PPARɑ激动剂抑制脂多糖诱导的单核细胞组织因子表达和促凝血活性

目的研究过氧化物酶体增殖物激活受体α（PPARα）激动剂（非诺贝特）对细菌脂多糖（LPS）诱导的单核细胞株THP-1细胞的组织因子（TF）表达和促凝血活性（PCA）的影响。方法用非诺贝特预处理THP-1细胞，分别用流式细胞术（FCM）和改良组织因子凝血时间法（TiFaCT）检测LPS刺激下THP-1细胞的TF蛋白表达水平和TF-PCA。结果非诺贝特抑制LPS诱导下THP-1细胞的TF蛋白表达上调，并以浓度依赖的方式抑制LPS诱导下的TF-PCA增加（F=62．79，P〈0．05）。50μmol／L和100μmol／L浓度的非诺贝特分别使TF-PCA下降到LPS组的29％和25％。结论PPARα激动剂抑制LPS诱导的单核细胞TF蛋白表达和TF-PCA，这可能是PPARα激动剂减少动脉粥样硬化血栓形成并发症的机制之一，并在血栓性疾病的防治中具有潜在的临床价值。     

PPARγ促进miR-16表达抑制脓毒症炎症反应的作用研究

目的 探讨PPARγ上调miR-16的机制及其抑制脓毒症炎症反应的作用.方法 经Real time RT-PCR检测脓毒症患者和健康者的外周血单核细胞PPARγ和miR-16的表达,分析其相关性;分别用PPARγ激动剂RGZ、PPAR γsiRNA或miR-16抑制剂(antagomir-16)处理THP-1和RAW246.7,经real time RT-PCR和Western blot检测miR-16及其靶基因IKKα的表达;细胞转染含miR-16启动子的报告基因质粒,经PPARγ激动剂RGZ或拮抗剂GW9662处理后,检测细胞报告基因活性;细胞经PPAR γ激动剂RGZ处理,再经LPS处理,ELISA检测炎症因子TNFα和IL-6的表达;LPS诱导的脓毒症小鼠经PPAR γ激动剂RGZ,或经antagomir-16预处理后,再经PPARγ激动剂RGZ处理小鼠,real time RT-PCR检测小鼠外周血单核细胞中miR-16的表达,ELISA检测血清炎症因子TNFα和IL-6的表达.结果 脓毒症患者外周血单核细胞中PPARγ与miR-16的表达均降低且二者的表达呈显著负相关(P＜0.05);PPARγ通过促进miR-16的启动子活性上调miR-16的表达,进而抑制miR-16靶分子IKKα的表达(P＜0.05);PPAR γ上调miR-16后显著抑制炎症细胞产生TNFα和IL-6(P＜0.05);PPARγ上调miR-16抑制脓毒症小鼠血清TNFα和IL-6的表达(P＜0.05).结论 激动剂活化的PPARγ上调miR-16进而抑制细胞炎症因子表达及脓毒症小鼠炎症反应.     

非诺贝特对培养的兔脂肪细胞表达凝血和纤溶因子的影响

目的探讨非诺贝特对培养的兔脂肪细胞表达组织因子(TF)和纤溶酶原激活物抑制剂1(PAI-1)的影响.方法取正常兔脂肪组织分离培养脂肪细胞,以不同浓度(分别为0,1,10和100μmol/L)非诺贝特孵育兔脂肪细胞24 h后收集细胞.RT-PCR测定脂肪细胞TF和PAI-1 mRNA表达.用ELISA方法测定TF和PAI-1浓度.结果不同浓度非诺贝特均可抑制兔脂肪组织细胞TF和PAI-1的表达和蛋白产生,其抑制作用呈浓度依赖性增强.在非诺贝特10μmol/L培养时兔脂肪细胞TF和PAI-1 mRNA分别为(0.504±0.016)和(1.500±0.096),明显低于对照[分别为(0.579±0.018)和(1.607±0.063),均P＜0.01].在非诺贝特100μmol/L培养时兔脂肪细胞TF和PAI-1 mRNA分别为(0.451±0.023)和(1.269±0.084),与对照比显著降低(均P＜0.001).结论非诺贝特能抑制兔脂肪细胞TF和PAI-1 mRNA和蛋白的表达,提示非诺贝特可能具有独立于降脂作用外的抗血栓作用.     

