一种同时检测丙型与庚型肝炎病毒的逆转录—巢式？…

目的 庚型肝炎病毒（ＨＧＶ）与丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）同属黄病毒科，且传播途径相似，重叠感染率高，本研究旨在建立一种同时检测ＨＧＶ与ＨＣＶ感染的方法。方法 根据ＨＣＶ与ＨＧＶ的基因序列分别选取５‘－ＵＴＲ（ＨＣＶ）与ＮＳ３（ＨＧＶ）的两套引物，在同一管内进行逆转录－巢式聚合酶锭反应，并初步应用于１５３例标本。结果 该方法能同时检出ＨＧＶ与ＨＣＶ感洒，扩增片段大小与设计相符。结论 该方法简便特异，适用     

广西不同人群庚型肝炎病毒感染状况的调查

目的 了解庚型肝炎病毒（ＨＧＶ）感染在广西柳州地区不同人群中的感染状况，并比较静脉毒瘾者与健康体检者ＨＧＶ，乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）、丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）与ＨＧＶ共同感染的特点，方法 应用酶联免疫法（ＥＬＡ）检测抗－ＨＧＶ，抗－ＨＣＶ，ＨＢＶＭ（ＨＢｓＡｇ，ＨＢｓＡｂ，ＨＢｅＡｇ，ＨＢｅＡｂ，ＨＢｃＡｂ），并对抗－ＨＧＶ阳性者随机抽取２０例（１９％）进一步用逆转录套式ＰＣＲ（ＰＴ－ｎＰＣＲ）法检测     

庚型肝炎病毒的分子生物学研究进展

庚型肝炎病毒（ＧＢＶ－Ｃ／ＨＧＶ）为单股正链ＲＮＡ病毒，属黄病毒家族成员。ＧＢＶ－Ｃ／ＨＧＶ与丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）有许多相似之处，但又有其自身特点。本文对ＧＢＶ－Ｃ／ＨＧＶ的基因组结构及变异、病毒多蛋白前体的加工、感染途径与致病性及检测方法等进行了综述，     

肝病患者中庚型肝炎病毒感染的检测

目的探讨临床肝病病人中庚型肝炎病毒（ＧＢＶ－Ｃ／ＨＧＶ）感染情况及临床特点。方法应用庚型肝炎病毒基因组５’ＵＴＲ两对寡核苷酸作为引物，建立逆转录套式聚合酶链反应，检测１６９例不同肝病患者血清标本中ＧＢＶ－Ｃ／ＨＧＶＲＮＡ，并对其中１例ＰＣＲ扩增产物进行克隆及测序。结果１６９例各型肝病病人ＧＢＶ－Ｃ／ＨＧＶＲＮＡ总的检出率为９５％（１６／１６９）。在２９例有手术输血史患者中，３１０％（９／２９）ＧＢＶ－Ｃ／ＨＧＶＲＮＡ呈阳性，明显高于无手术输血史组（５％，Ｐ＜００１）。序列分析显示１株庚肝病毒５’ＵＴＲ部分基因片段与已知庚肝病毒株核苷酸同源性在８９１４％～９８９１％之间。结论ＧＢＶ－Ｃ／ＨＧＶ感染普遍存在于临床肝病患者中，病人感染ＧＢＶ－Ｃ／ＨＧＶ的临床表现未发现有特殊性，ＧＢＶ－Ｃ／ＨＧＶ可能不是非甲～戊型肝炎的主要致病因子。     

庚型肝炎病毒感染对慢性丙型肝炎的临床与病理学影响

目的 探讨庚型肝炎病毒（ＨＧＶ）感染对慢性丙型肝炎（ＣＨ－Ｃ）的临床与病理学影响。方法 应用逆转录－聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）法对５３例经肝穿活检确诊的ＣＨ－Ｃ患者血清标本进行了ＨＣＶ－ＲＮＡ检测,并将合并与未合并ＨＧＶ感染者进行了临床与病理学对比。结果 ＨＣＶ－ＲＮＡ阳性１５例（２８．３０％）。合并与未合并ＨＧＶ感染者在临床表现、肝功能等生化指标水平、ＨＣＶ－ＲＮＡ阳性率及肝脏病理损害等方面差     

