MiR-183 及 let-7 家族在肝癌患者血清中的表达

目的:检测肝癌及良性肝病患者血清中miR-182、miR-96及let-7a、let-7b、let-7c、let-7e的表达量及其临床意义。方法:收集肝癌、肝硬化、肝炎患者和健康对照组的血清标本各58例、30例、40例、40例,采用荧光定量PCR分析各组间6种miRNA的相对表达量,分析肝癌组的相对表达量与临床病理因素间有无关系。结果:肝癌患者血清中miR-182和miR-96表达量均高于肝硬化血清、肝炎血清以及正常对照组(P0.01);肝硬化组血清miR-182和miR-96水平均大于肝炎组及正常对照组(P0.01)。肝炎组血清miR-96大于正常对照组(P0.01)。肝癌组血清中let-7a的表达量低于肝硬化组、肝炎组及正常对照组(P0.01)。肝癌组血清let-7c表达量大于肝炎组(P0.01)。肝癌血清中let-7e的表达量大于肝硬化组(P0.05)。结论:血清中miR-182及miR-96可能对肝癌有诊断价值,并可能预测肝癌的恶性程度及预后;血清中let-7家族对肝癌的诊断意义不显著。     

直肠癌中差异表达的microRNA及其与预后因子的关系

目的：检测直肠癌组织中差异表达的microRNA（miRNA）,并分析其与预后因子的关系。 方法：选20例直肠癌患者手术所得癌组织标本与癌旁组织,用q-PCR方法筛选在癌组织与癌旁组织中有差异表达的miRNA以及相关的预后因子。 结果：筛选得到26个在直肠癌组织中有差异表达的miRNA,其中15个miRNA表达上调,11个表达下调。相关分析显示,下调的miR-4770、miR-4790-5p与CK20表达呈负相关;上调的miR-182、miR-125a-5p、miR-126与p53表达呈正相关、miR-143和k-ras呈负相关、miR-9与vilin基因呈负相关（均P<0.05）。 结论：直肠癌组织中差异表达的miRNA与预后因子密切相关,可作为直肠癌诊断或预后判断的生物标记。     

前列腺癌患者癌组织中miR-647和HOXA9表达水平及其与预后的关系分析

目的 通过检测前列腺癌组织中微小RNA(microRNA,miR)-647、同源盒A9(HOXA9)表达水平，分析miR-647、HOXA9与前列腺癌患者预后的关系。方法 收集本院108例前列腺癌患者术中切除的癌组织及其对应的癌旁组织，使用qRT-PCR技术检测组织中miR-647和HOXA9 mRNA表达水平，免疫组化法检测HOXA9蛋白表达水平，并分析miR-647、HOXA9表达水平与患者临床病理特征及预后的关系；Pearson相关系数分析miR-647与HOXA9的相关性。结果 前列腺癌组织中miR-647表达水平(0.65±0.12)显著低于癌旁组织(1.01±0.09)(P<0.05),HOXA9 mRNA表达水平(1.86±0.37)明显高于癌旁组织(1.03±0.10)(P<0.05);癌组织中HOXA9蛋白阳性表达率显著高于癌旁组织(P<0.05);前列腺癌组织中miR-647与HOXA9呈负相关(r=-0.680,P=0.000);miR-647、HOXA9表达水平与患者T分期、淋巴结有无转移、Gleason评分以及前列腺特异抗原(PSA)水平有关...     

miR-18a在前列腺癌患者血清中的表达及其临床意义

目的探讨前列腺癌患者microRNA-18a(miR-18a)在血清中的表达及其诊断价值。方法采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测60例前列腺癌患者(PCa)、30例良性前列腺增生患者(BPH)和20例健康对照者(HC)血清miR-18a的表达水平。分析miR-18a表达水平与前列腺癌Gleason分级、TNM分期及PSA的关系。通过分析受试者工作特征(ROC)曲线判断miR-18a表达水平在前列腺癌诊断中的灵敏度和特异度。结果PCa患者血清miR-18a的表达水平分别明显高于BPH组和HC组(P<0.01);miR-18a与Gleason评分、肿瘤分期有关(P<0.01);miR-18a与PSA之间呈正相关(r=0.701,P=0.000);miR-18a的ROC曲线下面积(AUC)为0.928(95%CI:0.880~0.976,P=0.000),敏感度为84.3%,特异度为75.8%。结论miR-18a在PCa患者血清中表达水平明显增高,对于PCa的诊断有潜在的临床参考价值。     