非诺贝特对新生大鼠体外肥大心肌细胞的影响

目的：研究过氧化物酶体增殖物活化型受体α（PPARα）激活物非诺贝特对大鼠体外心肌细胞病理肥大的影响。方法：新生大鼠原代心肌细胞培养后，用不同时间、不同浓度的PPARα配体非诺贝特预处理细胞，然后以血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）诱导其肥大。采用软件分析细胞面积，以RT-PCR法检测肥大心肌细胞α、一肌球蛋白重链（α-MHC、β-MHC）及PPARαmRNA表达的影响，单四唑（MTT）比色法测定非诺贝特对AngⅡ处理细胞活力的干预作用。结果：非诺贝特预处理24h可逆转AngⅡ诱导的心肌细胞肥大，α/β-MHC mRNA表达比值降低及细胞活力的改变。同时增加PPARα mRNA的表达，并呈一定剂量依赖性；而非诺贝特和AngⅡ几乎同时处理细胞时，则无明显效应。结论：PPARα参与心肌细胞肥大过程，长期慢性非诺贝特预处理可能对心肌有保护效应。     

非诺贝特对氧化型低密度脂蛋白诱导的脂肪细胞肿瘤坏死因子-α分泌的影响

目的 探讨调脂药物非诺贝特对兔脂肪细胞分泌肿瘤坏死因子-α（TNF-α）的影响及可能机制。方法 取新西兰兔皮下脂肪组织行脂肪细胞原代培养，分别给予不同浓度的氧化型低密度脂蛋白（OxLDL）及非诺贝特刺激。采用酶联免疫吸附法检测脂肪细胞培养液中TNF-α蛋白水平，半定量逆转录多聚酶链式反应测定脂肪细胞TNF-α和PPAR仅mRNA的表达。结果 较低剂量的OxLDL刺激脂肪细胞TNF-α分泌，呈剂量依赖性；不同浓度的非诺贝特呈剂量依赖性降低OxLDL诱导的脂肪细胞TNF-α分泌及mRANA表达，而相应的PPAR仅mRANA的表达则无显著变化。结论 非诺贝特可显著抑制OxLDL诱导的免脂肪细胞TNF-α分泌，这一作用可能有利于胰岛素抵抗的改善。     

菲诺贝特对高血压大鼠血管内皮收缩因子分泌的影响及其作用机制

目的观察过氧化物酶增殖活化受体α(PPARα)激动剂菲诺贝特对高血压大鼠血管内皮收缩因子分泌的影响,探讨其作用机制。方法采用血管环收缩实验观察用0.1、1.0、10.0μmol/L菲诺贝特及10.0μmol/L菲诺贝特与PPARα拮抗剂MK866和PPARγ拮抗剂GW9662孵育1 h后SHR大鼠血管张力的变化情况,并与WKY大鼠进行比较;酶联免疫吸附试验(ELISA)测定血管内皮收缩因子前列环素(PGF)1α、2α和血栓素B2(TXB2)的分泌情况;Western blot检测COX-1蛋白的表达情况。结果 10.0μmol/L菲诺贝特可以明显降低SHR大鼠的血管收缩能力,与对照组相比差异有统计学意义(P=0.013);PPARα拮抗剂MK866可以明显提高10.0μmol/L菲诺贝特孵育SHR大鼠的血管收缩能力(P=0.021),PPARγ拮抗剂GW9662对10.0μmol/L菲诺贝特孵育SHR大鼠的血管收缩能力没有显著影响(P=0.071)。与对照组相比,10 mmol/L菲诺贝特组SHR大鼠离体主动脉释放的PGF1α(P=0.014)、2α(P=0.023)和TXB2(P=0.017)水平明显降低。在血管内皮存在的前提下,菲诺贝特处理组SHR大鼠的COX-1表达较未给予菲诺贝特处理的SHR大鼠明显降低(P=0.027)。结论菲诺贝特可以减少高血压大鼠血管内皮收缩因子的分泌,其可能是通过影响内皮对COX-1的表达来实现的。     

