同型半胱氨酸对内皮细胞凋亡的影响

目的 研究同型半胱氨酸对内皮细胞凋亡的影响。方法 采用ＤＮＡ末端标记（ＴＵＮＥＬ）染色、苏木精染色分别测定同型半胱型酸（Ａ组）、低密度脂蛋白（Ｂ组）、同型半胶氨酸＋低密度脂蛋白（Ｃ组）、同型半胱氨酸＋低密度脂蛋白＋叶酸和Ｌ－精氨酸（Ｄ组）、同型半胱氨酸＋低密度脂蛋白＋谷氨酸和甘氨酸（Ｅ组）对体外培养兔主动脉内皮细胞凋亡的影响。结果 Ｃ组细胞凋亡明显高于其它组（Ｐ〈０．０１），Ｄ组和Ｅ组各项检测指标     

同型半胱氨酸诱导人脐静脉内皮细胞MCPIP表达

目的 探讨同型半胱氨酸是否可以诱导人脐静脉内皮细胞中MCPIP的表达.方法 体外培养并鉴定人脐静脉内皮细胞;分别用10、50、100、200、500 μmol/L Hcy与HUVECs孵育24 h;用100 μmol/L Hcy与HUVECs分别孵育1、2、4、8、12、24 h;Real-time PCR检测MCPIP mRNA的表达,Western blot检测MCPIP蛋白质的表达.结果 Real-time PCR和Western blot分析结果表明,在所设置浓度下,Hcy均可诱导HUVECs中MCPIP的表达（P＜0.05）,其中以100 μmol/L Hcy作用24 h时MCPIP表达量最多;100 μmol/l Hcy与细胞作用2h时后MCPIP表达与对照组相比即有明显增高（P＜0.05）,并存在时间依赖效应.结论 Hcy可诱导HUVECs中MCPIP的表达,这可能与它致As的机理有关.     

JNK信号通路在老年大鼠耳蜗细胞凋亡中的作用

目的探讨c-Jun氨基末端激酶(c-Juna mino-terminal kinase,JNK)信号通路在老年大鼠耳蜗细胞凋亡中的作用,为老年性聋的预防和治疗提供更多的切入点。方法Wistar大鼠24只,其中12只为对照组(3～4月龄),12只为自然衰老组(22～24月龄);听性脑干反应(auditory brainstem response,ABR)检测听力学改变;采用透射电镜观察老年大鼠耳蜗的超微病理变化;用免疫组化及Western blotting方法检测p-JNK和p-c-Jun蛋白的表达。结果老年组大鼠听力〔(72.083±13.345)dBSPL〕较对照组〔(32.083±3.878)dBSPL〕明显下降,差异具有统计学意义(P<0.01);透射电镜下可见外毛细胞有凋亡样改变,螺旋神经节细胞内大量脂褐素沉着;在耳蜗石蜡切片中可观察到p-JNK和p-c-Jun免疫反应阳性细胞,定位于细胞核,老年组与对照组相比,差异具有统计学意义(P<0.05);Western blotting结果显示老年组内耳组织p-JNK和p-c-Jun的蛋白表达明显高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论在大鼠老年性聋的发生过程中,各种损伤因素可能通过激活JNK信号通路而促使耳蜗细胞的凋亡。     

JNK信号通路与细胞凋亡

肿瘤耐药的分子机制很复杂,包括染色体和基因表达的异常,细胞内药物蓄积减少,DNA损伤修复功能增强,细胞解毒功能增强,凋亡信号传导异常、凋亡抑制因子表达异常等。其中凋亡及生存相关的细胞信号通路是目前研究的热点。丝裂原活化蛋白激酶（mitogen activated-protein kinase,MAPK）信号通路是其中一条引人注目的通路。本文综述了MAPK信号通路中的一条重要通路c-Jun氨基末端激酶（c-Jun N-terminal kinases,JNK）信号通路,JNK信号通路与细胞凋亡的关系,以及其与肿瘤耐药相关的研究。     

