微RNA-23a通过缝隙连接蛋白43对颈椎后纵韧带细胞骨向分化的作用机制

目的 探讨微RNA（miR）-23a通过缝隙连接蛋白43（Cx43）对颈椎后纵韧带细胞骨向分化的作用及相关机制。方法 选取本院收治的50例间断型颈椎后纵韧带骨化症（OPLL）患者（OPLL组）、50例颈椎外伤非OPLL患者（对照A组）和50例颈椎病非OPLL患者（对照B组）颈椎后纵韧带组织，培养后纵韧带细胞，实时荧光定量聚合酶链反应（qRT-PCR）检测3组细胞miR-23a、Cx43 mRNA的表达，采用Western blotingt检测Cx43蛋白的表达。取OPLL组对数期后纵韧带细胞，分别转染miR-23a agomir质粒（miR-23a过表达组）、miR-23a antagomir质粒（miR-23a低表达组）、agomir NC质粒（转染对照组），未经处理的后纵韧带细胞为空白组。采用双荧光素酶实验验证miR-23a与Cx43的靶向关系；采用碱性磷酸酶（ALP）染色检测矿化情况；采用Western blotingt检测p38丝裂原活化蛋白激酶（p38 MAPK）、磷酸化p38 MAPK（p-p38 MAPK）、细胞外信号调节激酶（ERK1/2）、磷酸化ERK1/2（p-ERK1/2）的蛋白表达。结果 与对照A、B组比较，OPLL组miR-23a表达降低，Cx43 mRNA及蛋白表达升高，差异均有统计学意义（P < 0.05）。与空白组、转染对照组比较，miR-23a过表达组miR-23a表达量升高、Cx43 mRNA表达量降低，miR-23a低表达组miR-23a表达量降低、Cx43 mRNA表达量升高，差异均有统计学意义（P < 0.05）。双荧光素酶实验显示，miR-23a可有效抑制野生型质粒荧光素酶活性；与空白组、转染对照组比较，miR-23a过表达组矿化面积百分比、p-p38 MAPK/p38 MAPK蛋白表达、p-ERK1/2/ERK1/2蛋白表达降低，miR-23a低表达组矿化面积百分比、p-p38 MAPK/p38 MAPK蛋白表达、p-ERK1/2/ERK1/2蛋白表达升高，差异均有统计学意义（P < 0.05）。 结论OPLL病理条件下，颈椎后纵韧带细胞中miR-23a异常低表达，通过靶向上调Cx43激活MAPK信号通路，促进成骨分化。     

长链非编码RNA LINC00313与miR-342-3p/膜联蛋白A2轴在肝细胞癌细胞中的作用与机制

背景与目的 肝细胞癌（HCC）是造成癌症相关性死亡的常见原因之一，研究表明长链非编码RNA（lncRNA）调控微小RNA（miRNA）的表达，进而通过抑制靶mRNA翻译或促进mRNA降解来参与肿瘤发生及进展过程。LINC00313作为一种具有致癌活性的lncRNA参与肿瘤发生及进展过程；膜联蛋白A2（ANXA2）在包括HCC的多种恶性肿瘤中表达上调，促进恶性表型的发生，并可能受上游miR-342-3p的调控。因此，本研究探讨LINC00313、miR-342-3p、ANXA2在HCC细胞中的表达及其相互关系。方法 用qRT-PCR与Western blot检测人肝实质细胞及HCC细胞系（Li-7、HuH-7、Hep3B2.1-7）中LINC00313、miR-342-3p及ANXA2表达。将体外培养的Li-7细胞分为空白对照组（无处理）、LINC00313 siRNA组（转染LINC00313 siRNA）、miR-342-3p模拟物组（转染miR-342-3p模拟物）、共转染阴性对照组（转染阴性siRNA序列与阴性miRNA序列）、共转染组（转染LINC00313 siRNA及miR-342-3p抑制物），用qRT-PCR与Western blot检测各组细胞LINC00313、miR-342-3p及ANXA2表达；MTT实验及平板集落形成实验检测各组细胞增殖；进行TUNEL染色检测各组细胞凋亡；Transwell侵袭及Western blot分别检测各组细胞侵袭数目及上皮-间充质转化（EMT）相关蛋白波形蛋白（vimentin）、E-钙黏蛋白（E-cadherin）表达；免疫荧光染色检测各组细胞Bcl-2关联X蛋白（Bax）/B淋巴细胞瘤-2（Bcl-2）；双荧光素酶报告实验分析Li-7细胞中LINC00313对miR-342-3p、miR-342-3p对ANXA2的靶向调控。建立皮下裸鼠异种移植瘤模型，验证LINC00313沉默对Li-7细胞体内生长的影响。结果 与人肝实质细胞比较，Li-7、HuH-7、Hep3B2.1-7细胞的LINC00313、ANXA2 mRNA及蛋白表达均明显升高，而miR-342-3p表达均明显降低（均P<0.05）。与对照组比较，LINC00313 siRNA组、miR-342-3p模拟物组细胞ANXA2 mRNA及蛋白表达、增殖率、集落生成率、侵袭细胞数目、vimentin蛋白表达均明显降低（P<0.05），miR-342-3p表达、凋亡率、E-cadherin蛋白表达、Bax/Bcl-2比值均明显升高（均P<0.05）；与LINC00313 siRNA组比较，共转染组细胞ANXA2 mRNA及蛋白表达、增殖率、集落生成率、侵袭细胞数目、vimentin蛋白表达均明显升高，而miR-342-3p表达、凋亡率、E-cadherin蛋白表达、Bax/Bcl-2比值均明显降低（均P<0.05）。Li-7细胞中，LINC00313可靶向下调miR-342-3p表达，miR-342-3p可靶向下调其ANXA2表达（均P<0.05）。体内实验结果显示，与无处理的Li-7细胞移植瘤比较，LINC00313敲低的Li-7细胞移植瘤的体积与质量均明显降低，肿瘤组织中LINC00313、ANXA2 mRNA及蛋白表达均明显降低，而miR-342-3p表达明显升高（均P<0.05）。结论 LINC00313在HCC细胞中的表达上调，LINC00313可能通过抑制miR-342-3p而增加后者靶基因ANXA2的表达，进而促进HCC细胞的恶性表型。     

