肝癌组织γ-谷氨酰转移酶单克隆抗体制备及ELISA方法的建立

目的应用纯化的人肝癌组织中蔓陀罗凝集素(DSA)强结合的γ-谷氨酰转移酶(GGT)制备单克隆抗体(McAb),并建立ELISA检测方法。方法应用亲和色谱法纯化肝癌组织中DSA强结合的GGT;采用单克隆抗体技术获得其McAb;protein A-Sepharose亲和色谱法纯化McAb,过碘酸钠法标记HRP法后建立ELISA方法。结果获得5株能特异性识别DSA强结合GGT的McAb细胞株,其中3株细胞所分泌McAb具有较高的特异性,应用所获得McAb进行HRP标记后,建立的ELISA方法,其检测灵敏度为10μg/L,批内及批间平均变异系数为8.9%和11.5%。结论成功制备了DSA强结合的GGT McAb杂交瘤细胞系,并建立了ELISA免疫学检测方法,为临床应用打下基础。     

应用单克隆抗体精制无病毒的因子Ⅷ制剂

本文就最近正在开发的两种利用单克隆抗体(McAb)亲和层析法高度纯化的因子Ⅷ制剂(Monoclate和AHF-M)的制备、特性及临床效果作了介绍。两种制剂纯化中所用的McAb及制剂的病毒灭活方法有较大差异。 Monoclate利用vW因子的McAb作亲和层析柱。取自血浆提取的冷沉淀,上亲和层析柱,洗净杂蛋白后,用高浓度的钙离子溶液将因子Ⅷ解离洗脱,再经氨基己基琼脂糖层析后透析、过滤、冻干,最后加热灭活病毒。 AHF-M则利用因子Ⅷ促凝成分(Ⅷ∶C)的McAb作亲和层析柱。从血浆中取得的冷沉淀,先经用有机溶剂/表面活性剂处理,以     

人心肌肌钙蛋白Ⅰ单克隆抗体的制备与鉴定

为了建立抗人心肌肌钙蛋白Ⅰ(CTnI)单克隆抗体(McAb)的杂交瘤细胞株。以重组表达并纯化后的CTnI免疫BalB/C小鼠,采用传统单克隆抗体技术筛选能稳定分泌抗CTnI McAb的杂交瘤细胞株。结果:建立了3株稳定分泌抗CTnI McAb的杂交瘤细胞株2E3,3D4和3E6,腹水效价分别为4×10-5,1×10-6,1×10-5,亲和常数分别为4.8×108,5.2×109,3.6×108,最低检测浓度分别为20,40,20μg/L,其中2E3和3D4可以识别CTnI的不同表位。     

丙型肝炎病毒单克隆抗体的制备及其鉴定

目的：以基因工程表达的丙型肝炎病毒抗原蛋白（HCAg）为抗原，建立分泌单克隆抗体（McAb）的杂交瘤细胞系．并对其分泌的McAh进行鉴定。方法：用纯化HCV基因工程表达抗原（HCAg）免疫Balb／c小鼠，取脾细胞及骨髓瘤细胞按常规方法融合、筛选、克隆化及腹水注射制备McAb。采用ELISA及分片断鉴定技术进行鉴定。结果：筛选出5株能稳定分泌特异性抗-HC的McAb杂交瘤细胞株，经多次复苏传代仍能稳定分泌抗体，特异性强，效价高。与不同抗原蛋白的ELISA反应呈特异性阳性反应。分片断鉴定结果显示，所获5株McAb主要为抗HCV核心蛋白和非结构蛋白NS3。结论：此5株丙肝杂交瘤细胞株分泌的抗体对丙肝抗原具有特异亲和性，为丙型肝炎病毒抗原诊断试剂的研制提供了关键技术基础。     

