2.155 应激大鼠结肠平滑肌收缩性变化及其机制的研究

目的 1.探讨应激刺激后大鼠离体结肠环形平滑肌收缩性变化及平滑肌收缩时细胞内外钙离子(Ca2+)利用有无异常,进一步阐明结肠平滑肌收缩运动与Ca2+ 利用之间的可能联系.2.探讨胃肠道选择性Ca2+拮抗剂匹维溴胺(Pinaverium Bro mide PINA)在应激相关性结肠平滑肌动力紊乱中的调节作用及其对结肠平滑肌细胞内游离Ca 2+浓度([Ca2+]i)的影响.方法 1.制备寒冷-束缚应激大鼠排便异常的实验动物模型; 2.生理灌流液中乙酰胆碱(ACh)、氯化钾(KCl)、氯化钙(CaCl2)、氟化钠(NaF)及无钙灌流液中ACh、K Cl分别作用于应激大鼠远端结肠环形平滑肌,观察其收缩活性的离体效应,并与未受应激大鼠比较; 3. PINA孵育应激组及对照组结肠平滑肌后,再用ACh及KCl刺激,观察PINA对结肠平滑肌收缩活性的调节作用; 4.体外培养大鼠结肠平滑肌细胞,观察PINA对静息状态下 [Ca2+]i的影响及ACh、KCl、CaCl2作用于细胞后[Ca2+]i的变化. 结果 1.寒冷-束缚应激大鼠2h内排便量较对照组明显增加(P＜0.05) ,且粪便含水量增加; 2.应激后大鼠离体结肠环平滑肌受ACh、KCl刺激后收缩活性明显增强,并呈药物浓度依赖性;而在无Ca2+灌流液中,受KCl刺激后,应激组与对照组收缩性无显著性差异(P＞0.05),受ACh刺激后,应激组收缩性低于对照组(P＜0.05 );以高浓度CaCl2及平滑肌细胞G-蛋白直接兴奋剂NaF刺激结肠平滑肌,应激组收缩性均显著高于对照组(P＜0.01); 3.可明显抑制由ACh引起收缩的PINA浓度应激组≥3×10 -7mol/L,对照组≥3×10-6mol/L,应激组低于对照组;可明显抑制由KCl引起收缩的PINA浓度应激组≥10-6mol/L;对照组≥3×10-7mol/L,应激组高于对照组;4. PINA不影响静息状态下[Ca2+]i(P＞0.05),不能抑制由高浓度细胞外Ca2+引起的[[Ca2+]i增加;PINA可明显抑制由KCl、ACh引起的[Ca 2+]i增加,呈药物浓度依赖性.结论寒冷-束缚应激大鼠离体结肠环形平滑肌收缩性显著增强,可能是由于平滑肌收缩时对细胞内外Ca2+利用异常所致.     

RNAi抑制乳腺癌MCF-7/ADR细胞乳腺癌耐药蛋白基因研究

目的 利用RNAi技术干扰耐药乳腺癌细胞MCF-7/ADR的BCRP(乳腺癌耐药蛋白)基因的表达,观察MCF-7/ADR细胞BCRP的mRNA变化,BCRP蛋白的表达以及对阿霉素耐药性的变化.方法 设计3条不同(BCRPl, BCRP2, BCRP4)的RNA干扰链,构建出pGenesil-BCRP-EGFP(绿色荧光蛋白)质粒,设立对照组,空白质粒(HK)组及RNAi干扰组进行实验.半定量RT-PCR检测不同组的BCRP的mRNA水平,Westem-blot检测不同组的BCRP蛋白的水平,MTT法分析RNAi干扰组药敏性变化.结果 RT-PCR和Westem-blot检测结果显示:BCRP的mRNA和蛋白的表达受抑制,以BCRP1组干扰效果明显,明显弱于其他组.MTT比色法结果显示:BCRP1组对阿霉素的药物敏感性明显提高,与对照组差异有显著性(P<0.05).结论 RNAi能抑制BCRP基因转录和翻译水平的表达,其中以BCRP1的干扰效果明显,能明显提高MCF-7/ADR对阿霉素的药物敏感性.     

