受体介导TNFα基因转移的实验研究

目的检测受体介导基因转移人肿瘤坏死因子α基因的靶向性和表达效率.方法人转铁蛋白同多聚赖氨酸共价交联,盐键合成交联蛋白和外源基因质粒的超分子复合物,对表达转铁蛋白受体的肿瘤细胞株进行β-半乳糖苷酶和人肿瘤坏死因子α基因转移.结果检测到外源基因表达;转染人肿瘤坏死因子α基因后细胞上清液检测到一过性人肿瘤坏死因子α活性升高.结论受体介导基因转移肯有良好的靶向性,但表达效率低.     

自制阳离子脂质体介导的体内外基因转移研究

目的：研究阳离子脂质体介导体内外基因转移的效率。方法：采用逆相蒸发法制备出包裹TNFα DNA的脂质体,将其与体外培养的靶细胞共育,或将其直接注射至小鼠腹腔内,检测TNFα的分泌水平。结果：TNFα基因转染NIH3T3细胞和腹腔细胞,10d后均可检测到TNFα的分泌。结论：研制的脂质体不但能将目的基因转移至体外培养的靶细胞中,还可通过腹腔内注射直接将TNFα基因转移至腹腔细胞,稳定表达TNFα。     

肿瘤坏死因子受体（TNFR）基因转移增强TNF对肿瘤细胞的杀伤作用

目的：探讨TNFR基因转移对肿瘤细胞表面TNFR表达量的影响，观察其对TNF杀伤膀胱肿瘤细胞作用的影响。方法：建立TNFR的逆转录病毒表达载体，通过转染包装细胞PA317产生完整病毒颗粒；膀胱癌BIU－87细胞经病毒感染后，检测细胞表面TNFR数量及TNF对其杀伤作用的变化。结果：TNFR基因转移前膀胱癌BIU－87细胞表面与TNF结合的位点数量平均为912个／细胞，经病毒感染后，细胞表面与TNF结合的位点数量平均为2872个／细胞（P＜0．05）；TNF对经病毒感染的BIU－87细胞的杀伤作用较未经病毒感染者有明显增强（P＜0．05）。结论：以逆转录病毒为载体的基因转移方法可以提高肿瘤细胞表面TNFR的表达量，从而增强TNF对肿瘤细胞的杀伤作用。     

TNF-α诱导MCF-7细胞转移相关基因的cDNA阵列研究

目的:近来大量的研究证明肿瘤细胞以及肿瘤微环境中的巨噬细胞等分泌的TNF-α可促进包括乳腺癌在内的多种恶性肿瘤的转移?本研究拟在基因水平上较全面的了解TNF-α(20 ng/ml)作用于乳腺癌细胞系(MCF-7)引起的转移相关基因的变化,以进一步探索TNF-α促进乳腺癌转移的机制?方法:Transwell法用于检测TNF-α作用于MCF-7细胞后引起的侵袭能力的变化;cDNA微阵列分析用来检测TNF-α作用于MCF-7细胞后转移相关基因的变化?结果:低剂量的TNF-α可提高MCF-7细胞的侵袭能力,cDNA微阵列分析显示39个转移相关基因的表达发生了明显变化,TNF-α对其中6个基因之间的调节关系目前尚无相关报道?功能分析显示大多数的基因促进MCF-7细胞的转移,另外少数基因则抑制其转移?TNF-α作用后的这些基因表达变化有一定的时间依赖特点?结论:低剂量的TNF-α可通过影响一系列转移相关基因,从而增强MCF-7细胞的侵袭能力?研究中发现的一些表达变化明显的基因值得进一步的研究?     

受体介导的基因转移系统

目前，在非病毒的基因转穆方法中，受体介导的基因转移(receptor-mediated genetransfer，RMGT)受到特别广泛的重视，近几年来对该方法的研究逐渐深入使之成为具有潜在临床应用价值的基因转移方法。本文就RMGT系统的概况作一综述。     

TNFα与2型糖尿病

肿瘤坏死因子α有许多重要的生物学功能 ,近年来研究发现 ,脂肪源性的ＴＮＦα与胰岛素抵抗的关系密切 ,可能也是 2型糖尿病胰岛素抵抗的发病机制。本文就ＴＮＦα与糖尿病的研究进展作一综述。1　ＴＮＦα及其作用人肿瘤坏死因子α(ＴＮＦα)是由 2 33个氨基酸组成、分子量为 2 6ＫＤ的蛋白质。在哺乳动物中 ,ＴＮＦα蛋白序列高度保守 ,人和小鼠的氨基酸序列有 79%同源。ＴＮＦα主要来源于激活的单核细胞、巨噬细胞。此外肥大细胞、嗜酸性细胞、嗜碱性细胞、ＮＫ细胞 ,Ｂ、Ｔ淋巴细胞也能产生。ＴＮＦα具有许多重要的生物学功能 ,它有抗…     

