小鼠过氧化物酶体增殖体激活受体γ2重组逆转录病毒载体在NIH3T3细胞中的表达

目的　通过应用重组逆转录病毒介导小鼠过氧化物酶体增殖体激活受体γ2(mPPARγ2 )基因整合入NIH3T3细胞基因组中并进行表达。方法　从经测序证实含正确序列mPPARγ2的重组质粒pcDNA3/mPPARγ2 中 ,双酶切下约 1.5Kb的mPPARγ2 全长cDNA编码序列 ,亚克隆入逆转录病毒载体pGCEN中构建重组逆转录病毒载体pGCEN/mPPARγ2 。pGCEN/mPPARγ2 及pGCEN经LipofectAMINE感染病毒包装细胞系PA317细胞 ,通过筛选PA317细胞G418抗性克隆 ,收集病毒上清 ,然后用其感染靶细胞NIH3T3细胞 ,用免疫荧光染色及Western印迹方法鉴定mPPARγ2 在NIH3T3细胞中的表达情况。结果　构建了含mPPARγ2 全长cDNA重组逆转录病毒载体 ,获得了滴度分别为 5×10 4 CFU/ml和 6× 10 5CFU/ml的pGCEN/mPPARγ2 及pGCEN的病毒上清。经鉴定pGCEN/mPPARγ2 能有效地感染靶细胞NIH3T3细胞并表达mPPARγ2 。结论　本研究结果为在体外建立脂肪细胞分化模型及为进一步研究PPARγ2 在诱导脂肪细胞分化中的分子机制奠定了基础     

过氧化物酶体增殖体激活受体γ2表达诱导NIH3T3细胞向脂肪细胞分化

目的通过应用重组逆转录病毒介导小鼠过氧化物酶体增殖体激活受体γ2(mPPARγ2)基因整合入NIH3T3细胞基因组中进行表达,并研究其功能.方法从经测序证实含正确序列mPPARγ2的重组质粒pcDNA3/mPPARγ2中,双酶切下mPPARγ2全长cDNA序列,亚克隆入逆转录病毒载体pGCEN中构建重组逆转录病毒载体pGCEN/mPPARγ2.对pGCEN/mPPARγ2及pGCEN进行包装及G418抗性筛选,收集病毒上清,感染靶细胞NIH3T3细胞,进行G418抗性筛选并进行扩增.在含过氧化物酶体增殖体激活受体γ(PPARγ)激活物5,8,11,14-二十碳四烯酸等分化介质中,诱导PPARγ2表达增加,使NIH3T3细胞向脂肪细胞分化.结果构建了含mPPARγ2全长cDNA重组逆转录病毒载体,获得了滴度分别为5×104CFU/ml和6×105CFU/ml的pGCEN/mPPARγ2及pGCEN的病毒上清.经油红O染色证实分化10d的表达mPPARγ2的NIH3T3细胞中明显积聚了较多的中性脂肪,其细胞形态也与体内成熟脂肪细胞相似.结论本研究在体外建立了由PPARγ2诱导NIH3T3细胞向脂肪细胞分化模型,为进一步研究脂肪细胞分化的分子机制奠定了基础.     

小鼠过氧化物酶体增殖体激活受体γ_2基因克隆及其真核细胞表达产物鉴定

目的　克隆小鼠过氧化物酶体增殖体激活受体 (PPAR)γ2 基因并经真核细胞短暂表达系统表达 ,然后对表达产物进行鉴定。方法　采用RT PCR方法从中国昆明小鼠附睾脂肪垫总RNA中扩增出PPARγ2 cDNA全长基因 ,亚克隆入载体pcDNA3中 ,形成重组载体pcDNA3/小鼠PPARγ2 ,对其进行测序后 ,在真核细胞COS 7中进行短暂表达 ,并用免疫荧光染色法及Western印迹法对其表达产物进行鉴定。结果　克隆出中国昆明小鼠PPARγ2 基因 ,其cDNA序列与Genbank的小鼠PPARγ2 基因序列基本相同 ,仅在 383位氨基酸由Asn(AAC)变成了Ser(AGC)。经鉴定小鼠PPARγ2 基因有效地在真核细胞COS 7中获得了表达。结论　本研究为进一步研究PPARγ2 的功能提供了实验基础     