黑斑双鳍电鳐烟碱受体单克隆抗体及其在重症肌无力病研究中的应用

以纯化的NAChR为抗原免疫Balb/c小鼠,取其脾细胞与骨髓瘤细胞P_3U_1融合生成杂交瘤,用间接免疫荧光法和ABC-ELISA进行筛选,建立了三株NAChR McAb杂交瘤细胞株(A_7,E_4,G_3)。三种McAhs均属IgG_1,E和G_3可与NAChR上的α亚基结合。以E_4和G_3 McAbs为探针,用ELISA检测24例MG病人血清,发现12例病人血脚中存在McAb E_4的抗独特型抗体,其中11例有McAb G_3的抗独特型抗体,提示MC病人体内可能存在共有的独特型和功能性的自身免疫网络。     

单克隆抗体酶免疫试验检测乙型肝炎病毒基因组前S2区编码的抗原决定簇

作者制备了3株分泌抗前S2McAb的杂交瘤细胞,其中1株是通过用纯化的病毒颗粒免疫小鼠而得,分泌Mo-F124;另2株是用前S2阳性的重组HBsAg颗粒免疫小鼠而成,分别分泌Mo-F376和Mo-F52。Mo-F52为IgM,另2株McAb为IgG1亚类。3株McAb均与前S2阳性的病毒颗粒制剂和重组HBsAg颗粒(前S2和S基因的产物)结合,而不与     

人体淋巴丝虫各期抗原、排泄—分泌代谢抗原及抗丝虫性单克隆抗体分析

由于马来丝虫沙鼠模型的建立,马来丝虫Mf、Aw 抗原及经体外培养获得的 Es—Ag 已广泛应用于人体淋巴丝虫病的免疫学诊断和丝虫病流行病学的监测。近年来,应用单克隆抗体检测丝虫病人循环抗原亦获可喜结果。随着丝虫病防治和免疫学研究的深入发展,丝虫病的免疫预防、保护性免疫及晚期丝虫病人免疫机制的研究已成为当前我国丝虫病防治、科研领域的主要研究课题。为深入探索这些问题,本研究用 SDS—PAGE 技术对马来丝虫 Mf、L_3、AW 可溶性抗原,马来丝虫MfES—Ag、L_3—L_4Es—Ag;班氏丝虫L_3ES—Ag 和 McAb、BmAWES_5、McAb     

CD3AKC制备及生物学特性的实验室研究

本研究报道正常人外周血单个核细胞(PBMC)在10ng/ml浓度CD_3McAb及20s/ml IL—2条件下孵育48小时。应用苔盼兰拒染法观察白细胞成活情况,瑞—姬染色法计数淋巴细胞转化率,CD_3、CD_4、CD_2 McAb分析细胞表型、间接免疫荧光法计数IL—2 R~+细胞数。结果表明:正常人PBMC经过CD_3 McAb激活48小时,CD_3~+、CD_4~+细胞比例与对照组无显著差异:CD_3~+细胞激活组明显高于对照组(P<0.01)。IL—2R~+细胞数激活组明显高于对照组(P<0.01)。提示CD_3 McAb在提高PBMC IL—2R表达上有临床实用价值。     

治疗用鼠单克隆抗体中的鼠源性病毒污染及其清除方法

尽管已对人源性单克隆抗体(McAb)作了大量研究,但目前临床仍然应用鼠源性McAb,因此,从质量控制的观点出发,必须考虑McAb制剂中鼠源性病毒(简称鼠病毒)污染的可能性、危害性、检测方法及其清除技术。本文就上述问题作一综述。     

单克隆抗-HBe的再检测及进一步鉴定

HBeAg在血清中的浓度很低,难以提纯定量的HBeAg免疫动物,以制备多隆抗血清用于免疫诊断试验。本文报告了将HBeAg和HBsAg阳性血浆经人抗-HBe IgG亲和层析技、Bio-Gel P2柱及蔗糖密度梯度离心,可获得高纯度HBeAg,将其免疫小鼠后经杂交瘤技术得到5H12C81和12H7C161两株杂交瘤,其分泌的单克隆抗体(McAb)均属IgG2a亚型,但结合力研究显示,12H7C161抗体与HBeAg的结合率高于5H12C81McAb和多克隆抗-HBe。作者将这两个单克隆抗-HBe与以前分离     