重组TNF－α基因逆转录病毒转移系统的构建

将人ＴＮＦ－αｃＤＮＡ功能片段０．９ｋｂ克隆于逆转录病毒载体ＰＬＪ，构建成重组逆转录病毒载体ＰＬＪ－ＴＮＦ；在磷酸钙介导下，将其导入包装细胞ψＣＲＩＰ和ψＣＲＥ中，经克隆筛选，获得了病毒滴度为１０６ＣＦＵ／ｍｌ能稳定、高效分泌含ＴＮＦ－α基因重组病毒颗粒的细胞株ＰＬＪＣ－５。     

肿瘤坏死因子受体基因转移增强TNF杀伤肿瘤细胞作用的研究

目的 :探讨肿瘤坏死因子受体 (TNFR)基因转移对肿瘤细胞表面 TNFR表达量的影响 ,进而观察其对TNF杀伤肿瘤细胞作用的影响。　方法 :建立 TNFR的逆转录病毒表达载体 ,通过转染包装细胞 PA 317产生完整病毒颗粒 ;人前列腺癌细胞株 PC- 3m和小鼠 Renca肾腺癌细胞株经病毒感染后 ,检测其细胞表面 TNFR数量及TNF在体内外对其杀伤作用的变化。　结果 :TNFR基因转移前后 PC- 3m细胞表面与 TNF结合的位点数量分别为 2 912个 /细胞和 8872个 /细胞 (P<0 .0 5 ) ,Renca细胞表面与 TNF结合的位点数分别为 783个 /细胞和 36 78个 /细胞 (P<0 .0 5 )。 TNFR基因转染后 ,TNF在裸鼠体内对 PC- 3m和 Renca的肿瘤抑制率分别增强 1.8和 2 .1倍。　结论 :以逆转录病毒为载体的基因转移方法 ,可以提高肿瘤细胞表面 TNFR的表达量 ,从而增强 TNF对肿瘤细胞的体外杀伤作用和体内抑制作用     

电脉冲介导基因转移效率的实验研究

目的　研究电脉冲介导的基因转移效率及其最佳的基因转移的电脉冲参数。方法　用微量注射器将pcD2/LacZ质粒10μg,在昆明小鼠的股四头肌注射,1～2min内在注射部位给予不同参数的电脉冲刺激(不同的电脉冲参数每组10只小鼠),然后进行β-半乳糖苷酶活性的测定或酶组织化学染色。同时设空白对照组及单纯注射组。结果　电脉冲可明显增加LacZ基因的表达,电脉冲组的β-半乳糖苷酶活性（131.6U/mg±86.5U/mg蛋白）是单纯注射组（4.9U/mg±1.0U/mg蛋白）的30倍（P<0.05）。组织化学染色结果表明电脉冲组肌肉组织中β-半乳糖苷酶蓝色颗粒的数目和染色的程度均明显高于单纯肌肉注射组。当电脉冲参数电压200V/cm,波宽40ms,脉冲次数6次和频率1Hz时,可获得最高的基因表达效率。结论　在最佳的电脉冲参数条件下,电脉冲介导的基因转移可获得较高的基因表达。     

结核性脑膜炎脑脊液TNF-α和可溶性TNF受体的动态变化

目的：了解结核性脑膜炎（简称结脑）患者脑脊液中肿瘤坏死因子（TNF－α）和可溶性肿瘤坏死因子受体（sTNFR-I和sTNFR-Ⅱ）在抗结核治疗中的变化及意义。方法：用夹心ELISA法检测24例结脑患者治疗前和其中12例在治疗后第10、20、30d的脑脊液TNF－α、sTNFR-1和sTNFR-Ⅱ含量。结果：结脑患者脑脊液中TNF－α、sTNFR-I和sTNFR-Ⅱ显著高于对照组，抗结核治疗一个月后仍维持较高水平，但是与治疗前相比sTNFR-1和sTNFR-Ⅱ水平呈明显下降，而TNF－α水平变化不明显。结论：TNF－α、sTNFR-I和sTNFR-Ⅱ与结核感染有关；sTNFR-I和sTNFR-Ⅱ对抗结核治疗的反应较敏感，其水平的动态变化可作为判断结脑病情及治疗效果的一种指标.     

