脑源性神经营养因子可减轻 H9c2 心肌细胞缺氧/复氧损伤

目的 探讨脑源性神经营养因子（BDNF）预处理对 H9c2 心肌细胞缺氧/复氧（H/R）损伤的影响及其作用机制。方法 体外培养 H9c2 心肌细胞并以缺氧 （95%N2+5%CO2） 培养 4 h 后复氧 （95%O2+5%CO2） 培养 12 h 建立 H/R 模型, 并分为 Control 组、 H/R 组、 不同浓度 （1、 10、 100 μg/L） BDNF 预处理后 H/R 组、 酪氨酸蛋白激酶受体 B （TrkB）inhibitor 组 （同时加入 100 μg/L BDNF 和 1∶1 000 的 TrkB inhibitor 预处理后 H/R 组）。利用 MTT 方法检测各组心肌细胞的细胞存活率; 并测定各组心肌细胞 H/R 损伤后乳酸脱氢酶（LDH）、 肌酸激酶（CK）、 丙二醛（MDA）、 超氧化物歧化酶（SOD）含量及活性; 流式细胞术测定各组心肌细胞的凋亡率; Western-blot 检测 TrkB、 Bcl-2、 Bax 蛋白表达。结果 与 Control 组相比, H/R 组细胞存活率明显下降, LDH、 CK 和 MDA 含量升高, SOD 活性降低, 细胞凋亡率升高, 抗凋亡 Bcl-2 蛋白表达下降, 促凋亡 Bax 蛋白表达升高（均 P < 0.05）。与 H/R 组相比, 不同浓度 BDNF 预处理H9c2 心肌细胞后 H/R, 各组细胞存活率均明显上升, CK、 LDH、 MDA 含量逐渐下降, SOD 活性升高, 细胞凋亡率下降, TrkB 和 Bcl-2 蛋白表达升高, 而 Bax 蛋白表达降低, 但 BDNF 的作用均受到 TrkB inhibitor 的抑制。结论 BDNF预处理能够提高 H9c2 心肌细胞 H/R 损伤的细胞存活率, 通过降低细胞凋亡率和提升细胞抗氧化能力而发挥保护作用, 并与 BDNF-TrkB 信号通路有关。     

RISK信号通路在1-磷酸鞘氨醇后适应减轻心肌细胞缺氧/复氧损伤中的作用

目的研究再灌注损伤挽救激酶(reperfusion injury salvage kinase,RISK)信号通路在1-磷酸鞘氨醇(sphingosine-1-phosphate,S1P)后适应减轻H9c2心肌细胞缺氧/复氧损伤中的作用。方法将H9c2细胞随机分为7组,即(1)正常对照组(C);(2)缺氧/复氧组(H/R);(3)S1P组;(4)S1P+LY294002组(S1P+LY);(5)LY组;(6)S1P+PD98059组(S1P+PD);(7)PD组。采用MTT法测定各组细胞存活率;比色法测定丙二醛(MDA)含量、总超氧化物歧化酶(TSOD)和锰超氧化物歧化酶(Mn-SOD)活力;采用激光共聚焦显微镜技术检测细胞内游离钙离子浓度变化;流式细胞仪检测心肌细胞凋亡率;Western blot法测定Akt和ERK1/2蛋白的磷酸化水平。结果与H/R组比较,S1P组可明显增加H9c2细胞缺氧/复氧损伤后细胞存活率及凋亡率,增加TSOD及Mn-SOD活力,降低MDA含量,降低钙离子浓度,增加Akt和ERK1/2磷酸化水平,而PI3K/Akt信号通路阻断剂LY294002或ERK1/2阻断剂PD98059可阻断S1P对H9c2的上述作用。结论 S1P能够减轻H9c2细胞缺氧/复氧损伤,加入PI3K/Akt抑制剂LY294002和ERK1/2抑制剂PD98059均使S1P的保护作用被取消,表明S1P通过RISK信号通路发挥抗H9c2细胞缺氧/复氧损伤作用。     