人单克隆抗体研制的现状和展望

人单克隆抗体(McAb)研制技术的发展将导致诊断和治疗手段的改进,并使我们对B细胞库在人类健康和疾病中的作用的认识有所增加。本文评价迄今用于人McAb研究的各主要技术路线,以提出总的方针和可行的研究方法。免疫淋巴细胞的获得体内致敏产生小鼠McAb所用的免疫淋巴细胞的来源一般不受限制,而研制人McAb则完全不同。首先,能用于人体的免疫原种类以及免疫程序受道德和其他因素的限制;第二,免疫淋巴细胞的来源仅限于外周血;第三,处于哪一个分化阶段的B细胞用于融合最好     

从除去IgG的组织培养液提纯单克隆抗体

作者报道一种方法,利用G蛋白(一种重组链球菌生物工程制品)能和免疫球蛋白G(IgG)结合的特性,将其作为配基,连接在载体琼脂糖凝胶上,经亲和层析,分离纯化杂交瘤细胞培养上清里的IgG单克隆抗体(McAb)。由于G蛋白无法将IgG McAb和培养基中小牛血清IgG区分开来,作者采用在杂交瘤细胞培养前,先通过G蛋白琼脂糖凝胶亲和层析的方法除去小牛血清IgG。     

杂交瘤细胞大量培养的现状

1975年Kohler和Milstein创建的杂交瘤细胞培养技术,在短短的10年时间里,得到了很大的发展。现在从细胞融合到抗体生产,直至抗体的纯化和应用都有了惊人的进展。美国FDA(食品和药物管理局)已批准了60套以上由单克隆抗体(McAb)制成的诊断试剂。至少有100家公司正在致力开发抗体产品。Damon Biotech和Bio-Response公司正在筹建一套能生产近千克抗体的设     

氯胺酮单克隆抗体的研制及其免疫学特性研究

目的：制备氯胺酮单克隆抗体（McAb）,并对其特性进行分析。方法：采用丁二酸酐偶联法将氯胺酮（Ket）与BSA和OVA偶联合成人工完全抗原Ket—BSA和Ket—OVA,选择Ket—BSA免疫BALB／C小鼠,用Ket—OVA作包被抗原进行间接ELISA和竞争ELISA检测免疫小鼠血清效价,从而选择小鼠脾细胞为融合备用。应用杂交瘤技术制备氯胺酮单克隆抗体（Ket—McAb）,并对其效价、亲和性和特异性等进行鉴定。结果：成功地合成了氯胺酮人工完全抗原,用该抗原免疫小鼠产生高效价抗Ket抗体（1：12800）,并能被Ket单体抑制;建立了一株分泌稳定的单克隆抗体细胞株,细胞培养上清液的抗体效价为1：6400,腹水抗体效价为2×10^6;同种型为IgG2a,50％抑制浓度为80ng／ml,经鉴定能与Ket特异性结合与其它毒品类药物如冰毒、摇头丸,大麻、吗啡等无交叉反应。结论：抗氯胺酮McAb是一种特异的探针,对吸毒和戒毒病例的检测具有潜在的应用价值。     

搅拌反应器内影响细胞生长和单克隆抗体产生的因素

本文报告了搅拌反应器培养细胞时温度、溶解氧水平、营养物的消耗以及代谢产物的贮积等因素对杂交瘤细胞生长和单克隆抗体(McAb)产生的影响。作者将细胞分别培养于28、31、34和37℃。结果表明,在28～34℃,培养细胞死亡率降低,细胞存活时间比37℃培养时长,但McAb产量却低于37℃培养组。培养温度由37℃降至34℃时,细胞代谢率降低,培养基中葡萄糖消耗量减少41%,同时,McAb产量也下降60%。     