同型半胱氨酸诱导离体培养的血管内皮细胞凋亡

目的 :了解同型半胱氨酸 (HCY)对血管内皮细胞 (VEC)凋亡的形响。方法 :用不同浓度的HCY处理离体培养的大鼠VEC24h ,用末端脱氧核苷酸转移酶 (TdT)介导的荧光素d -uTP缺口末端标记方法 (TUNEL)原位检测细胞凋亡 ,以TUNEL指数 (TUNELI)表示凋亡。结果 :正常对照培养条件下 (2 %FBS)VEC经历低频凋亡 ,其TUNELI为5.8±2.5。培基中加入浓度为0.1mmol/L的HCY ,凋亡细胞数开始增加 (TUNELI为12.6±4.4) ,但差异无显著性 (与对照比P>0.05) ;培基中HCY浓度为0.5mmol/L时 ,凋亡细胞明显增加 (TUNELI为22.4±6.4 ,与对照比 ,P<0.05) ,当培基中HCY浓度增加到1.0mmol/L时 ,将近一半的VEC经历凋亡性细胞死亡 (TUNELI为44.5±11.2 ,与0.1mmol/LHCY组比 ,P<0.05)。结论 :HCY浓度依赖性诱导VEC凋亡 ,VEC凋亡异常可能是动脉粥样硬化 (AS)发生的重要原因之一。     

人参皂甙Rg1对同型半胱氨酸诱导人脐静脉内皮细胞凋亡的逆转作用

目的人参皂甙Rg1对同型半胱氨酸(homocy steine,Hcy)诱导人脐静脉内皮细胞(HUVECs)凋亡的逆转作用。方法体外培养HUVECs,采用台盼蓝染色方法筛选人参皂甙Rg1最适浓度。将细胞分为对照组(无任何诱导物)、Hcy组(10μmol·L-1Hcy)、Hcy+Rg1组(10μmol·L-1Hcy和40mg·L-1Rg1)和Rg1组(单独用40mg·L-1Rg1处理的细胞),作用时间为24h。琼脂糖凝胶电泳和末端脱氧核糖核苷酸转移酶介导的缺口末端标记法(TUNEL)染色检测细胞凋亡情况。结果台盼蓝染色结果显示:人参皂甙Rg1的最适浓度40mg·L-1。琼脂糖凝胶电泳结果显示:对照组和Rg1组未见凋亡条带,Hcy组可见清楚的细胞凋亡特征性的"梯状"条带,而Hcy+Rg1组可见不明显的细胞凋亡特征性的"梯状"DNA断裂条带。TUNEL染色结果显示:与对照组和Rg1组相比,Hcy组细胞凋亡数量显著增加(P<0.01);与Hcy组相比,Hcy+Rg1组细胞凋亡数量显著减少(P<0.01),凋亡百分比由33.733%下降至9.200%,但仍高于对照组和Rg1组(P<0.01)。结论 40mg·L-1人参皂甙Rg1可一定程度逆转Hcy诱导的HUVECs凋亡。     

同型半胱氨酸硫内酯诱导人脐静脉内皮细胞凋亡及其分子机制的研究

目的:探讨同型半胱氨酸硫内酯(homocysteine thiolactone,HcyT)对人脐静脉内皮细胞凋亡及caspase3基因表达的影响及抗氧化剂干预后上述指标的改变。方法:一定浓度HcyT及抗氧化剂作用细胞后,碘化吡啶染色流式细胞仪、琼脂糖凝胶电泳检测细胞凋亡,RT-PCR和Western blot免疫印记法测定caspase3mRNA和蛋白表达。结果:HcyT以剂量依赖性方式诱导内皮细胞凋亡且caspase3mRNA及蛋白表达随其作用浓度的增加而升高(P<0.05)。1mmol/L HcyT浓度时,应用抗氧化剂干预,N-乙酰胱氨酸、维生素E及核转录因子抑制剂吡咯烷二硫氨基甲酸使凋亡细胞百分率从(23.16±4.27)%分别降至(1.95±0.23)%、(11.01±2.62)%、(11.46±1.81)%(P<0.05)。结论:HcyT诱导内皮细胞凋亡过程中,caspase3发挥重要作用。抗氧化剂可能通过抑制氧化损伤,下调caspase3表达,对内皮细胞凋亡发挥防治作用。     