miR-134-5p靶向MRPL58调控乳腺癌细胞MCF7的凋亡研究

目的:探讨miR-134-5p靶向MRPL58调控乳腺癌细胞MCF7凋亡的潜在分子机制。方法:通过高通量测序检测正常乳腺上皮细胞MCF10A与乳腺癌细胞MCF7中的差异miRNA。在乳腺癌细胞MCF7中过表达差异倍数大于7的miRNA,检测其凋亡水平。通过miRDB在线分析miRNA潜在的靶标基因。通过过表达或敲低miRNA和荧光素酶报告实验确定miRNA的靶标基因。结果:正常乳腺上皮细胞MCF10A与乳腺癌细胞MCF7的总miRNA高通量测序结果发现,MCF10A细胞中miRNA比乳腺癌细胞MCF7表达量大于7倍的有30种。过表达上述miRNA后,miR-134-5p增强了乳腺癌细胞MCF7的凋亡水平(P<0.05)。敲低miR-134-5p后,乳腺癌细胞MCF7的凋亡水平下降(P<0.05)。miR-134-5p在癌旁组织中的表达水平高于乳腺癌组织(P<0.05)。过表达miR-134-5p后,KIAA0040,ZMAT5,RAB27A,TESMIN,MRPL58,ZFPM2,NUP98的表达水平下降(P<0.05)。敲低上述基因后,敲低MRPL58时乳腺癌细胞MCF7的凋亡水平上升(P<0.05)。过表达MRPL58后,乳腺癌细胞MCF7的凋亡水平下降。敲低miR-134-5p后,MRPL58的表达水平上升。过表达miR-134-5p后,MRPL58的表达水平下降。同时,miR-134-5p靶向MRPL58的3端非编码区(P<0.05)。同时敲低miR-134-5p和MRPL58后,乳腺癌细胞MCF7的凋亡水平没有显著改变(P>0.05)。同时过表达miR-134-5p和MRPL58后,乳腺癌细胞MCF7的凋亡水平没有显著改变(P>0.05)。结论:miR-134-5p通过靶向MRPL58 mRNA的3端非编码区以降低MRPL58的翻译水平,最终促进了乳腺癌细胞MCF7的凋亡。     

与大鼠肾间质纤维化相关microRNA的初步研究

目的 观察microRNA(miRNA)在单侧输尿管梗阻(UUO)大鼠模型中的表达,筛选与肾间质纤维化(RIF)相关的miRNA.方法 将48只SD大鼠分为UUO组和假手术组(Sham组),时间点为术后3d、7d、14 d.Masson染色观察肾脏病理.茎环实时定量PCR检测48条miRNA在肾组织的表达.结果 术后第3天,UUO组可见灶状肾间质水肿和单个核细胞浸润 ;术后第7天,灶状间质纤维化 ;术后第14天,显著间质纤维化.Sham组肾脏未见明显病变.相对于Sham组,UUO组在术后3d、7d和14 d分别有25条、24条和21条miRNA的表达差异有统计学意义(均P＜ 0.05).其中有5条miRNA(miR-132、miR-192、miR-194、miR-29c和miR-203)在术后3、7和14 d一致上调或下调,且与肾小管间质病变程度相关(均P＜0.05).结论 在大鼠UUO模型的RIF过程中20多条miRNA存在差异表达,提示miRNA可能参与RIF的发生发展过程.miR-132、miR-192、miR-194、miR-29c和miR-203与大鼠RIF关系密切,值得进一步研究.     