脂多糖对人单核细胞株THP-1细胞HIF-1α及其靶基因GLUT-1表达的影响

目的研究脂多糖(LPS)对人单核细胞株THP-1细胞低氧诱导因子-1α(HIF-1α)及其靶基因葡萄糖转运载体-1(GLUT-1)表达的影响。方法以1μg/mL LPS分别处理体外常规培养的THP-1细胞0、2、4、6、8 h。采用Western blotting检测THP-1细胞HIF-1α蛋白表达,RT-PCR技术检测HIF-1αmRNA与GLUT-1 mRNA表达。以不同浓度的LPS(0、0.01、0.1、1μg/mL)分别刺激THP-1细胞6 h,Western blotting检测HIF-1α蛋白表达。结果1μg/mL LPS作用2 h时,THP-1细胞的HIF-1α蛋白表达开始增加,4 h时显著增加(P<0.05),6~8 h时达高峰(P<0.01)。0.01μg/mL LPS刺激6 h,THP-1细胞的HIF-1α蛋白表达较对照组明显升高(P<0.05);当0.1μg/mL LPS和1μg/mL LPS刺激6 h时,HIF-1α蛋白表达更高,与对照组相比差异有高度统计学意义(P<0.01)。提示LPS能够诱导THP-1细胞内HIF-1α蛋白表达,并且呈时间和浓度依赖性。1μg/mL LPS作用2、4、6、8 h均能上调THP-1细胞HIF-1α与GLUT-1 mRNA水平(P<0.01),且随时间的延长表达逐渐增加。结论LPS能够促进人单核细胞株THP-1细胞HIF-1α及其靶基因GLUT-1的表达。     

非诺贝特对心脏成纤维细胞胶原合成的影响及作用机制

目的过氧化物酶增殖物激活受体α(peroxisome proliferator-activated receptor-α,PPARα)具有心血管保护作用,但其对心肌纤维化的影响及作用机制尚不清楚。文中探讨PPARα激动剂非诺贝特(Fenofibrate)对糜酶诱导的心脏成纤维细胞(cardiac fibroblasts,CF)胶原合成的影响及细胞内信号转导机制。方法用胰酶消化法分离、培养新生SD大鼠的CF,采用RT-PCR检测Ⅰ、Ⅲ型胶原mRNA的表达水平,Western blot检测转化生长因子β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)、p-Smad2/3及Smad7的蛋白表达水平。结果①非诺贝特浓度依赖性地抑制糜酶诱导的CF中Ⅰ、Ⅲ型胶原mRNA表达,其中50和100μmol/L组Ⅰ、Ⅲ型胶原mRNA表达水平均较糜酶组显著减少(P<0.01)。②不同浓度的非诺贝特预处理组CF的TGF-β1蛋白表达水平呈浓度依赖性减少,其中50和100μmol/L组均较糜酶组明显减少(P<0.05,P<0.01)。③不同浓度的非诺贝特预处理后,p-Smad2/3蛋白表达水平呈递减趋势,...     

辛伐他汀对脂多糖诱导人THP-1单核细胞MCP-1表达与NF—κB活化的影响及机制

目的 通过研究辛伐他汀对脂多糖(LPS)诱导人THP-1单核细胞单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)表达与NF-κB活化的影响,探讨辛伐他汀调控炎症状态下单核细胞MCP-1表达与NF-κB活化的机制.方法 体外培养人THP-1单核细胞,分为对照组、LPS组、辛伐他汀低、中、高浓度组,辛伐他汀3组加入不同浓度(1、5、10 μmol/L)辛伐他汀预孵2h与LPS组均加入LPS刺激24 h.应用Western blot检测各组细胞质蛋白IκBα、NF-κB p65、MCP-1水平与各组细胞核蛋白NF-κB P65水平,ELISA检测各组细胞培养上清MCP-1水平.结果 辛伐他汀呈浓度依赖性抑制LPS诱导人THP-1单核细胞胞质蛋白与培养上清MCP-1增加;辛伐他汀呈浓度依赖性抑制LPS所致人THP-1单核细胞胞质蛋白IκBα与NF-κB P65降低及核蛋白NF-κB P65增加.结论 辛伐他汀抑制LPS诱导人THP-1单核细胞MCP-1表达可能与其抑制NF-κB活化有关;而抑制NF-κB活化可能与其抑制IκBα降解有关.     

