高、低发区食管癌p16基因甲基化及其表达的比较研究

[摘要]目的 比较p16基因甲基化在食管癌高发区广东揭阳和低发区广东佛山之间的异同,探讨p16基因甲基化在两地食管癌变过程中所起的作用。方法 采用甲基化特异性PCR方法（MSP）分别检测两地食管癌组织、癌旁组织和切缘组织p16基因启动子区域CpG岛甲基化状态。采用EnVision免疫组化法检测两地食管癌组织及癌旁组织的p16蛋白的表达。结果 高发区75例标本中,食管鳞癌、癌旁及切缘组织的p16基因甲基化率分别为41.3%（31/75）、13.3%（10/75）和6.67%（5/75）。鳞癌及癌旁组织p16蛋白的阳性表达率分别为29.3%（22/75）和56.7%（17/30）。31例甲基化阳性标本中有2例（6.4%）检测到p16蛋白表达,而44例甲基化阴性的标本中有20例（45.5%）检测到p16表达;低发区55例标本中,食管鳞癌、癌旁及切缘组织的p16基因甲基化率分别为18.2%（10/55）、5.5%（3/55）和0（0/55）。食管鳞癌、癌旁组织p16蛋白阳性表达率分别为36.4%（20/55）和66.7%（20/30）。10例甲基化阳性标本中有1例（10.0%）检测到p16蛋白的表达;而45例甲基化阴性的标本中有19例（42.2%）检测到p16表达。两组鳞癌组织的p16基因甲基化率均明显高于癌旁及切缘组织（p<0.05）;p16蛋白表达与p16基因甲基化呈负相关。高发区癌组织p16基因甲基化率明显高于低发区,有统计学差异（p<0.05）。两组间癌组织p16蛋白表达率无显著统计学差异（p>0.05）。结论 p16基因异常甲基化可能是高发区食管癌癌变过程的重要事件,而在低发区p16基因异常甲基化可能不是其失活的主要机制。高、低发区可能存在不同的食管癌致癌机制。本研究从环境因素和p16基因之间的相互作用方面,为高发区和低发区食管癌的发生提供了一定的理论依据。 [关键词] 食管癌;p16基因;DNA甲基化;甲基化特异性PCR;负相关     

p16基因甲基化及P16、Cyclin D1、pRb与皮肤鳞状细胞癌相关性研究

目的 探讨P16、CyclinD1和pRb蛋白在皮肤鳞状细胞癌（简称皮肤鳞癌）中的表达及他们的相互关系和意义；研究p16基因甲基化是否与原发性皮肤鳞癌的发生有关。方法 采用PCR为基础的限制性内切酶甲基化法及免疫组化S-P法检测40例原发性皮肤鳞癌组织中p16基因甲基化状态及P16、Cyclin D1和pRb蛋白的表达，并以10例正常皮肤组织作对照。结果 皮肤鳞癌组织P16蛋白iCyclin D1阳性表达率分别为37．5％和57．5％；P16蛋白表达与CyclinD1的表达呈显著负相关（r=-0．3162，P=0．008）。皮肤鳞癌中P16蛋白和pRb表达呈显著负相关（r=-0．4007，P〈0．05）。p16基因的甲基化阳性率为42．5％。2级皮肤鳞癌组织中P16蛋白及p16基因甲基化阳性表达率比1级鳞癌组织显著增高（P〈0．05），而Cyclin D1和pRb阳性率表达则显著降低（P〈0．05）。在有淋巴结转移组中P16蛋白及p16基因甲基化阳性率与元淋巴结转移组相比显著降低（P〈0．05），而Cyclin D1和pRb阳性率则显著增加（P〈0．05）。结论 在原发性皮肤鳞状细胞癌中存在P16蛋白低表达、Cyclin D1高表达的异常表达现象，两者的表达相互抑制，呈显著负相关；P16蛋白和pRb蛋白的表达呈负相关；p16基因甲基化与皮肤鳞癌病理分级、淋巴结转移之间有显著关系。提示p16基因甲基化在皮肤鳞癌的发生发展过程中起重要作用。     

