人心钠素的蛋白质工程研究：Ⅰ.一种人心钠素衍生物RH—1的基因...

An analog of the alpha-human atrial natriuretic polypeptide (alpha-hANP) gene, articulated with a peptidase inhibitor SQ20881 at its N-terminal and two prolines at the C-terminal was expressed in E. coli by cloning the reconstituted plasmid pRHL-1 in vivo. This gene analog, RH-1, comprising 154 base pairs in total, was designed to contain an equivalent of the alpha-hANP gene, capping the peptidase inhibitor SQ20881 at its 5' end with a glutamic acid codon GAA to facilitate enzymatic cleavage of the expressed end product by endoproteinase Glu-C, wedging in two proline codons CCG & CCG before the double terminal codons TGA TAG at the 3' end to retard hydrolysis of the expressed product by exopeptidase, and adding 3 restriction sites to both ends. Synthesis of the RH-1 gene was effected enzymatically by joining in predicted order the ten segments of oligodeoxynucleotides which had been chemically synthesized by the solid-phase phosphite-triester method. The synthetic gene was cloned into vector M13mp18. Phage bearing the gene analog was identified by dot blotting and restriction endonuclease mapping. Nucleotide sequence of the gene was determined by the dideoxynucleotide chain termination method.(ABSTRACT TRUNCATED AT 250 WORDS)     

口腔链球菌丙酮酸氧化酶基因的克隆和序列分析

目的　阐明血链球菌产生过氧化氢及其调节的分子机理。方法　根据已知的肺炎链球菌丙酮酸氧化酶基因 (spx B)序列设计 PCR引物 ,扩增血链球菌 ATCC10 5 5 7的丙酮酸氧化酶基因 ,以 p U C18及 M13mp18、M13m p19为载体进行克隆和亚克隆 ,并进行序列分析。结果　成功地从血链球菌 ATCC10 5 5 7扩增出丙酮酸氧化酶基因 ,获得该基因的全部序列 (1788bp) ,具有完整的开放读框 ,能编码 5 91个氨基酸的多肽。结论　血链球菌丙酮酸氧化酶基因的克隆和序列分析 ,为进一步研究调节血链球菌产生过氧化氢的分子机理打下了基础     

口腔链球丙酮酸氧化酶的克隆和序列分析

目的 阐明血链球菌产生过氧化氢及其调节的分子机理。方法 根据已知的肺炎链球菌丙酮酸氧化酶基因（spxB）序列设计PCR引物,扩增血链球菌ATCC10557的丙酮酸氧化酶基因,以pUC18及M13mp18、M13mp19为载体进行克隆和亚克隆,并进行序列分析。结果 成功地从血链球菌ATCC10557扩增出丙酮酸氧化酶基因,获得该基因的全部序列（1788bp),具有完整的开放读框,能编码591个氨基酸的多肽。结论 血链球菌丙酮酸氧化酶基因的克隆和序列分析,为进一步研究调节血链球菌产生过氧化氢的分子机理打下了基础。     

人神经营养因子—4／5基因的克隆及序列测定

目的：从人胎盘组织基因组ＤＮＡ中,克隆人神经营养因子－４／５（ｈＮＴ－４／５）基因。方法：经ＰＣＲ扩增出的ＤＮＡ片段用ＰｓｔⅠ单酶切后,酶切图谱与文献报道一致。再将大量扩增后的目的ＤＮＡ片段连接于测序载体Ｍ１３ｍｐ１８,用手工测序和ＡＢＩ３７３Ａ ＤＮＡ自动序列分析仪自动测序。结果：两项分析结果都确证所得到的目的基因与天然ｈＮＴ－４／５编码序列一致。结论：首次成功地从人胎盘组织克隆出人神经营养因子     

