白血病抑制因子与胚胎着床

白血病抑制因子（Ｌｅｕｄｍｉａｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙｆａｃｔｏｒ,ＬＩＦ）是一具有多种生物学活性的分泌型糖蛋白．ＬＩＦ调节多种细胞的生长与分化,如胚胎于细胞,原始生殖细胞,成骨细胞,脂肪细胞,肝细胞,内皮细胞等。着床是生殖过程的关键步骤,其过程包括正常发育的胚泡脱去透明带,胚泡在子宫内膜的迁移、定位和粘附,胚泡滋养层向子宫内膜的侵入和子宫内膜的蜕膜化反应以及胎儿的免疫保护等。近年的研究表明,ＬＩＦ与小鼠胚胎植入有密切关系,ＬＩＦ表达的高峰在妊娠第四天,正好与胚胎着床时间一致,在妊娠第七天,ＬＩＦ的…     

胚胎培养液中 IGF-Ⅱ与胚胎的关系

目的：比较在不同级别胚胎间人胰岛素样生长因子-Ⅱ（ IGF-Ⅱ）表达的不同,旨在从分子水平完善卵泡和胚胎发育的形态学评分标准,挑选出发育潜力更高的优质胚胎,提高体外受精-胚胎移植（ IVF-ET）的临床妊娠率。方法选取2013年2月～6月期间因单纯性输卵管阻塞行第一周期IVF-ET 患者31例,挑选正常受精的胚胎,收集其第3天移植后的胚胎培养液,ELISA法测其中IGF-Ⅱ的表达水平。结果不同级别胚胎间胚胎培养液中IGF-Ⅱ的分泌浓度：I级＞Ⅱ级＞Ⅲ级,且各组之间比较有统计学意义（P＜0．05）,Ⅲ级与Ⅳ级间比较无统计学差异（ P＞0．05）。结论胚胎培养液中IGF-Ⅱ的定量检测有望在临床实践中成为选择胚胎的一个参数,作为辅助形态学评估选择胚胎移植,预测IVF的妊娠率。     

白血病抑制因子调节胚胎发育与着床的研究进展

白血病抑制因子(Leukemia inhibitory factor,LIF)是参与调节胚胎着床过程的重要的细胞因子之一,尽管如此,LIF及其受体在不同种属动物中的表达又不完全相同,孕酮和雌激素对其分泌的调节作用在不同种属动物之间、体内外之间,甚至于同种动物也都不完全一样。LIF调节着床机理的研究正日益受到广泛的重视。     

白血病抑制因子在女性输卵管的表达

白血病抑制因子（leukemia inhibitory factor，LIF）是60年代末发现的一种多功能的细胞因子，因能抑制小鼠M1型髓样白血病细胞增殖并诱导其向正常Mφ样细胞分化而得名。研究显示，LIF在女性卵巢及卵泡液、子宫内膜及蜕膜、滋养细胞与输卯管等组织细胞均有表达，在排卵、胚泡的形成、早期发育及胚泡着床中起调节作用，人类输卵管妊娠及部分不孕症的发生可能与组织局部LIF的表达异常有关。     

小鼠胚胎白血病抑制因子基因表达研究

目的 探索白血病抑制因子（ＬＩＦ）基因在小鼠胚泡着床后有无表达。方法 采用ＲＴ－ＰＣＲ技术对孕龄５ｄ、７ｄ、１０ｄ、１２ｄ和１５ｄ的小鼠胚胎（共５０个,每组１０个）ＬＩＦ基因表达进行检测。结果 在孕龄５ｄ的二个胚胎和孕龄７ｄ的一个胚胎中检测到ＬＩＦ基因弱表达。而在孕龄１０ｄ以上的胚胎中均未发现有ＬＩＦ基因表达。结论 推测ＬＩＦ基因的表达在小鼠胚胎组织中受到限制。     