p16基因甲基化在非小细胞肺癌发病中的研究

目的研究p16基因甲基化在非小细胞肺癌（NSCLC）发病过程中的作用及其影响因素,为探索肺癌发病机制提供依据。方法采用甲基化特异性PCR（MSP）技术检测47例NSCLC患者肺癌组织和47例对应癌旁组织中DNA的p16基因甲基化状况,同时收集吸烟等环境暴露资料。结果肺癌组织中p16基因甲基化率44．7％,高于癌旁组织的17％（P〈0．01）,p16基因甲基化好发于鳞癌（P〈0．05）,在鳞癌中肺癌组织p16基因甲基化率明显高于癌旁组织,差异有显著性（P〈0．01）,且p16甲基化和吸烟在鳞癌中高度相关（P〈0．01）。结论p16基因甲基化可能参与鳞癌的形成,且与吸烟高度相关。     

人宫颈癌发生中p16INK4A表达缺陷与其外显子甲基化的关系

目的 研究抑癌基因p16INK4A在宫颈癌发生中的表达变化，分析这种差异表达与甲基化的关系。方法 逆转录聚合酶链技术（RT．P（1R）检测30例宫颈癌组织标本、48例宫颈上皮内瘤样病变（CIN）组织（CIN Ⅰ12例、CINⅡ16例、CINⅢ20例）中p16INK4A基因的表达。Western Blot分析P16INK4A蛋白水平的表达。甲基化特异性的PCR技术（MSP）对p16INK4A DNA进行甲基化分析。以每例标本相应正常宫颈组织作为对照。结果 70％（21／30）宫颈癌组织中p16INK4A表达下降或缺失，与正常宫颈组织、CIN Ⅰ和CINⅡ中的p16INK4A表达相比，差异具有统计学意义（P〈0．05），与CIN Ⅲ相比差异无统计学意义（P〉0．05）。蛋白的表达检测也得到相似的结果。MsP检测发现宫颈癌组织中有9例p16INK4A外显子甲基化，甲基化率为30％，其中8例年龄小于40岁，提示甲基化易于出现在年轻患者。而CIN组织中仅CIN Ⅲ发现1例甲基化，说明甲基化随着宫颈病变的发展而增多。分析甲基化与p16INK4A表达的关系，发现42．86％（9／21）的宫颈癌组织中p16INK4A表达下降与甲基化有关，甲基化的宫颈癌组织中p16INK4A表达均下降。结论 p16INK4A作为一种抑癌基因，它的表达缺失或下降在宫颈癌的发生中起重要作用，外显子甲基化是导致其表达缺陷的部分原因。     

原发性肝细胞癌中p16、p15基因启动子区甲基化状态检测

目的研究原发性肝细胞癌中p16、p15基因启动子区甲基化状态及其与原发性肝细胞癌发生发展的关系。方法用特异性甲基化PCR（MSP）法检测30例原发性肝细胞癌肿瘤组织和5例正常肝脏组织中p16、p15基因启动子区甲基化状态，并进行统计分析。结果30例原发性肝细胞癌肿瘤组织中p16和p15基因启动子区分别有53．3％（16／30，P〈0．05）和46．7％（14／30，P〉0．05）甲基化，5例正常组织中未发现甲基化。两基因甲基化与原发性肝细胞癌临床病理及HBsAg之间无明显相关性（P〉0．05），两者在原发性肝细胞癌发生中有协同性（相关性和一致性）。结论p16、p15基因启动子区异常甲基化在原发性肝细胞癌中发生频率很高，可能对肝细胞癌发生发展起重要作用。     