β3-肾上腺素能受体基因及解偶联蛋白2基因复合变异与中国人肥胖症的关系

目的　探讨 β3-肾上腺素能受体 ( β3- adrenergic receptor,ADRβ3)基因 Trp6 4 Arg和解偶联蛋白 2 ( uncoupling protein 2 ,UCP2 )基因 Ala5 5 Val复合变异对中国汉族人群肥胖症发生的影响。方法　采用聚合酶链反应 -限制性片段长度多态性 ( PCR- RFL P)技术 ,对 ADRβ3基因 Trp6 4 Arg和 UCP2基因Ala5 5 Val变异进行检测。 119例肥胖症患者 ,平均体重指数 ( body mass index,BMI)为 ( 2 7.9± 2 .98) kg/m2 ,177名正常对照组 ,平均 BMI为 ( 2 1.9± 1.9) kg/ m2 。结果　 ( 1)肥胖患者的 ADRβ3基因 Trp6 4 Arg突变携带者的频率与正常对照组的差异无显著性 ( P>0 .0 5 ) ;正常人携带 Trp6 4 Arg基因变异者有较高的空腹和口服葡萄糖耐量试验 ( oral glucose tolerance test,OGTT) 2小时血糖水平。 ( 2 )肥胖患者携带 UCP2基因 Ala5 5 Val纯合子变异的基因频率明显高于正常对照组的 ( OR=3.71,P=0 .0 0 1) ;正常人携带 Ala5 5 Val基因变异者有较高的 BMI水平。 ( 3)单一的 UCP2或 ADRβ3基因变异时 ,肥胖组的变异基因频率与正常人的分布差异无显著性 ( P>0 .0 5 ) ;但 UCP2和ADRβ3两基因同时发生变异时 ,肥胖组的变异基因频率则明显高于正常组 ( OR=2 .5 7,P=0 .0 0 9)。 ( 4 )携带 Val/ Val Trp/ A     

NO、CO在LPS诱导的离体兔肺动脉舒张反应下降中的作用

目的:探讨脂多糖(LPS)所致离体肺动脉反应性张力变化与肺动脉内源性一氧化氮( NO)、一氧化碳(CO)的关系.方法:制备离体兔肺动脉环.①对照组,培养基中加入生理盐水溶剂;②LPS组,培养基中加入LPS 4 μg/mL.两组孵育7 h,检测肺动脉环对10-6 mol/L新福林(PE)的收缩反应及对l0-6 mol/L乙酰胆碱(ACh)的内皮依赖性舒张反应,以及一氧化氮合酶(NOS) 抑制剂氨基胍(AG)和N+-硝基-L-精氨酸(L-NNA),血红素氧合酶-l(HO-1)抑制剂锌卟啉原(ZnPP)预孵育20 min后,肺动脉环对PE及ACh反应性的改变.结果:①LP S孵育7 h时肺动脉环对ACh的内皮依赖性舒张百分比显著低于对照组(P＜0.05),而不影响肺动脉环对PE的收缩反应;②两组用10-4 mol/L AG、10-5 mol/L ZnPP预孵育20 min后,LPS组对 ACh的舒张百分比显著降低,对PE的收缩值显著增加(均P值＜0.01),对照组对ACh的舒张百分比均无显著改变. 10-4 mol/L-NNA预孵育20 min后,两组对ACh反应均表现收缩,对PE的收缩反应较孵育前(对照)均显著增加(P＜0.01),而与AG孵育后的PE收缩值比较,LPS组无显著差异,对照组显著增加.讨论:内皮源性NO在血管张力的调控上起重要作用,ACh为内皮依赖及受体依赖性舒血管物质,内皮源性NO介导其舒张反应.实验结果表明,LPS孵育后,肺动脉内皮依赖性舒张反应显著降低,对PE收缩反应无明显变化,提示LPS可能直接损伤了肺动脉内皮细胞功能, 如抑制cNOS活性,妨碍NO生成与释放;AG预孵育后LPS组对PE收缩显著增强,提示,LPS可引起iNOS诱生;ZnPP预孵育后LPS组收缩反应显著增强,ACh舒张百分比下降,溶剂对照组收缩反应也增强,但ACh舒张百分比与孵育前比较无显著差异.提示:CO参与生理和病理情况下的血管张力的调控.结论:①LPS可导致离体兔肺动脉内皮依赖性舒张反应减弱;②LPS对肺血管的损伤作用与NO有关,提示LPS可使内皮cNOS活性下降,CO在LPS损伤中起一定的作用,但其与NO的关系有待于进一步探讨.     