lncRNA FOXP4-AS1通过miR-507调控甲状腺乳头状癌细胞生物学行为的作用机制研究

背景与目的 长链非编码RNA（lncRNA）可通过结合mircoRNA（miRNA）来间接调控下游mRNA的转录及降解,从而调控肿瘤发生与发展。lncRNA FOXP4-AS1是近年来发现的一种新的肿瘤相关生物标志物,在不同的肿瘤中发挥着不同的调控作用,笔者前期研究发现,FOXP4-AS1在甲状腺乳头状癌（PTC）中呈低表达,发挥抑癌作用。此外,笔者通过数据库预测miR-507可与FOXP4-AS1互补结合。因此,本研究探讨FOXP4-AS1通过调控miR-507及其下游靶mRNA抑制PTC细胞的生长的作用与机制。方法 通过TCGA数据库分析miR-507在甲状腺癌（TC）中的表达水平及其在TC中的临床意义。qRT-PCR检测PTC细胞系（TPC-1、K1）和正常甲状腺滤泡上皮细胞（Nthy-ori3-1）中miR-507的表达水平,以及过表达及敲低FOXP4-AS1后检测miR-507表达水平的变化。用双荧光素酶报告基因实验验证FOXP4-AS1与miR-507靶向关系。分别在FOXP4-AS1过表达及敲低稳转株上转染miR-507的模拟物、抑制物,并分别用CCK-8实验、克隆形成实验、Transwell实验、划痕愈合实验以及流式细胞术检测细胞功能的变化。用生物信息学方法分析miR-507下游靶点并用qRT-PCR验证。结果 TCGA数据库分析结果显示,miR-507在TC中高表达,且其表达水平TC患者与临床病理分期、T分期、腺外浸润等临床病理特征有关（均P<0.05）。qRT-PCR结果显示,与Nthy-ori3-1细胞比较,miR-507在两种PTC细胞中呈高表达,且过表达和敲低FOXP4-AS1后,两种PTC细胞中miR-507的表达水平随之反向改变（均P<0.05）。双荧光素酶报告基因实验结果显示,FOXP4-AS1与miR-507靶向结合,并抑制miR-507的表达。细胞功能实验及功能回复实验显示,FOXP4-AS1过表达后,PTC细胞的增殖活力、迁移能力和抗凋亡能力明显减弱,同时加入miR-507的模拟物后,PTC细胞以上功能回复（均P<0.05）;敲低FOXP4-AS1后,PTC细胞的增殖活力、迁移能力和抗凋亡能力明显升高,同时加入miR-507的抑制物后,PTC细胞以上功能回复（均P<0.05）。数据库预测与GO、KEGG富集分析结果显示,miR-507下游可能涉及CAMK4,qRT-PCR验证结果显示,CAMK4的表达水平随FOXP4-AS1表达水平的上调、下调呈同向改变,且其表达水平随miR-507模拟物和抑制物的加入而反向改变（均P<0.05）。结论 FOXP4-AS1可以靶向结合miR-507,并可能通过海绵作用抑制miR-507表达水平调控PTC细胞的增殖、迁移及细胞凋亡。CAMK4可能是FOXP4-AS1/miR-507通路发挥抑癌作用的下游靶点之一。     

