组织检材的PCR性别鉴定研究

作者用引物Ｙ３、Ｙ４通过ＰＣＲ技术对微量陈旧的组织检材进行了扩增，扩增的靶序列位于Ｙ染色体ＤＮＡ特异３．４Ｋｂ重复序列中，产物为４４６ｐｂ。检材是新鲜组织、甲醛固定组织、石蜡包埋组织和ＨＥ染色切片组织。检材的保存时间从几小时到五年。结果表明：新鲜组织，１０％中性缓冲甲醛固定一年以下的组织和石蜡包埋３年以下的组织均可做为ＰＣＲ性别鉴定的良好检材。     

用Alu－pCR法快速检测人体组织AluDNA

通常，做ＰＣＲ需先从组织中提取ＤＮＡ。本文报道用ＰＣＲ法直接检测人体１８种组织的ＡｌｕＤＮＡ。结果发现：除新鲜组织外，固定包埋的组织也可用作ＰＣＲ分析；扩增产物荧光带的亮度随固定组织的不同而有差异；甲醛固定时间对ＤＮＡ和ＰＣＲ结果有明显影响，而甲醛固定、石蜡包埋后的存放时间对ＰＣＲ扩增结果的影响则不明显。作者认为直接用组织作ＰＣＲ法检测人体组织ＡｌｕＤＮＡ能简化操作步骤，避免外源性ＤＮＡ和核酸酶的污染，以及苯酚与氯仿对人体的伤害，便于推广应用。     

多重聚合酶链反应分析石蜡包埋组织多肿瘤抵制基因探讨

目的：建立一种敏感、特异和快速检测石蜡包埋组织中多肿瘤抑制基因（ＭＴＳ１）的方法。方法：利用改良的ＤＮＡ制备方法,成功的从甲醛固定、石蜡包埋组织中提取ＤＮＡ,同时用建立的多重聚合酶合链反应（ＰＣＲ）进行检测。结果：３０例石蜡包埋的正常组织与新鲜组织提取的ＤＮＡ经ＰＣＲ扩增后,电泳图谱都出现５３６ｂｐ和３１０ｂｐ,即结果相同。结论：轵要提取、纯化得当,石蜡包埋组织在分子生物学研究领域中将有重要应用价     

从石蜡包埋的组织中提取DNA的研究

我们将Ｓｈｉｂａｔａ制备ＤＮＡ的方法加以改进，采用二甲苯脱蜡、酚—氯仿—异戊醇抽提、乙醇沉淀等步骤，成功地从经甲醛固定、石蜡包埋的食管癌组织中提取出ＤＮＡ，用于聚合酶链式反应（ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅｃｈａｉｎｒｅａｃｔｉｏｎ，ＰＣＲ）。结果与从新鲜冷冻组织提取的ＤＮＡ结果相似，解决了分子生物学研究中在短时间内难以得到大量新鲜肿瘤组织标本的难题。     

PCR 影响因素初探(二) 模板 DNA 质量对 PCR 结果的影响

本文探索了模板ＤＮＡ浓度和质量对ＰＣＲ扩增结果的影响。结果表明模板ＤＮＡ的质和量，特别是其中待扩增的目的基因原始拷贝数量是影响ＰＣＲ反应结果的重要因素。用较高浓度，较完整长度及不含或少含蛋白成分的核酸作模板，并使用更敏感的方法检测ＰＣＲ产物，可避免假阴性反应和提高ＰＣＲ技术的敏感性和特异性。同时，实验结果还证实用新鲜或液氮冻存组织ＤＮＡ作模板，优于石蜡包埋组织。     

SIV模型猴石蜡包埋淋巴结组织DNA的提取及病毒基因检查

从取材于３只ＳＩＶ感染治疗猴和４只ＳＩＶ艾滋病模型猴治疗前后的１１份石蜡包埋淋巴结活检组织中提成基因组ＤＮＡ，分别用ＰＣＲ和巢式ＰＣＲ方法检测ＳＩＶ病毒基因，ＰＣＲ共检出１０份阳性，巢式ＰＣＲ检测１１价样品均阳性，而同期采样的猴外周血标本病毒分离仅３份阳性，ＰＣＲ扩增产物的特异性用限制性内切酶酶切反应得到证实。实验说明，从淋巴结组织中检测ＳＩＶ的病毒基因较外周血病毒分离更能真实地反映病毒感染状况，本研究将对全面和正确评价艾滋病药吻和疫苗治疗效果提供帮助。     

用染色的石蜡包埋组织为模板进行PCR扩增

用染色的石蜡包埋组织为模板进行ＰＣＲ扩增刘宝瑞，张学庸（西京医院消化内科）关键词聚合酶链反应；基因诊断；方法；石蜡中图法分类号Ｑ７８１目前，以未染色的石蜡包埋组织为模板已能成功地进行ＰＣＲ［ＧｒｅｅｒＣＥｅｔａｌ．ＡｍＪＣｌｉｎＰｈａｔｈｏｌ，１９９...     

