宫颈癌妇女人乳头瘤病毒16E6/E7基因变异分析

目的了解宫颈癌妇女人乳头瘤病毒(HPV)16E6/E7基因变异的情况,为HPV防治提供流行病学数据。方法从大量样本中筛选出HPV16阳性标本180例,其中宫颈癌患者100例,宫颈不典型增生患者50例,宫颈炎症患者30例,对宫颈脱落细胞样本采用PCR方法扩增HPV16 E6/E7基因,然后对反应产物采用DNA测序法获得基因序列,在GeneBank进行经BLAST分析,寻找变异位点。结果宫颈癌患者中E6核苷酸变异率为82.00%(82/100),明显高于宫颈不典型增生患者(=0.000)及宫颈炎患者(=0.000);宫颈癌HPV16E6最频繁的序列变异为T178G(60/100),其他常见变异为T350G、C335T/A442C、T178G/G39T,年轻宫颈癌组E6核苷酸变异率与非年轻宫颈癌无明显差别,但两者T178G变异率存在明显差异(=0.000)。宫颈癌患者HPV16 E7核苷酸变异率为74.00%(74/100),明显高于宫颈不典型增生患者(=0.000)及宫颈炎患者(=0.000);E7最频繁序列变异为A647G 32.00%(32/100),其他常见的变异为A647G/C749T/T843C/T846C、A647G/C749T/T846C、C749T/C790T、A647G/C749T;年轻宫颈癌组E7核苷酸变异率与非年轻宫颈癌无明显差别,但A647G变异率存在明显差别(=0.03)。结论宫颈癌患者明显存在HPV16E6E7核苷酸变异,HPVE6 T178G、E7 A647G可能与宫颈癌年轻化密切相关,故对该人群的检测并及时尽早采取干预措施。     

人乳头瘤病毒16、18型检测在宫颈癌早期诊断中的应用

目的 :比较HPV16、18型检测与巴氏涂片在宫颈癌早期诊断的价值。方法 :病例来源于我院阴道镜门诊 ,病人均已在普通门诊做巴氏涂片 ,采用TBS细胞分类法 ,其中正常 10 0例 ,ASCUS/AGUS6 5例 ,LSIL4 9例 ,复诊时做阴道镜下多点活检和HPV16、18-DNA检测。结果 :巴氏涂片以ASCUS/AGUS以上为阳性 ,宫颈活检病理做为金标准 ,以CIN二级以上为阳性 ,HPV16、18-DNA定性检测的敏感性为 96 .3% ,特异性为84 .5 % ,巴氏涂片的敏感性为 87.3% ,特异性为 86 .6 % ,HPV16、18-DNA的敏感性高于巴氏涂片 (P <0 .0 5 ) ,而二者的特异性无差别 (P >0 .0 5 )。结论 :HPV16、18-DNA的检测可以作为宫颈癌早期诊断的方法。     

重庆地区1例宫颈癌组织人乳头瘤病毒16型E6,E7基因的结构和变异

目的：报告1例重庆地区宫颈癌组织人乳头瘤病毒16型E6，E7基因的结构及其变异，方法：应用聚合酶链式反应（PCR）从宫颈癌组织扩增出人乳头瘤病毒16型重庆株E6，E7基因，分子克隆技术进行基因的克隆，测序。结果：成功地扩增出重庆地区宫颈癌人乳头瘤病毒16型株E6，E7基因，并克隆于质粒载体pBKS( )，结论：该例宫颈癌组织人乳头瘤病毒16型E6，E7与标准株HPV16 E6，E7基因的长度相同，E6基因无变异，但E7基因有两处点突变。     

宫颈癌组织中人乳头状瘤病毒16型转化基因E7的检测

用聚合酶链反应扩增宫颈癌组织中人乳头瘤病毒１６型Ｅ７基因，获得含完整Ｅ７基因的３１２ｂｐ片段。分析２２例宫颈癌样品，Ｅ７基因的检出率为４５．５％，４０例宫颈炎中Ｅ７基因的检出率为５％。这一方法为进一步研究Ｅ７基因在宫颈癌发生中的作用奠定基础，并可用于宫颈癌的诊断与防治。     

