NT-3基因修饰施万细胞促进神经干细胞体外分化为神经元样细胞

目的：观测神经营养素-3（NT-3）基因修饰施万细胞(SCs)对神经干细胞体外分化为神经元样细胞的影响。方法：神经干细胞(NSCs)分别与NT-3基因修饰SCs（NT-3-SCs）、LacZ基因基因修饰SCs（LacZ-SCs）和SCs在体外共培养，7d后用免疫组化方法观测NSCs的分化并计算其中神经元样细胞的分化率。结果：NSCs在体外可分化为神经元样细胞（NF阳性）和神经胶质样细胞（GFAP阳性），与未基因修饰的SCs相比，NT-3-SCs能更有效地提高神经元样细胞的分化率，而LacZ-SCs与SCs没有明显区别。结论：NT-3-SCs能促进NSCs向神经元样细胞分化。     

绿色荧光蛋白转基因小鼠神经干细胞的培养与鉴定

目的:体外分离、培养及鉴定绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)转基因小鼠神经干细胞(neu- ral stem cells,NSCs),为利用其示踪研究NSCs分化机制奠定基础。方法:从新生GFP小鼠海马组织分离NSCs,采用无血清培养、扩增及传代;免疫荧光和免疫细胞化学染色鉴定NSCs和神经细胞;荧光显微镜下观察GFP表达情况。结果:新生GFP小鼠大脑海马组织分离的NSCs具有自我增殖及分化成神经元、星形胶质细胞和少突胶质细胞的能力;连续传代后,神经球和分化后细胞的GFP表达不受影响。结论:成功分离并获得了GFP新生小鼠NSCs,该细胞具有自我更新能力和多向分化潜能,且稳定表达GFP。因此,源自GFP转基因小鼠的NSCs可以作为研究NSCs多向分化机制的有效示踪工具。     

NT-3基因修饰施万细胞促进移植的神经干细胞在损伤脊髓内分化为神经元样细胞

目的探讨神经营养素-3（NT-3）基因修饰施万细胞（SCs）对植入全横断性脊髓损伤处的神经干细胞（NSCs）分化为神经元样细胞的影响。方法将NSCs单独移植或与NT-3基因修饰SCs、LacZ基因修饰SCs和SCs联合移植到全横断性脊髓损伤处,67d后用免疫组织化学方法观测NSCs的分化,并计算其中神经元样细胞的分化率。结果NSCs在损伤脊髓内可分化为神经元样细胞和神经胶质样细胞,与未基因修饰的SCs的作用相比,NT-3基因修饰的SCs能更有效地提高NSCs向神经元样细胞的分化率,而LacZ基因修饰的SCs与未修饰SCs没有明显区别。结论NT-3基因修饰SCs能促进NSCs在损伤脊髓内向神经元样细胞分化。     

神经干细胞增殖分化的影响因素、调控机制与应用

神经干细胞可持续增殖并具有分化成神经元、星形胶质细胞和少突胶质细胞的能力,为治疗中枢神经系统退行性疾病和损伤打下基础,综述了NSC增殖分化的影响因素、调控机制及其临床应用前景。     

神经干细胞微环境的研究进展

传统观念认为，成年哺乳动物中枢神经系统是不可能再生的。近年来的一些研究表明，成年啮齿类和灵长类动物CNS仍然可产生新的神经元，并证实在成人脑组织中也有神经干细胞(neural stem cells，NSCs)存在。神经干细胞在体外可被生长因子诱导而增殖，并保持分化成神经元或胶质细胞的潜能，移植后能在宿主的神经组织中生存、整合及分化，并且通过基因转染后可表达外源性基因产物。     

骨髓基质细胞促进神经干细胞增殖分化

目的：探讨骨髓基质细胞（BMSCs）对神经干细胞（NSCs）增殖分化的影响。 方法:在体外比较NSCs在单独培养和在BMSCs条件培养液中培养下的分化和增殖情况。 结果:应用BMSCs条件培养液培养NSCs，分化的神经元比例较显著高于NSCs单独培养（41.1%±3.2% vs 23.3%±16.5%，P<0.05），而分化的星形胶质细胞所占比例显著降低（33.8%±4.9% vs 65.0%±10.4%，P<0.01），同时增殖细胞所占比例也显著增高（74.7％±4.7％ vs 51.4％±12.3％，P<0.01）。 结论:BMSCs对NSCs有促进其增殖和向神经元分化的作用。NSCs与BMSCs联合移植可能会增强NSCs移植的抗脑损伤作用。     

