Hsp22保护SCA3/MJD转基因果蝇神经的机制

目的:探索Hsp22保护SCA3/MJD转基因果蝇神经的机制.方法:利用GAL4-UAS系统,使Hsp22在SCA3/MJD转基因果蝇模型的神经系统中表达.观察果蝇的羽化率,Western blot检查线粒体复合物Ⅰ亚基NDUFS3的蛋白水平.结果:Hsp22诱导不能羽化的elav-GAL4/UAS系统启动的SCA3/MJD转基因果蝇部分羽化,线粒体复合物Ⅰ亚基NDUFS3蛋白表达升高.结论:Hsp22可能通过改善线粒体功能对SCA3/MJD转基因果蝇神经起保护作用.     

维生素K2对SCA3/MJD转基因果蝇的神经保护作用研究

目的：探讨维生素K2对SCA3/MJD的神经保护作用.方法：构建Gmr-GAL4/UAS系统和Nrv2-GAL4/UAS系统两种不同表达部位的SCA3/MJD转基因果蝇模型.并分别用1.00,0.10和0.01 mM的维生素K2干预.结果：0.10 mM的维生素K2明显抑制了SCA3/MJD转基因果蝇眼睛视网膜光感受神经元变性,降低果蝇翅膀异常率,改善果蝇运动能力,0.01 mM的维生素K2作用较0.10 mM的弱,1.00 mM的维生素K2反而加重SCA3/MJD转基因果蝇眼睛视网膜光感受神经元变性,增加果蝇翅膀异常率,降低果蝇运动能力.结论：维生素K2对SCA3/MJD转基因果蝇的神经保护作用与维生素K2剂量有关,过低作用弱,而过高损伤神经元.     

维生素B3对PINK1B9突变转基因果蝇模型的保护作用研究

目的 探讨维生素B3对PINK1 B9突变转基因果蝇的保护作用及其可能机制.方法 选用TH-Gal4/UAS系统的PD转基因果蝇模型,按处理方式分为正常对照组、PD转基因果蝇模型组、PD转基因果蝇模型+维生素B3干预组,PD转基因果蝇模型用GAPDH2 RNAi基因干预+维生素B3干预组,进行果蝇形态学、ATP水平、果蝇的mRNA水平和蛋白印记检测.结果 适当浓度的维生素B3能部分挽救PINK1B9果蝇的飞行能力和降低翅膀异常率.并且上调了GAPDH和NDUFS3蛋白的表达,增加ATP生成的相对水平.再用GAPDH2 RNAi干预PINK1B9转基因果蝇后GAPDH和NDUFS3蛋白表达相应下降.结论 维生素B3可能通过上调GAPDH和NDUFS3水平发挥调控糖酵解和氧化磷酸化起到保护作用.     

线粒体动力相关蛋白1与阿尔茨海默病

线粒体动力学是指线粒体通过分裂和融合维持线粒体网络的动态平衡并为细胞提供能量。在各种因素影响下,线粒体极易发生损伤,尤其是分裂异常导致其功能障碍与神经退行性疾病发生发展密切相关,而动力相关蛋白1(dynamin-related protein1,Drp1)是介导线粒体分裂的最关键蛋白。研究表明,Drp1在阿尔茨海默病(Aizheimer’s disease,AD)中表达增加介导的线粒体碎片化与AD病理相互影响,加速了疾病进程。本文通过对近几年关于Drp1蛋白结构、活性调控及其与AD相关的实验结论分析综合,为进一步明确Drp1与线粒体分裂和AD病理的关系、开发新的靶向线粒体动力学蛋白相关药物提供借鉴。     

研究发现线粒体分裂新机制和帕金森病治疗新靶点

3月24日,美国加州大学洛杉矶分校神经内科与分子药理学系和加州纳米系统研究所郭明教授团队发表最新研究,发现人类基因 CLUH及其果蝇同源基因 clueless能够通过调控负责线粒体分裂的核心因子Drp1,来有效抑制PINK1和parkin缺失造成的线粒体和组织损伤。因此, CLUH同样有很...     