长链非编码RNA PCAT19对胰腺癌细胞增殖与侵袭的影响及其作用机制

背景与目的 长链非编码RNA PCAT19（lncRNA PCAT19，简称PCAT19）在多种肿瘤中表达上调，且与恶性进展和不良预后密切相关。然而，PCAT19在胰腺癌中的表达、功能及作用机制尚无研究报道。笔者前期通过starBase数据库预测PCAT19可与miR-195-5p互补结合，因此，本研究探讨PCAT19在胰腺癌细胞中的表达与作用，及其与靶基因和相应miRNA的调控关系。方法 用qRT-PCR检测人胰腺导管上皮细胞系（HPNE）和胰腺癌细胞系（PANC-1、SW1990、HS766T、CFPAC-1）中PCAT19及miR-195-5p的表达。用双萤光素酶报告基因分析PCAT19与miR-195-5p的靶向结合作用。将PANC-1细胞分别转染PCAT19沉默序列si-PCAT19（si-PCAT19组）、阴性对照序列（si-NC组）、miR-195-5p抑制序列+si-PCAT19（共转染组）后，用MTT测定细胞增殖能力，Transwell测定细胞侵袭能力，Western blot检测Wnt/β-Catenin信号通路相关蛋白的表达。结果 各胰腺癌细胞系中PCAT19表达水平均明显高于HPNE细胞，而miR-195-5p的表达水平均明显低于HPNE细胞（均P<0.05）。双萤光素酶实验显示miR-195-5p是PCAT19的靶miRNA。与si-NC组PANC-1细胞比较，si-PCAT19组PANC-1中miR-195-5p表达水平明显升高，细胞增殖能力与侵袭能力明显降低，β-catenin、c-Myc和cyclin D1表达水平明显下调（均P<0.05），而共转染组以上各项指标与si-NC组差异均无统计学意义（均P>0.05）。结论 PCAT19在胰腺癌细胞中表达升高，其可促进胰腺癌细胞增殖和侵袭，机制可能与调控miR-195-5p并影响Wnt/β-Catenin信号通路有关。     

AMPA受体亚基GluR在脊髓损伤导致少突胶质前体细胞凋亡中的作用

目的 观察AMPA受体亚基GluR2（AMPA-GluR2）在脊髓损伤（SCI）前后少突胶质前体细胞（OPC）中的表达，明确AMPA-GluR2在OPC凋亡中的作用。方法 采用胰酶消化法分离并培养原代新生大鼠OPC，建立SD大鼠SCI模型并获取受损脊髓组织。实验分为对照组、SCI组及谷氨酸受体拮抗剂2，3-二羟基6-硝基7-氨磺基苯基喹恶啉（NBQX）组和蜘蛛毒素（JSTX）组。对照组将OPC与正常脊髓组织共培养48 h，其余组将OPC与受损脊髓组织共培养48 h。NBQX组和JSTX组在加入受损脊髓前分别用NBQX（100 μmol/L）、JSTX（1 μmol/L）处理OPC 10 min后更换正常培养基培养。采用免疫细胞化学染色法和蛋白质印迹分析法检测对照组和SCI组AMPA-GluR2表达量，采用流式细胞术检测各组OPC凋亡情况。结果 AMPA-GluR2在OPC细胞膜和细胞质均有表达。SCI组OPC中AMPA-GluR2的表达量较对照组明显降低，差异有统计学意义（P<0.05）；NBQX组及JSTX组AMPA-GluR2的表达量与对照组相当，均明显高于SCI组，差异有统计学意义（P<0.05）。与对照组相比，SCI组OPC凋亡率升高；与SCI组相比，NBQX组和JSTX组OPC凋亡率下降；差异均有统计学意义（P<0.05）。结论 SCI诱发的OPC凋亡与AMPAR-GluR2的表达下降有关。     