八肽胆囊收缩素抑制脂多糖诱导的大鼠肺间持质巨噬细胞NF—κB活性

目的探讨脂多糖(LPS)所致离体肺动脉反应性张力变化与肺动脉内源性一氧化氮(NO)、一氧化碳(CO)的关系.方法制备离体兔肺动脉环.①对照组,培养基中加入生理盐水溶剂;②LPS组,培养基中加入LPS4μg/mL.两组孵育7h,检测肺动脉环对10-6mol/L新福林(PE)的收缩反应及对l0-6mol/L乙酰胆碱(ACh)的内皮依赖性舒张反应,以及一氧化氮合酶(NOS)抑制剂氨基胍(AG)和N+-硝基-L-精氨酸(L-NNA),血红素氧合酶-l(HO-1)抑制剂锌卟啉原(ZnPP)预孵育20min后,肺动脉环对PE及ACh反应性的改变.结果①LPS孵育7h时肺动脉环对ACh的内皮依赖性舒张百分比显著低于对照组(P＜0.05),而不影响肺动脉环对PE的收缩反应;②两组用10-4mol/LAG、10-5mol/LZnPP预孵育20min后,LPS组对ACh的舒张百分比显著降低,对PE的收缩值显著增加(均P值＜0.01),对照组对ACh的舒张百分比均无显著改变.10-4mol/L-NNA预孵育20min后,两组对ACh反应均表现收缩,对PE的收缩反应较孵育前(对照)均显著增加(P＜0.01),而与AG孵育后的PE收缩值比较,LPS组无显著差异,对照组显著增加.讨论内皮源性NO在血管张力的调控上起重要作用,ACh为内皮依赖及受体依赖性舒血管物质,内皮源性NO介导其舒张反应.实验结果表明,LPS孵育后,肺动脉内皮依赖性舒张反应显著降低,对PE收缩反应无明显变化,提示LPS可能直接损伤了肺动脉内皮细胞功能,如抑制cNOS活性,妨碍NO生成与释放;AG预孵育后LPS组对PE收缩显著增强,提示,LPS可引起iNOS诱生;ZnPP预孵育后LPS组收缩反应显著增强,ACh舒张百分比下降,溶剂对照组收缩反应也增强,但ACh舒张百分比与孵育前比较无显著差异.提示CO参与生理和病理情况下的血管张力的调控.结论①LPS可导致离体兔肺动脉内皮依赖性舒张反应减弱;②LPS对肺血管的损伤作用与NO有关,提示LPS可使内皮cNOS活性下降,CO在LPS损伤中起一定的作用,但其与NO的关系有待于进一步探讨.     

AMPK调节骨骼肌细胞GLUT4基因表达的机制研究

腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)能调节运动/肌肉收缩所引起的骨骼肌细胞葡萄糖转运蛋白4(GLUT4)基因的表达,但至今它的调节机制不清.研究显示在非运动刺激引起的细胞信号事件中由组蛋白去乙酰化酶(HDACs)以及组蛋白乙酰化酶(HATs)控制的组蛋白乙酰化状态是调节基因表达的重要机制,所以我们假设AMPK信号途径是通过征用HDACs中的HDAC5(在骨骼肌细胞内高表达)来实现对运动/肌肉收缩引起的GLUT4基因表达控制.细胞分为正常浓度葡萄糖对照组(NGLU组)、正常浓度AICAR组(NGLU AICAR组)、高浓度对照组(HGLU组)、高浓度AICAR组(HGLU AICAR组).用5 mmol/L和20 mmol/L葡萄糖浓度培养骨骼肌细胞后,NGLU AICAR组和HGLU AICAR组与肌肉收缩模拟信号刺激5-氨基-4-甲酰胺咪唑核糖核苷酸(AICAR)孵育.AICAR能激活NGLU组骨骼肌细胞AMPKα2、减少骨骼肌细胞核HDAC5蛋白、促使HDAC5与骨骼肌细胞加强因子(MEF2)蛋白分离和上调GLUT4基因的表达;相反,高浓度葡萄糖延迟由AICAR引起的AMPKα2磷酸化、AMPKα2向细胞核转入、HDAC5向细胞核转出和GLUT4基因的表达.实验结果说明在不同葡萄糖浓度下的骨骼肌细胞GLUT4基因表达变化都对应着上游AMPK蛋白和下游HDAC5蛋白的变化,AMPK可能是征用转录抑制子HDAC5来调节MEF2的活性而达到控制肌肉收缩所引起的GLUT4基因表达.     