PRC技术鉴定毛发,陈旧血痕的性别

本文作者用ＰＣＲ技术对３例保存３年半的血痕及新鲜毛发标本进行性别鉴定，其方法是从陈旧血痕及新鲜毛发标本中提取ＤＮＡ，用蛋白酶Ｋ进行消化，然后用两组引起Ｙ１．１与Ｙ１．２和Ａｕｌ９．１、Ａｕｌ９．２及国产ＦＤ耐热ＤＮＡ聚合酶进行聚合酶链反应扩增ＤＮＡ，电泳分析Ｙ及Ａｕｌ重复序列，从而判断血痕及毛发性别。     

PCR对SSCP检测p53基因杂合性缺失的影响

对比观察了常规ＰＣＲ及半巢式ＰＣＲ对ＳＳＣＰ检测乳腺用ｐ５３基因杂合性缺失的影响。结果显示，半巢式ＰＣＲ能将石蜡包埋组织ｐ５３基因第４外显子ＤＮＡ片段ＰＣＲ扩增成功率由８２．５％提高到１００％，但应用半巢式ＰＣＲ产物对１３例杂合子病人ＳＳＣＰ分析显示，乳腺癌组织ｐ５３基因杂合性缺失由常规ＰＣＲ─ＳＳＣＰ检出阳性６例降低至１例。本研究结果表明，半巢式ＰＣＲ虽能提高ＰＣＲ的敏感性，但由于乳腺癌组织往往混杂有一些正常组织成分，二次ＰＣＲ扩增增加了正常组织ＤＮＡ对肿瘤组织ＤＮＡ的影响，因而不适用于乳腺癌ｐ５３基因杂合性缺失的研究。     

改良一步法从甲醛固定-石蜡包埋组织中提取RNA

作者利用自行改良的一步法(异硫氰酸胍方法),从甲醛固定石蜡包埋组织提取ＲＮＡ并获得成功,现报道如下。一、材料与方法1组织材料及细胞:35例胆囊组织石蜡包埋标本在手术中切下后常规10%甲醛固定2～10ｈ,石蜡包埋。标本在常温下已保存1～7年。ＫＢＶ1细胞株是人类Ｈｅｌａ细胞的子代细胞。从ＫＢＶ1细胞抽提的ＲＮＡ用作逆转录聚合酶链式反应(ＲＴＰＣＲ)实验的对照组。2.从石蜡包埋组织中分离ＲＮＡ:实验过程从一步法[1]中改良得来。根据蜡块中组织块的大小取40～100μｍ组织切片。经脱蜡、离心和梯度乙醇清洗后获取组织。组织干燥后加入0.…     

一步及半巢式PCR检测石蜡包埋B细胞淋巴瘤组织克隆性IgH重排的比较

目的：建立一种简便有效的方法,来检测Ｂ细胞非霍奇金淋巴瘤（Ｂ－ＮＨＬ）石蜡包埋组织的免疫球蛋白重链（ＩｇＨ）基因重排。方法：以ＩｇＨ的第三互补决定簇区（ＩｇＨ－ＣＤＲ３）为标志,用消化煮沸法和酚－氯仿法提取３６例Ｂ－ＮＨＬ及１０例扁桃体炎的石蜡包埋组织的基因组ＤＮＡ,比较两进行一步及半巢式聚合酶链反应（ＳｎＰＣＲ）,聚丙烯酰胺凝胶电泳、银染后检测克隆性ＩｇＨ重排的结果。结果：Ｂ－ＮＨＬ组,３４例经酚－氯仿法提取ＤＮＡ,其一步及ＳｎＰＣＲ检测克隆性ＩｇＨ－ＣＤＲ３重排的阳性率分别为２６．５％和７６．５％（Ｐ〈０．０５）;２７例经消化煮沸法提取ＤＮＡ,其一步及ＳｎＰＣＲ的阳性率分别为７．４％和６６．７％（Ｐ〈０．０５）;２５例同时用上述２种方法提取ＤＮＡ,ＳｎＰＣＲ的阳性率分别为７６％和６８％（Ｐ〉０．０５）。对     

组织ApoB位点扩增片段长度多态性分析及其应用

报道了新鲜组织，福尔马林固定组织，福尔马林固定石蜡包埋组织中ＤＮＡ的提取方法，组织ＤＮＡ的ＡｐｏＢ位点扩增片段长度多态性分析以及在法医学上的应用，旨在为解决法医实际案件提供一条行之有效的方法。     