核转运蛋白α2通过ERK信号通路调控乳腺癌细胞生物学行为的研究

背景与目的 核转运蛋白α2（KPNA2）异常表达能增强乳腺癌细胞迁移和侵袭能力,导致肺转移风险,并与乳腺癌患者不良预后相关。本研究进一步分析KPNA2在乳腺癌细胞中的表达情况,并探讨其对乳腺癌细胞生物学行为影响的相关机制。方法 用免疫组化检测62例乳腺癌患者癌组织与癌旁组织标本中KPNA2的表达。将两种人乳腺癌细胞株（MDA-MB-453、MCF-7）分为阴性对照组（转染空白质粒）、KPNA2敲低组（转染KPNA2 siRNA）、ERK抑制剂组（ERK抑制剂U0126处理）、联合组（转染KPNA2 siRNA联合U0126处理）。各组细胞处理48 h后,分别用qRT-PCR与Western blot检测KPNA2 mRNA与蛋白表达,并分别用MTT法、流式细胞术、Transwell实验、Western blot检测细胞增殖、凋亡、侵袭能力,以及ERK1/2通路与凋亡相关蛋白表达的变化。结果 免疫组化结果显示,KPNA2蛋白在乳腺癌组织中表达水平高于癌旁组织（2.48±0.39 vs. 1.28±0.22,P<0.05）。qRT-PCR与Western blot结果显示,两种乳腺癌细胞株的阴性对照组和ERK抑制剂组的KPNA2 mRNA及蛋白表达水平均无明显差异（均P>0.05）,而KPNA2敲低组和联合组KPNA2 mRNA和蛋白表达下调（均P<0.05）。功能实验结果显示,与各自的阴性对照组比较,ERK抑制剂组、KPNA2敲低组和联合组的细胞增殖率降低、凋亡率升高、细胞侵袭能力减弱,其中联合组各项变化最为明显（均P<0.05）。Western blot结果显示,与各自的阴性对照组比较,ERK抑制剂组、KPNA2敲低组和联合组磷酸化ERK1/2、裂解的胱天蛋白酶3蛋白表达均下调,且联合组两者的下调程度最为明显（均P<0.05）。结论 乳腺癌组织中KPNA2表达水平升高,其增强乳腺癌细胞迁移和侵袭能力的作用可能与活化ERK信号通路有关,KPNA2有望作为乳腺癌药物开发的新靶点。     

鼠李糖乳杆菌代谢物吲哚-3-乳酸拮抗SP3/TNF-α通路促进结直肠癌细胞凋亡的机制研究

背景与目的 众所周知,肠道系统的微生物群是调节肠道健康与否的重要微环境。拥有平衡的微生物群有助于预防疾病,特别是与胃肠系统有关的癌症。鼠李糖乳杆菌（L. rhamnosus）具有抗肿瘤作用,但是具体机制尚不明确,基于此,本研究探讨L. rhamnosus对人结直肠癌（CRC）细胞凋亡的影响和潜在机制。方法 将人CRC细胞HCT-116、HT-29以及正常结肠上皮细胞NCM-460用L. rhamnosus的培养上清液（LRCS）或大肠埃希菌（E. Coli）的培养上清液（ECCS）处理后,检测细胞活力、凋亡水平和细胞周期分布。使用3 kDa超滤管将细菌培养上清液分为低分子量组分（<3 kDa）和高分子量组分（>3 kDa）,分析这两个组分对细胞凋亡的影响。非靶向LC-MS/MS以鉴定LRCS有效组分中的抗CRC细胞的代谢物,并使用5 μmol/L浓度的上述代谢物筛选影响凋亡的关键代谢物。细胞凋亡通路siRNA筛选鉴定关键代谢物的作用靶标。分子对接分析关键代谢物与靶标分子的相互作用位点。结果 LRCS呈浓度依赖性降低CRC细胞的活力,且明显促进CRC细胞的凋亡（均P<0.05）,而ECCS无上述作用（均P>0.05）。进一步分析发现,仅LRCS低分子量能产生上述作用。非靶向LC-MS/MS鉴定以及验证实验表明,吲哚-3-乳酸（I3L）影响CRC细胞凋亡的L. rhamnosus关键代谢物。通过siRNA筛选,将CRC细胞的特异性蛋白3（SP3）敲除后,I3L对CRC细胞的凋亡水平、TNF-α的表达与分泌水平均无明显影响（均P>0.05）。分子对接发现,I3L与SP3的K551、E551和E552存在相互作用。将SP3敲除CRC细胞分别转染SP3野生型过表达质粒和SP3突变型过表达质粒,I3L可以促进前者的细胞凋亡水平和TNF-α分泌水平（均P<0.05）,但对后者无此作用（均P>0.05）。结论 L. rhamnosus能促进CRC细胞的凋亡,作用机制可能与其代谢物I3L通过结合SP3的K551、E551和E552位点,增加TNF-α的转录和分泌有关。     