前列腺癌中P53的表达及其临床意义

目的:探讨P53在前列腺癌中的表达及其临床意义。方法:应用免疫组化Elivision法,检测45例前列腺癌和10例前列腺增生组织标本P53的表达,分析P53表达与前列腺癌分期、分级、前列腺特异性抗原(PSA)水平、内分泌治疗效果及预后的关系。结果:P53在前列腺癌和前列腺增生中阳性表达率分别为51.1%和10.0%(P<0.05);D期和A~C期前列腺癌中阳性表达率分别为70.0%和25.0%(P<0.05);Gleason评分≤7分和>7分前列腺癌中阳性表达率分别为14.3%和56.7%(P<0.05);PSA≤10μg/L和>10μg/L前列腺癌中阳性表达率分别为20.0%和60.0%(P>0.05);在内分泌治疗有效和无效前列腺癌中阳性表达率分别为25.0%和72.3%(P<0.05);LogRank检验分析P53阴性表达前列腺癌患者的生存时间明显长于P53阳性表达前列腺癌患者(P<0.05)。结论:P53表达可以作为判定前列腺癌预后的分子标记,同时可以预测内分泌治疗的效果。     

微小RNA let-7基因表达在膀胱癌生物学行为中的作用

目的 探讨膀胱癌组织中微小RNA(miRNA)表达在膀胱癌发生发展中的作用. 方法 Trizol法抽提9例膀胱癌患者癌组织及癌旁正常膀胱组织标本总RNA,分离与富集miRNA,随机选取2组miRNA标本与miRNA表达谱芯片杂交,采用LuxScan 3.0和SAM 2.1软件对芯片结果 进行图像数据分析.在差异性表达的miRNA中筛选出感兴趣的let-7基因,采用印迹杂交技术对9组miRNA标本中let-7基因进行验证. 结果 膀胱癌组织和正常膀胱组织标本中差异性表达有显著性意义的miRNA 71个,其中表达上调33个,表达下调38个;差异性表达有极显著性意义的miRNA(上调或下调≥4倍)26个,其中显著上调12个,显著下调14个.let-7基因验证结果 与芯片表达结果 一致,癌组织let-7基因表达吸光度值为479.6±228.2,正常膀胱组织为694.6±152.9,组间差异有统计学意义(P<0.05). 结论 膀胱癌组织和正常膀胱组织中存在差异表达的miRNA,let-7基因在膀胱癌的发生中可能起着抑癌基因的作用.     

前列腺癌组织中ARA55 mRNA表达及临床意义

目的:探讨雄激素受体辅助因子ARA55在前列腺癌组织标本中的表达,分析ARA55 mRNA与患者的临床特征(Gleason评分、临床分期、PSA)之间的相关性。方法:应用实时定量PCR(SYBR染料法)技术,对前列腺癌组织标本中ARA55mRNA表达进行研究。结果:前列腺癌患者标本中ARA55 mRNA均有表达,但表达量有所不同,T1～T2期和T3～T4期Ct值分别为20.57±0.20和16.33±0.31;Gleason评分≤7分和Gleason评分>7分的Ct值分别为23.13±0.13和17.13±0.19;PSA≤10μg/L和PSA>10μg/L的Ct值分别为24.70±0.27和17.21±0.34;内分泌治疗有效和无效的Ct值分别为23.82±0.21和16.71±0.32,前者和后者相比均具有显著的统计学差异(P<0.05)。结论:ARA55 mRNA表达与患者的临床特征(Gleason评分、临床分期、PSA)显著相关,肿瘤分期越早、Gleason评分≤7分、PSA≤10μg/L及内分泌治疗有效的患者其ARA55 mRNA表达量越高。ARA55可能是前列腺癌预后的一个良好预测指标,对于指导前列腺癌内分泌治疗有一定的意义。     

EZH2在前列腺癌中的表达及其与临床病理的关系

目的:探讨EZH2蛋白及其mRNA在前列腺癌中的表达以及两者与临床病理参数间的关系。方法:通过组织芯片技术,运用免疫组化(EnVision法)和原位杂交方法分别检测48例前列腺癌中EZH2蛋白及其mRNA的表达,同时检测常规石蜡组织中15例良性前列腺增生组织和12例高级别上皮内瘤变组织中的EZH2蛋白及其mRNA的表达作为对照。结果:EZH2蛋白和mRNA在前列腺癌中的阳性率(87.5%、81.25%)明显高于良性前列腺增生组织(13.33%、6.67%)和高级别上皮内瘤(16.67%、16.67%),差异有统计学意义(P<0.05)。免疫组化显示,EZH2蛋白在Gleason≥7分组阳性表达率(96.67%)明显高于Gleason≤6分组(72.22%),差异有统计学意义(P<0.05)。EZH2蛋白阳性表达率与TNM分期比较,T3～T4期(100%)明显高于T1～T2期(76.92%),亦有统计学意义(P<0.05),而EZH2蛋白表达与年龄和PSA无关(P>0.05)。原位杂交显示,EZH2mRNA的阳性表达率T3～T4期(100%)高于T1～T2期(85%),与TNM分期显著相关(P<0.05),而与年龄、PSA和Gleason分级无关(P>0.05)。分段评价预后估计较好组与预后估计较差组,两组之间EZH2蛋白及其mRNA表达阳性率均有显著性差异(P<0.05)。结论:EZH2蛋白及其mRNA在前列腺癌中高表达,提示其在前列腺癌的发生、发展过程中可能起重要作用,有可能成为判定前列腺癌恶性程度进程和预后的参考指标。     