吡那地尔、美托洛尔、谷氨酰胺、胰岛素单独及联合使用对H9c2心肌细胞缺氧/复氧损伤的保护作用及机制

目的研究吡那地尔(pinacidil,Pin)、美托洛尔(metoprolol,Met)、谷氨酰胺(glutamine,Glu)、胰岛素(insulin,Ins)四药联用对缺氧/复氧(hypoxia/reoxygenation,H/R)所致H9c2心肌细胞损伤的保护作用并探讨其作用机制。方法将培养的H9c2心肌细胞随机分为7组,即①正常对照(Con)组;②H/R组;③Pin组;④Met组;⑤Glu组;⑥Ins组;⑦四药联用(PMGI)组。测定各组H9c2心肌细胞的存活率;收集培养液测定乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)活性,超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)活性;Western印迹法检测保护性蛋白热休克蛋白70(heat shock protein 70,HSP70)的表达情况。结果对于H/R损伤的H9c2心肌细胞,四药联用组与药物单用组或H/R组相比能明显提高细胞存活率,保护细胞膜,减少LDH渗漏;增加抗氧化能力,提高SOD含量;增加HSP70的表达。结论联合用药组与药物单用组相比保护作用增强。     

三叶苷调控miR-539-5p表达保护缺氧缺糖心肌细胞损伤研究

摘要：目的:探讨三叶苷对缺氧缺糖心肌细胞损伤的保护作用及机制。方法:采用不同浓度的三叶苷作用于缺氧缺糖诱导的心肌细胞H9C2,试剂盒检测丙二醛（MDA）含量、乳酸脱氢酶（LDH）和超氧化物歧化酶（SOD）活性,流式细胞术、蛋白质印记（Western blot）检测细胞凋亡以及B细胞淋巴瘤-2（Bcl-2）和Bcl相关X蛋白（Bax）蛋白表达,实时荧光定量PCR（RTq PCR）检测miR-539-5p表达。转染miR-539-5p模拟物至H9C2细胞,检测过表达miR-539-5p对缺氧缺糖诱导的H9C2细胞损伤的影响。结果:三叶苷作用于缺氧缺糖诱导的H9C2细胞后,细胞中MDA含量、LDH释放量、细胞凋亡率和Bax蛋白表达水平显著降低,SOD活性、Bcl-2蛋白和miR-539-5p表达水平显著升高（P<0.05）。过表达miR-539-5p后,缺氧缺糖诱导的H9C2细胞中MDA含量、LDH释放量、细胞凋亡率和Bax蛋白表达水平显著降低,SOD活性、Bcl-2蛋白表达水平显著升高（P<0.05）。抑制miR-539-5p表达可减弱三叶苷对缺氧缺糖诱导的H9C2细胞MDA含量、LDH释放量、SOD活性、凋亡,以及Bax和Bcl-2蛋白表达的影响。结论:三叶苷可有效降低缺氧缺糖诱导的心肌细胞损伤,其机制与上调miR-539-5p表达有关。     

pFLAG-AMPKα2真核表达质粒构建及对心肌缺氧/复氧损伤的作用

目的：构建大鼠pFLAG-AMPKα2真核表达质粒,分析AMPKα2过表达对心肌细胞缺氧/复氧损伤的影响。方法：提取H9c2心肌样细胞的mRNA,反转录为cDNA。PCR扩增AMPKα2基因的cDNA全长,并将其克隆至pFLAG-CMV-4构建pFLAG-AMPKα2重组质粒。转染pFLAG-AMPKα2至H9c2细胞,West-ern Blot测定AMPKα2的蛋白表达情况,建立缺氧/复氧（A/R）损伤模型,MTT法检测心肌细胞的存活率,生物自动分析仪检测LDH活性,流式细胞术检测各实验组心肌细胞凋亡程度、细胞内ROS的变化,试剂盒检测细胞内抗氧化酶（SOD、GSH-Px）活性。结果：AMPKα2全长基因序列克隆至真核表达载体pFLAG-CMV-4,酶切鉴定片段大小为1700bp,Western blot检测转染pFLAG-AMPKα2后,AMPKα2蛋白在H9c2细胞中高表达。H9c2细胞遭受A/R损伤,心肌细胞存活率下降,LDH活性增加,细胞凋亡加重,ROS生成增加,SOD及GSH-Px的酶活性下降,pFLAG-AMPKα2重组质粒的导入可明显逆转、改善上述各项指标,从而对抗A/R损伤。结论：构建成功的pFlAG-AMPKα2重组质粒能对抗A/R所致的心肌细胞损伤,其机制与改善心肌细胞的氧化应激作用有关。     

