乙酰肝素酶反义硫代寡脱氧核苷酸对人肝癌细胞系侵袭力的抑制作用

目的探讨乙酰肝素酶反义硫代寡脱氧核苷酸对人肝癌细胞系侵袭力的抑制作用。方法设计合成互补于HPAmRNA起始密码区的硫代反义寡脱氧核苷酸AS-ODN及相应的无义对照寡脱氧核苷酸NS-ODN,以阳离子脂质体OligofectamineTMReagent包埋后转染SMMC-7721、BEL-7402细胞。采用RT-PCR和Western-blot检测转染前后细胞HPAmRNA及蛋白表达的变化,以基底膜重建实验检测SMMC-7721、BEL-7402细胞侵袭力的变化。结果与正常对照组相比,AS-ODN转染组SMMC-7721、BEL-7402细胞HPAmRNA和蛋白的表达均显著下降(P<0.01,P<0.05),转染后两细胞系的侵袭力抑制率分别为55.8%和61.8%。结论HPA硫代反义寡脱氧核苷酸可通过下调HPAmRNA和蛋白的表达抑制肝癌的侵袭力。     

NK细胞对不同人肝癌细胞株的杀伤作用

目的: 观察自然杀伤(NK)细胞对不同肝癌细胞株的体内外抑瘤作用,并检测肝癌细胞MHC-I类链相关蛋白(MIC蛋白)的表达。方法: 抽取志愿者外周血50 mL,分离单个核细胞,置入NK细胞试剂盒行孵化及逐级扩增。计算NK细胞对人白血病细胞株K562及人肝癌细胞株BEL7402、HepG2、SMMC7721的杀伤率。接种建立人肝癌细胞株裸鼠移植瘤,进行NK细胞瘤内及瘤周注射;计算各组裸鼠移植瘤的体积,绘制各组肿瘤生长曲线;处死裸鼠,称瘤重,计算NK细胞对各组肿瘤抑制率。检测人肝癌细胞表面 MIC蛋白表达。结果: NK细胞对K562细胞杀伤最强,BEL-7402次之,SMMC-7721细胞株杀伤敏感性最低。裸鼠抑瘤实验结果显示NK细胞对于BEL-7402细胞株的抑瘤效果最好,而对于SMMC-7721细胞株的抑瘤效果较差。BEL-7402及HepG2细胞株表面表达MIC,而SMMC-7721则很少表达。结论: NK细胞对于不同人肝癌细胞株体内外抑瘤作用不同,其差异可能和不同肝癌细胞株MIC的表达有关。     

人参皂苷Rh2对肝癌SMMC-7721细胞增殖和细胞骨架的影响

目的: 探讨人参皂苷Rh₂(Rh₂)对人肝癌细胞SMMC-7721细胞生长和细胞骨架的影响。方法: 应用MTT法及流式细胞仪检测不同浓度Rh₂对SMMC-7721细胞增殖的抑制及诱导凋亡作用;激光共聚焦显微镜观察细胞骨架肌动蛋白F-actin的分布状态;整装细胞电镜术观察细胞核基质-中间纤维系统的变化。结果: MTT法和流式细胞仪分析结果分别显示,40 mg/L Rh₂ 作用SMMC-7721细胞4 d时的抑制率及细胞凋亡率明显高于对照组及10、20 mg/L组,显著差异(P＜0.05);激光共聚焦显微镜下,SMMC-7721细胞经Rh₂处理4 d,F-actin分布均匀,细丝排列整齐,数量增多;而对照组细胞F-actin细丝在细胞内排列紊乱,多呈斑点状分布。整装电镜结果显示,与对照组相比,实验组细胞的中间纤维丰富,均匀地满布细胞中,呈网架状连接的结构。结论: Rh₂能有效抑制SMMC-7721细胞的增殖,增加SMMC-7721细胞的凋亡,并且诱导SMMC-7721细胞骨架发生变化。     