川芎嗪对脂多糖诱导的单核细胞组织因子表达的抑制作用

研究川芎嗪对内毒素脂多糖(LPS)诱导单核细胞组织因子表达的影响,为川芎嗪防治血栓性疾病提供实验依据。采用新鲜分离的大鼠外周血单核细胞经过与LPS及川芎嗪共培养一定时间后,运用改良发色底物法测定组织因子的促凝活性,并运用RT-PCR技术检测组织因子mRNA的变化。实验发现,LPS（100 ng/mL, 5 h）能显著诱导单核细胞组织因子促凝活性的增强,川芎嗪（0.01～100 μmol/L）能明显抑制LPS诱导的TF促凝活性的增强,其IC₅₀约为0.29 μmol/L。LPS（100 ng/mL）作用2 h后能显著增加组织因子mRNA的表达,川芎嗪（10μmol/L）能显著抑制LPS诱导的组织因子mRNA的表达。实验结果表明,川芎嗪可显著抑制LPS诱导的单核细胞TF促凝活性及其mRNA的表达。     

黄芩苷对脂多糖诱导的人单核细胞THP-1的炎症反应的作用

目的 探讨黄芩苷(baicalin)对脂多糖(lipopolysaccharide, LPS)诱导的人单核细胞THP-1的炎症反应的作用。 方法 利用LPS建立人单核细胞THP-1的炎症模型,实时荧光定量聚合酶链式反应(real-time quantitatFive polymerase chain reaction, RT-qPCR)方法检测白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)、IL-6、IL-8、粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(granulocyte-macrophage colony-stimulating factor,GM-CSF)和肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)的相对表达,确定最优的LPS刺激浓度。乳酸脱氢酶检测试剂盒检测黄芩苷的细胞毒性,优选其最佳使用浓度范围。对LPS诱导的人单核细胞THP-1炎症模型予以不同浓度的黄芩苷预处理,利用RT-qPCR法检测黄芩苷对LPS诱导的人单核细胞THP-1的IL-1β、IL-6、IL-8、GM-CSF和TNF-α的表达升高的影响。 结果 与对照组相比,1 μg/mL的LPS处理人单核细胞THP-1 24 h后均可显著引起IL-1β、IL-6、IL-8、GM-CSF和TNF-α的表达升高(P<0.05),黄芩苷在浓度为10、30、100 μmol/L时处理人单核细胞THP-1 24 h和48 h,无明显细胞毒性。30 μmol/L和100 μmol/L的黄芩苷可降低LPS诱导的人单核细胞THP-1的IL-1β、IL-6、IL-8、GM-CSF和TNF-α的表达升高。 结论 黄芩苷可显著抑制LPS诱导的人单核细胞THP-1的炎症反应。     

非诺贝特对TNF-α诱导的人脐静脉内皮细胞CD40表达和基质金属蛋白酶活性的抑制作用

目的研究非诺贝特对肿瘤坏死因子-α(TNF-α)诱导的人脐静脉内皮细胞(HUVECs)CD40表达和基质金属蛋白酶(MMP)活性的作用。方法应用RT-PCR和流式细胞仪分别检测非诺贝特对TNF-α诱导的HUVECs的CD40mRNA和细胞表面CD40表达的影响;用明胶酶谱法测定TNF-α对HUVECs的MMP-2、MMP-9活性的影响以及非诺贝特对它们的作用。结果非诺贝特在5×10-5,1×10-4和2×10-4mol/L的浓度范围内能显著降低CD40mRNA和细胞表面CD40的表达(P<0.01),以1×10-4mol/L的非诺贝特的效果最为明显;浓度为2×10-4mol/L时,非诺贝特并没有进一步降低CD40mRNA和细胞表面CD40的表达。非诺贝特能抑制TNF-α诱导的HUVECs中MMP-2和MMP-9活性的增加。结论非诺贝特能降低TNF-α诱导的HUVECs的CD40表达,并且能抑制TNF-α诱导的HUVECs中MMP-2和MMP-9活性的增加。     