1-磷酸鞘氨醇后适应对人脐静脉内皮细胞缺氧/复氧损伤的保护作用

目的研究1-磷酸鞘氨醇(S1P)后适应对人脐静脉内皮细胞(HUVEC)缺氧/复氧损伤的保护作用,并探讨其作用机制。方法建立HUVEC缺氧/复氧损伤模型,将HUVEC细胞分为5组,正常对照组、S1P低剂量组、S1P中剂量组、S1P高剂量组以及缺氧/复氧损伤(H/R)组。MTT法检测细胞存活率;流式细胞术分析测定细胞凋亡率;比色法测定细胞培养液中总超氧化物歧化酶(total superoxide disnmtase,TSOD)、铜锌超氧化物歧化酶(copper/zinc superoxide dismutase,CuZn-SOD)和锰超氧化物歧化酶(manganese superoxide dismutase,Mn-SOD)活力以及一氧化氮(nitric oxide,NO)、丙二醛(malondialdehyde,MDA)含量;荧光显微镜下观察线粒体膜电位;Western blot测定HUVECs细胞Bcl-2/Bax、eNOS蛋白的表达水平。结果与H/R组相比,S1P低、中、高剂量组可明显增加HUVECs细胞缺氧/复氧损伤后细胞存活率;均明显升高T-SOD活力、CuZn-SOD活力、Mn-SOD活力,降低MDA含量,明显升高NO含量及增加eNOS蛋白表达,降低凋亡率,抑制线粒体膜电位下降。结论 S1P能够使H/R损伤的HUVECs细胞凋亡率降低,且呈一定的浓度依赖性。S1P对H/R损伤的HUVECs细胞凋亡的保护作用可能与降低细胞内MDA含量,提高细胞内SOD活力,提升线粒体膜电位,增强抗凋亡蛋白Bcl-2/Bax的表达有关。     

阿魏酸钠预处理对大鼠心肌细胞缺氧／复氧损伤线粒体的延迟保护作用

目的：研究阿魏酸钠（SF）预处理对心肌细胞缺氧／复氧（A／R）损伤的延迟保护作用的机制。方法：采用MTT比色法检测细胞存活率，生化检测细胞LDH活性、MDA含量、SOD活性和GPx活性．Western Blotting法检测SOD、GPx、HSP70的表达、TUNEL法与PI-Annexin V法测定细胞凋亡、流式细胞仪测定线粒体膜电位（△ψm）及ROS生成、分光光度法测定mPTP开放情况等指标，用终浓度为3．36mmol·L-1的SF预处理原代培养的大鼠乳鼠心肌细胞3h，24h后观察其对A／R损伤的保护作用及其ERKl／2抑制剂PDl84352（终浓度为0．5μmol·L-1）与基因转录抑制剂Act D（终浓度为5μmol·L-1）影响。结果：SF预处理能显著提高心肌细胞存活率、降低LDH活性、MDA含量减少；SOD、GPx活性增加，但其蛋白表达量却无明显差异；HSP70表达量显著上凋；ROS生成显著减少、mPTP开放与线粒体膜电位（△ψm）稳定、凋亡细胞比率减少。PDl84352、Act D均能取消SF预处理的上述作用。结论：SF预处理对心肌细胞A／R损伤延迟保护作用的机制可能与ERKl／2激活、上调HSP70蛋白表达、维护SOD、GPx等蛋白正常结构与功能，使得ROS生成减少、mPTP关闭、线粒体膜电位（△ψm）稳定、凋亡细胞减少有关。     

