先天性心脏病患者GATA4基因新突变的识别

目的 识别先天性心脏病(CHD)患者新的分子病因.方法 收集120例特发性CHD患者的临床资料和血标本,以100名健康者为对照.应用聚合酶链反应扩增GATA4基因的全部外显子,采用双脱氧核苷链末端合成终止法对全部扩增片段进行测序.借助BLAST程序将所测序列与GenBank中的已知序列进行比对以识别基因突变,并用Clustal W 软件分析突变氨基酸的保守性.结果 3例CHD患者的GATA4基因各识别出1个新的杂合错义突变,即第90、95和329位的密码子分别由AGC、GAC和AAG变为AGA、GAG和AAT,导致第90、95和329位的氨基酸分别由丝氨酸、天冬氨酸和赖氨酸变为精氨酸、谷氨酸和天冬酰胺,即S90R、D95E和K329N突变.这些突变在正常对照者中均不存在,多物种GATA4序列比对显示第329位的赖氨酸在进化上高度保守.此外,还发现了1个不改变氨基酸的单核甘酸多态,即c.99 G>T多态,但这些多态在CHD患者和健康对照者间的频率分布差异无统计学意义(P>0.05).结论 特发性CHD具有显著的遗传异质性,GATA4基因突变可能是部分特发性CHD患者的分子病因.     

高通量测序技术在先天性上睑下垂家系致病基因检测中的应用价值

目的:探讨应用高通量测序技术检测先天性上睑下垂家系中致病基因的价值。方法:采用高通量测序技术对先证者进行致病基因检测,获取致病基因突变位点,通过Sanger测序对高度可疑的位点进行测序验证。通过Sanger法对家系成员及100例正常对照者进行基因检测。结果:采用高通量测序技术测得先证者上睑下垂相关转录基因FOXL2基因发生c.578A>G错义突变,导致密码子由AAG突变为AGG,第193位的赖氨酸突变为精氨酸。采用Sanger测序法检测发现该家系所有患者均携带FOXL2基因c.578A>G错义突变,但家系中表型正常者及100例正常对照者的FOXL2基因c.578均为野生型,未发现突变。结论:该家系致病基因为FOXL2基因发生c.578A>G错义突变,高通量测序技术可用于先天性上睑下垂基因突变的快速检测,对先天性上睑下垂的产前诊断和遗传咨询有一定意义。     

特发性心房颤动患者KCNA5基因新突变的识别

目的 识别特发性心房颤动(AF)患者KCNA5基因的新突变.方法 以110例无血缘关系的特发性AF患者为研究对象,以200名匹配的健康者为对照.收集其临床资料和血标本.聚合酶链反应扩增候选基因KCNA5的全部外显子及外显子两侧的部分内含子,采用双脱氧核苷链末端合成终止法测序以识别基因突变.使用Mutation Taster在线程序预测突变的致病性,使用多序列比对软件ClustalW分析突变氨基酸的保守性.结果 在其中1例特发性AF患者的KCNA5基因中识别出1个新的杂合错义突变,该突变使KCNA5基因编码核苷酸序列第1 823位的鸟嘌呤(G)变成胸腺嘧啶(T),称为c.1823G>T突变,相应的第608位的密码子由AGC变为ATC,导致第608位的丝氨酸(S)变为异亮氨酸(I),即S6081突变.功能预测表明,KCNA5基因S6081突变影响其编码的离子通道功能,具有致病性.多序列比对分析显示,突变氨基酸在进化上完全保守.结论 在特发性AF患者中识别出KCNA5基因新突变S608I.揭示了特发性AF新的分子病因.     

NKX 2.5基因突变与广西壮族人群先天性房间隔缺损的关系研究

目的探讨NKX 2.5基因突变与广西壮族人群先天性心脏病(CHD)房间隔缺损的关系。方法应用聚合酶链反应(PCR)及DNA测序技术,对30例广西壮族CHD房间隔缺损患者(CHD组)以及30例非CHD患者(对照组)的NKX 2.5基因的全部外显子和侧翼序列进行突变检测,并对单核苷酸多态性位点进行基因分型,分析单个位点的基因型、等位基因频率与CHD房间隔缺损的关系。结果所有CHD房间隔缺损患者NKX 2.5基因均未发现突变,而在基因第二外显子区域发现1个SNP位点,位于上游606位碱基c.606GC,属于同义突变。两组基因型频率、等位基因频率比较,差异无统计学意义(P0.05)。结论 NKX 2.5基因突变与广西壮族CHD房间隔缺损患者之间无明显相关性,该基因上的606GC的SNP与先天性心脏病房间隔缺损之间无明显相关性。     