PLA激活JNK信号通路促进NCI-H292细胞凋亡

目的 探讨多聚左旋精氨酸(PLA)诱导NCI-H292细胞凋亡的信号通路及分子机制.方法 将加入PLA 的浓度梯度分5组:0、10、20、40、60 mg/L,作用NCI-H292细胞24 h后Western blot法检测每组c-Jun氨基末端激酶( JNK)的磷酸化水平;设对照组、PLA 组(40 mg /L)、SP组(加入特异性JNK通路抑制剂SP600125)、PLA+SP组,加药24 h后流式细胞仪检测每组NCI-H292细胞凋亡率,Western blot法检测各组NCI-H292细胞内凋亡相关蛋白 Bcl-2/Bax、Caspase-3、P-JNK/JNK和β-actin蛋白的表达水平.结果 对照组、PLA组、SP组、 PLA+ SP组 NCI-H292细胞凋亡率分别为(5.13 ±1.07)%、(22.62 ± 1.66)%、(5.69 ± 0.14)%、(8.99 ± 3.73)% ;Western blot 法检测 PLA 诱导 NCI-H292 细胞内BCL-2/Bax比值降低( P＜0. 01),Caspase 3 表达升高( P＜0. 001),PLA诱导NCI-H292 细胞JNK 磷酸化水平增加(P＜0.001 ), SP600125 抑制 PLA 诱导 JNK 磷酸化( P ＜0.001).结论 PLA可能介导JNK信号通路引起NCI-H292细胞凋亡水平增加.     

JNK信号通路在乙醛刺激的肝星状细胞凋亡中的作用

目的: 观察用特异性c-Jun氨基末端激酶(c-Jun N-terminal kinase,JNK)特异性阻断剂SP600125阻断JNK信号传导通路对乙醛刺激的大鼠肝星状细胞(Hepatic stellate cell,HSC)凋亡的影响.方法: 体外培养大鼠HSC株;用不同浓度的SP600125(20,60,100 μg/L)对乙醛(200 μmol/L)刺激的大鼠HSC进行处理,分别以DNA片段凝胶电泳及流式细胞仪检测细胞凋亡,用Western Blotting法检测JNK激酶的活性变化.结果: 不同浓度的SP600125(终浓度为20,60,100 μg/L)对乙醛刺激的HSC内p-JNK的水平有明显下调作用,强度呈剂量依赖关系,同乙醛组相比有显著性差异[MVI: (35.6±0.9),(24.4±1.1),(3.4±0.2) vs (48.2±0.9),P<0.05];同时SP600125具有促进HSC凋亡的作用: 空白对照组及乙醛组中细胞凋亡率为[(2.0±0.2)%和(6.0±0.5)% ,两者有显著性差异(P<0.05)],经SP600125处理后细胞凋亡率上升[分别为(11.1±0.4)%,(26.9±0.9)%,(33.1±1.3)%,P<0.05],同乙醛组相比有显著性差异(P<0.05).结论: SP600125通过阻断JNK通路促进HSC凋亡,故JNK信号通路可能参与了HSC的凋亡.     

地塞米松诱导人脐静脉内皮细胞凋亡

目的：观察地塞米松对人脐带静脉血管内皮细胞( ECV304)增殖的影响。方法：采用细胞凋亡的荧光检测法（Heochst 33342）检测地塞米松对脐静脉血管内皮细胞（ECV304）的形态学改变, MTT 法观察地塞米松对ECV304增殖的抑制作用,流式细胞仪术检测地塞米松引起的ECV304凋亡率改变。结果：较高剂量（100umol/L）地塞米松对脐静脉血管内皮细胞增殖起抑制作用,并诱导其凋亡。结论：地塞米松具有比较明显的抑制血管内皮细胞增殖的作用。地塞米松抗血管生成的机制可能与其抑制血管内皮细胞增殖、诱导内皮细胞凋亡有关。     