miR-27b-3p对主动脉血管平滑肌细胞和单核细胞功能的影响及机制研究

背景与目的 大数据基因芯片数据分析发现,在腹主动脉瘤（AAA）组织与患者血清中miR-27b-3p表达显著上调。然而,miR-27b-3p在主动脉血管平滑肌细胞（VSMC）中的功能及作用机制尚不清楚。因此,本研究探讨miR-27b-3p在VSMC中的功能,及其对单核巨噬细胞、细胞外基质的影响和作用机制。方法 将VSMC转染miR-27b-3p抑制物后,用CCK-8检测细胞增殖活力,流式细胞术检测细胞凋亡。将单核巨噬细胞THP-1转染miR-27b-3p抑制物后,用ELISA法检测炎症因子表达,Western blot检测基质相关蛋白表达水平。用双萤光素酶报告基因实验以及相关功能实验验证miR-27b-3p和PTEN的靶向关系。结果 miR-27b-3p敲低后,VSMC增殖能力明显增强,细胞凋亡率明显降低（均P<0.05）。miR-27b-3p敲低后,THP-1中促炎症因子（TNF-α、IL-12）表达水平、基质金属蛋白酶9（MMP-9）表达水平明显降低,而抑炎因子（IL-4、IL-10）表达水平、金属蛋白酶抑制剂-1（TIMP-1）表达水平明显升高（均P<0.05）。双萤光素酶实验证实miR-27b-3p的靶基因为PTEN。miR-27b-3p过表达的VSMC中PTEN蛋白表达水平明显下调（P<0.05）,而PTEN过表达的VSMC增殖活力明显增强、凋亡比例明显减少（P<0.05）。PTEN过表达THP-1的TNF-α、IL-12表达水平与MMP-9蛋白表达水平下调,同时IL-4、IL-10浓度与TIMP-1蛋白表达水平上调（均P<0.05）。miR-27b-3p和PTEN同时过表达后,VSMC与THP-1以上指标的变化与对照组差异均无统计学意义（均P>0.05）。结论 miR-27b-3p可通过靶向PTEN参与调节VSMC增殖和凋亡,抑制单核巨噬细胞的炎症反应和细胞外基质蛋白表达。miR-27b-3p/TPEN分子轴可能在AAA发生和进展过程发挥重要作用。     

LncRNA GAS5通过miR-21调控脊髓损伤后神经细胞凋亡的机制研究

目的 明确长链非编码RNA生长阻滞特异性转录因子5（LncRNA GAS5）与微小RNA-21（miR-21）的关系,阐明LncRNA GAS5调控miR-21参与脊髓损伤后神经细胞凋亡的机制。方法 建立脊髓损伤大鼠和氧糖剥夺复氧（OGD/R）处理的大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤细胞（PC-12）模型;沉默和过表达GAS5,构建下调shGAS5表达的慢病毒,通过生物信息学分析预测LncRNA GAS5与miR-21存在结合位点等。通过双荧光素酶报告基因实验等探究GAS5与miR-21的结合位点;采用实时荧光定量聚合酶链式反应（RT-qPCR）检测miR-21、GAS5、同源性磷酸酶-张力蛋白（phosphatase and tensin homolog,PTEN）基因、半胱天冬氨酸蛋白酶3（Caspase 3）、B淋巴细胞瘤（Bcl）-2相关X基因（Bax）、Bcl-2和蛋白激酶B（AKT）的RNA表达水平;Western blot检测Cleaved caspase 3、Bax、Bcl-2、AKT和磷酸化AKT（p-AKT）的蛋白表达水平;TUNEL技术检测神经细胞凋亡程度。结果 大鼠脊髓损伤后脊髓中miR-21、Bcl-2及p-AKT表达水平降低（P＜0.05）,GAS5、PTEN、Bax及Cleaved caspase-3表达均升高（P＜0.05）。PC-12体外培养与OGD/R损伤后出现与大鼠脊髓损伤模型类似结果,且于OGD/R处理后2 h最显著。GAS5可通过碱基互补配对方式结合miR-21,进而调控下游PTEN信号通路。下调GAS5或过表达miR-21可抑制PC-12细胞凋亡（P＜0.05）。结论 GAS5通过结合miR-21,上调PTEN并抑制AKT磷酸化,进而促进脊髓损伤诱导的神经细胞凋亡。     

三阴性乳腺癌细胞脂肪非典型钙黏蛋白4表达下调的生物学作用及机制

背景与目的 三阴性乳腺癌（TNBC）容易发生侵袭转移,恶性程度极高。笔者团队前期研究发现脂肪非典型钙黏蛋白4（FAT4）在TNBC组织中呈低表达且与预后相关,进而本研究进一步探讨FAT4对TNBC细胞生物学行为的影响,及其相关机制。方法 用qRT-PCR及Western blot检测正常人乳腺上皮细胞系（MCF-10A）及不同TNBC细胞系（BT-549、MDA-MB-231、MDA-MB-468、MDA-MB-436）中FAT4的表达水平。选择其中合适的TNBC细胞系,分别转染FAT4-shRNA（FAT4敲低组）、阴性对照序列（阴性对照组）,以未处理的TNBC细胞为空白对照组,分别采用CCK-8实验、流式细胞术、Transwell小室实验检测细胞增殖能力、凋亡率、侵袭与转移能力的变化,并用Western blot检细胞中Hippo信号通路下游靶点YAP及上皮间质转化（EMT）相关蛋白的变化。结果 与正常人乳腺上皮细胞比较,各TNBC细胞系中FAT4的mRNA与蛋白表达量均不同程度的降低（均P<0.05）。功能实验选用BT-549细胞和MDA-MB-436细胞。无论在BT-549细胞或MDA-MB-436细胞中,与空白对照组比较,FAT4敲低组在转染后24、48、72 h的增殖能力均明显升高、凋亡率明显降低、侵袭与转移能力明显增强（均P<0.05）;YAP蛋白表达量无明显变化（P>0.05）,但磷酸化YAP（p-YAP）表达量明显降低,上皮标志物E-cadherin水平明显降低,而间质标志物N-cadherin水平明显升高（均P<0.05）;阴性对照组与空白对照组间以上指标差异均无统计学意义（均P>0.05）。结论 FAT4表达水平在TNBC细胞中普遍降低,FAT4表达的降低能增强TNBC细胞增殖和侵袭迁移能力、减少TNBC细胞凋亡,其机制可能与FAT4降低后Hippo信号通路下游的YAP蛋白磷酸化减少,从而促进EMT进程有关。     