基于PI3K/Akt/mTOR信号通路探讨阿司匹林对缺氧/复氧H9c2细胞凋亡的影响

摘要：目的:探究阿司匹林（aspirin）对缺氧/复氧（H/R） H9c2心肌细胞凋亡的影响及其与磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（PI3K/Akt/m TOR）信号通路的关系。方法:正常培养H9c2心肌细胞16 h,作为对照组（control组）;缺氧、复氧处理H9c2心肌细胞,作为H/R组;培养基中加入aspirin,作为H/R+aspirin组;培养基中加入阻断剂LY294002,作为H/R+aspirin+PI3K/AKT特异阻断剂LY294002组（H/R+aspirin+LY组）;检测细胞活力、细胞凋亡情况及细胞中PI3K、磷酸化PI3K（p-PI3K）、Akt、磷酸化Akt（p-Akt）、磷酸化m TOR（p-mTOR）、半胱氨酸蛋白酶-3（caspase-3）、B淋巴细胞瘤-2（Bcl-2）蛋白表达情况。结果:H/R组H9c2心肌细胞存活率低于Control组,凋亡率高于Control组（P<0.05）; aspirin预处理组细胞存活率高于H/R组,H/R+aspirin组H9c2心肌细胞凋亡率低于H/R组（P<0.05）; H/R+aspirin+LY组细胞存活率低于H/R+aspirin组,细胞凋亡率高于H/R+aspirin组（P<0.05）。H/R组H9c2心肌细胞中p-PI3K、p-Akt、p-mTOR、caspase-3蛋白表达高于Control组,Bcl-2蛋白表达低于Control组（P<0.05）; H/R+aspirin组H9c2心肌细胞中p-PI3K、p-Akt、p-mTOR、Bcl-2蛋白表达高于H/R组,caspase-3蛋白表达低于H/R组（P<0.05）; H/R+aspirin+LY组p-PI3K、p-Akt、p-mTOR、Bcl-2蛋白表达低于H/R+aspirin组,caspase-3蛋白表达高于H/R+aspirin组（P<0.05）。结论:aspirin预处理可减轻H/R诱导的H9c2心肌细胞损伤,显著提高心肌细胞存活率,减少细胞凋亡,其作用机制可能是通过激活PI3K/Akt/m TOR信号通路实现的。     

热休克蛋白90在氯化钴对抗血清-葡萄糖剥夺引起的心肌细胞损伤中的作用

目的观察氯化钴(CoCl2)对血清-葡萄糖剥夺(SGD)诱导的H9c2心肌细胞损伤的影响,探讨热休克蛋白90(HSP90)在其中的作用。方法用SGD的方法处理H9c2心肌细胞,建立缺血性损伤的心肌细胞模型。在SGD过程中同时给予CoCl2处理;在应用SGD和CoCl2之前给予HSP90抑制剂(17-AAG)预处理。处理结束后,检测细胞存活率、HSP90的表达、细胞内活性氧(ROS)以及线粒体膜电位(ΔΨm)。结果 SGD处理可引起H9c2心肌细胞损伤,表现为细胞存活率降低、胞内ROS水平升高及ΔΨm丢失。SGD处理还可降低H9c2心肌细胞内HSP90的表达。在50～100μmol.L-1浓度范围内,CoCl2处理可保护H9c2心肌细胞对抗SGD引起的存活率降低,100μmol.L-1CoCl2还可对抗SGD引起的ROS水平升高和ΔΨm丢失。100μmol.L-1CoCl2可时间依赖性地促进胞内HSP90的表达。在50～200μmol.L-1浓度范围内,CoCl2处理可对抗SGD诱导的HSP90表达下调,其中100μmol.L-1的CoCl2具有最强的拮抗作用。17-AAG通过抑制HSP90的作用可明显减弱CoCl2诱导的上述心肌细胞保护作用。结论 CoCl2可保护H9c2心肌细胞对抗SGD引起的损伤,其机制之一与上调HSP90表达有关。     