同型半胱氨酸对人脐静脉内皮细胞表达ICAM-2及与树突状细胞粘附的影响

目的 探讨同型半胱氨酸（Hcy）对人脐静脉内皮细胞（HUVECs）分泌和表达细胞间粘附分子-2（1-CAM-2）以及内皮细胞与树突状细胞（DC）粘附的影响。方法 在人脐静脉内皮细胞培养基中加入浓度为0．5mmol／L的Hey作用不同时间，以及加入不同浓度的Hey作用24h。用ELISA法检测内皮细胞培养基中HU-VECs分泌ICAM-2的蛋白含量，用Western blot法检测HUVECs表达ICAM-2的蛋白含量，用分子探针标记的DC与HUVECs共孵育，共聚焦显微镜下计数粘附于HUVECs的DC数量，以检测Hey对HUVECs与DC粘附的影响。结果用0．5mmol／L Hey干预后，HUVECs分泌ICAM-2蛋白在12h开始高于空白组（P〈0．05），24h和48h均增加显著（均P〈0．01）；而ICAM-2蛋白的表达在6h开始高于空白组（P〈0．05），24h达峰值（P〈0．01），48h下降显著，且与空白组相比无统计学差异。用不同浓度的Hey干预24h后，ICAM-2蛋白的分泌和表达及HUVECs与Dc粘附均呈剂量依赖性增加，当Hey浓度高于0．5mmol／L时增加更显著。结论 Hey能刺激HUVECs分泌和表达ICAM-2蛋白，从而促进HUVECs与DC的粘附，这可能是其诱导动脉粥样硬化早期形成的重要机制之一。     

大蒜素对高半胱氨酸所致内皮细胞损伤的保护作用

目的：研究大蒜素对高半胱氨酸所致内皮细胞损伤的保护作用。方法：将培养的内皮细胞分成高半胱氨酸组（模型对照组）、大蒜素大剂量组、大蒜素中剂量组、大蒜素小剂量组、空白对照组5组,分别加不同的培养液,并于加药后的12、24、36?h取出上清液测乳酸脱氢酶（LDH）;另外采用MTT比色法观察细胞的存活率。结果：大蒜素小、中剂量组显示出对内皮细胞的保护作用：大蒜素小、中剂量组与模型对照组比较均能明显降低LDH含量（P＜0.05）;大蒜素大剂量组在36?h拮抗Hcy损害作用降低,跟模型对照组比较差异无统计学意义（P＞0.05）。这一结果跟MTT测试结果吻合：小、中剂量的大蒜素组光吸收值A较模型对照组明显升高（P＜0.01）,大蒜素大剂量组A值跟模型对照组比较差异无统计学意义（P＞0.05）。结论：大蒜素小、中剂量可明显降低高半胱氨酸对内皮细胞的损伤,有效防治高半胱氨酸血症。     

金黄色葡萄球菌侵入人脐静脉内皮细胞初期细胞骨架的动态变化

目的探讨不同毒力的金黄色葡萄球菌（标准菌株ATCC25923,产肠毒素株FRS6B）感染人脐静脉内皮细胞（HUVEC）初期,细胞骨架动态变化情况。方法常规方法制备菌液,分别感染HUVEC,1、2、4h后流式细胞仪分析细胞凋亡,应用激光共聚焦荧光显微镜观察细胞骨架的动态变化。结果两种不同毒力的金黄色葡萄球菌与HUVEC共育1h后即有凋亡细胞发生,共聚焦显微镜观察可见两种细胞作用1h后细胞骨架微丝、微管均发生了改变,作用4h后细胞内聚集大量细菌,细胞骨架微丝、微管部分开始解离。结论两种金黄色葡萄球菌感染HUVEC初期,产肠毒素菌株FRS6B诱导细胞凋亡明显高于ATCC25923,细胞骨架的动态变化存在差异。     

黄芪黄酮改善同型半胱氨酸诱导内皮功能紊乱的研究

目的：观察黄芪黄酮对同型半胱氨酸（Hcy）介导的内皮功能紊乱的作用,并进一步探讨其具体机制。方法采用离体血管灌流技术,观察离体血管舒张功能变化;采用离体培养人脐静脉内皮细胞培养技术,测定内皮细胞产生的超氧阴离子和一氧化氮（NO）含量,以及一氧化氮合酶（NOS）和超氧化物歧化酶（SOD）活性。结果 Hcy（10-3mol/L）可显著抑制乙酰胆碱（Ach）介导的内皮依赖性血管舒张功能[舒张幅度为：（66.26±3.71）%],黄芪黄酮（10-2,10-1,1,10g/L）则呈浓度依赖性地改善Hcy（10-3mol/L）所致的内皮依赖性血管舒张功能损伤[（66.71±7.29）％,（74.67±6.64）%,（81.73±5.92）%,（85.94±5.85）%,均P＜0.01],其作用与SOD类似,而NOS抑制剂Nω-硝基左旋精氨酸甲酯盐酸盐（L- NAME）可以阻断黄芪黄酮的作用。进一步细胞实验证实Hcy显著抑制内皮细胞NO产生[（7.53±1.31）vs（16.61±1.52）×10-6mol/g,P＜0.01],抑制NOS[（3.28±0.24）vs（8.35±0.37）kU/g,P＜0.01]和SOD活性[（8.69±1.54）vs（14.74±1.57）kU/g,P＜0.01]、以及诱导超氧阴离子的生成[（179.14±14.82）％vs（100.00±8.95）％, P＜0.01];而黄芪黄酮（1g/L）和SOD均可逆转Hcy对内皮的损伤作用（均P＜0.01）。结论本研究证实黄芪黄酮通过其抗氧化作用改善同型半胱氨酸损伤的NOS-NO途径,从而具备血管内皮的保护功能。     