Depletion of circ_0006459 protects human brain microvascular endothelial cells from oxygen-glucose deprivation-induced damage through the miR-940/FOXJ2 pathway

BackgroundMultiple circular RNAs (circRNAs) play important roles in ischemic stroke. The present study aims to reveal the role and the mechanism of circ_0006459 in ischemic stroke.MethodsHuman brain microvascular endothelial cells (HBMECs) were treated with oxygen-glucose deprivation (OGD) to mimic an in vitro ischemic stroke model. RNA expression of circ_0006459, microRNA-940 (miR-940), and forkhead box J2 (FOXJ2) was detected by quantitative real-time polymerase chain reaction. Cell proliferation was analyzed by cell counting kit-8 (CCK-8) and 5-Ethynyl-29-deoxyuridine (EdU) assays. Cell apoptotic rate was quantified by flow cytometry analysis. The protein expression of proliferating cell nuclear antigen (PCNA), clusters of differentiation 6 (CDK6), BCL2-associated x protein (Bax), B-cell lymphoma 2 (Bcl2), interleukin-1β (IL-1β), IL-8, IL-18 and tumor necrosis factor-α (TNF-α) was analyzed by Western blotting. The regulatory relationships among circ_0006459, miR-940, and F 《人生只有一件事》 OXJ2 were identified by dual-luciferase reporter assay, RNA immunoprecipitation assay, and RNA pull-down assay.ResultsCirc_0006459 and FOXJ2 expression were significantly upregulated, whereas miR-940 expression was downregulated in HBMECs after OGD. Circ_0006459 depletion assuaged OGD-induced inhibition in cell proliferation and promotion in cell apoptosis and inflammation in HBMECs. Circ_0006459 acted as a sponge for miR-940, and miR-940 targeted FOXJ2 in HBMECs. Besides, miR-940 silencing or FOXJ2 overexpression relieved circ_0006459 knockdown-induced promotion in cell proliferation and inhibition in cell apoptosis and inflammation in OGD-induced HBMECs. Further, circ_0006459 depletion decreased FOXJ2 protein expression by interacting with miR-940.ConclusionDepletion of circ_0006459 protected human brain microvascular endothelial cells from oxygen-glucose deprivation-induced damage through miR-940/FOXJ2 pathway, providing a promising therapeutic target for ischemic stroke.     

NICD基因转染对胰腺腺泡细胞凋亡的影响

目的 观察重组腺病毒介导的NICD基因对胰腺腺泡细胞凋亡的影响.方法 在293细胞中培养扩增重组腺病毒Ad-NICD,当细胞汇合度达到60％～70％时,用蚀斑形成实验测定其感染滴度;将该病毒感染胰腺腺泡细胞AR4-2J (48 h)通过实时定量聚合酶链反应(PCR)检测其表达.同时分对照组(未转染组)、Ad-CMV转染组、Ad-NICD转染组分别用Ad-CMV( MOI:100)和Ad-NICD( MOI:100)转染AR4-2J细胞,采用Annexin V/PI双标流式细胞术检测Ad-NICD对细胞凋亡的影响.结果 重组腺病毒Ad-NICD滴度为2.2×1010 pfu/L,病毒颗粒感染腺泡细胞可以有效地提高NICD的表达,在MOI为100时,NICD的表达量最高.Ad-NICD感染胰腺腺泡细胞后,雨蛙素诱导的细胞凋亡率为(7.32±1.67)％,与对照组(18.55±2.61)％及Ad-CMV转染组(19.76±4.28)％比较差异有统计学意义(P＜0.05).结论 重组腺病毒介导的NICD基因转染可以显著抑制雨蛙素诱导的胰腺腺泡细胞凋亡,这种抑制可能与急性胰腺炎的严重程度有关.     

