贝母的分子生物学鉴定方法的研究

用ＤＮＡ指纹图谱、ＲＡＰＤ和ＤＮＡ测序等技术鉴定中药材已有不少报道[1～ 5] 。ＤＮＡ的提取和ＰＣＲ扩增是分子生物学最基本的操作步骤之一。但是由于商品药材多数经过加工处理 ,ＤＮＡ可能会受到不同程度的降解 ,再者植物药材中含有的次生代谢产物如多糖很难与ＤＮＡ和ＲＮＡ分开 ,而多糖对酶有抑制作用 ,因此将会影响ＤＮＡ的提取和ＰＣＲ扩增。本文以贝母为研究对象 ,探讨不同ＤＮＡ提取方法、不同扩增条件对ＰＣＲ产物的影响 ,为生药的分子生物学鉴定提供参考。材料与方法1　材料　托里贝母Ｆｒｉｔｉｌｌａｒｉａｔｏｒｔｉｆｏｌ…     

西河柳种质遗传多样性的ISSR分析

目的：应用ISSR-PCR标记技术研究中药材西河柳基原植物柽柳及其近缘种的亲缘关系和遗传多样性,为西河柳药材鉴定和育种提供参考。方法：对柽柳7个居群以及甘蒙柽柳、多枝柽柳及购自药材市场西河柳共11个样本进行ISSR-PCR分析, 采用NTSYS-pc软件计算柽柳各居群及近缘种间的Jaccard遗传相似系数, 按非加权配对算术平均法(UPGMA) 建立所研究类群的系统聚类图。结果：14条引物扩增出106个条带,其中多态带为83条,占总扩增条带数的78.3％。从聚类分析图可以看出,柽柳不同居群样本首先聚在一起,表明是一自然物种;甘蒙柽柳与柽柳具有较近的亲缘关系。研究还表明目前商品市场西河柳药材来源较混乱。结论：ISSR标记可以为西河柳原植物及其近缘种的种质资源鉴定、遗传关系分析及栽培育种提供分子生物学依据。     

市售鹿鞭的DNA指纹鉴定研究

目的探讨鹿鞭及牛鞭线粒体细胞色素b基因(Cytb)部分序列片段特征,建立中药材鹿鞭敏感、特异的DNA分子标记学鉴定方法。方法对市售鹿鞭进行样本处理,模板制备,采用鹿鞭特异性引物进行PCR反应,对市售鹿鞭样本采取DNA指纹鉴定。结果对市售鹿鞭中药材进行mtDNA鉴定,有三个样本为正品。结论此方法对市售鹿鞭鉴定,可准确辨别正品与伪品。重现性、稳定性好,简便准确而可行,说明鹿鞭mtDNA具有特异性指纹特征,所得鹿鞭DNA指纹特征图谱可用于市售鹿鞭的鉴定。     

分子生物学技术在药品微生物鉴定溯源中的应用

目的:为满足基于风险评估的微生物控制体系及药品质量全过程控制的要求,建立更加完善的药品微生物鉴定溯源标准化分子生物学技术体系。方法:总结各国药典中分子生物学标准体系的构成,并分析《中国药典》中收载的分子生物学技术及该技术在药品微生物鉴定溯源中的应用。结果与结论:分子生物学技术是进行药品微生物鉴定溯源的重要标准,不同的分子生物学鉴定方法都有其优势和局限性,需要根据需求选择最合适的方法,以期达到最佳效果。     

川芎和引种日本川芎的RAPD分析与鉴定

目的从DNA分子水平上探讨川芎和引种日本川芎的亲缘关系及不同居群的遗传变异。方法提取35个样本的基因组DNA,并进行随机扩增多态性DNA(RAPD)分析和聚类分析。所选15个引物的RAPD,得出35个样本的聚类树状图。结果川芎和引种的日本川芎有明显的种间遗传差异,居群内遗传变异小,小生境对遗传性状有影响。结论所用方法可为川芎和日本川芎的鉴定及其道地性研究提供分子生物学依据。     

中药材苦地胆及其混淆品的DNA指纹鉴定

用聚合酶链式反应方法，包括臆断引物聚合酶链式反应技术和随意引物扩增的多态性ＤＮＡ技术，鉴定中药材苦地胆及其混淆品，结果表明：用六个长的和一个短的引物扩增的苦地胆及其混淆品基因组ＤＮＡ指纹和多态性，可在琼脂糖凝胶上明显地区别开来。根据这些指纹图谱及由此估算的相似度值，证实从福建，台湾，香港以及澳门获得的商品药材苦地胆的基原为菊科植物地胆草。     