Sirt1在缺氧条件下对心肌细胞线粒体融合与分裂中的作用

目的 探讨缺氧条件下线粒体动态学变化及Sirt1在其中的作用.方法 ①收集2014年于新桥医院心血管外科行手术治疗的先心病患儿29例,其中非紫绀型先心病14例,紫绀型先心病15例,取术中所切除的右室流出道心肌组织为心肌标本,Western blot检测促线粒体分裂蛋白Drp1与Fis1表达情况.②将H9c2心肌细胞置入缺氧培养箱(94％N2,5％ CO2,1％ O2)中进行培养,检测缺氧0、2、4、8、12 h后促线粒体分裂蛋白Drp1与Fis1的表达水平.③将线粒体靶向质粒分别同空载质粒、Sirt1过表达质粒和Sirt1干扰质粒共转染H9c2细胞,常氧或缺氧培养箱中培养12 h后,激光共聚焦显微镜下观察线粒体融合、分裂情况;④运用腺病毒Ad-Sirt1和慢病毒Lv-Sh-Sirt1分别在H9c2细胞中过表达或干扰Sirt1后,将细胞置于缺氧培养箱中培养12 h,检测Drp1与Fis1表达水平;⑤分别转染空载质粒、Sirt1过表达质粒和Sirt1干扰质粒至H9c2细胞后,缺氧培养12 h,LDH试剂盒检测细胞毒性.结果 ①同非紫绀组相比,紫绀组心肌中Drp1与Fis1表达显著增高,Drp1相对灰度值:[(0.47±0.11)vs(0.76±0.12)、Fis1相对灰度值(0.53 ±0.02)vs (0.83 ±0.03),P＜0.05];②细胞水平研究结果显示Drp1与Fis1的蛋白表达随缺氧的时间的延长呈递增趋势;③激光共聚焦结果表明,Sirt1过表达后能够一定程度地缓解缺氧诱导的线粒体分裂(P＜0.05),而当Sirt1受到干扰后,缺氧所诱导的线粒体分裂水平明显提高(P＜0.05);④在缺氧条件下,过表达Sirt1能够抑制Drp1与Fis1蛋白表达水平(P＜0.05),而Sirt1被抑制后,Drp1与Fis1蛋白表达水平增加(对照组,过表达组,低表达组Drp1相对灰度值依次为[(0.47 ±0.02)vs(0.36±0.02) vs (0.78 ±0.04);Fis1相对灰度值依次为(0.64±0.02) vs (0.42±0.02) vs (0.80±0.04),P＜0.05];⑤Sirt1过表达能够降低缺氧刺激后H9c2心肌细胞的死亡率.结论 Sirt1可能通过调控促线粒体分裂蛋白Drp1与Fis1表达水平促进心肌细胞在缺氧条件下的适应.     