先天性室间隔缺损相关HAND1基因新突变的识别及功能

目的：检测先天性室间隔缺损(ventricular septal defect,VSD)相关HAND1基因新突变并分析其功能。方法： 采集125例先天性VSD患者和210名对照者的临床资料和血标本,抽提基因组DNA,扩增HAND1基因的全部编码外显 子,并对扩增的基因片段进行测序以识别HAND1基因突变。利用双荧光报告基因分析系统分析突变型HAND1的功能 特点。结果：在1例散发性VSD患者中发现了1个新的HAND1杂合突变c.355G>T,亦即E119X突变,该无义突变在210 名对照者中并不存在,功能分析显示突变型HAND1丧失了转录、激活靶基因的功能。结论：本研究检测出了一个 VSD相关的HAND1基因新突变。     

两例结节性硬化症的基因突变分析

目的检测两例中国汉族结节性硬化症散发病例的基因突变位点。方法采用聚合酶链反应扩增结节性硬化症患者、患者家庭中的正常人及100例健康对照的TSC1和TSC2基因的全部外显子,并进行DNA序列分析。结果患者ⅠTSC2基因第268位碱基由胞嘧啶（C）变成胸腺嘧啶（T）,导致第90位氨基酸谷氨酰胺处提前出现终止密码子;患者ⅡTSC2基因第5227位碱基由胞嘧啶（C）变成胸腺嘧啶（T）,导致第1743位精氨酸被色氨酸替代;而患者家庭中的正常人和100例健康对照均无此改变。结论无义突变c.268C〉T和错义突变c.5227C〉T可能是导致这两例患者临床表型的主要原因。     

先天性心脏病患者GATA4基因突变谱分析

目的:研究先天性心脏病患者的GATA4基因突变谱,以分析先天性心脏病的分子病因。方法:选择2010年5月~2012年12月到贵州省人民医院就诊且无血缘关系的150例先天性心脏病患儿作为实验组,另外选择200名健康儿童作为对照组。应用聚合酶链式反应(PCR)对GATA4基因的全部外显子及部分内含子进行体外扩增,并对全部扩增片段进行测序,借助BLAST软件将所测序列与GenBank数据库中的已知序列进行对比以识别基因突变并分析突变氨基酸的保守性。结果:在1例室间隔缺损患儿的GATA-4基因识别出1个杂合错义突变,即第267位的密码子由GTG变为ATG,亦即C.799GA,相应地导致第267位的氨基酸由缬氨酸变为蛋氨酸也称为p.V267M突变。结论:此类临床研究可能更好地解释先天性心脏病的分子病因,以利于其预防。     

KRT6A基因I462S新生突变导致Ⅰ型先天性厚甲症

目的研究I型先天性厚甲症患者KRT6A基因突变情况,为建立该病的基因诊断与遗传咨询提供依据。方法提取1例I型先天性厚甲症患者及家系成员和50名正常对照外周血白细胞基因组DNA.设计针对KRT6A基因的特异引物,采用聚合酶链反应(PCR)扩增基因的全部编码序列,DNA直接测序明确具体的突变位置和方式,限制性内切酶反应验证基因突变。结果 PCR结合DNA测序发现患者KRT6A基因第7外显子存在异常;第1385位核苷酸由胸腺嘧啶(T)突变为鸟嘌呤(G),导致KRT6A角蛋白2B螺旋区末端第462位密码子由异亮氨酸(I)变成丝氨酸(S),即发生1462S错义突变。患者父母及与家系无血缘关系的50名正常对照均未发现此突变,提示I462S为一种新生突变(de novo mutation)。结论 KRT6A基因1462S新生错义突变是导致该例患者I型先天性厚甲症的特异突变。     

KRT6A基因1462S新生突变导致Ⅰ型先天性厚甲症

目的 研究Ⅰ型先天性厚甲症患者KRT6A基因突变情况，为建立该病的基因诊断与遗传咨询提供依据。方法 提取1例Ⅰ型先天性厚甲症患者及家系成员和50名正常对照外周血白细胞基因组DNA，设计针对KRT6A基因的特异引物，采用聚合酶链反应(PCR)扩增基因的全部编码序列，DNA直接测序明确具体的突变位置和方式，限制性内切酶反应验证基因突变。结果 PCR结合DNA测序发现患者KRT6A基因第7外显子存在异常；第1385位核苷酸由胸腺嘧啶(T)突变为鸟嘌呤(G)，导致KRT6A角蛋白2B螺旋区末端第462位密码子由异亮氨酸(Ⅰ)变成丝氨酸(S)，即发生。1462S错义突变。患者父母及与家系无血缘关系的50名正常对照均未发现此突变，提示1462S为一种新生突变(de novo mutation)。结论 KRT6A基因1462S新生错义突变是导致该例患者Ⅰ型先天性厚甲症的特异突变。     