Hcy对ECs氧化应激及调节DCs粘附功能的作用

目的研究同型半胱氨酸（homocysteine，Hcy）对人脐静脉内皮细胞（human umbilical vein endothelial cells，HUVECs）氧化应激的影响，探讨Hcy调节树突状细胞（dendritic cells，DCs）对内皮细胞（endothelial cells，ECs）粘附和迁移功能的作用。方法体外培养人外周血单核细胞来源的DCs和HUVECs，用不同浓度（0．01、0.05、0.1、0．5、1．0mmol／L）的Hcy及超氧化物歧化酶（superoxide dismutase，SOD）干预HUVECs 24h，用免疫荧光试验检测HUVECs对产生活性氧簇（reactive oxidative species，ROS）的影响，用细胞粘附试验检测DCs对HUVECs粘附功能的影响，用细胞迁移试验检测DCs对HU-VECs迁移功能的影响。结果浓度高于0.05mmol／L的Hcy干预HUVECs表达ROS高于空白对照组（P〈0．05）；浓度高于0．1mmol／L的Hcy干预后的HUVECs上粘附的DCs的数量高于空白对照组（P〈0．05）；迁移通过ECs的DCs的数量也高于空白对照组（P〈0．05），且此作用均能被SOD所阻断。结论Hcy能通过诱导ECs产生ROS，促进DCs粘附和迁移，这可能是其诱导动脉粥样硬化（AS）形成的重要机制之一。     

丹参多酚酸盐对高同型半胱氨酸诱导的人脐静脉内皮细胞组织因子表达的干预作用

目的:探讨丹参多酚酸盐对高浓度同型半胱氨酸诱导的人脐静脉内皮细胞组织因子(TissueFactor)表达的影响。方法:采用ELISA和逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测不同浓度丹参多酚酸盐(0、0.5、1.0mg/L)在不同作用时间下(2、4、8、12、24、48、72h)对高浓度同型半胱氨酸(50μmol/L)诱导的人脐静脉内皮细胞TF蛋白和mRNA表达的影响。结果:在24h,随着丹参多酚酸盐浓度的增加,同型半胱氨酸诱导的内皮细胞培养液中TF表达呈浓度依赖性下降(P<0.05);当丹参多酚酸盐浓度恒定时(1.0mg/L),随作用时间的延长,同型半胱氨酸诱导的内皮细胞培养液中TF表达水平呈时间依赖性下降(P<0.05)。结论:丹参多酚酸盐可抑制高浓度同型半胱氨酸诱导的内皮细胞TF的表达,并具有剂量和时间依赖性。     

同型半胱氨酸与老年冠心病患者内皮功能的关系

目的探讨血清同型半胱胺酸(HCY)与老年冠心病患者内皮细胞损伤的关系.方法对76例行冠状动脉造影的患者检测血清中HCY、一氧化氮(NO)、内皮素～1(ET-1)、循环内皮细胞(CEC)含量,以冠状动脉造影正常者做对照,进行t检验、线性相关分析.结果冠心病组HCY、ET-1、CEC水平均明显高于对照组(P＜0.01),NO水平显著低于对照组(P＜0.01);从相关分析看,HCY与ET-1、CEC呈正相关,与NO/ET-1呈负相关(P＜0.05).结论HCY与内皮细胞分泌NO、ET-1平衡失调有关.