小檗碱对棕榈酸诱导大鼠心肌细胞H9c2脂毒性损伤的影响

摘要：目的:探讨小檗碱对棕榈酸（PA）诱导大鼠心肌细胞H9c2脂毒性损伤的影响。方法:在正常培养的H9c2细胞中,采用细胞计数试剂盒（CCK8）检测细胞存活率;采用ELISA试剂盒检测细胞裂解液中氧化还原指标：丙二醛（MDA）、超氧化物歧化酶（SOD）和谷胱甘肽（GSH）;采用免疫印迹法Western blot检测细胞内能量感受器磷酸化AMP依赖的蛋白激酶（AMPK）/AMPK及肝激酶B1（LKB1）、沉默调节蛋白1（SIRT1）和成纤维细胞生长因子-21（FGF-21）的蛋白表达。结果:PA在100μmol·L-1浓度时,处理H9c2细胞24 h以上产生明显细胞毒性,与正常对照组（不含PA）比较,差异有统计学意义（P＜0.05或P＜0.01）。使用5μmol·L-1小檗碱预处理H9c2细胞4 h可以逆转PA对H9c2中MDA、SOD和GSH的影响,同时细胞存活率明显上升,差异有统计学意义（P＜0.05）。同时,在给予小檗碱治疗后,p-AMPK/AMPK、LKB1、SIRT 1和FGF-21蛋白的表达水平亦显著增加（P＜0.05）。但使用FGF21的干扰RNA（siRNA）后,小檗碱激活AMPK的现象几乎被逆转,差异有统计学意义（P＜0.05）。结论:小檗碱可显著改善PA诱导的心肌细胞脂毒性,其机制可能与经典的FGF-21/AMPK信号通路有关。     

羟丁酸钠在大鼠海马脑片缺氧/复氧损伤中的保护作用机制

目的：研究羟丁酸钠（SO）在大鼠海马脑片缺氧/复氧（H/R）损伤中的保护作用,揭示SO在缺血性脑损伤中的保护作用机制。方法：采用大鼠海马脑片H/R损伤模型。设正常对照组,H/R组,SO1、10、100μmol/L组,NCS-382100μmol/L＋SO100μmol/L（NCS-382＋SO）组、NCS-356100μmol/L（NCS-356）组。测定脑片孵育液中乳酸脱氢酶（LDH）释放率,γ-氨基丁酸（GABA）、谷氨酸（Glu）含量;脑片进行TTC染色计算组织损伤百分率;HE染色观察组织病理形态学变化,流式细胞仪测定细胞内钙;酶组织化学法检测一氧化氮合酶（NOS）的表达。结果：SO明显降低H/R海马脑片LDH释放率（P〈0.01）,提高TTC染色的A490值,降低组织损伤百分率（P〈0.01）,升高GABA/Glu比值（P〈0.01）,减轻H/R所致的组织病理损伤。H/R组脑片细胞内钙荧光强度和NOS阳性神经元明显高于正常对照组（P〈0.01）;SO100μmol/L组、NCS-356组细胞内钙荧光强度较H/R组显著减弱（P〈0.01）,NOS阳性神经元的数目明显减少（P〈0.01）。用γ-羟基丁酸（GHB）受体选择性阻断剂NCS-382后再使用SO,细胞内钙荧光强度、NOS阳性神经元的数目均接近H/R组。结论：SO对大鼠海马脑片H/R损伤有明显的保护作用,其机制可能与升高GABA/Glu比值,激动GHB受体抑制细胞内钙的增高及NOS的表达有关。     