点地梅提取物saxifragifolinB体外抗实体瘤活性研究

目的: 初步探讨点地梅提取物saxifragifolin B体外抗实体瘤活性及其作用机制。方法: Saxifragifolin B作用于体外培养的人肝癌细胞BEL-7402、肺癌细胞A549和胃癌细胞SGC7901。光镜下观察肿瘤细胞形态学变化;AO/EB双染法观察细胞死亡;MTT法检测细胞增殖水平,计算IC₅₀;流式细胞术检测细胞凋亡和坏死。结果: Saxifragifolin B诱导3种实体瘤细胞出现凋亡样和坏死样改变。Saxifragifolin B以浓度依赖的方式抑制肿瘤生长,作用24 h IC₅₀分别为13.13 μmol/L、9.61 μmol/L和11.64 μmol/L。Saxifragifolin B可以诱导肿瘤细胞凋亡和坏死。结论: 点地梅提取物saxifragifolin B具有抗多种实体瘤的活性,其作用机制可能与诱导细胞凋亡和促进细胞坏死有关。     

合成紫花茄皂苷对体外培养肝癌细胞的增殖抑制作用

目的:探讨合成紫花茄皂苷对人肝癌细胞株BEL-7402的增殖抑制及凋亡诱导作用。方法:采用酸性磷酸酶(ACP)法检测细胞增殖抑制率;电镜观测BEL-7402细胞形态变化;流式细胞仪检测细胞凋亡率。结果:合成紫花茄皂苷对人肝癌BEL-7402细胞有明显的增殖抑制作用,其72h的IC50为6·5μg/ml。皂苷可引起细胞形态的明显改变。细胞经皂苷作用6h和12h后,凋亡率显著增加。结论:合成紫花茄皂苷对人肝癌细胞的增殖抑制呈浓度相关性,可诱导肿瘤细胞凋亡。     

柠檬苦素对人肝癌细胞SMMC-7721的体外抑制作用

目的:探讨柠檬苦素(limonin)对人肝癌细胞株SMMC-7721的体外抑制作用。方法:采用四唑盐(MTT)比色法观察不同浓度柠檬苦素对人肝癌细胞株SMMC-7721增殖的影响;绘制细胞株SMMC-7721的生长曲线观察柠檬苦素对其增殖的影响。结果:MTT结果显示,不同浓度柠檬苦素对SMMC-7721细胞生长均有一定抑制作用,且除1.25μg.mL-1浓度外,同一时间各浓度组与对照组相比均有统计学差异(P<0.05);柠檬苦素浓度为1.25-80μg.mL-1,对SMMC-7721细胞48小时的抑制率为3.86%-71.06%,且48小时IC50值为24.42±5.27(19.15?29.69)μg.mL-1;生长曲线结果提示,柠檬苦素对SMMC-7721细胞的抑制作用呈明显时效和量效关系。结论:柠檬苦素对人肝癌细胞株SMMC-7721的增殖具有抑制作用。     

rhHGF/cHGF体外抑制SMMC-7721人肝细胞癌细胞生长

目的:观察重组人肝细胞生长因子(rhHGF)和天然小牛肝细胞生长因子(cHGF)对SMMC-7721人肝细胞癌细胞株的生长效应。方法:传代后处于指数生长期的SMMC-7721细胞经过(HGF处理组)或不经(对照组)rhHGF/cHGF处理培养1-4d,采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测细胞数。并通过流式细胞仪对rhHGF处理细胞作细胞周期分析。结果:rhHGF(5-20μg/L)和cHGF(25-100mg/L)对SMMC-7721细胞增殖具有类似的剂量依赖性抑制作用。在实验浓度内,使用最高浓度时(rhHGF为20μg/L、cHGF为100mg/L)对细胞增殖抑制作用最强。使用不同浓度(5μg/L、10μg/L、20μg/L)rhHGF处理3d的培养细胞均有一半以上停留在G₀/G₁期。结论:rhHGF和cHGF对SMMC-7721人肝细胞癌细胞的体外生长都有强烈的抑制效应。这是由于受HGF的作用细胞生长易于终止在G₀/G₁期。     