类胚体中残留细胞分化全能性维持与外源性白血病抑制分化因子的关系

目的 研究小鼠胚胎干细胞体外类胚体分化后残留未分化细胞的分化能力,探讨其分化全能性维持与外源性白血病抑制分化因子(LIF)的关系.方法 小鼠R1胚胎干细胞体外经20 d的类胚体诱导分化后,胰酶消化为单细胞悬液,在不含LIF的DMEM培养液中贴壁培养.扩增后的细胞用流式细胞仪分析未分化及分化表面标志(CD9、 SSEA1和Flk-1)的表达情况.分别于再次类胚体诱导分化前后,RT-PCR检测Oct-4、 Nanog、Rex1、FGF5、Nestin、Brachyury、Flk-1和GATA6表达.将扩增后的残留细胞注射至裸鼠皮下,检测畸胎瘤形成能力.Oct-4/GFP 转基因小鼠胚胎干细胞在半固体培养基上作单细胞分化,20 d后统计分化残留率.结果 在不含LIF的DMEM培养液中的残留细胞呈克隆样生长,表达未分化胚胎干细胞标志CD9、SSEA1、Oct-4、Nanog和Rex1.残留细胞体外可再次诱导分化,表达3个胚层的分化标志.残留细胞裸鼠皮下注射6周后形成畸胎瘤.单细胞分化实验表明,常规培养的小鼠胚胎干细胞中约14%的细胞具有分化残留能力.结论 残留胚胎干细胞全能性维持不依赖外源性白血病抑制分化因子;常规培养的胚胎干细胞仅部分具有残留能力.     

类胚体中残留细胞分化全能性维持与外源性白血病抑制分化因子的关系

目的 研究小鼠胚胎干细胞体外类胚体分化后残留未分化细胞的分化能力,探讨其分化全能性维持与外源性白血病抑制分化因子（LIF）的关系。方法 小鼠R1胚胎干细胞体外经20 d的类胚体诱导分化后,胰酶消化为单细胞悬液,在不含LIF的DMEM培养液中贴壁培养。扩增后的细胞用流式细胞仪分析未分化及分化表面标志（CD9、SSEA1和Flk-1）的表达情况。分别于再次类胚体诱导分化前后,RT-PCR检测Oct-4、Nanog、Rex1、FGF5、Nestin、Brachyury、Flk-1和GATA6表达。将扩增后的残留细胞注射至裸鼠皮下,检测畸胎瘤形成能力。Oct-4/GFP 转基因小鼠胚胎干细胞在半固体培养基上作单细胞分化,20 d后统计分化残留率。结果 在不含LIF的DMEM培养液中的残留细胞呈克隆样生长,表达未分化胚胎干细胞标志CD9、SSEA1、Oct-4、Nanog和Rex1。残留细胞体外可再次诱导分化,表达3个胚层的分化标志。残留细胞裸鼠皮下注射6周后形成畸胎瘤。单细胞分化实验表明,常规培养的小鼠胚胎干细胞中约14%的细胞具有分化残留能力。结论 残留胚胎干细胞全能性维持不依赖外源性白血病抑制分化因子;常规培养的胚胎干细胞仅部分具有残留能力。     

围植入期暴露二硫化碳对小鼠子宫组织白血病抑制因子表达的影响

目的 观察二硫化破(CS2)对孕鼠子宫组织白血病抑制因子(LIF)表达水平的影响,探讨CS2致胚胎毒性的作用机制.方法 健康昆明种孕鼠随机分为D3(孕第3天),D4,D5,D6染毒组和对照组,每组又根据各自的染毒时点分别设相应的现察终点(记为D4,D5,D6,D7,139).染毒组腹腔注射631.4 mg/kg剂童的C...     