肿瘤坏死因子受体(TNFR)基因转移增强TNF对肿瘤细胞的杀伤作用

目的：探讨ＴＮＦＲ基因转移对肿瘤细胞表面ＴＮＦＲ表达量的影响，观察其对ＴＮＦ杀伤膀胱肿瘤细胞作用的影响。方法：建立ＴＮＦＲ的逆转录病毒表达载体，通过转染包装细胞ＰＡ３１７产生完整病毒颗粒；膀胱癌ＢＩＵ８７细胞经病毒感染后，检测细胞表面ＴＮＦＲ数量及ＴＮＦ对其杀伤作用的变化。结果：ＴＮＦＲ基因转移前膀胱癌ＢＩＵ８７细胞表面与ＴＮＦ结合的位点数量平均为９１２个／细胞，经病毒感染后，细胞表面与ＴＮＦ结合的位点数量平均为２８７２个／细胞（Ｐ＜０．０５）；ＴＮＦ对经病毒感染的ＢＩＵ８７细胞的杀伤作用较未经病毒感染者有明显增强（Ｐ＜０．０５）。结论：以逆转录病毒为载体的基因转移方法可以提高肿瘤细胞表面ＴＮＦＲ的表达量，从而增强ＴＮＦ对肿瘤细胞的杀伤作用。     

肿瘤坏死因子α基因转染人脑胶质瘤浸润淋巴细胞的实验研究

采用脂质体转染技术将能表达肿瘤坏死因子α（ＴＮＦ－α）基因的重组逆转录病毒质粒ｐＬ（ＴＮＦ－α）ＳＮ导入病毒包装细胞ＰＡ３１７，在细胞培养上清液中得到重组病毒，滴度为１．４×１０９ＣＦＵ／Ｌ。将此病毒上清液感染人脑胶质瘤浸润淋巴细胞（ＴＩＬ），用Ｇ４１８筛选出能表达标记基因ＮｅｏＲ的阳性克隆，ＥＬＩＳＡ法测得ＮｅｏＲ阳性ＴＩＬ培养上清液中存在ＴＮＦ－α，可达５３０ｎｇ／Ｌ，Ｌ９２９依赖细胞法并测出上清液中有ＴＮＦ－α生物学活性。结果表明，我们构建的重组逆转录病毒可介导ＴＮＦ－α基因在人脑胶质瘤ＴＩＬ中的表达     

阿片受体拮抗剂在TNF－α所致体温升高中的作用

为探索细胞介素ＴＮＦ－α升体温效应与下丘脑前部、视前区（ＰＯＡＨ）中的阿片受体的关系。应用脑神经核团微量注射方法给自由状态下的雄性ＳＤ大鼠ＰＯＡＨ区微量注射ＴＮＦ－α致热源。给药前３０ｍｉｎ分别用通常阿片受体拮抗剂Ｎａｌ（１０～２０μｇ）和特异性阿片受体μ、δ和κ的拮抗剂ＣＴＡＰ（１．０～２．５μｇ）、ＮＴＩ（０．２５～０．５μｇ）和ｎｏｒ－ＢＮＩ（０．１～３μｇ）对ＰＯＡＨ做预处理。结果：单独给ＴＮＦ－α可致剂量相关的体温升高△Ｔ（１℃～１．４℃）；经Ｎａｌ１０μｇ，ＣＴＡＰ１．０μｇ和ＮＴＩ０．５μｇ处理后使ＴＮＦ－α的升体温效应减弱；用Ｎａｌ２０μｇ，ＣＴＡＰ２．５μｇ和ＮＴＩ０．２５μｇ处理后可完全阻断ＴＮＦ－α所致的体温升高；ｎｏｒ－ＢＮＩ（０．１～３μｇ）对ＴＮＦ－α的升体温效应无影响。     

肿瘤坏死因子α基因多态性与矽肺遗传易感性的研究

目的探讨肿瘤坏死因子α基因(tumor necrosis factor-α,TNF-α)启动子区-308和-238位点G→A的碱基突变与中国西南地区汉族人群矽肺遗传易感性的相关性.方法分别选择在职的75例矽肺患者和137名矽尘接触者,140例高龄矽肺患者和135名高龄正常人为研究对象.采集外周静脉血,应用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性分析和测序检测其TNF-α基因多态位点的变化.结果 75例在职矽肺组中TNF-α -308A、-238A的分布频率显著高于矽尘接触组(P<0.01),其中Ⅰ期矽肺患者-308A的分布频率与矽尘接触组差异无统计学意义(P>0.01),而Ⅱ期、Ⅲ期矽肺患者-308A、-238A的分布频率均远高于矽尘接触组(P<0.01).调整混杂因素后,Logistic回归分析发现,矽肺组及各亚组和正常矽尘接触组-308A、-238A的分布频率差异均有统计学意义(P<0.01).而140例高龄矽肺患者TNF-α -308A的分布频率远低于正常对照组(P<0.001).结论 TNF-α -308及-238位点基因G→A的碱基突变与中国西南地区汉族人矽肺的发生及其严重程度有关,TNF2可能影响矽肺患者的转归和存活.     