中药材蛇胆的DNA分子标记鉴定研究

目的　运用分子标记技术鉴定药材蛇胆的真伪,以克服目前仅依据形态、显微特征及理化性状进行鉴别的不足。方法　分别从药材蛇胆的胆衣和胆汁、原动物棕黑锦蛇的肌肉和胆汁中提取DNA,经PCR扩增得到约400bp的12SrRNA基因片段,并对该基因片段进行测序研究。结果　从少量药材蛇胆的胆衣和胆汁中可提得足够用于PCR扩增的DNA模板,扩增产物的测序结果表明同一动物的胆衣和胆汁、肌肉和胆汁的碱基序列完全一致。结论　DNA分子标记技术可用于中药材蛇胆和胆汁的鉴定,提示该技术也可用于其他动物分泌物类型药材的鉴别。目前市场上药材蛇胆来源较复杂,需加强质量监督和控制。     

无症状人芽囊原虫感染调查及PCR鉴定

目的 调查当地居民人芽囊原虫感染情况,用PCR鉴定方法进行初步的分子生物学研究。方法 收集当地居民粪便标本,碘染色法镜检人芽囊原虫,体外分离培养并观察其形态及繁殖方式,提取人芽囊原虫基因组DNA,用针对人芽囊原虫SSurDNA的特异性引物进行PCR鉴定。结果 共调查415例当地居民,镜检发现4例阳性,均为无症状人芽囊原虫感染者,阳性率0．96％,未见其他寄生虫合并感染。分离培养观察形态主要为空泡型和颗粒型,未发现阿米巴型和包囊型。繁殖方式以二分裂为主,偶见出芽生殖及三分裂．未发现裂体生殖。PCR扩增获得特异性的阳性条带。结论 无症状人芽囊原虫感染率较低,可以通过扩增其SSurDNA进行鉴定。     

市售鹿鞭的DNA指纹鉴定研究

目的：探讨鹿鞭及牛鞭线粒体细胞色素b基因（Cytb）部分序列片段特征,建立中药材鹿鞭敏感、特异的DNA分子标记学鉴定方法。方法对市售鹿鞭进行样本处理,模板制备,采用鹿鞭特异性引物进行PCR反应,对市售鹿鞭样本采取DNA指纹鉴定。结果对市售鹿鞭中药材进行mtDNA鉴定,有三个样本为正品。结论此方法对市售鹿鞭鉴定,可准确辨别正品与伪品。重现性、稳定性好,简便准确而可行,说明鹿鞭mtDNA具有特异性指纹特征,所得鹿鞭DNA指纹特征图谱可用于市售鹿鞭的鉴定。     

中药材DNA条形码技术研究进展

摘 要 药用植物滥用现象带来的众多有害反应已经引起了国内外广泛的关注。药物安全使用问题亟待解决。DNA条形码是一种强有力的分子鉴定技术,它能弥补传统形态学和化学方法鉴定中药材的不足之处。近年,DNA条形码技术给中药材的鉴定带来了新的视野也获得了众多突出性成绩。一些热门的DNA条形码候选序列如ITS, ITS2, psbA-trnH, rbcL, matK已经用于中药材的鉴定。     

中药材掺伪染色鉴别技术研究进展

目的：对近年来中药材掺伪染色的形式及鉴别技术进行总结,为中药材掺伪、染色的鉴别提供参考。方法：通过收集近年来发表的中药材掺伪染色相关的文献报道,归纳相应的鉴别技术,总结鉴别技术的研究进展。结果：中药材的掺伪染色多样,形式不同,适用的鉴别方法亦不同。结论：性状、显微鉴定、理化鉴定或分子生物学方法均有其特长,在实际工作中应根据品种情况有针对性地选择合适的方法,或者使用多种方法相结合以达到鉴别中药材的目的。     

中药材分子鉴别新方法:锚定引物扩增多态性DNA的研究

为了寻找稳定性好、可操作性强的分子鉴定新方法，在充分吸取RAPD优势的基础上，对其引物和退火温度进行了改进。本文以人参、西洋参为例进行了方法的探索和各种验证，并推广应用到天花粉以及白芷类药材的鉴别。结果显示引物Pg-q36F得到人参、西洋参及其9种伪品的多态性条带。对于人参、西洋参的鉴别结果与文献鉴别方法结果一致，并且具有更高的稳定性。引物TkS1-64F得到了天花粉及其11种伪品的多态性条带，引物AfS1-100F得到白芷及其3种伪品的多态性条带，均能准确鉴别各种药材。实验结果证明本方法具有简单易行、稳定性和重复性好、提供的信息量大等优点，是一种极具前途的中药材分子鉴定新方法，被命名为锚定引物扩增多态性DNA(anchored primer amplification polymorphism DNA，APAPD)。     