2-脱氧-D-葡萄糖与奥沙利铂对人肝癌SMMC-7721细胞增殖及凋亡的影响

目的: 研究糖酵解抑制剂2-脱氧-D-葡萄糖(2-deoxy-D-glucose,2-DG)与奥沙利铂(oxaliplatin,L-OHP)单独及联合应用对人肝癌细胞SMMC-7721增殖及凋亡的影响。方法: 将2-DG及L-OHP单药及联合用药作用于人肝癌细胞SMMC-7721,MTT法检测各组细胞的生长抑制率,并计算两药的协同作用q值,流式细胞仪检测各组细胞周期及凋亡情况,caspase-3试剂盒检测caspase-3活性。结果: 不同浓度的2-DG和L-OHP均可使肝癌细胞增殖受到抑制,并呈时间、浓度依赖性,两药合用后对细胞的增殖抑制作用明显增强(P<0.05)。2-DG可诱导细胞凋亡,使细胞周期阻滞于G₂/M期;与L-OHP合用后细胞凋亡率更高,可阻滞细胞于G₂/M期和S期。Caspase-3活性在两药联合应用时明显增强。结论: 2-DG能有效抑制SMMC-7721细胞生长增殖,并诱导其凋亡;当其与L-OHP联合应用时能增强L-OHP的抗肿瘤作用,其机制可能与增加caspase-3活性有关。     

雷帕霉素介导丝裂原活化蛋白激酶信号通路对肝癌细胞的影响

目的： 探讨雷帕霉素介导丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）信号通路对肝癌细胞Bcl-2、Bcl-xl 及Bax 蛋白表 达的影响。方法：将人肝癌细胞BEL-7402 细胞分为对照组和雷帕霉素处理组（20、50、100 ng/mL）,观察各组 BEL-7402 细胞的形态变化、细胞增殖抑制率、凋亡及蛋白（MAPK、Bcl-2、Bcl-xl 及Bax）表达。结果：随着 雷帕霉素浓度的升高,BEL-7402 细胞呈现崩解和坏死;对照组BEL-7402 细胞增殖抑制率最低,雷帕霉素干预组 BEL-7402 细胞增殖抑制率高于对照组,随着时间及雷帕霉素浓度的升高,细胞生长抑制率逐渐升高;雷帕霉素 处理组与对照组相比差异有统计学意义;随着浓度的升高,BEL-7402 细胞凋亡率升高;对照组BEL-7402 细胞中 MAPK阳性表达率高于雷帕霉素处理组,雷帕霉素处理组随着浓度升高,MAPK阳性表达率不断降低;对照组 BEL-7402 细胞中Bcl-2、Bcl-xl 蛋白升高,与雷帕霉素处理组比较存在显著差异,雷帕霉素处理组Bcl-2、Bcl-xl 蛋白水平随着雷帕霉素的浓度升高而降低,Bax 表达水平随着雷帕霉素的浓度升高而增加。结论：雷帕霉素能 够抑制肝癌细胞增殖,加快坏死及破裂,随着雷帕霉素的浓度升高,凋亡程度增大,其作用机制可能与抑制 MAPK、Bcl-2、Bcl-xl 表达,促进Bax 水平升高有关。     

人参皂苷Rg3逆转人肝癌细胞BEL-7402多药耐药的实验研究

目的 观察人参皂苷Rg3对逆转人肝癌细胞BEL-7402耐药作用.方法 MTT法测定人参皂苷Rg3与长春新碱(VCR)联合对肝癌细胞BEL-7402生长抑制率,反转录多聚酶链反应(RT-PCR)检测人参皂苷Rg3作用于肝癌细胞MDRImRNA的表达量.结果 不同浓度的人参皂苷Rg3( 10、20、30、40、60 mg/L)与长春新碱(0.02 mg/L)联合作用后,其对细胞增殖抑制率较单独用药时作用增加(P＜0.05),相互作用指数CDI＜1.人参皂苷Rg3 40.0μg/mL作用于肝癌细胞BEL-7402不同时间(24、48、72h)后MDR1mRNA的表达量明显下降[(79.21±2.23)％,(62.58±2.46)％,(45.46±1.13)％],与对照组差异有统计学意义(P＜0.05).结论 人参皂苷Rg3与长春新碱联合应用具有协同抑制作用,能逆转BEL7402对VCR的耐药.人参皂苷Rg3能抑制BEL-7402细胞MDR1 mRNA的表达.     