人乳头瘤病毒16型主要衣壳蛋白L1基因的克隆和序列分析

目的 从已感染人乳头瘤病毒（HPV）的新鲜宫颈癌组织中获得HPV16型晚期表达基因L1，为HPV感染的检测和治疗奠定基础。方法 根据引物设计原则设计一对特异引物，并用PCR方法从宫颈癌组织中获得L1基因，用pGEM-T作为克隆物体，构建重组质粒并以双脱氧法双向测定插入片段序列，拼接出L1基因序列，自动测序验证并分析序列。结果 从西安地区1例宫颈癌临床标本克隆到的1株HPV16型L1蛋白编码序列经BLAST2．0分析与既往报道序列存在高度同蛋白编码序列经BLAST2．0分析与既往报道序列存在高度同源性。结论 构建的重组质粒为进一步研究L1蛋白的表达及其免疫学创造了条件。     

人乳头瘤病毒16型E7蛋白单克隆抗体的研制

目的 为研究HPV16 E7蛋白在肿瘤早期预报中的作用及研制治疗性疫苗,特制备HPV16 E7的单克隆抗体.方法 将构建成的PGEX4T-1-HPV16 E7的质粒转化BL21细菌,在IPTG诱导下,稳定表达GST-HPV16E7融合蛋白,免疫Balb/c小鼠,收集免疫小鼠的脾细胞与SP2/0细胞融合,用ELISA双筛,直至检测所有孔均为E7阳性而GST阴性为止,扩大培养、建株、冻存并制备腹水、单克隆抗体.结果 成功制备出HPV16 E7的单克隆抗体,可在多种肿瘤组织细胞核中染色.结论 该抗体是HPV16 E7蛋白特异性的McAb.     

沙眼衣原体与女性感染高危型人乳头瘤病毒的关系

目的:分析沙眼衣原体(CT)与女性感染高危型人乳头瘤病毒(HPV)的关系。方法:收集临床(包括门诊和住院)送检的428例同时检测CT和高危型HPV女性患者(均>35岁)数据。CT由本院采用EIA法检测,高危型HPV检测由广州金域医学检验中心采用第2代杂交捕获(HybridCapture2,HC-2)法进行检测。结果:在CT阴性的357例患者中,高危型HPV阳性38例,阳性率10.64%;CT阴性的71例患者中,高危型HPV阳性26例,阳性率36.62%。采用X2检验进行统计,两阳性率的差异有统计学意义(P<0.01)。结论:女性沙眼衣原体(CT)的持续感染能显著增加高危型HPV感染的机率,而高危型HPV的持续感染是宫颈癌发生发展的必要条件[1],积极预防和控制CT的感染将有可能降低宫颈癌的发生率。     

上消化道癌组织中人乳头瘤病毒16及E6 mRNA检测的临床意义

目的　探讨人乳头瘤病毒 (HPV)感染与上消化道癌的关系。方法　采用原位杂交(ISH)技术检测了食管癌、贲门癌、胃体癌、胃窦癌及正常胃黏膜组织中HPV16E6mRNA的表达水平。结果　食管癌、贲门癌、胃体癌、胃窦癌及正常胃黏膜组织中HPV16E6mRNA的检出率分别为 :70 %(2 8/ 4 0 ) ,6 7 6 % (5 0 / 74 ) ,4 7 5 % (19/ 4 0 ) ,35 5 % (2 2 / 6 2 )和 2 0 % (10 / 5 0 )。贲门癌与食管癌的检出率之间的差异无显著意义 (P =0 95 5 )。胃癌 (胃体癌 +胃窦癌 )的检出率明显低于贲门癌和食管癌 (均P<0 0 1)。正常人群胃黏膜中HPV16E6mRNA检出率明显低于食管癌 (P <0 0 1)、贲门癌 (P <0 0 1)、胃癌 (胃体癌 +胃窦癌 ) (P <0 0 5 )。贲门癌HPV16E6mRNA检出率与分期呈负相关 (P <0 0 5 ) ,与患者性别、年龄、肿瘤的大小、浸润深度、组织分化程度、脉管癌栓、淋巴结转移及患者的预后无显著相关性 (P >0 0 5 )。结论　HPV不仅在鳞状上皮中增生繁殖 ,在腺上皮中也能活跃地生存。HPV16感染与上消化道肿瘤 ,尤其是食管癌和贲门癌的发生可能相关。     

导流杂交基因芯片技术检测人乳头瘤病毒结果分析

目的 分析妇产科就诊妇女人乳头瘤病毒（HPV）感染、基因型和年龄特征的流行病学情况.方法 对2008年1月-2012年12月妇产科就诊的6230例妇女进行下生殖道HPV感染分型检测,采用核酸分子快速导流杂交基因芯片技术（HybriMax）检测21种亚型,其中高危型（HR-HPV）15种,低危型（LR-HPV）6种.结果 在6230例标本中,阳性标本1664（26.71%）,单型感染1213例（19.47%）,多型感染451例（7.24%）.感染率占前5位的亚型分别是：HPV16型335例（5.38%）、HPV52型334例（5.36%）、HPV58型243例（3.90%）、HPV6型164例（2.63%）、HPV53型152例（2.44%）.高危型HPV16、HPV52和HPV58及低危型HPV8304和HPV11检出率逐年下降;所有患者中≤20岁年龄段HPV检出率最高为52.04%.结论 应用HybriMax技术检测HPV的检出率为26.71%,主要为HPV16、HPV52、HPV58、HPV6和HPV53,人群感染高峰在≤20岁年龄段.     

