单纯疱疹病毒糖蛋白模拟位的研究

目的 为了充分认识单纯疱疹病毒（HSV）糖蛋白的抗原表位，寻找HSV多组分疫苗和新型基因工程疫苗更有效的小片段短肽作为该病毒疫苗的备选免疫原。方法 利用有动物保护活性的抗HSV糖蛋白C（gC)单克隆抗体（McAb)1A12淘筛噬菌体随机12肽库，经4轮筛选后进行ELISA检测，随机挑取14个阳性克隆进行序列测定，序列比较后得到保守序列，做ELISA阻断实验进一步鉴定筛选结果并与相关天然蛋白HSV gC进行序列比较。结果 获得保守序列－SG（L）RHII－和其侧翼辅助序列－AK－、－VW－，其与天然相关蛋白HSV gC114-116位氨基酸十分相似。携有此短肽的噬菌体可以与McAb特异结合，并可部分阻断抗体与HSV囊膜抗原的反应。结论 所筛选到的保守序列可模拟McAb针对的抗原表位，可能是HSV的替代抗原。这一研究方法有望使短肽替代庞大的糖蛋白全长氨基酸序列，为研制更有效及更广谱的基因工程疫苗提供依据，也使研制基于抗原表位水平的特异诊断试剂成为可能。     

抗单纯疱疹病毒单克隆抗体CHA9靶基因的定位

目的：获得单纯疱疹病毒（HSV）新糖蛋白g30K的部分特征氨基酸信息，以期对该蛋白基因的准确定位有所帮助。方法：将针对HSV新糖蛋白g30K的单克隆抗体（mAb）CHA9生物素化后，淘筛噬菌体随机12肽库，经3轮筛选后进行ELISA检测。随机挑取10个阳性克隆进行DNA测序，并进行序列比较以得到保守序列，然后对其疏水性进行预测。结果：得到的保守氨基酸序列（motif）为-PH/KHXHXGS-。携有此短肽的噬菌体可与CHA9特异结合而不与其它IgG出现交叉反应。疏水性分析证明其可能构成一个表位。结论：筛选到一段具有含mAb CHA9靶抗原-HSV新糖蛋白g30K部分氨基酸特征的短肽，为新基因的预测提供了参考依据，对进一步分析这一新糖蛋白的生物学功能也具有重要意义。     

麻痹性贝类毒素GTX2,3模拟表位的初步研究

目的:利用噬菌体展示随机肽库筛选可模拟麻痹性贝类毒素GTX2,3抗原表位的噬菌体,初步鉴定人工合成的GTX2,3抗原表位肽的特异性。方法:以抗麻痹性贝类毒素GTX2,3单克隆抗体(mAb)为靶分子,对噬菌体随机12肽库进行3轮免疫亲和筛选,以夹心ELISA方法鉴定噬菌体克隆,竞争ELISA鉴定阳性噬菌体克隆的特异性。对阳性克隆进行DNA测序并推导噬菌体所展示的氨基酸序列。竞争ELISA鉴定模拟GTX2,3表位的合成肽的特异性。结果:经过3轮筛选获得20株能与靶分子高亲和力结合的阳性噬菌体克隆。序列分析表明DXLXPP为保守序列(X为任意氨基酸)。竞争ELISA检测表明,麻痹性贝类毒素GTX2,3可抑制阳性噬菌体克隆phage2与抗GTX2,3mAb结合。根据阳性序列合成的短肽可以抑制phage2与抗GTX2,3mAb的结合(IC50=13μg/mL)。结论:通过噬菌体肽库筛选技术,成功地获得麻痹性贝类毒素GTX2,3的模拟表位,并初步证实以此为基础合成的短肽能够准确和特异的模拟GTX2,3的表位。     

胃癌相关抗原表位模拟短肽的筛选

目的：筛选能模拟胃癌相关抗原表位的功能短肽。方法：利用离子交换层析，对抗胃癌相关抗原单克隆抗体(mAb)进行纯化，并以此mAb为靶标，将其包被于ELISA板上，以噬菌体随机12肽库对其进行3轮亲和筛选。结果：从噬菌体随机12肽库中，筛选到12个噬菌体阳性克隆：结论：获得了具有模拟胃癌相关抗原表位的阳性噬菌体克隆，且有共同的基序。     

应用噬菌体肽文库筛选mAb F3特异性结合肽

目的 应用噬菌体展示肽文库筛选可与汉坦病毒囊膜蛋白中和性单抗（mAb） F3特异性结合的配体肽。方法 以F3mAb为筛选配基，对噬菌体展示和随机12肽文加进行3轮生物亲和淘选；用夹心ELISA和竞争ELISA鉴定筛选克隆的结合特性，并进一步对阳性克隆进行序列测定和分析。结果 通过3轮生物淘选，能被抗体捕获的噬菌体克隆为21／22，ELISA测定显示，筛选到的噬菌体短肽能与F3mAb特异性结合。序列分析表明，7个阳性克隆氨基酸序列相同，均为－MHGPTKNQMWHT；同源性分析显示，该序列与HTNV／SEOV M蛋白G2区第750－759位氨基酸有较高的同源性。结论 本研究为基于表位水平的HFRSV特异性分子多肽疫苗的设计提供了重要的依据。     