中国脑型疟患者恶性疟原虫分离株裂殖子表面蛋白2基因的分子？…

目的 为设计研制安全有效的人脑型疟疫苗提供科学依据。方法 应用多聚酶链反应（ＰＣＲ）对５例中国脑型疟患者恶性朱虫云南省勐腊县勐罕（ＣＭＨ／ＹＮ）分离株和云南省盈江县农场（ＣＹＪ／ＹＮ）分离株基因组裂殖子表面蛋白２（ＭＳＰ２）基因进行扩增,将扩增产物分别经ＢａｍＨＩ和Ｈｉｎｄ Ⅲ双酶切后,回收的ＭＳＰ２基因分子定向克隆Ｍ１３ｍ１８和Ｍ１３ｍｐ１９载体,按Ｓａｎｇｅｒ双脱氧链终止法进行ＤＮＡ序列测定,     

大黄酸衍生物RH-01抑制骨肉瘤生长作用研究

【目的】研究大黄酸衍生物RH-01抑制骨肉瘤生长及其骨亲和性的作用。【方法】体外用MTT法对RH-01的活性进行筛选；昆明鼠荷S180肉瘤，连续10d给药RH-0130mg·（kg·d）^-1和60mg·（kg·d）^-1，处死动物，称量肿瘤，分析RH-01对体内肿瘤生长的抑制作用；采用体外羟基磷灰石吸附实验测定RH-01的骨亲和性；用紫外分光光度仪测定RH-01在体内的骨亲和性。【结果】经RH-01处理过的人源骨肉瘤HOS细胞，IC50为0．18μmol／L；浓度为30mg·（kg·d）-1和60mg·（kg·d）^-1两个实验组，RH-01对昆明鼠荷S180肉瘤的生长抑制率分别为64．54％和77．26％；RH-01在体外的骨亲和性明显，羟基磷灰石吸附值为14．8μmol／g，而四环素的吸附值仅为8．1μmol／g；紫外分光光度仪测定结果显示，RH-01在骨内与鬼臼毒素具有相似的光谱图，并且测得在254nm波长，给药12h后，经RH-01转运至骨内的鬼臼毒素含量为（5．39±0．03）μg／mg，而对照组的鬼臼毒素的含量为（3．29±0．03）μg／mg。【结论】RH-01体外抑制骨肉瘤HOS细胞生长作用明显，体内也能显著抑制S180肉瘤的生长，而且RH-01在体内外的骨亲和性作用明显。     

带信号肽人VEGF165 cDNA克隆

目的：克隆带信号肽人ＶＥＧＦ１６５ ｃＤＮＡ,以便进一步在真核系统表达人ＶＥＧＦ１６５蛋白或基因治疗。方法：设计引物;从人胎脑ｃＤＮＡ文加ＰＣＲ扩增目的基因;ＤＮＡ片段回收与酶切鉴定;与Ｍ１３ｍｐ１８重组;单链序列测定。结果：克隆片段与人ＶＥＧＦ１６５ｃＤＮＡ序列一致。结论：克隆ＤＮＡ片段为带信号肽人ＶＥＧＦ１６５ ｃＤＮＡ。     

人神经营养因子-3基因在大肠杆菌中的克隆和表达

目的 :获得人神经营养因子 - 3 (hNT - 3 )在大肠杆菌中的克隆并表达。方法 :采用PCR方法从 2 0周人胎脑cDNA文库中扩增hNT - 3基因 ,通过双酶切法在M 13mp18载体上克隆获得全长基因 ,将正确全长基因插入PBV2 2 0载体 ,通过选择合适宿主菌获得hNT - 3的高效表达。结果 :获得全长基因完全正确的hNT - 3基因 ,获得占细菌总蛋白 3 0 %的hNT - 3表达菌株。结论 :本研究获得了序列正确的hNT - 3基因克隆 ,并实现了在大肠杆菌中的高效表达。     

椰毒假单胞菌部分16srRNA序列测定法

详细介绍了椰毒假单胞菌部分１６ｓｒＲＮＡ序列测定法。常规提取细菌ＤＮＡ，采用聚合酶链反应（ＰＣＲ）扩增目的基因，琼脂糖凝胶电泳后回收目的基因。纯化后克隆到Ｍ１３ｍｐ１９噬菌体上，转染大肠杆菌ＪＭ１０９菌株。挑选无色噬斑扩增并提取其双链ＤＮＡ，酶切分析为阳性克隆，提取其单链ＤＮＡ在ＡＢＩ公司３７０Ａ型自动测序仪上测序。