麝香保心丸抗心肌细胞缺氧-复氧损伤活性成分筛选

目的：建立原代心肌细胞缺氧-复氧模型,并对麝香保心丸及其20种血中活性成分进行抗缺氧-复氧损伤的活性筛选。方法取新生（1～3 d）SD乳鼠的心脏,建立原代心肌细胞的缺氧-复氧损伤模型,并采用四甲基偶氮唑盐（MTT）比色法进行麝香保心丸及其入血成分的活性筛选。结果麝香保心丸在50μg/ml浓度下具有较好的保护原代心肌细胞缺氧-复氧损伤的作用;人参皂苷Rb1、人参皂苷Rb2、蟾毒灵和麝香酮具有较好的保护原代心肌细胞缺氧-复氧损伤的作用。结论麝香保心丸具有抗心肌细胞缺氧-复氧损伤的作用,人参皂苷Rb1、人参皂苷Rb2、蟾毒灵和麝香酮是其主要的有效成分。该研究为麝香保心丸深入的药效和机制研究奠定了基础。     

果糖二磷酸钠镁对心肌细胞缺氧复氧损伤修复作用的体外研究

目的:体外研究果糖二磷酸钠镁对缺氧/复氧(H/R)心肌细胞损伤的修复作用及其机制。方法:采用原代培养4d的心肌细胞建立H/R损伤模型,分为H/R组和H/R+果糖二磷酸钠镁高、中、低浓度(4.8、2.4、1.2mg·mL-1)组,另取正常细胞设为正常对照组。加入相应药物处理后分别测定各组细胞中乳酸脱氢酶(LDH)、肌酸激酶(CPK)活性及细胞内游离钙浓度([Ca2+]i),并用透射电镜观察细胞超微结构的变化。结果:与H/R组比较,果糖二磷酸钠镁组能显著降低细胞中LDH、CPK、[Ca2+]i水平(P<0.01或P<0.05),减轻细胞超微结构的损伤。结论:果糖二磷酸钠镁对H/R损伤的心肌细胞具有修复作用,其作用可能与降低钙超载有关,且具有浓度依赖性。     

PKC/HSP70通路介导白藜芦醇对心肌细胞缺氧/复氧损伤的保护作用

目的：探讨白藜芦醇（resveratrol,RSVL）对心肌细胞缺氧/复氧损伤（anoxia/reoxygenation injury,ARI）的保护作用及机制。方法：分离、纯化SD乳鼠原代心肌细胞,建立缺氧/复氧损伤模型,采用随机数字量表法分为6组：正常对照（CON）组、ARI组、ARI+不同浓度RSVL（25,50,75 μmol·L^-1）预处理组、ARI+RSVL（75 μmol·L^-1）+PKC抑制剂白屈菜红碱（1 μmol·L^-1）组。倒置相差显微镜观察心肌细胞生长形态,自发搏动频率和节律;Hoechst 33258染色计算细胞凋亡率;比色法测定细胞培养液中LDH、CK漏出量及细胞内Ca²⁺-ATPase活性;荧光分光光度计测定细胞内游离钙离子浓度;Western blot检测心肌细胞PKC、HSP70及Ca²⁺-ATPase蛋白水平。结果：不同浓度RSVL与ARI组相比,心肌细胞折光性好,搏动有力而规则,频率在90~115次/分（P<0.01）;呈剂量依赖性减少细胞凋亡（P<0.01）,降低培养液中LDH和CK漏出量（P<0.05或P<0.01）,提高心肌细胞Ca²⁺-ATPase活性及降低细胞内[Ca²⁺]_i量（P<0.05或P<0.01）;心肌细胞PKC、HSP70及Ca²⁺-ATPase蛋白表达增加（P<0.05或P<0.01）。而RSVL的保护作用可被PKC抑制剂白屈菜红碱所取消（P<0.05或P<0.01）。结论： RSVL可能通过PKC/HSP70通路产生对心肌细胞缺氧/复氧损伤的保护作用。     