利用噬菌体展示技术筛选C型副鸡嗜血杆菌抗原模拟表位

目的　确定抗C型副鸡嗜血杆菌 (HpgC)的单克隆抗体 (mAb)的抗原表位。方法　利用噬菌体展示技术 ,从随机 12肽库中进行生物淘洗 ,用ELISA进行筛选和鉴定。结果　通过 3轮吸附 洗脱 扩增的生物淘洗过程 ,获得了抗HpgmAb结合肽。通过ELISA和竞争抑制ELISA ,获得了高亲和性和特异性的结合肽 ,即Hpg的抗原表位。序列分析显示 ,结合肽恒定区的序列为WIHP。结论　利用噬菌体展示肽库筛选抗原表位技术 ,成功地获得了HpgCmAb的模拟表位 ,它可能是线性表位 ,非常有希望应用于实验性疫苗的研制     

广谱抗革兰氏阴性菌单克隆抗体3A8识别表位的初步研究

目的:利用噬菌体肽库技术筛选抗广谱革兰氏阴性菌与LPS单克隆抗体3A8的识别表位,以获得来源于不同LPS的保守表位.方法:用广谱抗G-菌、LPS的单克隆抗体3A8为靶,筛选噬菌体环七肽库,蚴鉴定阳性噬菌体克隆并测序.根据阳性保守序列合成短肽A2及A5,并与KLH载体交联,ELISA鉴定A2-KLH、A5-KLH与3A8单抗的结合.结果:随机挑选的33个噬菌体克隆中有15个可特异性与3A8结合,该结合可被LPS2630所抑制.根据阳性克隆DNA序列推导氨基酸序列,共有7种序列,均以疏水氨基酸为主,且包含保守序列Ser Pro Pro/Pro X Pro;选择所获阳性序列经设计与改造合成延长的两个环肽;经ELISA鉴定表明这些环肽可特异地与3A8结合.结论:得到可被3A8单抗特异性识别并含保守残基Ser Pro Pro/ProX Pro的阳性序列,据此合成的短肽可特异性结合3A8,提示该短肽可能模拟LPs共同表位的抗原性,有望成为疫苗候选表位.     

利用噬菌体肽库筛选汉滩病毒受体结合表位的研究

目的 确定汉滩病毒（HTNV）上可与宿主细胞受体结合的一段配基表位。方法 型特异性mAb3G1,与HTNV糖蛋白G2及核蛋白（NP）具有双结合活性，且中和效价很高。以纯化的mAb 3G1作为配基，淘筛噬菌体随机12肽库，经ELISA法鉴定后，对阳性克隆进行测序并与天然病毒蛋白G2及NP的序列进行同源性比较分析。结果 经3轮筛选，噬菌体显示有良好的富集效果。从第3轮筛选产物中，随机挑取21个克隆进行ELISA结合实验。结果显示，9个克隆与mAb 3G1有较强的特异结合活性；DNA测序结果表明，具有保守性序列模式PX（1－2）HX（0－2）H。该基序分别与G2^96YPWHTAKCH Y^105及NP^81 PTGVEPGDHLKERS^94相似。结论 从噬菌体随机肽库中，筛选到能与mAb 3G1特异性结合的一段短肽基序PX（1－2）HX（0－2）H，其与HTNV G2部分氨基酸的同源性较高，可能是与宿主细胞受体结合的表位，为进一步证实和研究HTNV的受体奠定了基础。     

噬菌体表达短肽模拟乙脑病毒糖蛋白的研究

为研究日本脑炎病毒 (JEV )E蛋白模拟肽 ,将抗JEVE蛋白的mAb 2H4淘筛噬菌体 15肽库。经夹心ELISA、竞争ELISA鉴定后 ,随机挑取 10个阳性克隆 ,测序并与JEVE蛋白同源比较。将阳性噬菌体免疫小鼠 ,检测血清中特异性抗体。ELISA结果显示筛选到的噬菌体能特异地与mAb 2H4结合 ,并且这种结合可被JEV天然抗原所竞争抑制。 10个阳性克隆的氨基酸序列相同 :—RQDPQWPYANSTIAR— ,同源分析得到的序列STXAR可能为mAb 2H4识别的模拟表位。阳性噬菌体表达的 15肽能够刺激小鼠产生特异性抗体。该噬菌体表达短肽模拟JEVE蛋白的部分抗原性。     

应用噬菌体展示技术筛选、鉴定抗汉滩病毒单克隆抗体的模拟表位

目的 :应用噬菌体 12肽文库筛选抗汉滩病毒单抗 (mAb)F3、B11的模拟配体肽 ,并对其免疫学特性进行初步分析。方法 :以纯化的mAb为筛选配基 ,进行噬菌体肽库的生物亲和淘选。用ELISA法鉴定筛选克隆的结合活性 ,对阳性克隆进行序列测定和分析。用动物免疫试验初步分析噬菌体颗粒展示的抗原肽的免疫特性。结果 :通过 3～ 4轮生物淘选 ,ELISA显示筛选到的多数噬菌体克隆均可与mAb特异性结合 ;与mAbF3结合的阳性克隆的氨基酸序列高度一致 ,均为 MHGP TKNQMWHT ,与HTNV/SEOVM蛋白G2区第 75 0～ 75 9位氨基酸具有较高的同源性 ;而mAbB11特异性的结合肽在氨基酸水平上表现出一定的多态性 ,其序列的基序尚未能确定 ;动物免疫试验表明 ,噬菌体肽抗原具有良好的免疫反应性和免疫原性 ,是天然病毒抗原较好的免疫原模拟物。结论 :获得了具有良好结合活性的模拟表位肽 ,为基于表位的HFRSV多肽疫苗及DNA疫苗的研制奠定了基础。