基于Drp1-Ser637磷酸化探讨补阴牵正方对PD小鼠脑线粒体的影响

目的通过帕金森病(PD)小鼠脑动力相关蛋白1(Drp1)和其磷酸化位点丝氨酸637(Ser637)表达的变化及对脑线粒体的影响探讨补阴牵正方防治PD的可能机制。方法选用C57BL/6小鼠72只,随机分为正常组、模型组、补阴牵正方组、美多芭组,每组18只。除正常组外,其余3组小鼠腹腔注射1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶(MPTP)建立PD模型,补阴牵正方组灌胃补阴牵正方水煎剂,每天灌胃2次,连续28 d,美多芭组腹腔注射美多芭,隔天1次,共28 d。爬杆法、抓握法观察小鼠行为学;免疫荧光组化法观察中脑黑质酪氨酸羟化酶(TH)阳性神经元数目;荧光素酶法测定脑线粒体三磷酸腺苷(ATP);JC-1法检测脑线粒体膜电位;蛋白印迹法(Western blot)检测脑蛋白Drp1及其磷酸化蛋白Drp1-Ser637表达。结果相比正常组,模型组小鼠爬杆时间延长(P0.01),抓握力度减弱(P0.01),黑质TH阳性神经元数目减少(P0.01),脑线粒体膜电位及ATP水平降低(P0.01),脑Drp1蛋白表达增加(P0.01),Drp1-Ser637磷酸化蛋白表达降低(P0.01)。与模型组相比,补阴牵正方组小鼠在第14天爬杆时间缩短、握力明显增加(P0.05),黑质TH数目明显增加(P0.05),Drp1蛋白表达减少(P0.01),Drp1-Ser637磷酸化蛋白表达增加(P0.05),脑线粒体膜电位及ATP水平显著升高(P0.01);而美多芭组除在第14天行为学较模型组有明显改善外(P0.05),其余指标均无统计学差异;补阴牵正方组与美多芭组比较其黑质TH数目、ATP水平及膜电位均有差异(P0.05,P0.01),Drp1-Ser637磷酸化蛋白表达也显著增加(P0.01)。结论补阴牵正方可能通过下调维持线粒体动态平衡的分裂蛋白Drp1、上调Drp1-Ser637磷酸化位点的表达改善PD小鼠脑线粒体功能,从而保护中脑黑质多巴胺神经元达到防治PD的作用。     

鹰嘴豆芽素A对Aβ果蝇模型阿尔茨海默病的寿命影响及机制初探

目的:观察鹰嘴豆芽素对转基因果蝇阿尔茨海默病(AD)模型寿命的影响。方法:采用Gal4/USA系统建立Aβ果蝇模型;连续给药后进行行为学实验,观察鹰嘴豆芽素对AD果蝇寿命的影响。实验分为对照组、模型组、治疗组和抑制剂组。通过寿命实验观察鹰嘴豆芽素A对阿尔茨海默症果蝇寿命的影响。结果:与对照组比较,模型组果蝇寿命明显减少;与模型组相比,鹰嘴豆芽素A治疗组能明显提高果蝇寿命;与治疗组相比,抑制剂组能显著降低果蝇寿命。结论:鹰嘴豆芽素A对AD果蝇模型寿命具有保护作用,其作用机制可能与其激活eNOS表达有关。     

MK-801对转Aβ42基因果蝇阿尔茨海默病模型的神经保护作用

目的:探讨N-甲基-D-天冬氨酸(NMDA)受体拮抗剂MK-801拮抗阿尔茨海默病(AD)果蝇模型中Aβ42诱导的神经毒作用。方法:建立转Aβ42基因果蝇AD模型,用NMDA受体拮抗剂MK-801分别干预正常对照果蝇和转Aβ42基因AD模型果蝇,在整体动物水平上进行果蝇行为学检测,分别检测各组果蝇的嗅觉短期记忆能力、攀爬能力和平均寿命。结果:与Aβ42转基因组果蝇相比,Aβ42转基因果蝇喂食MK-801组的学习记忆能力、攀爬能力、平均寿命均有显著改善(P<0.05),正常对照组和正常对照 MK801组的行为学检测无统计学差异。结论:在转Aβ42基因AD果蝇模型中,NMDA受体拮抗剂MK-801的干预有明显的神经保护作用,能减轻Aβ42诱导的神经毒作用。     