和厚朴酚抑制内毒素诱导的人肾小球系膜细胞炎症因子表达的研究

目的：观察和厚朴酚（HNK）对内毒素（LPS）诱导人肾小球系膜细胞（HRMCs）炎症反应的抑制作用及其分子机制研究。方法：以MTS法检测和厚朴酚（0～160μmol/L）对人肾小球系膜细胞的毒性作用,确定合适的药物实验浓度。将系膜细胞与LPS（1μg/ml）及不同浓度的和厚朴酚（0～20μmol/L）共同培养24h后收集培养上清液和细胞,并提取细胞蛋白。ELISA法检测各组培养上清液中IL-1β、TNF-α、IL-18及TGF-β1的表达水平,免疫印迹Western blot法检测细胞NF-κB p65,IKK-α/β及IKB-α磷酸化、非磷酸化蛋白表达水平,探讨和厚朴酚的抗炎作用机制。结果：20μmol/L及以下的和厚朴酚浓度对系膜细胞无明显毒性作用,但40μmol/L及以上的浓度明显降低系膜细胞的增殖活力。LPS刺激可显著诱导系膜细胞炎症因子IL-1β、TNF-α、IL-18及TGF-β1的产生。和厚朴酚（0～20μmol/L）剂量依赖性地抑制LPS诱导的炎症因子的表达。免疫印迹结果显示,和厚朴酚可显著抑制LPS诱导的系膜细胞NF-κB p65,IKK-α/β及IKB-α等信号分子蛋白磷酸化水平。结论：和厚朴酚能有效抑制LPS诱导的人肾小球系膜细胞炎性细胞因子的表达,其机制部分通过抑制细胞NF-κB p65、IKK-α/β及IKB-α等信号分子的磷酸化水平。     

非诺贝特对LPC诱导脐静脉内皮细胞增殖、凋亡及eNOS基因表达的影响

目的：探讨非诺贝特对LPC诱导的脐静脉内皮细胞增殖、凋亡及内皮型一氧化氮合酶（eNOS）基因表达的影响。方法：体外培养人脐静脉内皮细胞（HUVECs），根据非诺贝特不同浓度分为正常对照组、LPC组、低浓度非诺贝特（10μmol／L）组、中浓度非诺贝特（50μmol／L）组、高浓度非诺贝特（100μmol／L）组，根据非诺贝特不同干预时间分为正常对照组、LPC组、非诺贝特（50μmol／L）干预6h组、12h组、24h组、48h组进行实验。分别观测不同浓度及不同时间非诺贝特内皮细胞增殖、凋亡、NO浓度及eNOS mRNA表达的变化。结果：与正常对照组比较，LPC抑制内皮细胞增殖，促进细胞凋亡，并使HUVECs eNOS mRNA表达降低，NO合成减少。非诺贝特可干预LPC对内皮细胞的作用，使内皮细胞增殖增强，细胞凋亡减少，eNOS mRNA表达升高，NO合成增加，且其作用呈时间-效应、浓度-效应依赖关系。结论：非诺贝特可改善LPC对HUVECs的影响，使内皮细胞增殖增强，凋亡减少，eNOS mRNA表达升高，NO合成增加，从而起到抗动脉硬化作用。     