MiR-30b-3p and miR-126-3p of urinary extracellular vesicles could be new biomarkers for prostate cancer

BackgroundExtracellular vesicles (EVs) including exosomes are present in blood, urine, and saliva and contain proteins, microRNAs, and messenger RNAs. We investigated microRNAs in urinary EVs to discover new biomarkers of prostate cancer (PCa).MethodsWe isolated EVs from urine obtained following digital rectal examination (DRE) of 14 men with elevated levels of serum prostate-specific antigen (PSA) [negative biopsy (n=4) and PCa with Gleason scores of 6 (n=3), 7 (n=3), and 8–9 (n=4)]. MicroRNAs extracted from EVs were analyzed by microRNA microarray.ResultsMicroRNAs miR-30b-3p and miR-126-3p were identified as being overexpressed in urinary EVs of the PCa patients versus the biopsy-negative men, but no microRNAs were associated with the Gleason score. In the independent cohort as well, these two microRNAs were overexpressed in urinary EVs from the PCa patients versus the negative-biopsy men. Logistic regression analysis adjusted by age and PSA showed that these two microRNAs were significantly associated with the prediction of PCa in biopsy specimens. Sensitivity and specificity of miR-30b-3p and miR-126-3p for the prediction of PCa were 46.4% and 88.0% and 60.7% and 80.0%, respectively, which were better than those of serum PSA (53.5% and 64.0%, respectively).ConclusionsMiR-30b-3p and miR-126-3p in urinary EVs could be potential biomarkers of PCa.     

E-cd和α-Cat表达与前列腺组织良恶性和转移性关系的研究

目的:研究黏附蛋白E-cd及α-Cat在良恶性前列腺组织中的表达,以及能否作为判定前列腺癌(PCa)预后的标志物。方法:应用免疫组化Elivision法,检测10例前列腺增生(BPH)和45例PCa患者组织标本中E-cd及α-Cat表达,并探讨E-cd及α-Cat的表达与PCa分级、分期、术前PSA、内分泌治疗效果及预后的关系。结果:①E-cd表达情况:在PCa和BPH中异常表达率分别为86.7%和10.0%,差异有显著性(P<0.05);PCa中转移和未转移组、Gleason评分≤7和Gleason评分>7组E-cd异常表达率分别为85.0%和87.5%,100.0%和86.7%,组间比较差异无显著性(P>0.05);PSA≤10μg/L和PSA>10μg/L的PCa中E-cd异常表达率分别为40.0%和97.1%,组间比较差异有显著性(P<0.05);在内分泌治疗有效与无效组中E-cd异常表达率分别为93.8%和72.7%,组间比较差异无显著性(P>0.05)。②α-Cat表达情况:PCa和BPH中α-Cat异常表达率分别为93.3%和30.0%,差异有显著性(P<0.05);PCa中转移和未转移组、Gleason评分>7和Gleason评分≤7组α-Cat异常表达率为90.0%和100.0%,90.0%和100.0%,组间比较差异无显著性(P>0.05);PSA≤10μg/L和PSA>10μg/L的PCa中α-Ca异常表达率为40.0%和94.3%,两者比较差异有显著性(P<0.05);在内分泌治疗有效与无效组中α-Cat异常表达率表达分别为100.0%和81.8%,组间比较差异无显著性(P>0.05)。结论:E-cd和α-Cat的表达与前列腺组织良恶性有关,与PCa转移性无关,在PCa中E-cd和α-Cat表达与PSA值成负相关。     