不同月龄APP/PS1双转基因AD小鼠海马神经元线粒体的动态变化

目的:检测不同月龄APP/PS1双转基因阿尔茨海默病(Alzheimer's disease,AD)模型小鼠海马神经元中线粒体自噬的动态变化,并探讨其意义.方法:选取20只雄性APP/PS1双转基因AD小鼠为研究对象,分为3月龄组、6月龄组、9月龄组和12月龄组,以C57小鼠为对照组.获取海马组织,通过电镜观察海马区神经元中线粒体的形态变化,用Western blot检测自噬相关蛋白LC3和P62的表达水平;线粒体自噬相关蛋白PINK1、Parkin和Miro1的表达水平;线粒体外膜蛋白Tom20的表达水平.结果:电镜观察结果显示:随着月龄增大,APP/PS1双转基因AD小鼠海马区神经元中线粒体损伤的病理变化呈逐渐加重的过程,即线粒体明显水肿、透明,嵴排列不规则,断裂,甚至消失.Western blot结果显示,与野生小鼠组比较,LC3、P62、PINK1和Parkin蛋白表达水平在6月龄组、9月龄组和12月龄组小鼠中明显增高(P＜0.05),而Miro1蛋白却明显降低(P＜0.05),Tom20的表达水平无明显差异(P＞0.05).结论:随着APP/PS1双转基因AD小鼠月龄的增加,其海马区神经元线粒体病理改变呈动态,线粒体自噬呈动态增强但伴随线粒体清除障碍.     

Exon Deletions of Parkin Gene in Patients with Parkinson Disease

Mutations in the parkin gene have recently been identified in familial and isolated patients with early-onset Parkinson disease (PD) and that subregions between exon 2 and 4 of the parkin gene are hot spots of deletive mutations. To study the distribution of deletions in the parkin gene among variant subset patients with PD in China, and to explore the role of parkin gene in the pathogenesis of PD, 63 patients were divided into early onset and later onset groups. Exons 1-12 were amplified by PCR, templated by the genomic DNA of patients, and then the deletion distribution detected by agarose electrophoresis. Four patients were found to be carrier of exon deletions in 63 patients with PD. The location of the deletion was on exon 2 ( 1 case), exon 3 (2 cases) and exon 4 (1 case). All patients were belong to the group of early onset PD. The results showed that parkin gene deletion on exon 2, exon 3 and exon 4 found in Chinese population contributes partly to early onset PD.     

早发性和迟发性帕金森病患者parkin基因的检测

目的观察早发性帕金森病(EOP)和迟发性帕金森病(LOP)患者中parkin基因的突变情况.方法EOP17例,LOP27例.抽取患者外周血后提取DNA,PCR扩增parkin基因Exon3、4、5、7,琼脂糖凝胶电泳鉴定外显子缺失突变,单链构象多态性检测点突变.结果17例EOP中存在Exon3和Exon5联合缺失1例,27例LOP中存在Exon5缺失1例.单链构象多态性未发现单链泳动异常.4例有家族史的患者中存在parkin基因突变1例(25%),40例散发患者中存在parkin突变1例(2.5%).结论无论是EOP还是LOP患者中均可检测到parkin基因突变.     

复合杂合parkin基因突变家族的不同表型

背景：Parkin基因（PRKN）突变可导致常染色体隐性遗传性早发帕金森病（EOPD）。目的：探讨EOPD白人家族PRKN突变的表现和基因型-表型关系。设计：对EOPD家族的3代20例成员进行基因分析，该家族有4例患者。应用直接基因组DNA测序、半定量聚合酶链反应、实时定量聚合酶链反应以及逆转录酶聚合酶链反应分析以确定PRKN突变。结果：4例早发患者（年龄30—38岁）被确定有PRKN复合杂合突变（T240M和EX5_6缺失），虽然PRKN的杂合T240M和纯合EX5_6缺失突变已有描述，但是据悉，本文为上述复合杂合突变的首次报道。患者的表型为典型常染色体隐性遗传性EOPD的表现，其特征是对左旋多巴治疗有效、相对缓慢的进展和运动障碍。所有杂合突变的基因携带者（T240M或EX5_6缺失）和1例56岁的复合杂合突变女性携带者（T240M和EX5_6缺失）无任何神经系统症状。结论：研究发现，PRKN基因复合杂合突变（T240M和EX5_6缺失）导致一个大的白人家族中4例成员发生常染色体隐性遗传性EOPD。另外1例成员具有相同的突变，比4例患者的平均发病年龄大10岁，并且无本病的临床表现。不完全的外显率对遗传咨询具有暗示作用，并且提示复杂的基因一环境交互作用在PRKN相关EOPD的发病机制中发挥作用。     