脂多糖对人单核细胞株THP-1细胞HIF-1α及其靶基因GLUT-1表达的影响

目的 研究脂多糖(LPS)对人单核细胞株THP-1细胞低氧诱导因子-1α(HIF-1α)及其靶基因葡萄糖转运载体-1(GLUT-1)表达的影响.方法 以1 μg/mL LPS分别处理体外常规培养的THP-1细胞0、2、4、6、8 h.采用Western blotting检测THP-1细胞HIF-1α蛋白表达,RT-PCR技术检测HIF-1α mRNA与GLUT-1 mRNA表达.以不同浓度的LPS(0、0.01、0.1、1 μg/mL)分别刺激THP-1细胞6 h,Western blotting检测HIF-1α蛋白表达.结果 1 μg/mL LPS作用2 h时,THP-1细胞的HIF-1α蛋白表达开始增加,4 h时显著增加(P＜0.05),6～8 h时达高峰(P＜0.01).0.01 μg/mL LPS刺激6 h,THP-1细胞的HIF-1α蛋白表达较对照组明显升高(P＜0.05);当0.1 μg/mL LPS和1 μg/mL LPS刺激6 h时,HIF-1α蛋白表达更高,与对照组相比差异有高度统计学意义(P＜0.01).提示LPS能够诱导THP-1细胞内HIF-1α蛋白表达,并且呈时间和浓度依赖性.1 μg/mL LPS作用2、4、6、8 h均能上调THP-1细胞HIF-1α与GLUT-1 mRNA水平(P＜0.01),且随时间的延长表达逐渐增加.结论 LPS能够促进人单核细胞株THP-1细胞HIF-1α及其靶基因GLUT-1的表达.     

非诺贝特对自发性高血压大鼠心肌重构及NF-κB表达的影响

探讨过氧化物酶体增殖物激活型受体α(peroxisome proliferator-activated receptor α，PPARα)激动剂非诺贝特对自发性高血压大鼠心肌组织核因子κB (nuclear factor kappa B, NF-κB)表达的影响及对心肌重构的干预作用。方法:将22只8周龄自发性高血压大鼠（SHR）随机分为SHR组（10只）及非诺贝特组（12只），同周龄Wistar-kyoto(WKY)大鼠10只作为正常对照。用药组给予非诺贝特60mg/（kg·d）灌胃8周。实验前后进行超声心动图检查，实验末处死动物进行组织学检查，实时定量逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）检测心肌NF-κB mRNA表达。结果:实验结束后，SHR组与WKY组相比室壁厚度、左室/体重比值显著增加(P＜0.05)，非诺贝特组与SHR组相比明显降低(P＜0.05); SHR组与WKY组相比大鼠心肌NF-κB mRNA表达水平明显升高(P＜0.05)，非诺贝特组与SHR组相比明显降低(P＜0.05);免疫组化显示,SHR组NF-κB在心肌组织分布广且呈强阳性表达,而非诺贝特组NF-κB着色弱,分布局限。结论:PPARα激动剂非诺贝特可通过抑制NF-κB表达来干预自发性高血压大鼠心肌重构的发生发展。     

NF-κB在炎症介质诱导的大鼠脑微血栓形成分子发病机制中的作用△

目的以脂多糖（LPS）诱导下高表达组织因子（tissue factor，TF）的大鼠脑微血管内皮细胞（BMECs）为大鼠脑微血栓形成的细胞模型，探讨核因子kB（NF-kB）在炎症介质导致的脑微血栓形成中的作用。方法制备大鼠脑微血管内皮细胞培养模型，分别用LPS刺激1／4、1／2、1、2、4、16h，以NF-kB特异性抑制剂PDTC（pyrrilidine dithiocarbam-ate）预处理组和空白对照组作为对照，采用流式细胞术特异性检测经BMECs膜表面TF定位表达丰度的变化，同时检测胞浆中TF的mRNA水平的变化，并进行计算机定量分析。结果TF在BMECs细胞中的表达与LPS作用呈现时间依赖关系，10μg／ml LPS刺激1／2h时TF表达开始升高，1h时达到最高值；100μmol/L PDTC预处理的BMECs在LPS刺激下，TF表达水平不升高。结论LPS可以显著诱导BMECs中TF的表达，NF-kB是LPS诱导的BMECs TF表达的关键性转录调控分子，是炎症介质诱导的脑血栓形成发病分子机制中的重要因素。     