低氧诱导因子1α及血管内皮生长因子在前列腺癌中的表达及意义

目的:观察低氧诱导因子1α(H IF-1α)及血管内皮生长因子(VEGF)在前列腺癌(PCa)中的表达及意义。方法:32例PCa患者,根据G leason评分,将≥7分者设为高G leason评分组(n=12),<7分者为低G leason评分组(n=20)。良性前列腺增生(BPH)16例,BPH伴高级别前列腺上皮内瘤(PIN)15例,正常前列腺组织(NP)12例。采用免疫组化染色CD34观察各组组织中微血管密度(MVD)及H IF-1α、VEGF的表达情况。结果:PCa、PIN中H IF-1α阳性表达率分别为62.5%、60.0%,较BPH(6.3%)及NP(0)高,差异有统计学意义(P<0.05)。PCa、PIN中VEGF阳性表达率分别为78.1%、73.3%,较BPH(18.7%)及NP(8.3%)高,差异亦有统计学意义(P<0.05)。PCa的MVD为66.9±18.0,明显高于BPH(28.3±6.9)及NP(15.3±2.9)(P<0.05)。高G leason评分组H IF-1α、VEGF阳性率及MVD值均高于低G leason评分组,差异均有显著性(P<0.05)。结论:H IF-1α及VEGF过表达是PCa形成的早期事件,与PCa密切相关。     

Mcl-1和Caspase-3在前列腺癌患者中的表达和意义及相关性分析

目的 观察Mcl-1和Caspase-3在前列腺癌（PCa）、良性前列腺增生（BPH）组织中的表达情况,探讨两者相关性及意义。方法 采用免疫组化法检测并比较分析30例BPH和35例不同病理分级的PCa组织切片Mcl-1、Caspase-3蛋白的表达。结果 PCa组Mcl-1阳性表达率为82.86%（29/35）,显著高于BPH组13.33%（4/30,P<0.05）;PCa组Caspase-3阳性表达率为25.71%（9/35）,显著低于BPH组73.33%（22/30）（P<0.05）。Mcl-1、Caspase-3蛋白的表达与PCa患者术前PSA值、有无远处转移、Gleason评分、临床分期等临床资料无关(P>0.05)。在PCa组织中Mcl-1的表达与Caspase-3的表达呈负相关（r_s=-0.748,P<0.05）。结论Mcl-1、Caspase-3在PCa的发生、发展中可能相互影响。     

Five microRNAs in serum as potential biomarkers for prostate cancer risk assessment and therapeutic intervention

Background

Prostate cancer (PCa) is a common malignant human tumor and one of the main causes of cancer-related deaths in men. At present, prostate-specific antigen levels are widely used to diagnose PCa in the clinic, but they are not sufficient for an accurate early diagnosis or prognosis.

Methods

To identify potential molecular markers for PCa, we used real-time PCR to measure the expression levels of various microRNAs, including miR-1825, miR-484, miR-205, miR-141, and let-7b, in the serum of 72 PCa patients and 34 healthy controls.

Results

miR-1825, miR-484, miR-205, miR-141, and let-7b were shown to be highly specific for PCa, suggesting that they could be used as PCa tumor screening biomarkers. miR-205 may also be used as a biomarker for indicating bone metastasis in PCa patients, miR-1825 levels may help indicate tumor–node–metastasis classification, the evaluation of treatment effects, and determining prognosis, while let-7b levels may indicate potential tumor malignancy and the hormone resistance status and could be used as a basis to adjust individual treatments for the high-risk, early diagnosis of refractory PCa.

Conclusion

This study identified possible PCa tumor markers to more accurately predict the occurrence, progression, and prognosis of PCa, and which could be used in the development of tumor drug therapy.

