从S-100蛋白和NF的分布变化研究益气化瘀方促进神经再生的机理

目的:从S-100蛋白和神经丝蛋白(neurofilament,NF)的不同时相分布,探讨益气化瘀方促进神经再生的机理.方法:大鼠L5神经根损伤后,分别给予益气化瘀方治疗10 d、20 d、30 d、和60 d,采用免疫组织化学和激光共聚焦扫描显微镜(Confocal Iaser Scaning Microscopy,CLSM)技术,观察大鼠比目鱼肌神经肌肉接头部S-100蛋白和NF不同时期的分布变化.NIH图像分析技术定量测定S-100与NF的重叠面积.结果:由S-100蛋白标记的雪旺细胞(Schwann cells,SCs)的出现和生长先于NF标记的神经丝,SCs和NF的聚集、出芽、延伸及两者的重叠面积, 益气化瘀方组均明显优于对照组(P<0.01).结论:SCs在神经再生过程中起着重要的导向作用,益气化瘀方能明显地促进SCs和NF的增生,加快神经再生修复进程.     

益气化瘀方对腰神经根压迫模型神经肌肉接合部施旺细胞的作用

目的：研究大鼠L5神经根受压后，益气化瘀方对神经肌肉接合部施旺细胞的作用和表现。方法：采用免疫组织化学和激光共聚焦扫描技术，使用S-100多克隆抗体标记施旺细胞，α-bungarotoxin(α-BTX）萤光结合剂显示运动终板，大鼠L5神经根受压后，给予益气化瘀方治疗，于术后10，20和30天取比目鱼肌，观察神经肌肉接合部施旺细胞在神经再生过程中的表现。结果：肌肉失神经支配后，益气化瘀组的末梢施旺细胞在神经肌肉接合部的聚集，出芽数量及突起的延伸长度均明显优于对照组，神经再生期间，末梢施旺细胞与运动终板的接触面及肌肉接合部的再构筑，益气化瘀组亦同样明显优于对照。结论：益气化瘀方能促进施旺细胞的增生及提高其再生功能，加快神经肌肉接合部的重建，缩短神经再生修复进程。     

益气化瘀方对大鼠腰神经根损伤后纤维连接蛋白的作用

目的:探讨益气化瘀方对神经再生修复过程中神经肌肉接头部纤维连接蛋白(fibronectin FN)的作用。方法:大鼠L5神经根受压后,分别予以益气化瘀方灌胃治疗10、30和60d后取比目鱼肌。以FN作为细胞外基质标记,α-bunga-rotoxin(α-BTX)萤光结合剂显示乙酰胆碱受体(acetylchline receptor,AChR),采用免疫组织化学方法结合激光共聚焦扫描显微(Confocal Iaser Scanning Microscopy system)技术,观察大鼠比目鱼肌神经肌肉接头部FN的表达,NI H图像分析技术定量测定FN与AChR的重叠面积。结果:大鼠L5神经根损伤后10d和30d,益气化瘀方组FN的表达及与乙酰胆碱受体(Acetylchline Receptor,AChR)的重叠面积均明显高于模型组,60d时,益气化瘀方组FN的表达较模型组显著回落,AChR的形态再构建明显优于模型组。结论:FN的表达与运动神经终板的神经再支配状况密切相关,益气化瘀方可促进FN表达,加快神经再生修复进程。     

益气化瘀方对大鼠腰神经根损伤后生长相关蛋白-43与蛋白基因产物9.5的作用

目的:探讨益气化瘀方在神经再生修复过程中对神经肌肉接头部(NMJs)生长相关蛋白-43(growth-associatedprotein-43,GAP-43)及蛋白基因产物9.5(protein gene product 9.5,PGP9.5)的作用。方法:大鼠L5神经根损伤后,给予益气化瘀方分别治疗10 d3、0 d和60 d。采用免疫组织化学和激光共聚焦扫描显微镜技术,观察GAP-43与PGP9.5在大鼠比目鱼肌中的分布变化。采用α-金环蛇毒萤光结合剂显示乙酰胆碱受体(acetylchline receptor,AchR),NIH图像分析系统定量测定GAP-43与PGP9.5重叠面积。结果:益气化瘀方组GAP-43和PGP9.5在NMJs的表达及两者的重叠面积均明显优于模型组。结论:GAP-43与PGP9.5的表达与AchR的神经支配状况密切相关。益气化瘀方能明显加快神经再生修复进程。     

补肾活血方对缺血再灌注脑损伤小鼠学习记忆功能及海马神经细胞凋亡的影响

目的：观察补肾活血方对缺血再灌注脑损伤小鼠学习记忆功能及海马神经细胞凋亡的影响。方法：采用双侧颈总动脉夹闭反复缺血再灌术,建立脑缺血学习记忆障碍及海马神经细胞凋亡小鼠模型。以Morris水迷宫测试小鼠学习记忆功能;HE及尼氏染色光镜观察皮层及海马病理形态改变;碘化丙啶（PI）与Hoechst 33342及流式细胞仪检测凋亡细胞,与阿尼西坦及灯盏花注射液对照,观察小鼠学习记忆功能及海马神经细胞凋亡的变化及补肾活血方对其影响。结果;模型组小鼠记忆能力潜伏期较正常对照组及假手术组延长（P＜0.05);皮层及海马神经细胞出现退化、变性、坏死等病理改变;海马神经细胞凋亡百分率升高,术后6h达到高峰（P＜0.01)。补肾活血方能缩短小鼠潜伏期（P＜0.05);降低海马神经细胞凋亡百分率,与模型组比较,差异有显著性(P<0.05)。结论：补肾活血方具有改善缺血再灌注脑损作小鼠学习记忆功能及减轻缺血再灌注后海马神经细胞凋亡的作用。