小鼠过氧化物酶体增殖体激活受体γ2基因克隆及其真核细胞表达产物鉴定

目的 克隆小鼠过氧化物酶体增殖体激活受体（PPAR）γ2基因并经真核细胞短暂表达系统表达,然后对表达产物进行鉴定。方法 采用RT－PCR方法从中国昆明小鼠附睾脂肪垫总RNA中扩增出PPARγ2cDNA全长基因。亚克隆入载体pcDNA3中,形成重组载体pcDNA3/小鼠PPARγ2,对其进行测序后,在真核细胞COS－7中进行短暂表达,并用免疫荧光染色法及Western印迹法对其表达产物进行鉴定。结果 克隆出中国昆明小鼠PPARγ2基因,其cDNA序列与Western印迹法对其表达产物进行鉴定。结果 克隆出中国昆明小鼠PPARγ2基因,其cDNA序列与Genbank的小鼠PPARγ2基因序列基本相同,仅在383位氨基酸由Asn(AAC)变成了Ser(AGC)。经鉴定小鼠PPARγ2基因有效地在真核细胞COS－7中获得了表达。结论 本研究为进一步研究PPARγ2的功能提供了实验基础。     

过氧化物酶体增殖体激活受体γ与肾脏疾病

过氧化物酶体增殖体激活受体γ(PPARγ)为核受体家族成员,是一配体依赖性核转录因子,参与体内脂肪细胞分化,能量代谢、细胞周期调控、免疫调节和炎症反应等多种生理、病理过程。鉴于PPARγ在抑制细胞增殖、免疫调节及抑制炎症反应中的重要作用, 近年研究提示其有望成为肾脏疾病新的治疗靶点。本文就PPARγ在肾脏疾病中作用的研究进展进行综述。     

过氧化物酶体增殖物激活受体γ与炎症性肠病

炎症性肠病(Inflammatory bowel disease,IBD),包括克罗恩病(Crohn's disease,CD)和溃疡性结肠炎(ulcerative colitis,UC),是病因和发病机制尚不清楚的胃肠道慢性炎症性疾病.现在认为由多种因素(如遗传、环境,尤其是肠道菌群)之间相互作用,遗传易感性宿主通过异常的黏膜免疫反应引起的肠道炎症.     

过氧化物酶体增殖物激活受体γ激动剂与动脉粥样硬化

1过氧化物酶体增殖物激活受体γ(peroxisomeproliferators-activated receptor-gamma,PPARγ)与PPARγ激动剂PPARγ属于核受体超家族的一员;由于启动子和拼接方式不同,PPARγ可以分为PPARγ1、PPARγ2、PPARγ3三种亚型,功能涉及脂肪酸代谢、脂肪细胞分化以及抑制巨噬细胞激活。PPARγ与配体结合而被激活后,与视黄醛X受体(retinoidXreceptor,RXR)结合形成异源二聚体,转移到细胞核,再结合于特定DNA序列-PPARγ目标基因启动子应答元件(peroxisome proliferators responsiveelement,PPRE),启动目标基因———糖、脂代谢相…     

过氧化物酶体增殖激活受体与动脉粥样硬化

过氧化物酶体增殖激活受体(PPAR s)是一类由配体激活的核转录因子,属核受体超家族成员之一。越来越多的研究认为PPAR s可通过调节全身脂质代谢,改善胰岛素抵抗,抑制巨噬泡沫细胞在血管壁的聚集及抑制炎症反应来发挥抗动脉粥样硬化的作用。现对其在动脉粥样硬化发生发展中的作用作一综述。     

过氧化物酶体增殖物激活受体γ在肝纤维化中作用

肝纤维化是各种慢性肝疾病向肝硬化发展的中间过程,是所有慢性肝疾病的共同病理基础[1,2],而肝损伤(肝实质炎症、坏死)激活肝星状细胞(hepatic stellate cell,HSC)引起大量细胞外基质(extracellular matrix,ECM)沉积,是肝纤维化发生机制的中心环节[3]。     

过氧化物酶体增殖物激活受体γ抗动脉粥样硬化研究进展

<正>过氧化物酶体增殖物激活受体(peroxisome proliferator-activated receptors,PPARs)属于核受体家族成员,有3种亚型即PPARα、PPARβ/δ和PPARγ,其中以PPARγ与动脉粥样硬化(atherosclerosis,AS)的关系最为密切。最近研究表明,PPARγ在AS和炎症细胞中均有表达,其通过调节糖脂代     