一定浓度下三氧化二砷对T细胞淋巴瘤Hut-78细胞株增殖的影响

背景：近年来有将三氧化二砷试用于T细胞肿瘤的有效报道,但未见其治疗机制的相关研究。 目的：检测三氧化二砷对人皮肤T细胞淋巴瘤Hut-78细胞的抑制增殖、诱导凋亡及细胞周期的影响。 方法：分别采用MTT、PI单标记流式细胞术和TUNEL法检测2,5,10 μmol/L的三氧化二砷干预24,48,72 h, 对人皮肤T细胞淋巴瘤Hut-78细胞株抑制增殖、诱导凋亡和细胞周期的影响,及其凋亡相关基因bcl-2及血管内皮细胞生长因子基因表达的变化。 结果与结论：在一定的浓度范围内,三氧化二砷对Hut-78细胞存在增殖抑制作用,其增殖抑制作用在一定程度上可能与下调血管内皮细胞生长因子基因的表达有关,同时还存在一定的细胞毒作用;三氧化二砷可诱导Hut-78细胞发生凋亡,凋亡机制主要发生在G2~M期,其凋亡作用可能与下调bcl-2基因表达有关。三氧化二砷对Hut-78细胞的增殖抑制及诱导凋亡作用呈时间剂量依赖性。     

桔皮素对人肝癌细胞株SMMC-7721抑制作用的初步研究

目的：探讨桔皮素对人肝癌细胞株SMMC-7721的抑制作用。方法：采用四唑盐（MTT）比色法观察不同浓度桔皮素对人肝癌细胞株SMMC-7721细胞增殖的影响，计算半数抑制浓度IC50；绘制细胞株SMMC-7721的生长曲线观察桔皮素对其增殖的影响。结果：MTT结果显示不同浓度的桔皮素对SMMC-7721的生长均有一定的抑制作用，同一时间，各浓度组与对照组相比均有统计学差异（P〈0．05）；桔皮素浓度为0．24—30μg·mL。时，对SMMC-7721细胞在药物处理72小时后抑制率为3．85％～93．59％，且72小时的IG50为14．69—21．11μg·mL^-1。生长曲线结果提示，桔皮素对SMMC-7721细胞的抑制作用呈明显时效和量效关系。结论：桔皮素能抑制人肝癌细胞株SMMC-7721的增殖。     

用噬菌体表面展示技术筛选与肝癌细胞系结合的抗体模拟肽

目的:从噬菌体展示肽库中,筛选可与肝癌细胞特异性结合的抗体模拟肽。方法:通过生物淘选使噬菌体富集。利用ELISA法,鉴定噬菌体单克隆原种的亲和性,并进行统计学分析。通过竞争ELISA,分析筛选所得抗体模拟肽的结合位点,并进一步分析抗体模拟肽的序列组成。结果:随着淘选次数的增加,出现噬菌体的富集。ELISA的结果显示,相对于正常肝细胞,筛选所得环状7肽对肝癌细胞系SMMC7721和BEL7402均有良好的结合活性(P<0.05),且与SMMC7721细胞的结合活性明显优于与BEL7402细胞的亲和性(P<0.05)。在α=0.01的水平上,7肽单克隆噬菌体原种可明显与scFv竞争结合SMMC7721细胞(0.005相似文献   