以任意放大多型性DNA之方法鉴别中药及复方中的术类

目的:藉由分子生物学的技术,鉴别中药复方中的单品药材—术类,以提升药材分析的灵敏度,进而促使药材品管升级。方法:藉由任意序列的引子,先以单品药材—术类为模板来建立该药材常用的品种,苍术及白术等之RAPD标志,以应用于复方之检测。结果:在RAPD的标志分析中,可得知引子OPF05对术类具有保留性,而引子OPF03则仅在白术有保留性,因而可以应用于区分苍术与白术。另外,白术诸种中,可由引子OPF14加以鉴别,而同种不同产地的白术,江坪上等与一等则可由引子OPF13得到区别。结论:中药材的鉴定,传统上以外型及化学方法加以区分,在本论文中,在分子层次上进行鉴定,除了灵敏度增加外,在复方及粉剂中,亦可有良好的鉴别效果。     

玉竹基因组DNA的提取与分析

目的以玉竹根茎为材料,寻找一种适合于玉竹总DNA提取的方法,便于下游分子生物学的操作。方法采用经典CTAB法与改良CTAB法。结果改良CTAB法提取得到的DNA可以很好地用于PCR扩增。结论改良CTAB法适用于类似玉竹这类含多糖较多的根及根茎类中药材DNA的提取。     

中药材龟板和鳖甲中DNA的提取与扩增

中药材龟板和鳖甲中ＤＮＡ的提取与扩增王亚明，周开亚，吴平，徐珞珊（南京师范大学生物系，南京２１００９７；中国药科大学生药学研究室，南京２１０００９）龟鳖类药材在我国使用历史悠久，具补阴益气的功效。《中国药典》（１９９０年版）规定龟甲（龟板）的原动物为...     

鹿鞭线粒体DNA指纹鉴定

目的探讨鹿鞭及牛鞭线粒体细胞色素b基因部分序列片段特征,建立中药材鹿鞭敏感、特异的DNA分子标记学鉴定方法。方法碱变性法提取新鲜鹿鞭及牛鞭,采用引物设计软件PrimerPremier5.0对鹿鞭及牛鞭的细胞色素b基因序列分析,用于鉴定正品鹿鞭的特异性引物,经聚合酶链式反应(PCR)扩增,对鹿鞭进行DNA指纹鉴定。结果对鹿鞭进行mtDNA鉴定图谱显示,真品鹿鞭有306bp条带,伪品没有。结论用此方法对鹿鞭进行鉴定,可准确辨别正品与伪品。重现性、稳定性好,简便准确而可行。鹿鞭mtDNA具有特异性指纹特征,所得鹿鞭DNA指纹特征图谱可用于鹿鞭的鉴定。     

不同种类中药材的DNA提取方法

目的根据不同种类中药材来选择DNA提取方法.方法根据作者对各种药材鉴定的实践经验,结合国内外有关代表性的论文,进行归纳和整理.结果分析了不同DNA提取方法适用范围和局限性.结论根据药材种类、贮存时间,选取合适的提取方法和适当的样品量.     

试论火试法在中药鉴定中的应用

我国中药材品种繁多,中药材鉴定有很大难度.常用的鉴定方法有:来源(原植物、原动物和矿物)鉴定、性状鉴定、显微鉴定及理化鉴定等四大鉴定方法.各种方法均有其特点和适用对象,有时候还需要几种方法配合才能完成对一种中药材的准确鉴定.所以一般的医药工作者甚至是专业药监人员在没有特定的工作环境及仪器设备的情况下是难以对一些中药材进行准确鉴定的.笔者十几年来在药检所的药品监督检验及质保工作中总结出用火试方法鉴定中药材.     

Y染色体α类卫星序列的扩增及鉴定胎儿性别中的应用

作者介绍了用寡核苷酸引物Y_1和Y_2扩增人类Y染色体α类卫星DNA序列的方法,并用于胎儿性别鉴定。本方法灵敏、准确,无损伤性。作者用之对一胎儿进行了性别鉴定。     

使用碱裂解法快速提取药材DNA方法的研究

目的:建立药材DNA快速提取方法。方法:使用碱裂解缓冲液提取药材DNA,考察提取液配方组成和中和剂种类对药材DNA纯度、浓度的影响。利用优化提取液提取了144个中药材DNA,动物药使用COⅠ、植物药使用psbA-trnH通用引物进行PCR扩增。结果:0.5 mol.L-1氢氧化钠、1%PVP和1%Triton×100具有最佳的DNA提取效果。对144个中药材进行PCR扩增,利用琼脂糖凝胶电泳可检测到123个中药材DNA的PCR产物。碱裂解法可用于快速提取蛇类药材DNA,并成功用于乌梢蛇、金钱白花蛇的分子鉴定。结论:优化的碱裂解法可用于提取中药材基因组DNA,其提取时间可控制在10 min左右,且避免了酚、三氯甲烷等对人体有毒试剂的使用,对药材快速分子鉴定体系的建立将发挥重要作用。