蝮蛇抗栓酶对实验性心肌坏死的影响

本文着重探讨Svate对大鼠异丙肾上腺素性坏死(ISP-MN)时心肌超微结构变化和左室收缩与舒张功能的影响,并与尿激酶的效果进行对比。实验分四组、A组(正常对照组);B组(安慰剂组)皮下注射ISP(85mg/kg)4h后经舌下静脉注射生     

人工椎间盘植入对椎管容积变化的影响

目的:探讨不同高度的人工椎间盘(ADR)植入后,腰椎间隙的静态变化及其与椎管容积之间的关系,为合理的ADR植入提供临床依据。方法:20例福尔马林浸泡的腰段脊柱标本,随机分为L4/5及L5/S1两组,每组10例。L4/5的ADR组依次放置厚度为8、9、10、11、12mm滑动核,L5/S1组椎间滑动核厚度分别为5、6、7、8、9mm。分别观察植入前后椎管容积变化。结果:不同高度的椎间盘植入后,L4/5及L5/S1椎管容积均逐渐增加。对于L4/5节段,当10~12mm的滑动核植入时,椎管容积的增加有显著性差异;但高度为12mm滑动核植入时,相邻的L5/S1节段椎管容积显著减小。对于L5/S1节段,当8~9mm的滑动核植入时,椎管容积的增加有显著性差异。结论:单纯从椎管角度考虑,静态ADR植入后,相应节段椎管容积均增加。对于L4/5节段,滑动核的适宜植入高度为8~11mm。     

NCA对受磷蛋白敲除小鼠心肌兴奋-收缩偶联的作用

 目的: 硝酰基(HNO)在轻微增加细胞内钙的基础上可以显著增加心肌肌丝对钙离子的反应性。本研究中,我们应用崭新的HNO供体乙酸1-亚硝基环己酯(NCA)来观察HNO对受磷蛋白敲除(PLB-KO)小鼠心室梳状肌的作用。方法: 小鼠右心室的完整梳状肌被连接在张力换能器与刺激电极之间,肌小节长度设定在2.2~2.3μm之间,K-H液表面灌流后,Fura-2经玻璃微电极负载进行离子透入法检测[Ca²⁺]_i,同时测定心肌收缩张力的变化。结果: PLB-KO小鼠心室梳状肌比野生型(WT)小鼠具有更高的钙瞬变及收缩力,同时展示负性收缩力-收缩频率相关性(FFR)。NCA(2.5μmol/L)在不同浓度细胞外钙([Ca²⁺]_o)条件下增加PLB-KO及WT小鼠心肌收缩力,但并不影响PLB-KO小鼠的负性FFR。稳态条件下2组小鼠去肌膜梳状肌的收缩力-钙离子相关性无显著性差异,NCA则增加去肌膜梳状肌的钙离子的反应性。结论: NCA提供的HNO通过增加PLB-KO及WT小鼠心肌肌丝对钙离子的反应性而增强心肌收缩力;心肌细胞内钙瞬变的增加伴随收缩力的增强表明HNO可改善钙离子活性,进一步证实HNO作为正性肌力药物的作用效果。     

慢性心肌缺血大鼠膈肌舒缩功能和结构变化及其机制的研究

目的和方法 :实验采用冠状动脉分支结扎法 ,建立慢性心肌缺血大鼠模型 ,十四周后测定其血流动力学变化 ,并用离体肌条等长收缩试验分析了其膈肌收缩性变化。结果 :心肌缺血组大鼠左室舒张未压(ＬＶＥＤＰ)高于假手术组 (Ｐ <0 0 5) ,而心室收缩末压 (ＬＶＥＳＰ)低于假手术组 ,与假手术组相比其膈肌收缩峰值Ｐｔｔ下降 ,收缩时间ＣＴ和半舒张时间ＲＴ/2均延长 ;用参麦注射液两周后 ,膈肌收缩峰值明显上升 (Ｐ<0 0 5)。用ｍｙｏｓｉｎＡＴＰ酶钙 -钴显色进行膈肌纤维染色分类分析 ,发现心肌缺血组大鼠膈肌纤维中Ⅰ类纤维比例与假手术组相比…     