阻断Sonic Hedgehog信号对不同人肝癌细胞生长的影响

 目的: 研究阻断Sonic Hedgehog (Shh)信号对不同人肝癌细胞生长的影响,探讨阻断Shh信号抑制肝癌细胞生长的机制。方法: RT-PCR法检测Shh信号分子在3株人肝癌细胞(BEL-7402、Huh7和HepG2)中的表达,并检测Shh阻断抗体作用后BEL-7402细胞Shh信号效应分子表达变化;MTT法检测人肝癌细胞增殖活性;流式细胞术检测人肝癌细胞凋亡;Western blot 检测凋亡相关蛋白表达。结果: Shh信号分子在3株人肝癌细胞中均有表达,Shh阻断抗体可以下调Shh信号效应分子patched (Ptch)、Gli1和Gli2的表达;Shh阻断抗体可以抑制3株肝癌细胞生长,增加G₀/G₁期细胞,并诱导细胞凋亡;Shh阻断抗体作用后,BEL-7402细胞pro-caspase-3、pro-caspase-8和pro-caspase-9蛋白表达水平下降,cleaved caspase-3、cleaved caspase-8和cleaved caspase-9蛋白表达水平升高。结论: 阻断Shh信号可抑制Shh高表达的人肝癌细胞生长,阻滞细胞周期于G₀/G₁期,并诱导肝癌细胞凋亡。     

索拉非尼对敏感人肝癌细胞株MAPK信号通路基因表达的影响

 目的：筛选对索拉非尼敏感的人肝癌细胞株,检测索拉非尼作用于敏感细胞株后MAPK信号通路基因表达谱的变化。方法：索拉非尼作用于人肝癌细胞株Huh7、 MHCC97H、 HepG2 、SMCC7721、 HepG2.2.15和PLC,流式细胞术检测肝癌细胞凋亡,CCK-8测定细胞增殖的抑制率,筛选敏感肝癌细胞株;采用实时定量PCR基因芯片,观察索拉非尼作用于敏感细胞株前后MAPK信号通路基因的表达。结果：索拉非尼作用后,流式细胞术的结果显示,凋亡较明显的细胞株为PLC和HepG2.2.15,相对不明显的细胞株为SMCC7721和MHCC97H;CCK-8测定索拉非尼对PLC、HepG2.2.15、Huh7、HepG2、MHCC97H和SMCC7721细胞的IC50值分别为5.25 μmol/L、5.30 μmol/L、6.80 μmol/L、7.01 μmol/L、11.7 μmol/L和15.0 μmol/L。对索拉非尼相对敏感细胞株和不敏感细胞株分别为PLC和SMCC7721。索拉非尼作用敏感细胞株PLC后,MAPK信号通路表达 >2.0倍的有2个,≤0.5倍的有6个。结论：PLC为对索拉非尼相对敏感的人肝癌细胞株;索拉非尼主要导致MAPK信号通路中与调控细胞周期和活化转录因子相关的基因表达发生变化。     

人核受体hLRH-1不同变异体在多种肿瘤组织和细胞系中的表达

目的:初步分析人核受体hLRH-1不同变异体在多种肿瘤组织和细胞系中的表达。方法:常规RT-PCR法分析hLRH-1v1和hLRH-1在肝癌等多种肿瘤组织和HepG2等肿瘤细胞系中的表达情况，实时定量PCR法分析hLRH-1v1，hLRH-1和hOct4在HepG2，SMMC-7721和BEL-7402三株肝癌细胞系的表达水平。结果:hLRH-1v1的表达见于所有检测的12种类型肿瘤和8种恶性肿瘤细胞系，hLRH-1的表达则仅在12种类型肿瘤中的6种肿瘤组织中可检测到，但8种恶性肿瘤细胞系均为hLRH-1阳性表达；在HepG2，SMMC-7721和BEL-7402三株肝癌细胞系中hLRH-1v1和hOct4的表达呈正相关。结论:hLRH-1v1在肿瘤中广泛表达，可能在维持肿瘤干细胞的自我更新中发挥重要作用。