胰液中p16基因启动子区5'CpG岛甲基化改变及其意义

目的：探讨胰液中p16基因启动子区5’CpG岛甲基化检测在胰腺癌诊断中的价值。方法：2005～2006年30例来自长海医院消化内镜中心的胰腺疾病患者入选，采用内镜逆行胆胰管造影（ERCP）下放置鼻胰管收集胰液，沉渣涂片H-E染色进行细胞学检查，甲基化特异性PCR（MSP）法检测胰液及组织中p16基因甲基化状态。结杲：单纯胰液细胞学检查诊断胰腺癌的敏感性为40％（8／20），特异性为100％（10／10），阳性预测值为100％（3／8），阴性预测值为45．4％（10／22），诊断准确性60．0％（18／30）。所有胰液标本均成功抽提出DNA，30例胰腺疾病患者胰液标本进行p16基因启动子区5＇CpG岛甲基化检测，其中20例胰腺癌患者胰液中p16基因甲基化率为35％（7／20），慢性胰腺炎和胰腺囊腺瘤患者胰液中无p16基因甲基化。胰液中p16基因甲基化与常规细胞学联合诊断胰腺癌的敏感性为55％（11／20），特异性为100％（10／10），阳性预测值为100％（11／11），阴性预测值为52．6％（10／19），诊断准确性70％（21／30）。结论：鼻胰管收集的胰液可用于分子生物学检测，检测胰液中p16基因甲基化改变与细胞学联合更有助于胰腺癌的诊断。     

食管鳞癌组织中p16基因缺失及甲基化检测

目的:探讨食管癌组织中p16基因表达缺失的机制.方法:采用PCR、DHPLC、MSP及免疫组化的方法,检测45例食管鳞癌组织及其相应的间变组织和正常食管上皮组织中p16基因的缺失、突变、甲基化状态及蛋白表达情况.结果:正常食管上皮组织中p16蛋白均为正常表达(45/45,100%),间变和癌组织中异常表达率分别为84.4%(38/45)和91.1%(41/45),3者间异常表达率差异有统计学意义(x2=20.03,P＜0.001).p16蛋白表达异常的41例癌组织中,纯合型甲基化发生率为80.48%(33/41),杂合缺失发生率58.53%(24/41),不缺失发生率41.46%(17/41),均高于p16蛋白表达正常的癌组织.结论:该地区食管癌组织中p16基因主要通过纯合型甲基化失活.     

乳腺癌p16基因甲基化及与蛋白表达的关系

目的:探讨散发性乳腺癌中p16基因异常甲基化状况及其与蛋白表达的关系,进而研究散发性乳腺癌中p16基因异常的表遗传学作用。方法:用甲基化特异PCR(MSP)和SP法研究68例乳腺癌组织及相应癌旁正常组织中p16基因启动子甲基化状况及蛋白表达情况。结果:p16基因在68例散发性乳腺癌组织中的甲基化率为29%,且其甲基化与肿瘤组织分型、患者居住地及淋巴结转移相关(P<0.05),而与肿瘤患者绝经与否及组织分级无关(P>0.05);P16蛋白在所有肿瘤标本中的表达下降率为51%,在相应癌旁组织中均呈阳性表达,二者有显著性差异(P<0.05),P16蛋白表达下降与肿瘤患者淋巴结转移及患者居住地明显相关(P<0.05),与患者绝经、组织分级和分型无关(P>0.05);在20例p16甲基化的癌组织标本中,P16蛋白表达下降率(95%),显著高于48例未发生甲基化的乳腺癌标本下降率(33%),两者有显著性差异(P<0.05),乳腺癌患者组织p16基因甲基化检出率与P16蛋白表达下降率具有良好的一致性(Kappa=0.506),而p16未发生甲基化的正常乳腺组织和乳腺良性病变组织其蛋白均呈阳性表达。结论:在散发性乳腺癌中p16启动子甲基化改变会明显降低P16蛋白表达,p16基因启动子甲基化是其蛋白表达下降的重要原因,这种机制更倾向于农村乳腺癌患者。     