     

骨形态发生蛋白-7在前列腺癌组织中的表达及意义

目的 研究骨形态发生蛋白-7(BMP-7)在前列腺癌(PCa)组织中的表达及意义.方法 经病理检查确诊PCa组织标本87例.患者平均年龄66(59～78)岁,术前或穿刺前血清总PSA(t-PSA)平均45.7(2.4～138.2)ng/ml.Gleason评分≤6分37例,7分18例,≥8分32例.临床分期:I期(T1a N0 M0)+Ⅱ期(T1b N0M0,T1cN0M0,T2N0M0)20例,Ⅲ期(T3N0M0)20例.Ⅳ期(T4N0M0,TxN1M0,TxN0M1)47例,其中TxN0M1 45例.根据核素骨扫描或正电子发射计算机体层成像CT检查结果分为:PCa无骨转移42例,PCa伴骨转移45例.以30例BPH组织标本为对照,患者平均年龄68(57～88)岁.免疫组织化学PV法检测BMP-7在PCa组织和BPH组织中的表达,统计学分析2组及PCa组内表达差异,PCa组织中BMP-7与血清t-PSA相关性采用Pearson相关性分析. 结果BPH组织中BMP-7表达吸光度A值为70.55±5.41,PCa组织中为70.47±6.18,2者比较差异无统计学意义(P>0.05).PCa无骨转移组BMP-7表达吸光度A值为65.94±1.76,伴有骨转移组为74.80±5.76,2者比较差异有统计学意义(P<0.05).Gleason评分≤6分者吸光度A值为65.96±1.56,7分者为65.83±2.75,≥8分者为78.06±1.39.≤6分和7分者分别与≥8分相比,BMP-7表达A值差异有统计学意义(P<0.05).临床分期编组中Ⅰ期+Ⅱ期BMP-7表达A值为65.86±1.72,Ⅲ期为65.87±1.85,Ⅳ期为74.49±5.83,Ⅰ期+Ⅱ期和Ⅲ期分别与Ⅳ期相比,差异有统计学意义(P<0.05).PCa组织中BMP-7表达A值与血清t-PSA值呈正相关关系(r=0.77,P<0.05).结论 病理Gleason高评分、临床分期、已发生骨转移的PCa组织中高表达BMP-7,BMP-7表达水平与血清t-PSA具有正相关性,提示BMP-7可能是促进PCa细胞发生骨转移的重要细胞因子之一.     

粘着斑蛋白、雄激素受体在前列腺癌中的表达及相关性研究

目的:检测粘着斑蛋白(VCL)和雄激素受体(AR)在良性前列腺增生(BPH)和前列腺癌(PCa)中的表达情况,并分析其与PCa不同临床分期、病理分级、PSA水平之间的相互关系。方法:采用免疫组化法检测18例BPH组织,38例PCa组织中VCL、AR的表达。并分析两者在BPH、PCa中的表达差异,在PCa不同临床分期、病理分级、初次PSA检测水平的表达差异,以及两者之间的相关性。结果:VCL在PCa中的表达较BPH组织增多,AR表达在BPH、PCa中无明显差异;VCL、AR在PCa组织中的表达与肿瘤临床分期、病理分级密切相关,与PSA值无明显关系;VCL、AR在PCa组织中的表达存在正相关。结论:VCL在BPH、PCa的表达具有差异性,可以作为前列腺良、恶性疾病鉴别诊断的一个潜在指标;AR、VCL随PCa进展表达逐步下降,两者存在正相关,两者结合可以成为PCa进展的诊断、预后评价指标。     

CD44s和CD15在前列腺癌组织中的表达及其意义

目的 探讨细胞黏附分子CD44s和CD15在前列腺癌(PCa)组织中的表达及其临床意义.方法 采用免疫组化SP法检测42例前列腺癌(PCa)组织和15例良性前列腺增生(BPH)组织中CD44s和CD15的表达,并用图像分析系统测量CD44s和CD15的平均光密度值.结果 (1)CD44s在PCa组织中的表达明显低于BPH组织(p＜0.01);CD44s在PCa组织中的表达随着Gleason分级、临床分期的增加而明显降低(p＜0.01);PCa转移组中CD44s表达明显低于无转移组(p＜0.01).(2)PCa组织中CD15的表达显著高于BPH(p＜0.01),CD15在PCa组织中的表达随着Gleason分级、临床分期的增加而增强(p＜0.001);转移组中CD15的表达显著高于无转移组(p＜0.001).(3)在PCa组织中CD44s与CD15表达呈负相关(r=-0.785,p＜0.001).结论 CD44s和CD15的异常表达在PCa的恶性进展过程中起重要作用,将CD44s和CD15联合分析,可更准确判断肿瘤恶性程度、转移和预后.