早期流产患者血清TNFα的变化及意义

目的　探讨肿瘤坏死因子α(TNF α)在早期流产中的作用。方法　采用ELISA双抗体夹心法测定 35例早期流产患者血清TNF α浓度。结果　早期流产患者血清TNF α显著高于正常非孕妇女及正常怀孕妇女 ,而且难免流产组明显高于先兆流产组。结论　提示血清TNF -α浓度升高可作为早期流产的活动性预测指标     

肿瘤坏死因子α，β基因多态性与多发性硬化关系的研究

目的：研究肿瘤坏死因子α（TNF-α）-308G/A多态性、肿瘤坏死因子β（TNF-β）＋252A/G多态性与多发性硬化症（MS）的相关性.方法：采用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性（PCR-RFLP）对62例MS患者和60名无血缘关系的健康人TNF-α基因-308G/A和TNF-β基因＋252A/G多态性进行分析,并对MS组患者进行临床EDSS评分.结果：TNF-α-308G/A各基因型频率和等位基因频率在MS组和正常对照组之间差异无统计学意义.TNF-β1/1基因型频率较对照组明显升高（P〈0.05）,TNF-β1等位基因频率较对照组明显升高（P〈0.01）.TNF-β1/1,1/2,2/2三种基因型中,EDSS评分、首次发病年龄、病程、发病次数相比较,差异均无统计学意义.结论：江苏省汉族人群中,TNF-α-308G/A基因多态性与MS无关.TNF-β1基因多态性与MS有关,但和EDSS评分、首次发病年龄、病程、发病次数无关.     

转染TNFα基因对胶质瘤细胞致瘤性的影响

目的 研究转染肿瘤坏死因子α（ＴＮＦα）基因的胶质瘤的致瘤性。方法 运用ＭｏＭＬＶ逆转录病毒载体,将ＴＮＦα基因转导至人胶质瘤细胞ＳＨＧ－４４,用Ｇ４１８筛选出阳性细胞克隆,以细胞培养检测细胞生长抑制,以裸鼠接种研究其致瘤性。结果 转染细胞培养上清液中ＴＮＦα含量分别为（５１９８．７±３７５７．４）和（３２１７．４±１１８０．６）ｐｇ／ｍｌ（Ｐ〈０．０５）,其生物活性达３２０．０ｕ／ｍｌ。运用ＲＴ     

TNFα-基因多态性与银屑病易感性研究

目的探讨TNF-α基因多态性与南方汉族人寻常型银屑病的相关性。方法采用PCR-RDB方法,检测南方汉族人Ⅰ型银屑病(60例)、Ⅱ型银屑病(40例)及正常对照(100例)TNF-ɑ多态性。结果南方汉族人Ⅰ型银屑病患者携带TNFα-238G/A基因型频率较健康组明显增高(OR=2.56,P<0.05);而Ⅱ型银屑病患者携带该基因型频率则与正常对照组差异无统计学意义(OR=0.83,P>0.05)。且南方汉族人Ⅰ型、Ⅱ型银屑病携带TNFɑ-308基因型频率与正常对照组差异无统计学意义(OR<1,P>0.05)。结论 TNFɑ-238基因的多态性与南方汉族人Ⅰ型银屑病相关,可能是易感因子之一,TNFα-308基因的多态性在银屑病发病中不起主要作用。     

ASGP受体介导的体内基因转移

我们针对肝细胞特异的ＡＳＧＰ（去唾液酸糖蛋白）受体，构建了一种具有肝细胞特异导向性的基因转移载体系统，该载体包括两种共价结合的功能成分：一种为ＡＳＧＰ，作为配体，与肝细胞表面特异的ＡＳＧＰ受体结合；另一种为多聚左旋赖氨酸（ｐｏｌｙ－Ｌ－ｌｙｓｉｎｅ），与ＤＮＡ以强静电作用相结合。小鼠尾静脉注射３２Ｐ－ＤＮＡ－ｐｏｌｙ－Ｌ－ｌｙｓｉｎｅ－ＡＳＯＲ（去唾液酸ａｌ酸性糖蛋白）或等量的３２Ｐ－ＤＮＡ、ＡＳＯＲ、ｐｏｌｙ－ＤＬ－ｌｙｓｉｎｅ单体混合物，２０小时后，小鼠肝、脾、肾各组织的放射性计数结果表明该载体系统具有较强的肝组织特异性。     

外源性TNF—α基因修饰口腔鳞癌DNL的实验研究

采用缺陷型逆转录病毒转导人ＴＮＦ－α基因至口腔癌ＤＮＬ，并应用ＰＣＲ技术，ＴＮＦ－α活性检测技术，Ｇ４１８筛选试验ＤＮＬ中外源基因及其上清液中的ＮＴＦ－α活性进行了检测。