小檗碱抑制组织因子活性和静脉血栓形成的实验研究

目的 研究小檗碱体内外对抑制组织因子（tissue factor,TF）活性和静脉血栓形成的影响。方法 采用肿瘤坏死因子-α（TNF-α）活化人单核细胞株THP-1细胞模型,应用发色底物法测定TF的促凝活性,Western blotting检测TF蛋白表达,考察小檗碱体外对TF的作用;采用下腔静脉结扎致小鼠血栓模型,考察小檗碱体内给药对血浆TF活性及血栓形成的影响。结果 TNF-α（25 ng/mL）作用5 h能明显诱导THP-1细胞TF表达和活性增强,小檗碱（10～1 000 nmol/L）明显抑制TNF-α诱导的TF蛋白表达和促凝活性的增强,其IC₅₀约25.71 nmol/L;阳性药姜黄素1 000 nmol/L也具有明显抑制作用。小檗碱（1、10、100 mg/kg）单次ig给药,显著或非常显著降低下腔静脉结扎6 h致血栓模型小鼠升高的血浆TF促凝活性,并可明显减少血栓干、湿质量,阳性药华法林钠片1 mg/kg也有明显抑制作用。结论 小檗碱体内外给药均显著降低TF促凝活性及其蛋白表达,并可抑制TF相关的静脉血栓形成。     

NF-kB在炎症介质诱导的大鼠脑微血栓形成分子发病机制中的作用

目的以脂多糖（LPS）诱导下高表达组织因子（tissue factor，TF）的大鼠脑微血管内皮细胞（BMECs）为大鼠脑微血栓形成的细胞模型，探讨核因子kB（NF-kB）在炎症介质导致的脑微血栓形成中的作用。方法制备大鼠脑微血管内皮细胞培养模型，分别用LPS刺激1／4、1／2、1、2、4、16h，以NF-kB特异性抑制剂PDTC（pyrrilidine dithiocarbam-ate）预处理组和空白对照组作为对照，采用流式细胞术特异性检测经BMECs膜表面TF定位表达丰度的变化，同时检测胞浆中TF的mRNA水平的变化，并进行计算机定量分析。结果TF在BMECs细胞中的表达与LPS作用呈现时间依赖关系，10μg／ml LPS刺激1／2h时TF表达开始升高，1h时达到最高值；100μmol/L PDTC预处理的BMECs在LPS刺激下，TF表达水平不升高。结论LPS可以显著诱导BMECs中TF的表达，NF-kB是LPS诱导的BMECs TF表达的关键性转录调控分子，是炎症介质诱导的脑血栓形成发病分子机制中的重要因素。     

膜表面核仁素对脂多糖所致TNF-α和IL-1β表达的影响

目的：观察人THP-1细胞膜表面核仁素对脂多糖（LPS）所致TNF-α和IL-1β表达的影响。方法：采用免疫荧光、免疫印迹等方法观察核仁素在THP-1细胞膜表面表达。利用抗体封闭策略使膜表面核仁素失活,以LPS刺激THP-1细胞的炎症细胞模型,采用逆转录PCR和酶联免疫吸附实验观察炎症因子TNF-α和IL-1β的表达与分泌。结果：免疫荧光结果显示核仁素呈斑点状位于细胞膜表面;免疫印迹检测显示核仁素和Fas存在于THP-1细胞膜蛋白中。逆转录PCR结果显示LPS（1000μg/L）处理1,2,3,4h后,IL-1β和TNF-α mRNA均表达上调,而核仁素抗体封闭明显抑制二者的表达。酶联免疫吸附检测发现,LPS（1mg/L）刺激4,12,24h后,促进THP-1细胞分泌TNF-α和IL-1β,而核仁素抗体封闭显著抑制LPS所致的炎症因子释放（P〈0.05）。结论：THP-1细胞膜表面核仁素参与介导LPS所致早期炎症介质IL-1β和TNF-α的表达与分泌。