重组人白血病抑制因子的原核表达及优化

目的在大肠杆菌中表达重组人白血病抑制因子(HLIF)蛋白,并探索其高效表达的条件。方法将HLIF重组质粒转化至大肠杆菌BL21,分别给予不同诱导时间(4、8、12、16、20、24 h)、不同浓度大肠杆菌(吸光度值分别为0. 5、0. 6、0. 8、1. 0)、不同诱导温度(20、25、30、37、42℃)、不同浓度诱导剂异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)(0. 1、0. 2、0. 3、0. 4、0. 5 mmol·L-1)、不同浓度乙酸(0. 0、0. 1、0. 2、0. 3、0. 4 mmol·L-1)进行培养,蛋白电泳考马斯亮蓝染色后,采用Image J软件分析HLIF蛋白的相对表达量,观察不同干预条件对HLIF表达的影响。结果不同诱导时间下HLIF蛋白相对表达量比较差异有统计学意义(F=22. 088,P <0. 05),诱导16 h时的HLIF蛋白相对表达量显著高于诱导4、8、12、20、24 h(P <0. 05)。不同浓度(以吸光度值表示)大肠杆菌诱导时HLIF蛋白相对表达量比较差异有统计学意义(F=17. 153,P <0. 05);吸光度值为0. 8时HLIF蛋白相对表达量显著高于吸光度值为0. 5、0. 6时(P <0. 05),吸光度值为1. 0时与吸光度值为0. 8时HLIF蛋白相对表达量比较差异无统计学意义(P> 0. 05)。不同温度诱导时HLIF蛋白相对表达量比较差异有统计学意义(F=18. 053,P <0. 05),25℃时HLIF蛋白相对表达量显著高于20、30、37、42℃时(P <0. 05)。不同浓度诱导剂诱导时HLIF蛋白相对表达量比较差异无统计学意义(F=1. 181,P> 0. 05)。不同浓度乙酸诱导时HLIF蛋白相对表达量比较差异有统计学意义(F=27. 181,P <0. 05),乙酸浓度为0. 00 mmol·L-1时HLIF蛋白相对表达量显著高于乙酸浓度为0. 1、0. 2、0. 3、0. 4 mmol·L-1时(P <0. 05)。结论成功在大肠杆菌表达了HLIF,并探索出了适合最佳表达的诱导时间、大肠杆菌浓度、诱导温度、诱导剂浓度、乙酸浓度等条件。     

卵泡液白血病抑制因子浓度对IVF-ET妊娠结局的影响

【目的】检测卵泡液内白血病抑制因子（LIF）浓度，探讨LIF和体外受精和胚胎移植（IVF-ET）妊娠结局的关系。【方法】接受IVF-ET治疗周期的患者在取卵时留取第1管清亮无血染卵泡液，用酶联免疫吸附法（ELSIA）测定卵泡液内LIF浓度。并对LIF和年龄、性激素、移植胚胎质量以及妊娠率等因素进行分析。【结果】共收集了164个IVF-ET周期（164个病人）的卵泡液。66例妊娠，妊娠率40．2％。卵泡液LIF浓度在妊娠组和未妊娠组间元显著性差别。但在找到卵子的卵泡液内LIF水平显著低于未找到卵子的卵泡液组（P=0．034）。正常妊娠妇女的卵泡液内LIF水平显著高于异常妊娠（流产和宫外孕）妇女（P=0．006）。年龄在妊娠组和未妊娠组间有显著性差异（P=0．038）。【结论】卵泡液内LIF浓度并不影响IVF-ET妊娠结局。正常妊娠妇女卵泡液LIF浓度显著高于发生早期流产和宫外孕的妇女。年龄会显著影响IVF-ET妊娠率。     