四氧嘧啶糖尿病大鼠主动脉金属元素含量与收缩反应的相关性

本实验通过对 4周四氧嘧啶诱导的糖尿病大鼠主动脉及对照大鼠主动脉 12种金属元素含量、主动脉环收缩反应张力的测定及其相关性分析 ,旨在了解糖尿病时主动脉金属元素含量变化与收缩反应的关系。材料和方法1　动物及糖尿病模型的复制Ｗｉｓｔａｒ雌性大鼠 (重庆医科大学实验动物中心提供 ) ,鼠龄 3月 ,体重 185 - 2 10ｇ ;四氧嘧啶 2 0 0ｍｇ/ｋｇＢＷ腹腔内注射 ,3ｄ后测定血糖 ,血糖≥ 13 9ｍｍｏｌ/Ｌ的大鼠为糖尿病模型建立 (ｎ =12 ) ,继续饲养。至 4周时体重 190 - 2 15ｇ ,血糖14 0 - 18 7ｍｍｏｌ/Ｌ ,平均 15 8ｍｍｏｌ/Ｌ ,对照…     

转染肿瘤坏死因子-α及MDR1反义RNA逆转乳腺癌多药耐药的研究

目的:转染肿瘤坏死因子-α(TNF-α)cDNA和多药耐药基因(MDR1)的反义RNA到乳腺癌耐药细胞株MCF-7/ADR中进行表达,并观察它们在乳腺癌耐药逆转中的作用.方法:应用RT-PCR和DNA重组技术构建反义绿色荧光蛋白pEGFP-MDR1融合蛋白表达载体和红色荧光蛋白pDsRed2-TNF-α融合蛋白表达载体,分别和同时导入乳腺癌耐药细胞株MCF-7/ADR中进行表达,检测转染前后细胞的生长曲线、细胞凋亡程度、MDR1-mRNA和P糖蛋白(P-gp)表达情况及对ADR敏感性的变化.结果:转染后的细胞生长明显减慢,凋亡率显著增加,MDR1-mRNA和P糖蛋白(P-gp)表达明显降低,对ADR的耐药性明显下降,敏感性增加.结论:联合运用不同的逆转耐药机制,将TNF-αcDNA及MDR1反义RNA分别或同时导入乳腺癌耐药细胞中,能有效达到逆转耐药的目的.     

参麦注射液与氨茶碱对离体大鼠膈肌疲劳的发生和发展之影响的对比性研究

目的和方法 :用离体大鼠膈肌条为材料 ,运用收缩力学手段 ,着重观察离体条件下膈肌疲劳发生和发展过程中舒张功能变化特点 ,并对比性研究中药参麦注射液 (其主要成分为人参和麦冬 )和具有正性肌力作用的西药氨茶碱对膈肌疲劳发生时其最大舒张速率 (ｄＲ/ｄｔｍａｘ)、最大收缩峰值 (Ｐｔｔ)、及收缩速率 (ｄＴ/ｄｔｍａｘ)的影响。结果 :膈肌疲劳发生时 ,其最大舒张速率 (ｄＲ/ｄｔｍａｘ)在 3ｍｉｎ内下降 58% ,明显早于最大收缩峰值 (Ｐｔｔ)及收缩速率 (ｄＴ/ｄｔｍａｘ)的下降 ;膈肌疲劳恢复过程中 ,ｄＲ/ｄｔｍａｘ在 30ｍｉｎ内仅恢复…     