用显微切割-PCR检测石蜡标本微小病灶DNA异常

目的 :探讨在石蜡切片中行显微切割 PCR检测微小病灶基因突变和微卫星不稳定的方法及意义。方法 :选取本室实验性大鼠肺鳞癌浸润癌伴有支气管粘膜上皮增生、鳞状化生和 或不典型增生的蜡块标本 19例 ,分别切割各病变阶段组织并提取DNA用作PCR模板 ;SSCP检测P5 3基因第 5～ 8外显子突变及变性聚丙烯酰胺凝胶电泳检测微卫星点ADRB2 的不稳定现象。结果 :7例支气管粘膜上皮增生 ,1例鳞状化生 ,12例不典型增生 ,19例浸润癌组织都分别成功地显微切割并提取DNA。除 1例上皮增生及 2例不典型增生组织PCR扩增失败外 ,其余切割组织P5 3外显子及微卫星点PCR扩增均获成功。 19例浸润癌组织 10例有P5 3基因突变 ,增生及鳞状化生组织未发现P5 3基因突变 ,10例不典型增生组织有 3例P5 3基因突变 ,这 3例标本中的浸润癌组织也都有相同外显子的突变。所有扩增成功微卫星点均未发现不稳定现象。结论 :在石蜡标本中进行显微切割 PCR检测DNA异常可获得较满意结果。联合应用连续切片 HE染色 显微切割 PCR 银染技术使定点对位分析肿瘤发生发展各阶段微小病灶中基因异常得以实现 ,对于研究癌前病变、不典型增生组织中DNA分子变化有重要应用价值     

福尔马林固定石蜡包埋组织DNA提取方法对PCR的影响

目的：比较多种福尔马林固定石蜡包埋组织ＤＮＡ提取方法对ＰＣＲ的影响,探讨临床组织病理标本理想的ＤＮＡ提取方法及ＰＣＲ应用。方法：采用５种不同的ＤＮＡ提取方法应用ＰＣＲ技术进行了比较。结果：Ｔｗｅｅｎ ２０,ＮＰ ４０加蛋白酶Ｋ法和亚氨基二乙酸法处理标本时ＰＣＲ结果较为理想。结论：合适的福尔马林固定石蜡包埋组织ＤＮＡ提取方法可应用ＰＣＲ进行ＤＮＡ水平的相应的研究。     

不同固定液对大鼠肝脏组织石蜡切片质量的影响

目的 探讨不同固定液对大鼠肝脏组织石蜡切片HE染色效果.方法 应用SD大鼠肝脏组织分别在动物空腹和空腹条件下,选择三种常规的固定液：体积分数10％甲醛固定液、Bouin＇s固定液和改良Davidson＇s固定液,对肝脏组织进行固定、石蜡包埋、切片和HE染色,观察动物空腹与未空腹条件下组织固定对切片质量的影响,以及不同固定液对肝脏组织切片质量的影响.结果 在未空腹的条件下,肝脏组织结构显示不清晰,呈水样变性的形态改变;Bouin＇s固定液和改良Davidson＇s固定液固定的组织结构更清晰,但是切片色泽不如体积分数10％甲醛固定液的鲜亮.结论 大鼠是否处于空腹状态对肝脏组织结构影响很大,三种固定方法对大鼠肝脏组织切片质量影响差异不大.     

新鲜与石蜡包埋CA组织中的病毒检测

目的：对尖锐湿疣（ＣＡ）中的人乳头瘤病毒（ＨＰＶ）及人巨细胞病毒（ＨＣＭＶ）进行检测。方法：采用聚合酶链式反应（ＰＣＲ）。结果：新鲜湿疣中ＨＰＶ阳性率为８０．８％,其中ＨＰＶ１１／６ｂ（＋）者１９例,ＨＰＶ１６（＋）者２例。石蜡包埋组织中ＨＰＶ阳性率为５８．３％。５例ＨＰＶ强阳性的湿疣组织ＨＣＭＶ检测全部阴性。结论：新鲜组织的ＨＰＶ检出率高于石蜡包埋组织;部分湿疣由ＨＰＶ１６感染所致,应注意其恶变倾向;本文结果不支持ＣＡ中ＨＰＶ与ＨＣＭＶ复合感染的可能。     

用聚合酶链反应检测喉鳞癌细胞内人乳头状瘤病毒DNA

用聚合酶链反应（ＰＣＲ）技术检测喉鳞状细胞癌患者的经福尔马林固定、石蜡包埋的组织标本２８例。从石蜡包埋的癌组织提取的人乳头状瘤病毒ＤＮＡ（ＨＰＶＤＮＡｓ）用ＨＰＶ－１６，１８试剂盒进行ＰＣＲ扩增。其中５例（１８％）扩增阳性。声带癌ＨＰＶ－１６，１８的阳性率较其它部位的高（占阳性８０％）。结果提示：ＨＰＶ－１６，１８的感染在喉癌的发生中起到一定的作用。声门区的喉鳞癌与宫颈癌的发生类似，与ＨＰＶ－１６，１８的感染有密切的联系。