卵裂期胚胎sHLA-G抗原表达及其与胚胎发育和种植的关系

【目的】通过对卵裂期胚胎培养液可溶性人类白细胞抗原G(sHLA-G)的定性和定量分析,了解卵裂期胚胎sHLA-G抗原表达及其与胚胎发育和种植的关系。【方法】应用免疫发光WesternBlot了解卵裂期胚胎sHLA-G和HLA-I类抗原的表达情况;应用双抗体夹心法ELISA了解卵裂期胚胎培养液中sHLA-I类抗原的表达量与胚胎发育和种植的关系。【结果】①胚胎培养液中以sHLA-G抗原为主,其它sHLA-I类抗原量极少或不存在,因此用培养液中sHLA-I类抗原的量来估计培养液中sHLA-G的含量是可行的。②卵裂期胚胎培养液中1级胚胎sHLA-I类抗原的绝对吸光度(A)值为0.077±0.006;2级胚胎为0.064±0.002;3级胚胎为0.043±0.002;3组比较差异有显著性(P=0.014)。胚胎种植率与胚胎sHLA-I类抗原绝对A值的相关系数为0.426,P=0.004。它们的表达量与胚胎发育和种植的有关。【结论】卵裂期胚胎培养液中sHLA-G的表达量与胚胎发育和种植的有关。     

白血病抑制因子在米非司酮流产妇女蜕膜组织中的表达研究

目的 探讨白血病抑制因子在药物（米非司酮）流产妇女蜕膜组织与早孕妇女蜕膜组织中的表达及差异．方法 用免疫组织化学方法对两组LIF的表达进行检测，同时用JPEG彩图系统采图和用HPIAS-1000高清晰度彩色病理图文报告分析系统测量程序检测和计算LIF表达灰度值．结果 蜕膜组织LIF在腺体表达高于间质组织（P〈0．01），在药物（米非司酮）流产妇女蜕膜组织与早孕妇女蜕膜组织腺上皮、间质之间灰度值差异均无统计学意义（P〉0．05）．LIF在蜕膜组织细胞的胞核和胞浆内多有表达．结论 LIF在蜕膜组织的表达存在部位差异．米非司酮导致流产的机制需要进一步研究．     

体外受精与胚胎移植术后妊娠的围生情况

【目的】研究体外受精与胚胎移植 (IVF ET)妊娠的围产情况。【方法】应用病例对照方法 ,在控制孕周、妊娠胎数及分娩方式情况下 ,选择在中山医科大学附属第一医院行IVF ET妊娠并在本院住院分娩的 92例产妇与同期、同数量自然妊娠产妇 92例作对照 ,研究IVF ET妊娠的围生情况。【结果】IVF ET妊娠与同样胎数的自然受孕婴儿体重及主要产科并发症如妊高征、产后出血、胎膜早破、死胎、新生儿窒息、糖耐量异常无明显差别 ,但IVF ET妊娠的多胎妊娠的并发症较单胎妊娠高 ,胎儿体重明显较低。【结论】IVF ET技术对宫内妊娠胎儿生长无明显影响。     

1021例体外受精-胚胎移植妊娠结局

目的探讨辅助生殖技术(assisted reproductive technology,ART)后的妊娠结局。方法对1021例通过ART获得的临床妊娠者,通过直接询问或电话随访对其妊娠结局进行回顾性分析。结果1021例妊娠者中,分娩838例(82.08%),单胎642例(76.61%),多胎196例(23.39%),流产132例(12.93%),异位妊娠41例(4.02%),分娩情况失随访10例(0.98%),畸形儿10例(1.19%),分娩男婴540个、女婴495个,新鲜胚胎移植后早期流产率为10.76%,明显高于冻融胚胎移植(FET)后的5.08%(P<0.01),多胎的早产率、剖宫产率、低体重儿发生率均明显高于单胎(P<0.01)。结论重视ART技术带来的多胎、早产、流产及异位妊娠等并发症,密切关注ART后代的出生缺陷。     