先天性厚甲症-1型基因突变分析

目的对2家系和1例散发的先天性厚甲症1型患者进行基因突变检测,为产前诊断和遗传咨询提供依据。方法采用巢式PCR扩增K6a基因突变热点区,通过DNA直接测序的方法,对先天性厚甲症患者、家系中的正常对照和100例无亲缘关系的正常人进行K6a突变检测。结果在K6a基因上发现3个错义突变(K6a1387G>C,K6a1393T>C,K6a513C>A),其中K6a1387G>C,K6a1393T>C为首次报道,而家系中正常对照和家系外100例正常人均未发现上述突变。结论K6a1387G>C,K6a1393T>C,K6a513C>A突变,不是罕见的单核苷酸多态,是导致患者发病的主要原因。中国人汉族患者与其他已研究的种族或民族有相似的突变热点区,但目前尚未发现基因型和表型之间的明确相关性。     

GATA4 and NKX2.5 gene analysis in Chinese Uygur patients with congenital heart disease

Background Congenital heart disease （CHD） is the most common developmental anomaly in newborns. The germline mutations in GATA4 and NKX2.5 genes have been identified as responsible for CHD. The frequency of GATA4 and NKX2.5 mutations in Chinese Uygur patients with CHD and the correlation between their genotype and CHD phenotype are unknown.
Methods We examined the coding region of GATA4 and NKX2,5genes in 62 Chinese Uygur patients with CHD and 117 Chinese Uygur individuals as the controls by denaturing high pedormance liquid chromatography （DHPLC） and sequencing.
Results Two heterozygous missense mutations of c.1220C〉A and c.1273G〉A in GATA4 gene, which cause the amino acid residue changes of P407Q and D425N in GATA4, were found in a patient with tetralogy of Fallot and a patient with ventricular septal defect, respectively. The two patients did not have atrioventricular conduct defects or non-cardiac abnormalities. The two mutations are expected to affect the protein function. There were no reported NKX2.5 mutations in the patients.
Conclusion Our results provided the primary data on CHD phenotype associated with GATA4 mutation in the Chinese Uygur population.     

先天性无痛无汗症1例并文献复习

报告2018年10月收治的1例先天性无痛无汗症,患者年龄32 d,采集患儿及其父母外周血进行医学外显子 5 000种疾病筛查,并对候选基因变异进行Sanger测序验证。患儿主要临床表现为无痛、无汗、反复发热。基因分子遗 传学分析结果提示在患儿遗传性感觉和自主神经病4型等疾病相关基因神经营养因子酪氨酸激酶受体1型(neurotrophic tyrosine kinase receptor type 1,NTRK1)中存在复合杂合突变(c.36G>A和c.851-33T>A)。结果显示两个突变分别来自父母 双方。c.851-33T>A为既往已报道致病突变,c.36G>A为未报道的突变,该突变可导致色氨酸转变成终止密码子。对于 无明确致病报道的点突变,进一步参考美国医学遗传学和基因组学学院(ACMG)基因突变解读指南,评估其为致病基 因,生物学危害性为可能有害。先天性无痛无汗症临床罕见,该病为单基因遗传病,基因分子遗传学分析有助于诊 断及发现新的基因突变。     

右胸外侧小切口剖胸矫治先天性心脏病12例

[目的 ]介绍在体外循环下经右胸外侧小切口剖胸行心内直视手术的体会 .[方法 ]经右胸外侧第 4肋间进胸 ,矫治先天性心脏畸形 12例 ,其中修补房间隔缺损 2例 ,室间隔缺损 5例 ,法洛氏四联征 4例 ,部分心内膜垫缺损 1例 .[结果 ]全组无手术死亡病例 ,1例法洛氏四联征病例在术后出现低心排综合症 ,3例出现部分右束支传导阻滞 ,1例在房间隔缺损术后拔胸腔引流管时出现气胸 ,再次做胸腔闭式引流 .[结论 ]经右胸外侧小切口手术法可替代正中剖胸矫治先天性心脏畸形手术法 ,它具有损伤小、恢复快、不破坏胸廓连续性及防止术后鸡胸等优点 ,属于微创外科手术 ,值得推广 .     