GDNF基因修饰的NSCs移植对暂时性缺血性脑卒中大鼠的神经保护作用研究

目的　探讨移植胶质细胞源性神经营养因子（glial cell line derived neurotrophic factor,GDNF）基因修饰的神经干细胞（neural stem cells,NSCs）对暂时性缺血性脑卒中大鼠的神经保护。 方法　用GDNF重组腺病毒载体转染新生大鼠NSCs（GDNF/NSCs）,分化培养7 d后,行免疫细胞化学染色检测微管相关蛋白2（MAP2）。采用改良的插线法制作暂时性脑缺血再灌注模型,3 d后经脑室分别移植生理盐水、NSCs和GDNF/NSCs。于再灌注后1、2、3、5、7周末处死大鼠,行免疫组织化学染色观察移植细胞在脑内的神经元分化及星形胶质细胞在缺血区形成胶质界膜情况,行Luxol fast blue（LFB）染色显示神经纤维损伤情况。 结果　GDNF/NSCs体外分化为MAP2+细胞的比例显著高于NSCs的分化。移植细胞在脑内分化为MAP2+细胞,于再灌注第5周分化达高峰,GDNF/NSCs组于再灌注第3~7周,其MAP2+细胞显著高于NSCs组。各组缺血区由星形胶质细胞形成的血管胶质界膜存在不同程度的破坏,其连续性中断。对照组在各个时间点,血管胶质界膜损伤严重,完整性差,两细胞移植组,其胶质界膜随时间延长逐渐完整,GDNF/NSCs组早于NSCs组完善对胶质界膜的修复。此外,GDNF/NSCs组的神经纤维损伤修复优于NSCs组。 结论　GDNF/NSCs比NSCs对暂时性缺血性脑卒中大鼠模型有更好的神经保护作用,可能是与GDNF提高了NSCs在脑内的神经元分化,增强了NSCs对胶质界膜及神经纤维修复有关。     

atRA对新生大鼠纹状体神经干细胞增殖和分化的影响

目的：研究全反式视黄酸（atRA）对体外培养的NSCs分裂增殖和分化的作用及其机制。 方法： 分离培养新生SD大鼠纹状体神经干细胞（NSCs），免疫荧光细胞染色加以鉴定；采用不同组合配方的培养液培养细胞，FCM检测atRA对NSCs细胞周期分布和增殖的影响；利用免疫荧光鉴定和分化细胞的分类计数法，判定atRA对NSCs分化的影响。 结果： 细胞周期分析表明，atRA处理组G0/G1期细胞数量显著增加，PI值小于对照组。atRA处理组与对照组的NSCs，经诱导分化后产生的细胞类型有显著差异，atRA处理组产生的神经元是对照组的2.5倍。 结论： atRA能抑制NSCs细胞增殖，并抵消生长因子对NSCs的促有丝分裂作用，atRA还促进NSCs向神经元方向分化。     

壳聚糖支架与神经干细胞生物相容性的研究

为探讨壳聚糖多孔支架与神经干细胞(NSCs)的生物相容性,应用冷冻干燥技术制备壳聚糖多孔支架,将神经干细胞克隆球接种于壳聚糖支架载体上,分为NSCs+支架组和NSCs+支架+NGF组。培养2周后冰冻切片,行Nissl染色及微管相关蛋白-2(MAP-2)、胶质纤维酸性蛋白(GFAP)和2,3-环核苷酸磷酸二酯酶(CNP)免疫组化染色来检测NSCs的分化,并进行MAP-2阳性细胞计数、胞体面积、细胞周长的图像处理和统计分析。结果显示:壳聚糖支架孔隙率为90%,支架孔径为50～350μm。NSCs可以在壳聚糖支架上存活、迁移并分化成神经元、星形胶质细胞和少突胶质细胞。NSCs+支架+NGF组的MAP-2阳性细胞数明显多于NSCs+支架组,且胞体较大,突起较多且长。上述结果提示,壳聚糖支架与NSCs具有良好的生物相容性,外源性的NGF能够促进壳聚糖支架中的NSCs向神经元分化。     

神经干细胞分化调节机制与应用前景

Reynolds等（1992）将成鼠的纹状体在表皮生长因子（epidermal growth factor，EGF）存在下离体培养，发现可表达nestin的细胞，并证实该细胞具有增殖能力，可分化为神经元与胶质细胞。这一发现打破了以往认为的中枢神经系统（central neural system，CNS）神经元损伤不可再生的观点。神经干细胞（neural stem cells，NSCs）具有干细胞的一般特性：自我更新和多向分化，且具有潜在的迁移能力，这些良好的生物学特性，使其具有广泛的应用前景，对于NSCs的研究为脑功能的恢复带来了曙光。