃肾的肾皮质 ,筛网法分离肾小球 ;含 10 %灭活小牛血清的ＲＰＭＩ 16 4 0培养 ,消化传代及细胞鉴定。实验中使用第 4～ 8代细胞。1.2　实验分组　按培养液中胰岛素浓度…     

黄芪多糖对肾阳虚型糖尿病大鼠肾组织NF-κB及IκB的影响

[目的]研究黄芪多糖（APS）对肾阳虚型糖尿病大鼠肾组织核因子κB（NF-κB）mRNA和细胞内抑制性蛋白κB（IκB）mRNA的影响。[方法]将纯种SD雄性大鼠随机分为4组：对照组，模型组，苯那普利治疗组，APS治疗组。实验第8周时统一处死，以RT-PCR法检测各组大鼠肾组织NF-κBmRNA和IκBmRNA表达，并测定大鼠肾重／体重，血糖（HS）、血脂及肾功能。[结果]与苯那普利相比，APS能减少大鼠肾组织NF-κBmRNA表达，增加IκBmRNA表达，并可明显降低肾重／体重、BS、血脂，改善肾功能。[结论]APS能上凋IκBmRNA表达，抑制NF-κBmRNA的过度表达，从而延缓肾阳虚型糖尿病肾病的进展。     

p38丝裂原活化蛋白激酶对HBZY-1系膜细胞株表达NF-κB和MCP-1的调控

目的 探讨p38丝裂原活化蛋白激酶(p38 mitogen-activated protein kinase, p38MAPK)与NF-κB、单核细胞趋化蛋白1(monocyte chemoattractant protein-1, MCP-1)之间的关系,从而研究p38MAPK和NF-κB、MCP-1在糖尿病肾病中的作用机制.方法 分别以高葡萄糖、高胰岛素、H2O2和糖基化终产物孵育大鼠肾小球系膜细胞株HBZY-1;先以p38MAPK特异抑制剂SB203580预处理细胞株HBZY-1,再给予上述4种因素孵育细胞株HBZY-1,观察其p38MAPK和NF-κB、MCP-1的表达.结果 高葡萄糖、高胰岛素、H2O2和糖基化终产物均可独立激活p38MAPK,使其磷酸化表达量增加,NF-κB、MCP-1表达也明显增加;SB203580预处理后,NF-κB、MCP-1表达被显著抑制.结论 p38MAPK可能通过激活NF-κB、MCP-1而诱导糖尿病时肾脏的损害,p38MAPK和NF-κB、MCP-1在糖尿病肾病的发生发展过程中可能起重要作用.