circRAD18/miR-516b/PDK1轴调节葡萄糖代谢重编程与结直肠癌增殖的关系

背景与目的 环状RNA circRAD18被发现在乳腺癌和甲状腺癌的进展中起了促进作用,但其在其他恶性肿瘤的表达及作用尚未被充分揭示。笔者前期通过生物信息学软件预测circRAD18可与miR-516b互补结合,而葡萄糖代谢关键调节酶丙酮酸脱氢酶激酶1（PDK1）可能是miR-516b的靶基因。因此,本研究初步探讨circRAD18在结直肠癌细胞中的表达及作用,及其对靶miRNA及下游靶基因的调控关系。方法 用qRT-PCR检测不同结直肠癌细胞系（SW480、SW620、HT-29）及正常结直肠上皮细胞（NCM460）中circRAD18的表达;用si-circRAD18沉默结直肠癌细胞中circRAD18的表达后,分别用CCK-8实验和相应的试剂盒检测细胞的增殖情况以及葡萄糖摄取量和乳酸产生量。用双荧光素酶报告基因实验与RNA免疫沉淀（RIP）实验分析circRAD18、miR-516b及PDK1之间的结合关系;最后,采用过表达/敲低实验进一步验证三者之间的关系。结果 与正常结直肠上皮细胞比较,circRAD18在各结直肠癌细胞系中的表达均明显上调（均P<0.05）;转染si-circRAD18后,结直肠癌细胞增殖能力、葡萄糖摄取及乳酸产生量均明显降低（均P<0.05）;双荧光素酶报告基因实验与RIP实验证实circRAD18可与miR-516b结合,而PDK1是miR-516b的下游靶基因。miR-516b模拟物及si-circRAD18的转染可明显抑制细胞葡萄糖摄取、乳酸产生及PDK1蛋白表达,且补充PDK1可逆转该抑制作用（均P<0.05）。结论 circRAD18在结直肠癌细胞中表达上调,并与结直肠癌细胞增殖能力的增强密切相关,作用机制可能与circRAD18通过海绵样吸附miR-516b后,上调PDK1表达,从而导致结直肠癌细胞葡萄糖代谢重编程有关。     

lncRNA XIST is associated with preeclampsia and mediates trophoblast cell invasion via miR-340-5p/KCNJ16 signaling pathway

BackgroundPreeclampsia (PE) is a syndrome commonly occurring among the pregnant. Shallow trophoblast invasion is considered to be closely related to PE. Therefore, in trophoblast cells, we explored the potential mechanisms of lncRNA XIST in the modulation of trophoblast invasion and proliferation.MethodsGEO online analyzer was used to screen the abnormally expressed RNAs in placenta tissues from patients with severe PE and healthy controls. The prediction of target bindings was performed on TargetScan and starBase. Transfection was conducted to regulate the RNA expression levels in trophoblast cells, HTR-8/SVneo. RT-qPCR measured expression of lncRNA XIST, miR-340-5p and KCNJ16. The CCK-8 assay examined cell viability. Flow cytometer analyzed apoptosis and luciferase assay determined the luciferase activity. Transwell assays detected the invasion and western blot verified the changes in protein expression of MMP2, MMP9 and KCNJ16 in trophoblast cells.ResultslncRNA XIST expression was enhanced in PE patients. Upregulation of lncRNA XIST in HTR-8/SVneo cells inhibited the cell proliferation and invasion, and induced apoptosis. XIST upregulation inhibited MMP2 and MMP9 protein expression. lncRNA XIST/ KCNJ16 interplayed as ceRNAs of miR-340-5p. Specifically,miR-340-5p overexpression reversed the effect of XIST upregulation on the cell apoptosis, proliferation and invasive ability and the knockdown of KCNJ16 could add to the effect of miR-340-5p overexpression in HTR-8/SVneo.ConclusionlncRNA XIST was upregulated in PE. Upregulation of lncRNA XIST exerted the inhibitory effects on the proliferation and invasion of trophoblast cells through the interactions with miR-340-5p/KCNJ16, which suggests that the lncRNA XIST/miR-340-5p/KCNJ16 axis might play a role in PE.     