L1、E6和E7基因序列分析

目的了解中国西南地区HPV16亚型基因的一级结构特点,为由HPV16亚型感染引起的疾病特别是宫颈癌的临床诊断、治疗提供理论依据。方法选取经分型明确为HPV16型感染的官颈癌组织32例,用PCR方法获得其E6、E7及L1基因的全长序列并进行测序分析。结果与德国标准株相比,32个标本中总共发现131（G—A）（Gly-Arg）、178（T—G）（Asp—Glu）、350（G-T）（Val—Leu）、647（A—G）（Asn-Asp）、846（T—C）（同义突变）、IA基因第966（C—T）（同义突变）、L1基因第1302（C-T）（同义突变）和L1基因第1434（A—G）（同义突变）等20个突变位。结论与标准序列比较,中国西南地区HPV16亚型L1、E6和E7基因存在一定范围变异,提示在预防治疗西南地区妇女宫颈癌病人以及研制该地区HPV疫苗时,需要注意这些位点的变异,特别是一些引起氨基酸变异的位点。     

16型人乳头状瘤病毒E6、E7与宫颈癌、宫颈炎关系的初步研究

目的 了解重庆地区宫颈癌、宫颈炎发病与１６例人乳头状瘤病毒（ＨＰＶ１６）Ｅ６、Ｅ７的关系。方法 运用ＰＣＲ,分子生物学技术进行ＨＰＶ１６Ｅ６、Ｅ７的扩增和克隆。结果 重庆地区宫颈癌、宫颈炎组织中ＨＰＶ１６Ｅ６,Ｅ７总检出率分别为７０％和６５％。结论 重庆地区ＨＰＶ１６感染与宫颈癌、宫颈炎的发生相关。Ｅ７原癌蛋白可能与宫颈癌发生早期有关,而Ｅ６原癌蛋白可能与宫颈癌形成晚期关系密切。     

人乳头瘤病毒E6/E7蛋白在宫颈病变筛查中的应用

目的:探讨人乳头瘤病毒(human papilloma virus,HPV)E6/E7蛋白在宫颈癌筛查中的作用。方法:选取宫颈疾病患者70例,行宫颈病理学检查及新柏氏液基细胞学(TCT)检测,比较高危型HPV E6/E7 mRNA与HPV DNA分型检测宫颈癌病变及非典型鳞状细胞(ASC-US)患者高级别宫颈癌病变的敏感度、特异度。结果:高危型HPV E6/E7 mRNA检测与HPV DNA分型检测宫颈病变总检出率分别为60.0%(42/70)、67.1%(47/70);两种方法检测慢性宫颈炎及CINⅠ、CINⅡ~Ⅲ、宫颈癌检出率差异均无统计学意义(P>0.05);宫颈病变的敏感度、阳性预测值及阴性预测值差异无统计学意义(P>0.05),高危型HPV E6/E7 mRNA检测的特异度明显高于HPV DNA分型检测(P<0.05);ASC-US患者高危型HPV E6/E7 mRNA检测的特异度明显高于HPV DNA分型检测(P<0.05)。结论:与HPV DNA分型检测方法相比,高危型HPV E6/E7 mRNA检测对预测宫颈病变特异度更强,特别是对TCT检测为ASC-US患者的分流意义更为明确。     

宫颈癌组织中HPV16 E6基因的检测及其意义

目的：探讨宫颈癌组织中人乳头状瘤病毒16型(HPV16)E6基因的检测及其意义。方法：运用PCR方法扩增HPV16E6／E7基因，分子克隆技术进行基因的克隆后进一步测定基因序列，宫颈炎和宫颈癌的确诊依赖于病理学方法。结果宫颈癌组织中HPV16E6基因的检出率为45％，显著高于宫颈炎组织中5％的检出率，两者有统计学差异。HPV16E7基因的检出率在两者之间没有显著性差异。结论：HPV16E6基因在宫颈癌的发病中起到重要的作用。宫颈组织中HPV16E6基因的检测有望成为宫颈癌筛查的新手段。     