广东地区肝炎患者血清中庚型肝炎病毒RNA的检测

目的了解庚型肝炎病毒（ＨＧＶ）感染在不同临床类型肝炎患者中的存在状况。方法用逆转录－聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）技术对７２１例肝炎患者血清进行了ＨＧＶＲＮＡ检测。结果发现８０例ＨＧＶＲＮＡ阳性，以非甲、乙、丙、丁或戊型肝炎中阳性率为高；慢性丙型肝炎（ＨＣＶ）和慢性乙型混合丙型肝炎（ＨＢＶ＋ＨＣＶ）次之；在慢性重型肝炎和肝硬化时较低。结论庚型肝炎病毒在广东地区现症肝炎患者中有一定程度的流行     

二重逆转录—聚合酶链反应及微孔板反向杂交法检？…

目的 为适应临床上需同时检测庚型肝炎病毒（ＨＧＶ）与丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）感染情况，建立了二重逆转录－聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）及微孔板反向杂交法。方法 根据ＨＣＶ与ＨＧＶ基因与ＨＧＶ特异探针微孔板反向杂交检测ＣＰＲ产物。结果 ＰＣＲ产物经测序，ＨＣＶ与Ｔａｋａｍｉｚａｗａ等及Ｃｈｏｏ等报道的核苷酸同源性分别为９３．１％￣９４．１％与９２．５％￣９３．７％，ＨＧＶ与Ｓｉｍｏｎｓ等、Ｌｉｎｎｅｎ等     

831名健康青年庚型肝炎病毒和人免疫缺陷病毒感染的调查

目的了解我国健康青年中庚型肝炎病毒（ＨＧＶ）和人免疫缺陷病毒的感染情况。方法采用酶联免疫法（ＥＩＡ）检测６省８３１名健康青年血清中的ＨＧＶ和ＨＩＶ抗体，对抗－ＨＧＶＩｇＧ阳性的血清再用逆转录－巢式聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）检测ＨＧＶＲＮＡ。结果发现抗－ＨＣＶＩｇＧ阳性率为２５３％（２１／８３１），２１例阳性者中ＨＧＶＲＮＡ阳性８例，两者符合率为３８１％；抗－ＨＩＶ均阴性。结论我国健康青年人群中确实存在ＨＧＶ感染。     

肝细胞癌组织中庚型肝炎病毒感染的研究

目的探讨庚型肝炎病毒（ＨＧＶ）在肝细胞癌（ＨＣＣ）组织中存在状态。方法采用抗ＨＧＶＮＳ５单克隆抗体,以免疫组织化学法检测５３例ＨＣＣ患者石蜡包埋的肝癌组织。结果ＨＣＣ组织中检出ＨＧ抗原（ＨＧＡｇ）２０例（３７７％）,在非乙非丙、乙型及丙型肝炎病毒组中,分别检出ＨＧＡｇ２例（２５％）、１６例（３９％）和２例。结论ＨＣＣ患者中ＨＧＶ感染较常见;ＨＧＶ感染似乎不是ＨＣＣ发生的高危因素。     

吸毒人群丙型和乙型肝炎病毒感染的血清流行病学研究

目的　调查广州市吸毒人群丙型肝炎病毒（ＨＣＶ） 和乙型肝炎病毒（ＨＢＶ） 的感染状况。方法　在广州市两所戒毒所４８３ 名男性吸毒人员中，用酶标记免疫（ＥＬＩＳＡ） 法，调查ＨＢＶ、ＨＣＶ感染情况，并以正常人群作对照组观察。结果　广州市吸毒人群中，ＨＣＶ、ＨＢＶ的感染率及这两种病毒的混合感染率，分别为６７－４９％ 、９０－４８ ％ 、６２－７３％ ，明显高于正常人群对照组的３－７５％ 、５５－６３ ％ 、３－７５％ 。结论　静脉吸毒是ＨＢＶ、ＨＣＶ感染的主要危险因素。广州市吸毒人群当中，存在着极高的丙型肝炎病毒和乙型肝炎病毒感染率     