Knockdown of circ_0026579 ameliorates lipopolysaccharide (bacterial origin)-induced inflammatory injury in bronchial epithelium cells by targeting miR-338-3p/TBL1XR1 axis

BackgroundCircular RNAs (circRNAs) play an important regulatory role in human diseases including organ allograft rejection. The aim of this study is to clarify the functional role and molecular mechanism of circ_0026579 RNA in lipopolysaccharide (LPS)-induced bronchopneumonia injury.Materials and methodsBronchial epithelial BEAS-2B cells were treated with LPS to mimic an in vitro model for bronchopneumonia. Cell viability and proliferation were analyzed by 3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide (MTT) assay and 5-ethynyl-2′-deoxyuridine (EdU) assay. Flow cytometry assay was used to assess cell apoptosis. Caspase-3 activity was analyzed by Caspase-3 activity assay kit. The expression levels of circ_0026579 RNA, miR-338-3p, and transducin β-like 1× related protein 1 (TBL1XR1) RNA were determined by RT-qPCR. The protein level was quantified by western blot assay. The correlation between miR-338-3p and circ_0026579 or TBL1XR1 was confirmed by dual-luciferase reporter and RNA immunoprecipitation assays.ResultsLPS treatment repressed proliferation but induced apoptosis and inflammatory response in BEAS-2B cells. Circ_0026579 RNA was highly expressed in patients with pneumonia. Besides, the expression levels of circ_0026579 RNA and TBL1XR1 RNA/protein were upregulated, while miR-338-3p level was decreased in LPS-treated BEAS-2B cells. Knockdown of circ_0026579 RNA or TBL1XR1 protein could abolish LPS-induced cell injury in BEAS-2B cells. Furthermore, we found that circ_0026579 RNA functioned as a “sponge” for miR-338-3p to regulate TBL1XR1 expression. Additionally, silencing circ_0026579 RNA protected BEAS-2B cells from LPS-induced bronchopneumonia injury by regulating TBL1XR1 expression.ConclusionCirc_0026579 RNA knockdown promoted cell proliferation but inhibited apoptosis and inflammation in LPS-induced BEAS-2B cells through regulating miR-338-3p RNA/TBL1XR1 protein axis.     

MiR-25 protects PC-12 cells from H2O2 mediated oxidative damage via WNT/β-catenin pathway

Objective: Spinal cord injury (SCI) is associated with modulation of different microRNAs (miRs). This study aims to explore the role of miR-25 in PC-12 cells to reveal the potential of miR-25 in SCI treatment.

Methods: SCI model was established in C57BL/6 mice, then miR-expression in the injured spinal cords were detected by qRT-PCR. PC-12 cells were exposed to H₂O₂ conditions to establish an in vitro model of SCI. PC-12 cells were transfected with expressing vector or antisense oligonucleotides (ASO) of miR-25. The effects of miR-25 expression on H₂O₂-induced oxidative damage was evaluated by detection of cell viability, apoptosis, ROS activity, HIF-α and γH2A expression, and the level of inflammatory mediators. The expression of Nrf2 in cells was silenced by transfection with Nrf2 siRNA, and the effects of Nrf2 silence on miR-25-mediated PC-12 cells were detected. Besides, the expression of main proteins in Wnt/β-catenin and PI3?K/AKT/ERK signaling were assessed.

Results: miR-25 was low expressed in injured spinal cords. miR-25 protected PC-12 cells against H₂O₂-induced oxidative damage, as evidenced by significant suppression in cell apoptosis, increase in cell viability, decrease in the level of ROS, HIF-α and γH2A, and decrease in inflammatory mediators (IL-1β, TNF-α, IL-6, and MCP-1). However, Nrf2 silence abolished the protective functions of miR-25 on H₂O₂-induced damage. Furthermore, we found that Wnt/β-catenin and PI3?K/AKT/ERK signaling were activated by miR-25.

Conclusions: miR-25 protects PC-12 cells against H₂O₂-induced oxidative damage though regulation of Nrf2 and activation of Wnt/β-catenin and PI3?K/AKT/ERK signaling.     

miR-181a-5p通过HOXB4抑制骨肉瘤细胞HOS增殖和迁移

目的：研究miR-181a-5p对HOS骨肉瘤细胞增殖、周期和迁移的影响及其机制。方法 ：采用实时定量PCR检测hFOB1.19成骨细胞和HOS、U2OS、MG63骨肉瘤细胞系中miR-181a-5p及HOXB4的表达情况。利用Lipofectamine 2000将miR-181a-5p mimics和miR-181a-5p inhibitor分别转染至人骨肉瘤HOS细胞中（分别为过表达组和抑制剂组）,并设置miR阴性对照组;CCK-8法检测各组细胞的增殖能力变化,流式细胞术检测各组细胞的细胞周期变化,划痕愈合实验以及Transwell迁移实验检测各组细胞的迁移能力变化。Targetscan网站预测miR-181a-5p的靶向基因,并通过双荧光素酶报告基因系统及Western blot验证靶向关系。结果：与成骨细胞hFOB1.19相比,miR-181a-5p在骨肉瘤细胞HOS、U2OS和MG63中低表达（P<0.05）,而HOXB4在骨肉瘤中高表达（P<0.05）。与阴性对照组相比,过表达miR-181a-5p抑制骨肉瘤HOS细胞的增殖和迁移能力,并且处于细胞周期S期的细胞...