植入后全胚胎培养的培养基pH值改变对大鼠胚胎生长发育的影响

目的　探讨植入后全胚胎培养培养基最适pH值。方法　分离 9.5天龄Wistar大鼠胚胎 ,分别在实验组 (即不同pH :5 .5 ,6 .0 ,6 .5 ,7.0 ,7.5 ,8.0 ,8.5 ,9.0 )和对照组 (pH为 8.2 )的培养基 (1 0 0 %大鼠即刻离心血清 )中体外旋转培养4 8小时 ,观察pH值的改变对胚胎生长发育的影响。结果　与对照组比较 ,当培养基pH为 6 .5、6 .0和 9.0时培养胚胎的生长发育明显受到影响 (P <0 .0 5 ) ,胚胎畸形率和死亡率增高 (P <0 .0 5 )。当培养基pH为 5 .5时 ,培养胚胎死亡率达1 0 0 %。结论　全胚胎培养培养基pH条件改变 (过低或过高 )能够影响培养胚胎的生长发育。植入后全胚胎培养培养基最适pH值为 7.5～ 8.2。     

小鼠胚胎成纤维细胞与人胚共培养对胚胎体外发育影响

[目的]评价小鼠胚胎成纤维细胞共培养是否促进d3质量差的人胚胎的囊胚发育。[方法]使用小鼠胚胎成纤维细胞与受精后第3天(d 3)质量差的胚胎共培养,对照组使用Quins囊胚培养液进行序贯培养,观察各阶段囊胚形成率,检测囊胚总细胞数。[结果]d5共培养组12.3％胚胎开始出现早期囊腔化,d 6 7.4％胚胎出现囊腔扩张,4.2％的胚胎d 7孵出。而序贯培养组d 5仅4.2％胚胎开始早期囊腔化,d 6仅1.5％胚胎出现囊腔扩张,d 7仅0.6％的胚胎孵出,表明共培养组囊胚形成率更高,囊胚发育速度快于对照组。此外,共培养组囊胚总细胞数更多,d 6扩张囊胚总细胞数为62.6±13.4,而未扩张囊胚总细胞数26.1±8.9,分别高于序贯培养组。[结论]小鼠胚胎成纤维细胞共培养与 Quins囊胚培养液序贯培养比较,前者更能促进d 3质量差的人胚胎体外发育。     

女性年龄对体外受精与胚胎移植临床效果的影响

目的： 探索女性年龄对体外受精与胚胎移植（ＩＶＦＥＴ）临床效果的影响。方法：对１９９７ 年７ 月～１９９９ 年１ 月在中山医科大学附属第一医院生殖医学中心行ＩＶＦＥＴ共１ ０７２ 个治疗周期的资料进行回顾分析,应用χ２ 检验及Ｌｏｇｉｓｔｉｃ 回归分析研究年龄与生化妊娠率和临床妊娠率间的关系。结果：总生化妊娠率２６．０３％ ,总临床妊娠率２２．８５％ 。按年龄≤２９ 岁、３０～３４岁、３５～３９ 岁和≥４０ 岁分组,其生化妊娠率分别为２８．６９％ 、２６．４９％ 、２１．９９％ 和８．３３％ ,临床妊娠率分别为２５．６８ ％ 、２２．９６％ 、１９．０９ ％ 和８．３３％ 。经Ｌｏｇｉｓｔｉｃ 回归分析显示ＩＶＦＥＴ生化及临床妊娠率随年龄增大而逐渐下降。结论：女性年龄对ＩＶＦＥＴ妊娠率有明显影响,它们之间存在负相关关系。     

白血病抑制因子在骨性关节炎组织的表达及临床研究

[目的]探讨白血病抑制因子(leukemia inhibitory factor,LIF)在骨性关节炎(OA)关节组织中的表达规律及临床相关性。[方法]切取(32人)73例骨性关节炎滑膜、软骨和软骨下骨组织,含10人正常关节组织标本,应用RT-PCR检测LIF mRNA在OA不同病变阶段中的表达,酶联免疫吸附反应(ELISA)检测LIF在组织中的含量。[结果]中度OA病变软骨下骨LIF mRNA表达量最高。重度OA软骨中LIF mRNA的表达量最高,软骨下骨的表达量最低。ELISA检测LIF在各组织的含量情况与上述结果一致。[结论]LIF在OA组织中表达呈现出一定的时间及空间分布的规律,提示LIF作为一种分解代谢因子可能参与了OA发病过程。