升陷汤及单味药材水提物对缺氧/复氧致心肌损伤的保护作用

目的 通过观察升陷汤及单味药材水提物对离体培养的大鼠心肌细胞缺氧/复氧损伤的影响,并对其作用机制进行初步探讨。方法 培养H9C2大鼠心肌细胞,共分成8组：空白对照组,缺氧/复氧组（模型组）,缺氧复氧损伤后药物干预组（升陷汤全方及5个单味药材水提物组）。分别对心肌细胞凋亡率、心肌细胞的活力、细胞内活性氧（ROS）活性、细胞内钙离子浓度（Ca²⁺）等指标进行检测。结果 升陷汤全方及黄芪、知母等药材干预能明显降低细胞凋亡率、细胞内ROS活性和Ca²⁺浓度（P<0.05）,其中,全方的作用最强。与缺氧/复氧组细胞内ROS活性和Ca²⁺浓度增加至空白对照组的2.49倍及1.71倍相比,全方能使细胞内ROS活性和Ca²⁺浓度增加率降至缺氧/复氧组的41.37%和15.20%。结论 升陷汤及单味药材对缺氧/复氧致心肌损伤具有保护作用,该作用的机制可能通过抑制细胞凋亡、降低细胞内ROS以及Ca²⁺的浓度所致。     

双参通冠方药物血清对缺氧/复氧心肌细胞Ca~(2+)-CaM-CaMPKⅡ信号系统的影响

目的考察双参通冠方(SSTG)药物血清对缺氧/复氧心肌细胞Ca2+-CaM-CaMPKⅡ信号系统的影响。方法培养心肌细胞,建立缺糖缺氧/复氧损伤模型。运用血清药理学方法研究SSTG药物血清对缺糖缺氧/复氧损伤心肌的作用。荧光分光光度法测定心肌细胞胞质[Ca2+]i,RT-PCR法测定CaM、CaMPKⅡδmRNA表达。结果正常心肌细胞[Ca2+]i、CaM、CaMPKⅡδmRNA表达很低。缺氧/复氧后[Ca2+]i较正常组增高,CaM、CaMPKⅡδmRNA表达增高(P<0.05),SSTG提取物大鼠灌胃剂量为22.5、45、90 mg.kg-1所取得的药物血清(体积分数为0.1)处理组[Ca2+]i降低,CaM、CaMPKⅡδmRNA表达降低,与空白血清处理组相比差异有统计学意义(P<0.05)。结论缺氧/复氧损伤可导致心肌细胞Ca2+超载,CaM、CaMPKⅡδmRNA表达增高;SSTG药物血清可对抗心肌细胞Ca2+超载,抑制其胞内受体CaM及Ca2+/CaM依赖性蛋白激酶CaMPKⅡδ的活性。     

一氧化氮供体预处理对乳鼠心肌细胞的延迟保护作用及其机制

目的　探讨一氧化氮模拟预处理延迟保护作用的机制。方法　体外培养新生大鼠心肌细胞 ,实验分为 :①阴性对照组 (Normal组 ) ;②SNAP组 :一氧化氮 (nitricoxide ,NO)供体S 亚硝基 N 乙酰青霉胺 (S nitroso N acetyl 1 ,1 penicil lamine ,SNAP ,5 0 0 μmol·L-1 )与心肌细胞共育 2 4h ;③Che +SNAP组 :蛋白激酶C拮抗剂白屈菜季铵碱 (chelerythrinechlo ride ,Che ,1 0 μmol·L-1 )处理心肌细胞 30min后 ,加入SNAP与心肌细胞共育 2 4h ;④PDTC +SNAP组 :核因子κB(NF κB)特异性阻断剂PDTC(1 0 0 μmol·L-1 )处理心肌细胞 30min后 ,加入SNAP与心肌细胞共育 2 4h ;⑤缺氧复氧损伤组 (H/R组 ) :心肌细胞缺氧 6h ,复氧 3h。②～④组部分取细胞爬片以免疫组织化学法观察SNAP对热休克蛋白 70 (HSP70 )表达的影响 ;其余细胞经历H/R损伤后 ,检测心肌细胞存活率及乳酸脱氢酶 (LDH)活性。结果　在正常心肌细胞免疫组织化学法未检测到HSP70的表达 ,心肌细胞经过H/R损伤后 ,可检测到少量HSP70阳性细胞 ,其阳性染色A值为 94 6± 9 1 ,心肌细胞培养上清LDH活性为 (2 1 90 5± 1 5 1 7)U·L-1 ,细胞存活率为 5 1 7%± 4 6 % ,细胞损伤较正常组加重 (P <0 0 1 ) ;SNAP处理细胞后 2 4h ,HSP70阳性细胞数增多 ,     