Point mutation in the parkin gene on patients with Parkinson’s disease

Summary To investigate the distribution of possible novel mutations from parkin gene in variant subset of patients with Parkinson’s disease (PD) in China and explore whether parkin gene plays an important role in the pathogenesis of PD, 70 patients were divided into early-onset group and late-onset group; 70 healthy subjects were included as controls. Genomic DNA from 70 normal controls and from those of PD patients were extracted from peripheral blood leukocytes by using standard procedures. Mutations of parkin gene (exon 1–12) in all the subjects were screened by PCR-single strand conformation polymorphism (SSCP), and further sequencing was performed in the samples with abnormal SSCP results, in order to confirm the mutation and its location. A new missense mutation Gly284Arg in a patient and 3 abnormal bands in SSCP electrophoresis from samples of another 3 patients were found. All the DNA variants were sourced from the samples of the patients with early-onset PD. It was concluded that Parkin point mutation also partially contributes to the development of early-onset Parkinson’s disease in Chinese. WANG Tao, male, born in 1961, Associate Professor This work was supported by grants from the key program of the special scientific project of Scientific & Technologic Agency of Hubei Province (Serial No. 2001AA308B01) and the Hygienic Research Project of Hygienic Agency of Hubei province (Serial No. WJ 01529).     

Systematic examination of DNA variants in the parkin gene in patients with Parkinson’s disease

Increasing evidence suggests that genetic factors play an important role in the pathogenesis of Parkinson‘s disease(PD). Three genes, namely α-synuclein, parkin, and UCH-L1, have been implicated in familial PD. An exon deletion in the parkin gene is the mutation most frequentlymentioned in published data. The parkin gene was first identified by Japanese researchers, and, since fragment deletions in coding exons of this gene have been proven     

胶质细胞源性神经营养因子在大鼠神经病理性疼痛模型中的作用及机制研究

目的 探讨胶质细胞源性神经营养因子（GDNF）通过PINK1/Parkin信号通路对大鼠神经病理性疼痛的作用及其机制。方法 将大鼠按随机数字表法分为Sham组、NP组和GDNF组。对大鼠的一般情况和行为学进行观察和测定;透射电镜观察大鼠脊髓;Western blotting法观察大鼠脊髓组织中PINK1和Parkin蛋白表达。结果 Sham组大鼠的情况良好;与Sham组比较,术后NP组大鼠侧肢体后爪有内收的现象,偶有大鼠跛行;GDNF干预后大鼠的情况明显好于NP组大鼠。3组大鼠机械缩足反射阈值（MWT）和热痛阀值（TWL）在坐骨神经压榨性损伤（CCI）的阈值无明显的变化（P >0.05）;术后3 d、7 d和14 d的MWT和TWL比较,NP组大鼠较Sham组大鼠降低（P <0.05）;NP组大鼠脊髓组织中完整自噬小体双膜结构较少,线粒体分别出现肿胀甚至空泡变性,还有大量的线粒体消失不见,少数出现与溶酶体融合;经过GDNF干预后,GDNF组大鼠在各个时间的MWT和TWL较NP组大鼠升高（P <0.05）;GDNF组大鼠脊髓组织中少见自噬小体双模结构,线粒体偶见轻微肿胀和空泡变性,未见溶酶体融合。NP组大鼠脊髓组织中的PINK1和Parkin蛋白表达较Sham组升高（P <0.05）;经过GDNF干预治疗后发现,GDNF组大鼠脊髓组织中PINK1和Parkin蛋白降低（P <0.05）。结论 GDNF作用机制可能通过抑制PINK1和Parkin蛋白表达,从而有效减轻神经病理性疼痛。     

荧光半定量PCR在散发早发性帕金森综合征parkin基因外显子重排突变分析中的应用

目的探讨散发早发性帕金森综合征（EOP）parkin基因外显子重排突变情况。方法应用荧光半定量PCR方法对61个散发EOP患者进行parkin基因外显子重排突变分析。结果4例患者发现含parkin基因外显子重排突变,其中一个外显子4未见PCR产物,考虑为外显子4纯合缺失突变,其他3个发现外显子2、外显子3和外显子4的正常化比值（NR）分别为0．47、0．52和0．49,分别考虑为外显子2、外显子3和外显子4的杂合缺失突变。本组患者中未见parkin基因外显子重复突变。结论我国散发EOP患者存在parkin基因外显子重排突变。     