血清学标志阴性的非甲～戊型肝炎的病原学研究

目的对血清学标志阴性的非甲～戊型肝炎进行病原学研究。方法用ＨＢＶＰＣＲ、ＨＣＶＲＴ－ＰＣＲ和ＨＥＶＲＴ－ＰＣＲ分别检测血清学标志阴性的非甲～戊型肝炎患者血清，并对其部分阳性产物进行克隆测序。结果８７例非甲～戊型肝炎血清ＨＢＶＤＮＡ均为阴性，９例（１０．３％）为ＨＣＶＲＮＡ阳性，部分经测序证实为ＨＣＶ１ｂ亚型；余７８例为ＨＢＶＤＮＡ和ＨＣＶＲＮＡ均阴性。该７８例中，１４例因无血清未作ＨＥＶＲＮＡ检测，余６４例中４９例（７６．６％）为ＨＥＶＲＮＡ阴性，１５例（２３．４％）为ＨＥＶＲＮＡ阳性。经序列分析显示，其中９例为典型的中国ＨＥＶ株基因序列，６例变异较大，与典型的中国株基因序列的同源性仅为８０％左右。４９例ＨＢＶＤＮＡ、ＨＣＶＲＮＡ和ＨＥＶＲＮＡ均阴性的血清中１６例（３２．６％）ＨＧＶＲＮＡ阳性。由此可见，该８７例中至少有９例为ＨＣＶ感染，１５例为ＨＥＶ感染，１６例为ＨＧＶ感染。结论对血清学标志阴性的非甲～戊型肝炎的病人应该用ＰＣＲ法进行病原学分型，以明确其诊断     

慢性乙型肝炎重叠HGV感染对HBV复制的影响

目的观察慢性乙型肝炎重叠ＨＧＶ感染对ＨＢＶ复制的影响．方法采用逆转录聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）检测患者血清ＨＢＶ－ＤＮＡ．ＨＢＶ－ＤＮＡ定量采用荧光信号引物能量转换法．以单纯慢性乙型肝炎患者作对照研究．结果２３例ＨＧＶ重叠感染的慢性乙型肝炎患者 ＨＢＶ－ＤＮＡ、ＨＢｅＡｇ和抗－ＨＢｅ的阳性率分别为５６．５％、１７．４％和６０．９％而３４例单纯慢性乙型肝炎患者三项指标的阳性率分别为９１．２％、８５．３％和１１．８％．定量分析显示,前组ＨＢＶ－ＤＮＡ量为２．０２、后组为４．１２．经统计学处理,两组各项指标均有显著性差异．结论慢性乙型肝炎重叠ＨＧＶ感染可能会抑制ＨＢＶ的复制．     

丙肝病毒(HCV)及乙肝病毒(HBV)双表达载体的构建及表达

目的 :为探索HCV/HBV高效联合基因免疫策略 ,构建具有 2套独立表达单元的HCV/HBV真核表达载体。方法 :分别将与HCV核心区基因互补的cDNA和HBV核心区基因克隆于具有 2套独立表达单元的真核表达载体pRSC的巨细胞病毒启动子和RSV启动子下游 ,称为pRSC HBV/HCV ,转染SP2 / 0细胞 ,通过免疫荧光和Western印迹法观测蛋白的表达 ,免疫Balb/c小鼠 ,用酶联免疫小鼠体液免疫应答。结果 :pRSC HBV/HCV转染SP2 / 0细胞可见HBcAg及HCV核蛋白染色阳性荧光细胞 ,SDS Page电泳显示在 14kD及 2 1kD处均可见蛋白条带 ,与HBcAg及HCV核蛋白的的理论预期值一致 ,Western印迹分析显示在 14kD及 2 1kD处可见特异性的蛋白条带。 5只免疫鼠中全部出现抗 HCV及抗 HBV抗体 ,而对照组全阴性。结论 :pRSC HBV/HCV可分别表达HBcAg及HCV核蛋白 ,免疫Balb/c小鼠后可诱导其体液免疫应答 ,为进一步开展HCV/HBV联合基因免疫奠定了实验基础。     

临床诊断为非甲～戊型肝炎患者的病原学研究

目的探讨临床诊断为非甲-戊型肝炎患者的病原学。方法 采用巢式PCR（nPCR)检测HBV、TTV、B19、和SENV DNA；用逆转录巢式PCR（RT-nPCR)检测HGV和HCV RNA。结果 60例临床诊断为非甲-戊型肝炎患者中，单独HBVDNA阳性30例（阳性率为50.0%)，HBV和TTVDNA阳性10例（16.7%)，HBV和B19DNA阳性6例（10.0%)，HCVRNA、HBV和SENVDNA阳性1例（1.7%)，单独HCVRNA阳性1例（1.7%)，HCVRNA和B19DNA阳性1例（1.7%),HGVRNA无一例阳性，单独B19DNA阳性2例（3.3%)。单独TTVDNA阳性1例（1.7%)，另8例（13.3%)上述病毒核酸均为阴性。HBV合并感染TTV或B19对其血清学生化指标无影响。结论HBV是临床诊断为非甲-戊型肝炎的主要病原，HGV、TTV、B19和SENV与非甲-戊型肝炎无关。     