过氧化物酶体增殖物激活受体γ与肝纤维化关系的研究进展

过氧化物酶体增殖物激活受体（peroxisome proliferator activated receptors，PPARs）属Ⅱ型核激素受体超家族成员，1990年首先由Issemann等从小鼠肝脏克隆得到，因其被过氧化物酶体增殖物活化后能诱导肝脏过氧化物酶体增殖而得名。迄今已发现PPARα、β和γ3种亚型，β亚型又称δ亚型；它们在结构、功能及组织分布上均有差异。PPARs具有多种生物学效应，已知PPARs与许多慢性疾病如肥胖、糖尿病、动脉硬化和癌症等的发生有关。PPARs也是重要的肝脏代谢调节分子，肝星状细胞（HSC）表达PPARγ。本文就PPARγ与肝纤维化关系的研究进展作一综述。     

过氧化物酶体增殖物激活受体-γ在炎症性肠病中的表达及意义

目的 观察过氧化物酶体增殖物激活受体-γ(PPAR-γ)在炎症性肠病(IBD)中的表达,探讨其可能的意义.方法 采用免疫组织化学方法检测28例克罗恩病(CD)患者、38例溃疡性结肠炎(UC)患者及30例健康对照肠道组织中PPAR-γ蛋白的表达,并进一步分析PPAR-γ蛋白与IBD临床特征的关系.结果 PPAR-γ在UC患者中表达阳性率为34.21% (13/38),明显低于正常对照63.33%(19/30) 及CD患者60.71%(17/28)(P<0.05);PPAR-γ蛋白表达与UC疾病活动性明显相关(P<0.05),与UC严重程度、病变部位及CD临床特征无明显相关(P>0.05).结论 PPAR-γ蛋白在UC肠道组织中表达降低,且与疾病活动性明显相关.提示PPAR-γ可能在UC发生、发展中发挥重要作用.     

缺氧对过氧化物酶体增殖物激活受体α表达的影响

目的 研究不同程度缺氧条件下，肺癌A549细胞内过氧化物酶体增殖物激活受体α（PPARα）和缺氧诱导因子1α（HIF-1α）的表达状况，及反义封闭HIF-1α后，对PPARα受体的影响，以了解PPARα和HIF-1α的相关性。方法 首先将A549细胞分为4组：正常对照组（A组）、缺氧24小时组（B组）、缺氧48小时组（C组）、缺氧72小时组（D组）。观察不同缺氧时间对PPARα及 HIF-1α蛋白和mRNA表达水平的影响。为观察HIF-1α对PPARα表达状况的影响，再设计4组：对照组2（E组），HIF-1α反义寡核苷酸组（F组），HIF-1α正义寡核苷酸组（G组），HIF-1α错义寡核苷酸组（H组）。结果 正常对照组，PPARα和HIF-1α蛋白及mRNA均有少量表达；随着缺氧时间的延长，两的表达水平逐渐升高。在缺氧24小时，两mRNA和蛋白开始较高，48小时明显增高，至72小时达到高峰。反义封闭HIF-1α后，PPARα蛋白及mRNA的表达水平明显下降。结论 PPARα及HIF—1α的表达水平随肿瘤缺氧信号的加强而增加，且PPARα受HIF-1α的调控。     

过氧化物酶体增殖物激活受体α在非酒精性脂肪性肝炎发病机制中的作用

过氧化物酶体增殖物激活受体α（PPARα）通过对肝内脂肪酸氧化和炎症反应相关基因表达的调控，在肝脏脂类代谢和炎症反应中发挥重要作用，研究PPARα在非酒精性脂肪性肝炎（NASH）大鼠肝组织中的表达情况，旨在探讨PPARα在NASH发病机制中的作用，为有效防治本病提供新的思路。     

过氧化物酶体增殖物激活受体通路与心肌纤维化

多项研究证实,心力衰竭、心肌梗死后通过一系列神经-内分泌途径激活导致左室重塑,发生心脏不良事件。心肌间质重塑在左室重塑过程中发挥着重要的作用。心肌间质纤维化的直接后果是舒张功能减退,最终出现收缩功能障碍,发生心力衰竭;同时与心律失常、心源性猝死的发生密切相关。目前对于心肌纤维化发生、发展机制的认识还处于探索阶段,临床工作中缺乏规范的诊断、评价方法,缺乏有效、系统的药物治疗和干预措施。近年来的研究发现,过氧化物酶体增殖物激活受体(PPARs)通路与心肌纤维化的发生、发展有着密切的关系。因此,干预PPARs通路,可能…     