三氧化二砷逆转HL60/ADR细胞耐药的研究

背景：临床应用三氧化二砷(As₂O₃)治疗复发难治性急性早幼粒细胞白血病已获得较好效果。 目的：探讨As₂O₃逆转急性髓系白血病细胞株HL60/ADR耐药的作用及其机制。 方法：以HL60/ADR细胞为研究对象,分为空白对照组和As₂O₃组,空白对照组不加任何药物培养,As₂O₃组加入48 h IC50 As₂O₃进行培养。 结果与结论：As₂O₃能提高HL60/ADR细胞摄取阿霉素水平,降低HL60/ADR细胞多药耐药相关蛋白1表达率(P < 0.05),能够促进HL60/ADR细胞凋亡,细胞早期和晚期凋亡率均高于空白对照组(P < 0.01),并随时间增加而提高。可减低细胞IκBα、p65、抗凋亡蛋白Bcl-2表达,使促凋亡蛋白Bax,断裂的Caspase-3、Caspase-9、PARP表达升高,说明As₂O₃能够逆转HL60/ADR细胞耐药,与其上述变化有关。     

吡喹酮及其对映异构体对离体大鼠心房收缩性、自律性和不应期的影响

前文发现吡喹酮致心律失常作用存在立体选择性。本文比较了吡喹酮及其对映异构体对离体大鼠心房生理特性的影响。(±)-,(+)-和(-)-和PQT对左心房正性肌力作用的ED_(50)分别为14.8,16.6和48.0μmol/L。心肌收缩幅度最大净增率(+)-和(±)-PQT分别为85±(SD)15％和79±(SD)4％,而(-)-PQT     

一氧化氮对血管紧张素Ⅱ介导的小鼠入球动脉收缩功能的影响

目的 观察NO对血管紧张素Ⅱ介导的入球动脉收缩功能的影响,探讨其机制.方法 使用分离的微灌注的入球动脉行等张收缩试验,给予L-NAME及血管紧张素Ⅱ等血管活性物质,观察入球动脉内径的变化.利用NO荧光探针DAF-FM观测入球动脉内皮NO释放情况.结果 L-NAME (10-4mol/L) 时间依赖性的引起入球动脉的收缩,作用60 min后动脉内径减少了35.2 %.在灌注状态下,内皮NO荧光强度持续增加,60 min后达70 %;L-NAME明显抑制内皮NO的释放速率(从29 %降到5.7 %).血管紧张素Ⅱ(10-14 ～ 10-6 mol/L)浓度依赖性的引起入球动脉收缩,最大收缩强度达41 %;L-NAME预处理能够增强入球动脉对于Ang Ⅱ的收缩反应,10-10mol/L Ang Ⅱ收缩动脉直径达46 %(没有L-NAME时为8.5 %),10-8 mol/L时为66 %(没有L-NAME时为41%).结论 灌注产生的血管剪切力是刺激NO释放的重要因素,内皮功能的完整性及NO在调控Ang Ⅱ介导的入球动脉收缩方面发挥重要的作用,NO生物利用度下降可能是肾脏疾病时入球动脉阻力增高的重要机制.     

神经胶质生长因子对阿霉素中毒性心肌细胞的影响

目的:观察人类重组神经胶质生长因子(rhGGF)对阿霉素(ADR)所致心肌细胞损伤的影响。材料与方法:采用原代培养新生SD大鼠的心肌细胞。培养72h后,分为三组(对照组、ADR组、rhGGF ADR组)。作用4/小时后,检测心肌细胞搏动频率,评定心肌细胞搏动功能;透射电镜观察细胞形态学改变,MTT法测定心肌细胞存活力,测定培养基中肌钙蛋白Ⅰ(cTnI)含量。结果:rhGGF ADR组心肌细胞搏动频率(74.33±3.58)较ADR组(55.33±2.82)加快(P<0.05);透射电镜观察rhGGF ADR组心肌细胞线粒体破坏较ADR轻;MTT法测ADR组心肌细胞存活力下降(OD=0.301±0.011),rhGGF ADR组心肌细胞存活力增强(OD=0.495±0.024)(P<0.05);rhGGF ADR组测定的cTnI含量(0.642±0.145)较ADR组(1.668±0.702)降低(P<0.05)。结论:rhG-GF对ADR中毒心肌细胞有保护作用。     