用~(131)I标记的单克隆抗体免疫治疗小鼠肿瘤

细胞毒药物由于缺乏对肿瘤的特异性而使其应用受到限制。近年来将抗肿瘤药物、毒素或放射性同位素与单克隆抗体(McAb)结合,大大增强了它们对肿瘤细胞的特异性。用~(131)标记McAb比毒素和抗癌药与McAb制成的结合物更简易可行。本文作者以~(131)I标记的McAb体外处理肿瘤细胞和体内治疗移植于裸鼠的人肿瘤均获得一定效果。     

大肠杆菌表达的乙型肝炎表达抗原124aa分子的纯化和免疫学鉴定

目的 探索大肠杆菌表达的乙型肝炎表面抗原（HBsAg）124aa分子作为疫苗成分应用的可能性。方法 以超声破碎法获取包涵体,用HisTrap^TM试剂盒亲和层析纯化目的蛋白。加入聚乙二醇（PEG4000）以提高变性蛋白的复性效率。以抗HBsAga抗原决定簇单克隆抗体（McAb)和抗HBsAg多克隆抗体（PcAb)作为包被抗体,采用夹心ELISA法分析其抗原性;以纯化产物免疫BALB/c小鼠,RIA法测定小鼠血清中抗HBs抗体。结果 通过HisTrap^TM试剂盒亲和层析纯化的HBsAg124aa分子经反相高效液相色谱（RP-HPLC）分析。纯度达95%以上,经复性后的蛋白具有抗原性和免疫原性。结论 HBsAg124aa分子在大肠杆菌中的成功表达,为探索新的乙型肝炎疫苗成分提供了重要线索。     

单克隆抗体在临床肿瘤学中的应用

1994年5月23～26日在希腊莱斯沃斯召开了第十一届国际Hammersmith单克隆抗体应用进展会议.会议讨论了单克隆抗体(McAb)在临床肿瘤学中的应用,其中包括临床试验现状、McAb用于导向治疗、肿瘤成象和体内诊断,并讨论了产生重组抗体的最新技术.     

用小鼠淋巴结初次免疫法制备多克隆和单克隆抗体

在单克隆抗体(McAb)制备工作中,可用毫微克(ng)的抗原量对小鼠脾细胞进行体外免疫,但此法需要复杂的培养条件以保持细胞的活性。本文报告了应用BALB/c小鼠淋巴结初次免疫技术,只需100ng牛血清白蛋白(BSA)的抗原量就能产生多克隆抗体,用少于20μg的抗原量(从用疱疹病毒转化的仓鼠肾细胞提取的35KD多肽)即能产生McAb。用苯妥英钠麻醉小鼠,打开腹腔,用解剖显微镜找到腹腔淋巴结,并用显微操作器上的细长毛细管向淋巴结中注入1μl弗氏完全佐剂抗原(牛血清白蛋白抗原溶液与佐剂     

大肠杆菌表达的乙型肝炎表面抗原124aa分子的纯化和免疫学鉴定

目的探索大肠杆菌表达的乙型肝炎表面抗原(HBsAg)124aa分子作为疫苗成分应用的可能性. 方法以超声破碎法获取包涵体,用HisTrapTM试剂盒亲和层析纯化目的蛋白,加入聚乙二醇(PEG4000)以提高变性蛋白的复性效率;以抗HBsAg a抗原决定簇单克隆抗体(McAb)和抗HBsAg多克隆抗体(PcAb)作为包被抗体,采用夹心 ELI SA法分析其抗原性;以纯化产物免疫BALB/c小鼠,RIA法测定小鼠血清中抗HB s抗体.结果通过HisTrapTM试剂盒亲和层析纯化的HBsAg124aa分子经反相高效液相色谱(RP-HPLC)分析,纯度达95 %以上 ;经复性后的蛋白具有抗原性和免疫原性.结论 HBsAg124aa 分子在大肠杆菌中的成功表达,为探索新的乙型肝炎疫苗成分提供了重要线索.