Potential role for peroxisome proliferator activated receptor (PPAR) in preventing colon cancer

BACKGROUND: Peroxisome proliferator activated receptors (PPARs) are nuclear hormone receptors involved in genetic control of many cellular processes. PPAR and PPAR have been implicated in colonic malignancy. Here we provide three lines of evidence suggesting an inhibitory role for PPAR in colorectal cancer development. METHODS: Levels of PPAR mRNA and protein in human colorectal cancers were compared with matched non-malignant mucosa using RNAse protection and western blotting. APC(Min)/+ mice were randomised to receive the PPAR activator methylclofenapate 25 mg/kg or vehicle for up to 16 weeks, and small and large intestinal polyps were quantified by image analysis. The effect of methylclofenapate on serum stimulated mitogenesis (thymidine incorporation), linear cell growth, and annexin V and propidium iodide staining were assessed in human colonic epithelial cells. RESULTS: PPAR (mRNA and protein) expression levels were significantly depressed in colorectal cancer compared with matched non-malignant tissue. Methylclofenapate reduced polyp area in the small intestine from 18.7 mm(2) (median (interquartile range 11.1, 26.8)) to 9.90 (4.88, 13.21) mm(2) (p=0.003) and in the colon from 9.15 (6.31, 10.5) mm(2) to 3.71 (2.71, 5.99) mm(2) (p=0.009). Methylclofenapate significantly reduced thymidine incorporation and linear cell growth with no effect on annexin V or propidium iodide staining. CONCLUSIONS: PPAR may inhibit colorectal tumour progression, possibly via inhibition of proliferation, and may be an important therapeutic target.     

过氧化物酶体增殖物激活受体γ基因多态性与老年男性骨质疏松的相关性

目的 探讨过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)基因第6外显子C161→T单核苷酸多态性与老年男性骨质疏松的相关性.方法 采用聚合酶链反应限制性片段长度多态性分析法检测老年男性骨质疏松组、老年男性非骨质疏松组(对照组)的基因频率分布;采用双能X线吸收测定法检测老年男性骨质疏松组及对照组腰椎和股骨上端(大转子、股骨颈)的骨密度;酶联免疫法(ELISA)检测血清骨钙素.结果 PPARγ基因第6外显子C161→T的多态性,有CC、CT和TT 3种基因型,老年男性骨质疏松组携带T等位基因的频率高于对照组,CT+TT分别为40.4%和25.7%(P＜0.05);与对照组比较,老年男性骨质疏松组骨钙素水平、骨密度较低;与CC基因型比较,携带T等位基因型的骨密度更低.结论 PPAR7基因多态性与老年男性骨质疏松有关,T等位基因是老年男性骨质疏松的易感因素.PPARγ可能是骨质疏松的一个候选基因.     

小鼠过氧化物酶体增殖物激活受体γ1高表达对游离脂肪酸介导的β细胞损害的保护作用

目的观察小鼠过氧化物酶体增殖物激活受体γ1(PPARγ1)基因高表达对游离脂肪酸(FFA)介导的胰岛βTC3细胞损伤的影响。方法克隆构建重组载体pcDNA3.1/PPARγ1,并在βTC3细胞中进行稳定表达,用半定量RTPCR对其表达进行鉴定。之后,采用四唑盐(MTT)比色试验比较细胞暴露于较高水平FFA48h后的细胞活力。结果克隆出中国昆明小鼠PPARγ1全长基因,其cDNA序列与Genbank的PPARγ1基因序列基本相同,仅编码第421位天冬酰胺的密码子由AAU变成了AAC。经鉴定PPARγ1基因有效地在βTC3细胞中获得了表达。野生型βTC3细胞暴露于较高水平FFA48h后细胞活力下降(P<0.01),且FFA浓度越高细胞活力下降越明显(r=-0.962,P<0.01);而PPARγ1高表达βTC3细胞的细胞活力无明显改变(P>0.05)。结论PPARγ1高表达可保护胰岛βTC3细胞免于FFA介导的损伤。