佛手挥发油逆转人乳腺癌ADR化疗耐药的作用研究

目的 探讨佛手挥发油对人乳腺癌耐药细胞株MCF7/阿霉素（ADR）化疗敏感性的影响。方法 四甲基偶氮唑蓝（MTT）法确定佛手挥发油无毒剂量。取人乳腺癌耐药细胞株MCF7/ADR，分为对照组、ADR组（19.71μg/mL ADR）、佛手挥发油组（7.5μg/mL佛手挥发油）、ADR+PI3K抑制剂（LY294002）组（19.71μg/mLADR+20μmol/L LY294002）、ADR+佛手挥发油组（19.71μg/mL ADR+7.5μg/mL佛手挥发油）。结果 与对照组和佛手挥发油组比，ADR组、ADR+LY294002组和ADR+佛手挥发油组G0/G1期细胞占比下降（P<0.05）,G2/M期细胞占比上升（P<0.05），细胞凋亡率上升（P<0.05）,PI3K、AKT、细胞周期蛋白B1(Cyclin B1)、抗凋亡基因（Bcl-2）信使核糖核酸（mRNA）和蛋白表达及p-PI3K、p-AKT水平下降，p21、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(caspase-3)mRNA和蛋白表达上升（P<0.05）；与ADR组比，ADR+LY294002组和ADR+佛手挥...     

自体移植兔静脉细胞增殖与钙激活钾通道的变化

目的: 研究静脉移植后钙激活钾通道(K_Ca)的变化,并探讨其病理生理意义。方法: 将兔的双侧股静脉倒置移植于同侧股动脉缺损之间,采用离体血管灌流的方法,测定移植静脉环的张力。分别以图像分析和四唑盐(MTT)比色法检测移植静脉内膜增厚的程度以及K_Ca的阻断剂盐酸四乙胺(tetraethylammonium chloride, TEA)对培养的家兔股静脉血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cells, VSMCs)增殖的影响。进而采用膜片钳技术记录K_Ca电流。 结果: 移植后1 week, 静脉的收缩性和内膜相对厚度没有显著变化。静脉移植后2 weeks,收缩性和内膜相对厚度显著大于对照组(P＜0.05, n=8)。移植后4 weeks静脉的收缩性和内膜相对厚度进一步大于对照组(P＜0.01, n=8)。TEA(2-8 mmol/L)显著增加培养VSMCs的MTT吸光值,并且有剂量依赖性(P＜0.05, n=8)。膜片钳实验结果显示,指令电位在(30-60)mV时,移植(1-4) weeks静脉VSMCs的K_Ca 电流密度均显著低于对照组(P＜0.05, n=5),指令电位在20 mV时,只有移植4 weeks静脉VSMCs的K_Ca电流密度显著低于对照组(P＜0.05, n=5)。结论: 自体移植静脉VSMC的K_Ca受到抑制,可能是血管收缩性增强、VSMCs异常增殖的原因,从而导致自体移植静脉痉挛和狭窄。     

反义人钙周期素结合蛋白编码基因转染对胃癌细胞多药耐药性的影响

目的 研究hCacyBP编码基因在胃癌多药耐药机制中的作用。方法 采用Northern杂交，检测SGC7901细胞及SGC7901／ADR细胞中hCacyBP mRNA表达水平的差异。将hCacyBP cDNA克隆到pcDNA3.1中，构建反义核酸真核表达载体pcDNA3.1/hCacyBP-，并转染耐阿霉素人胃癌细胞，用RT－PCR检测转染细胞中hCacyBP mRNA水平的变化。用MTT比色法和FCM，分别检测SGC7901／ADR细胞，pcDNA3.1/hCacyBP-和pcDNA3.1分别转染的SGC7901／ADR细胞，对ADR的药物敏感性和胞内ADR的蓄积浓度。结果 Northern杂交证实，SGC7901／ADR细胞中hCacyBP mRNA表达的水平显著高于SGC7901细胞。成功地构建了pcDNA3.1/hCacyBP-。以pcDNA3.1/hCacyBP-转染的SGC791／ADR细胞中hCacyBP mRNA的表达水平，显著低于空载体转染及未转染的SGC791／ADR细胞。MTT检测表明，转染pcDNA3.1/hCacyBP-细胞，对ADR的药物敏性较空载体转染及未转染的SGC7901／ADR细胞有所增高，生存率较后两者为低。FCM显示，转染pcDNA3.1/hCacyBP-的SGC7901／ADR细胞，转染pcDNA3.1及未转染的SGC7901／ADR细胞内ADR的蓄积浓度，分别为6．72，5．62和5．54。结论 hCacyBP编码基因对胃癌细胞的MDR有一定的影响，CacyBP可能是一种胃癌细胞MDR中的重要分子。