牛磺酸抗脂质过氧化作用与调节Ca~（2＋）作用

在培养心肌细胞缺氧－再给氧模型上，发现牛磺酸（２０ｍｍｏｌ·Ｌ－１，终浓度）能显著降低细胞内脂质过氧化物（ＬＰＯ）荧光强度；剂量依赖性地提高心肌细胞超氧化物歧化酶（ＳＯＤ）活性；以荧光比率法（荧光探针为Ｉｎｄｏ－１－ＡＭ）在粘附式细胞仪（ＡＣＡＳ５７０）上测定细胞内游离Ｃａ２＋荧光比率，结果显示缺氧及再给氧后细胞内Ｃａ２＋荧光比率明显升高，２０ｍｍｏｌ·Ｌ－１牛磺酸能显著减少Ｃａ２＋荧光比率；分别以２０ｍｍｏｌ·Ｌ－１、０．４ｍｍｏｌ·Ｌ－１Ｃａ２＋及０．１ｍｍｏｌ·Ｌ－１维拉帕米处理细胞，牛磺酸能降低高Ｃａ２＋引起的细胞搏动加快；而提高低Ｃａ２＋及维拉帕米处理后的细胞搏动。提示牛磺酸对培养心肌细胞再给氧损伤有保护作用，其机理与其提高心肌细胞ＳＯＤ活性、降低细胞内游离Ｃａ２＋浓度及对细胞Ｃａ２＋双向调节作用有关。     

硫氢化钠后处理对缺氧/复氧心肌细胞线粒体渗透性转换的影响

目的观察硫化氢(hydrogen sulfide,H2S)供体——硫氢化钠(sodium hydrosulfide,NaHS)后处理对培养的新生大鼠心肌细胞缺氧/复氧损伤中线粒体渗透性转换(mitochon-drial permeable transition,MPT)影响。方法将原代培养大鼠乳鼠心肌细胞随机分为缺氧/复氧组(H/R)和硫氢化钠后处理组(H/R+NaHS)。H/R组为缺氧2h后复氧2h。H/R+NaHS组为缺氧2h后,给予1×10-6mol·L-1NaHS后处理0.5h,再复氧1.5h。两组分别于缺氧前、缺氧2h、复氧0.5h、1和2h,应用噻唑蓝法检测细胞活性,荧光指示剂孵育激光共聚焦显微镜下检测线粒体渗透性转换孔(MPTP)的开放程度和线粒体膜电位(Δψm)的变化。结果缺氧2h内细胞活力明显下降,MPTP开放,Δψm下降。在复氧初期两组细胞损伤会进一步加剧,但H/R+NaHS组在NaHS后处理后,细胞活性(45%±3.7%)下降幅度明显小于H/R组(36.5%±1.8%,P<0.05);MPTP荧光强度(52%±5.7%)和Δψm荧光强度(47.2%±5.1%)也明显高于H/R组(40%±5.4%,33.4%±5.0%,P<0.05)。到复氧2h时,两组细胞损伤均不再加重,但H/R+NaHS组各项指标仍然明显好于H/R组(P<0.05)。结论硫氢化钠后处理可以有效调控缺氧/复氧心肌细胞线粒体渗透性转换,阻止MPTP开放,抑制Δψm下降,从而减轻缺氧/复氧造成的心肌细胞损伤。