凋亡相关基因PDCD5启动子区甲基化在新疆汉族和维吾尔族食管鳞癌中的作用研究

目的：探讨凋亡相关基因程序化细胞死亡分子5（PDCD5）启动子区 CpG岛在新疆维吾尔族和汉族食管鳞状细胞癌（鳞癌）中的甲基化情况及其与临床病理特征的相关性。方法采用甲基特异性PCR（MSP）法检测40例食管鳞癌患者（维吾尔族20例,汉族20例）癌组织、癌旁组织中 PDCD5基因甲基化情况。结果癌组织中PDCD5甲基化阳性率为80．0％（32/40）,癌旁组织中甲基化阳性率为35．0％（14/40）,差异有统计学意义（P ＜0．05）;PDCD5甲基化阳性率与食管鳞癌临床分期相关（P ＜0．05）;不同民族、性别、年龄食管鳞癌中 PDCD5甲基化阳性率差异无统计学意义（P ＞0．05）。结论在食管鳞癌癌组织中甲基化水平高于癌旁组织;PDCD5甲基化率与食管癌的临床分期有相关性,PDCD5在食管鳞癌中的甲基化率与民族、性别、年龄无相关性。     

大肠癌p16抑癌基因甲基化及与Dukes分期的关系

目的 检测大肠癌患者p16基因启动子CpG区甲基化的改变,探讨其与大肠癌发生、发展和临床资料的关系。方法 采用甲基化特异PCR技术（MSP法）研究58例大肠癌标本p16基因甲基化改变,分析临床病理资料。结果 25例标本（43．1％）呈p16 CpG区甲基化阳性;Dukes C、D期病人p16 CpG区甲基化发生率（75％）明显高于Dukes A、B期病人（13．3％）。结论 p16启动子区甲基化导致p16抑癌基因失活参与了大肠癌的发生和发展;p16甲基化可以作为估计大肠癌病人预后的一个指标。     

2001年我国医药研究的若干进展

随着国内外生命科学和生物技术等的飞速发展,我国医药技术在2001年取得了长足的进步。提前完成了我国所承担的人类基因组汁划中的1％测序任务,到2000年,中国科学家在功能基因研究和基因组多样性领域共完成研究论文1850篇,遍及医药各领域,研究手段和水平可于国际先进水平媲美,中国完全有条件在“后基因时代”成为主角之一。     

小儿耳鼻喉手术麻醉的新进展

因小儿耳鼻喉手术刺激强,时间短,且常与气道相关,故麻醉的控制有一定难度,现对国内外现阶段小儿耳鼻喉手术麻醉的改良方法及新观点进行评述,以期对临床工作有较好的指导意义。     

成都市属医院1，175例儿童支气管肺炎住院费用分析

为探讨成都市不同级别医疗机构儿童支气管肺炎单病种费用水平以及不同收费项目占总费用的比例特点及控制医疗费用的有效途径,为患者自主选择就诊医疗机构提供参考指导,对成都市卫生局所属不同级别医院儿童支气管肺炎住院医疗费用分析如下。1资料与方法1.1资料来自成都市卫生局2     

Malaria in children in Birmingham in the 1970s

Thirty-two children with malaria were admitted to Dudley Road Hospital, Birmingham, in the 1970s. None was admitted before 1974 and there was a rapid increase after that. All the infections were due to Plasmodium vivax and occurred in children of Asian immigrant families who had been born in or had visited India or Pakistan apart from one infant born in England who acquired the disease transplacentally. All presented within 12 months of entering or re-entering the United Kingdom. The clinical features of the 32 patients have been analysed and it is suggested that more effort should be made to educate travellers about the need for anti-malarial chemoprophylaxis and the necessity to continue it for one month after return.     

2005年广西流动人口疟疾监测结果分析

目的了解广西流动人员疟疾流行现状,进而提出针对性防治措施。方法收集全区网络直报疫情资料和各级疾病预防控制机构疟疾监测数据进行分析。结果2005年广西流动人口发热病人平均疟原虫阳性率为0·33%。80·62%的病人为本地居民外出到疟疾流行区务工感染所致。以从事护林/砍伐比例最高,占44·19%。结论加强返乡流动人口疟疾监测是巩固广西疟疾防治的关键所在。