梅州市妇女HPV感染研究

目的：了解梅州客家地区不同年龄段女性生殖道人乳头瘤病毒（HPV）感染状况及其分布规律,为梅州客家地区HPV分子流行病学研究提供依据。方法：以2009年8月～2010年8月来我院就诊的6 455例可疑患者为对象,采集其阴道、宫颈分泌物作为标本。用凯普医用核酸分子杂交系统进行21种HPV基因型的分型检测,分析常见感染亚型和分布规律。结果：HPV阳性总检出率为20.67%（1 334/6 455）,高危型主要为HPVl6,其余依次为HPV58、52、31、33感染。低危型主要为HPV11、HPV6感染;各年龄组总HPV阳性率居前3位的是30～39岁,40～49岁,50～59岁。结论：HPV基因型HPV16（5.61%）、HPV58（2.74%）、HPV52（2.69%）、HPV31（2.14%）和HPV33（1.28%）是梅州客家地区HPV感染的主要型别,不同年龄段HPV阳性率有显著性差异（P〈0.05）,对HPV阳性者进行定期跟踪是防治宫颈癌的重点。     

海口地区女性人乳头瘤病毒易感型别的临床研究

目的了解海口地区女性人乳头瘤病毒(HPV)感染的易感型别,为海口地区女性预防和治疗HPV病毒感染提供参考依据。方法采用多重PCR与导流杂交技术,对2 587名海口地区女性的宫颈脱落细胞进行HPV 21种基因分型检测。结果2 587例海口女性中,检出HPV阳性患者465例,总阳性率为17.97%。其中HPV 52型阳性163例,阳性率为6.30%;HPV 58型阳性94例,阳性率为3.63%;HPV 16型阳性92例,阳性率为3.56%。结论海口地区女性人乳头瘤病毒以HPV 52、58及16型为主要易感型别。     

人乳头状瘤病毒感染致宫颈癌及癌前病变风险研究

目的 探讨感染人乳头状瘤病毒（human papilloma virus,HPV）后患宫颈癌及癌前病变风险.方法 采用HPV-DNA核酸扩增及导流杂交技术,对7 234例来我院就诊的宫颈异常患者,进行HPV21种亚型的基因检测和宫颈液基薄层细胞学（TCT）检测,对细胞学检测结果为非典型鳞状细胞（ASCUS）以上和/或HPV-DNA检测阳性的患者,行活组织病理检查,对HPV感染后患宫颈癌及癌前病变风险进行分析.结果 HPV总感染率为27.37%,检出率前四位依次是HPV 16型6.97%（504/7 234）、52型5.68%（411/7 234）、58型5.27%（381/7 234）和33型3.33%（241/7 234）,其中高危型病毒（HR-HPV）感染占78.16%（2147/2747）.宫颈癌患者HPV的检出率为73.33%（33/45）.单型HPV感染后患轻度鳞状上皮内瘤变（LSIL）及高度鳞状上皮内瘤变（HSIL）和宫颈癌的风险分别是HPV阴性者的4.055倍（95% CI 2.528～6.505）和5.103倍（95% CI 3.838～6.786）,多型混合HPV感染后患宫颈LSIL及HSIL和宫颈癌的风险分别是HPV阴性者的7.313倍（95% CI 4.314～12.397）和7.550倍（95%CI 5.395～10.564）.结论 单型HPV感染致宫颈HSIL或宫颈癌的风险是HPV阴性者的5.1倍,多型混合HPV感染致宫颈HSIL或宫颈癌的风险是HPV阴性者的7.6倍.     

高危型人乳头瘤病毒检测在宫颈病变筛查中的意义

目的 探讨高危型人乳头瘤病毒(HPV)检测在宫颈病变筛查中的临床意义.方法 对2003年10月至2005年1月在我院就诊的1476例患者进行超薄液基细胞学检查、高危型HPV检测及阴道镜检查.结果 1476例患者中HPV感染阳性例数为654例,占44.31%,平均年龄为36.57岁;阴性例数为822例,占55.69%,平均年龄为36.48岁.高危型HPV感染阳性率随宫颈病变程度加重而明显升高.HPV高危型阳性患者中,病理诊断宫颈炎占35.7%(444/1244);宫颈上皮内瘤变(CIN)Ⅰ级占84.3%(70/83);CIN Ⅱ级占90.0%(54/60);CIN Ⅲ级占95.8%(69/72);早期浸润癌为100%(17/17).结论 在宫颈病变的早期筛查中,联合进行细胞学、高危型HPV-(第2代杂交捕获实验)HC2检测、阴道镜及病理学检查有重要意义.