我国九个地区丁型肝炎病毒感染状况及其与乙型肝炎病毒复制指标关系的研究

对１５４５例各类乙型肝炎病毒表面抗原（ＨＢｓＡｇ）阳性肝病和无症状ＨＢｓＡｇ携带者的血清进行了乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）与丁型肝炎病毒（ＨＤＶ）感染标记物的测定。结果表明，ＨＤＶ感染率为１３．０１％，其中ＨＤＡｇ和抗－ＨＤ阳性率分别为２．９１％和１０．０９％。而且在全国九个地区均有ＨＤＶ感染者存在，说明其分布是较为广泛的。同时还表现出，男性高于女性，慢性肝炎、重型肝炎及原发性肝癌高于急性肝炎和无症状ＨＢｓＡｇ携带者。提示ＨＢＶ与ＨＤＶ合并感染或重叠感染可能导致病情加重和感染的慢性化。本项研究结果还揭示，在ＨＢＶ与ＨＤＶ合并或重叠感染时，可能对ＨＢＶ的复制指标（ＨＢｅＡｇ·ＨＢＶＤＮＡ）有一定的抑制现象。     

乙型和丙型肝炎病毒感染的免疫学研究进展

世界范围内持续感染乙型肝炎病者（HBV）、丙型肝炎病毒（HCV）的患者已超过5亿。这两种病毒在病原学上有许多共同特点，但在病毒学特点上以及在慢性肝炎的免疫逃逸机制上均有着显著的差别。在早期天然免疫应答方面，HBV感染最初几周并不引起肝脏基因表达的改变，而HCV则会引起许多肝内基因表达改变。在特异性免疫应答方面，HBV和HCV感染后机体清除病毒的途径主要有特异性CTL细胞的杀伤作用、CD4^＋细胞的辅助作用、抗体的中和作用或杀伤作用。相对于HBV来说，HCV在成人更多引起慢性肝炎。     

Clinical features and treatment efficacy of peginterferon alfa plus ribavirin in chronic hepatitis C patients coinfected with hepatitis B virus

Background/Aims

Cross-sectional studies have documented that 2-10% of patients who are chronically infected with hepatitis C virus (HCV) are also positive for hepatitis B virus (HBV) surface antigen (HBsAg). Data related to HCV-HBV coinfection are lacking in Korea. This study evaluated the clinical characteristics, the treatment efficacy of peginterferon alfa plus ribavirin, and the changes induced by such treatment in HBV status in chronic hepatitis C (CHC) patients coinfected with HBV.

Methods

Eighteen (2.37%) HBsAg-positive CHC patients were selected from among the 758 subjects from the K(G)yeonggi-Incheon Peginterferon alfa and ribavirin in chronic hepatitis C Treatment (KIPECT) study, which evaluated the treatment efficacy and safety of peginterferon alfa plus ribavirin in CHC patients. Data on changes in the status of HBV infections were obtained.

Results

HCV genotype 1b was the most common (44%). The overall sustained virologic response rate was 72% in all patients, and 60% and 87.5% in genotypes 1 and 2, respectively. Two of the 18 patients were positive for HBeAg, and 15 had baseline HBV DNA level of less than 2,000 IU/mL. Two of the three whose levels exceeded this threshold showed no detectable DNA after treatment. After the completion of treatment, serum HBV DNA levels were increased in the two patients whose baseline HBV DNA levels were less than 2,000 IU/mL.

Conclusions

The prevalence of HBV coinfection in CHC patients was 2.37% and most of the patients were inactive carriers. The treatment efficacy was similar to that of HCV mono-infection. Reactivation of HBV replication was observed in some patients after CHC treatment.     

乙型肝炎病毒感染者血清中丁型肝炎病毒标志物检测分析

目的 了解丁型肝炎病毒(hepatitis delta virus,HDV)感染标志物在乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)感染者中的分布状况并分析其临床意义.方法 收集HBV感染者的临床资料和血清样本,通过酶联免疫分析法检测其血清HBV感染五项指标、HDVAg和Anti-HDV,结合临床诊断和生化指标进行分析.结果 收集HBV感染者样本462例,其中无症状携带者210例,慢性肝炎175例,急性乙肝35例,肝纤维化42例,检出HDV感染率为4.8％,男性显著高于女性,肝纤维化组的HDV感染率最高,为9.5％,其次为慢性肝炎的6.9％,45～60岁人群的HDV感染率为7.8％,显著高于其他年龄段.结论 慢性乙肝和肝纤维化病例的HDV感染显著增高,提示HDV感染与肝病的严重程度相关,建议对肝病患者开展血清HDV感染标志物检查,鉴别是否存在HDV重叠感染.