用聚合酶链反应方法检测人睾丸精原细胞瘤中的P53基因突变

采用聚合酶链反应（ＰＣＲ）、单股构造多态性分析及直接ＤＮＡ测序方法检测１７例人睾丸精原细瘤中的Ｐ５３基因外显子５～８突变。发现有４例肿瘤组织中的Ｐ５３基因有点突变，分别位于外显子５的密码子１４１、外显子７的密码子２３８和２５８以及外显子８的密码子２７０，这些突变均可导致蛋白质氨基酸的改变。结果提示Ｐ５３基因的突变和人类睾丸精原细胞瘤的发生有关。     

先天性心脏病经导管封堵术后机械性溶血的发生与防治

目的 探讨先心病经导管封堵术后机械性溶血的发生原因与防治措施。方法 通过对1例室间隔缺损（VSD）封堵术后发生机械性溶血患者的病例特点及治疗效果资料进行回顾性分析,结合文献报道对先心病经导管封堵治疗后发生机械性溶血的原因与防治措施进行讨论。结果 共438例先心病患者接受经导管封堵治疗,其中VSl5181例,房间隔缺损135例,动脉导管未闭122例。经导管封堵术后即刻发现35例有残余分流,其中1例VSD患者于术后10h发生机械性溶血,经用激素等治疗于术后72h病情好转,1周后治愈出院。结论 先心病封堵术后机械性溶血的发生与封堵术后的残余分流有关,大剂量激素、碱化尿液及大量补液等对机械性溶血治疗有效。     

Mutation analysis and prenatal diagnosis of EXT1 gene mutations in Chinese patients with multiple osteochondromas

Background  Multiple osteochondromas (MO), an inherited autosomal dominant disorder, is characterized by the presence of multiple exostoses on the long bones. MO is caused by mutations in the EXT1 or EXT2 genes which encode glycosyltransferases implicated in heparin sulfate biosynthesis.

Methods  In this study, efforts were made to identify the underlying disease-causing mutations in patients from two MO families in China.

Results  Two novel EXT1 gene mutations were identified and no mutation was found in EXT2 gene. The mutation c.497T>A in exon 1 of the EXT1 gene was cosegregated with the disease phenotype in family 1 and formed a stop codon at amino acid site 166. The fetus of the proband was diagnosed negative. In family 2, the mutation c.1430-1431delCC in exon 6 of the EXT1 gene would cause frameshift and introduce a premature stop codon after the reading frame being open for 42 amino acids. The fetus of this family inherited this mutation from the father.

Conclusions  Mutation analysis of two MO families in this study demonstrates its further application in MO genetic counseling and prenatal diagnosis.

     

先天性巨结肠患儿结肠肌间神经丛内神经节细胞中NKX2-1的表达

目的:探讨转录因子NKX2-1在先天性巨结肠(HD)患儿结肠肌间神经丛内神经节细胞中的表达。方法:应用免疫组化SP和RT-PCR技术检测30例HD患儿狭窄、移行和扩张段结肠组织和30例正常对照结肠组织中NKX2-1的表达情况。结果:HD患儿狭窄、移行段结肠组织中NKX2-1蛋白和mRNA的表达均低于正常对照组,差异有统计学意义(Z=5.236和2.926,P<0.008;t/t’=19.475和14.429,P<0.001)。结论:转录因子NKX2-1在结肠肌间神经丛内神经节细胞中表达减少可能与HD的发生有关。     

Identification of CFTR Gene Mutations in Chinese Patients with Congenital Obstructive Azoospermia

Objective To analyze the frequency and hot spot of CFTR gene mutations in Chinese patients with congenital obstructive azoospermia Materials & Methods Mutations in CFTR exon 2,3,4,5,6a,8,10,11,12,13,15A 17b, 19A,20,21and 23 were detected. PCR-single strand conformation poly-morphism (SSCP) and direct sequencing were performed on 32 patients with congenital bilateral absence of the vas deferens (CBAVD), 17 patients with congenital unilateral absence of the vas deferens (CUAVD) and 50 normal Chinese.Results No CFTR gene mutations were detected in 50 normal Chinese. One CBAVD patient exhibited an abnormal band on SSCP for exon 10 of the CFTR gene and subsequent DNA sequencing showed a 3 bp deletion at position 1 653～ 1 655, which caused the deletion of a single amino acid, phenyalanine, in codon 508, i. e. , △F 508. A shift mutation was detected in another CBAVD patient in exon 2, a 1 bp deletion at position 225, 225 delC. One CUAVD patient exhibited an abnormal band on SSCP for exon 17 b of CFTR gene. Subsequent DNA sequencing showed a C-to-A transversion at position 3 295, which led to a predicted change of Leusine (codon 1 055,CUU) to Isoleucine (codon AUU), L1055I.Conclusion CFTR mutation could be detected in Chinese patients with congenital obstructive azoospermia. But no hot spots of mutations are discovered. 225 delC and L1055I are identified as two novel mutations, which are found only in Chinese.