葛根素调节PINK1/parkin信号通路对横纹肌溶解致大鼠急性肾损伤的影响

目的 探讨葛根素是否可通过调节PTEN诱导激酶1/帕金森病相关基因(PINK1/parkin)信号通路影响横纹肌溶解诱导的急性肾损伤大鼠线粒体自噬。方法 将60只SPF级成年雄性SD大鼠分为正常组(等量生理盐水)、模型组(50%甘油10 mL/kg)、葛根素低剂量组(葛根素50 mg/kg)、葛根素中剂量组(葛根素100 mg/kg)、葛根素高剂量组(葛根素200 mg/kg)、3-MA组(腹腔注射3-MA 15 mg/kg),每组10只。3-MA组灌胃葛根素200 mg/kg同时腹腔注射15 mg/kg自噬抑制剂3-MA,各给药组连续灌胃给药7 d后,除正常组外其余各组大鼠在双侧后肢肌肉一次性注射50%甘油10 mL/kg,建立横纹肌溶解诱导的急性肾损伤大鼠模型。血清生化分析血清尿素氮(BUN)、肌酐(SCr)和肌酐磷酸激酶(CK)水平;ELISA法检测血清肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白介素1β(IL-1β)、白介素6(IL-6)水平;HE染色法观察大鼠肾组织病理变化;试剂盒法测量大鼠肾脏组织超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽(GSH)、丙二醛(MDA)、活性氧(ROS)水平;透射...     

复方蒲黄汤对缺血性脑损伤小鼠脑组织中Parkin、Cyclin E蛋白的影响

目的通过观察缺血性脑损伤小鼠脑组织中Parkin、细胞周期素E（Cyclin E）蛋白在用药前后的表达变化,探讨复方蒲黄汤对缺血性脑病的神经保护机制及Parkin蛋白与缺血性脑病的关系。方法 48只雄性C57小鼠随机分成对照组、模型组、药物组,每组各16只。药物组用复方蒲黄汤干预缺血性脑损伤小鼠模型,等量生理盐水灌注胃模型组和对照组小鼠。分别于损伤后0、6、12、24 h断头取脑,免疫组化检测Parkin、Cyclin E的含量。结果模型组Parkin的表达较高,12 h后达到高峰,12~24 h下降,但总体高于对照组（P〈0.05）;药物组Parkin整体表达变化类同模型组,但各亚组表达量均低于模型组（P〈0.05）,且24 h处下降趋势明显缓于模型组。模型组与药物组Cyclin E的表达都较高,其中12 h处模型组依旧上升,而药物组开始下降,模型组与对照组差异显著（P〈0.05）;模型组与药物组在0、24 h时差异有统计学意义（P〈0.05）,6、12 h时差异无统计学意义（P〉0.05）。结论复方蒲黄汤可能通过诱导Parkin过表达及抑制Cyclin E表达,达到对缺血性脑病神经元损伤的早期防护。     

麻疹的双相移位研究进展

近年新生儿、婴儿、成人麻疹患者逐年增加,临床表现一般仍较典型,成年人麻疹患者全身中毒症状较重。麻疹抗体检测结果阳性是主要的诊断依据。麻疹发病的双相移位的机理可能是,免疫保护力不足,婴儿出生时麻疹抗体力低。孕期母传胎的麻疹抗体减弱,母经乳汁传给婴儿的抗体减弱,成人麻疹抗体水平逐年下降。预防措施是怀孕前给予育龄妇女麻疹疫苗接种,鼓励母乳喂养,麻疹疫苗计划免疫适当提前,在成人追加麻疹疫苗的免疫,加强病毒变异的研究等。