DNT细胞的扩增及其对胰腺癌Panc-1细胞的影响

目的 探讨TCR+CD+3CD-4CD-8(DNT)双阴T细胞对人胰腺癌细胞系Panc-1的影响.方法 应用抗体吸附法扩增人外周血DNT细胞,采用流式细胞仪检测所得细胞表型,选择多组对照观察DNT细胞对裸鼠荷瘤的生长曲线和抑瘤率的影响,应用RT-PCR检测不同浓度DNT细胞与Panc-1细胞体外培养后Fas/FasL的表达情况.结果 经过12 d左右的培养,每孔细胞数量可达1.0×106个以上.流式细胞仪鉴定细胞表型为CD+3CD-4CD-8.与阴性对照组比较,实验组和阳性对照组对裸鼠荷瘤的肿瘤生长曲线及抑瘤率的差异有统计学意义,实验组的抑瘤率达44.75%.DNT细胞与胰腺癌细胞共培养后,胰腺癌细胞在mRNA水平的Fas表达量明显上升,差异有统计学意义;FasL表达略有下调,差异无统计学意义.结论 DNT细胞能抑制胰腺癌Panc-1细胞株增殖,Fas/FasL途径为其作用机制之一.     

肿瘤转移相关基因1与抑制基因KISS-1在胰腺癌中的表达及意义

目的研究肿瘤转移相关基因1（metastasis associated 1,MTA1）与抑制基因KISS-1在胰腺癌中的表达,探讨其与病理指标的关系。方法应用免疫组化Envision二步法在36例胰腺癌组织、10例癌旁胰腺组织中检测MTA1与KISS-1蛋白的表达情况。结果 MTA1在胰腺癌组织中的阳性表达率为77.8%（28/36）,显著高于癌旁胰腺组织中的表达[20.0%（2/10）]（P〈0.01）;KISS-1在胰腺癌组织中的阳性表达率为38.9%（14/36）,明显低于癌旁胰腺组织的90.0%（9/10）（P〈0.01）。二者的表达均与患者年龄、性别及肿瘤部位无关（P〉0.05）,而与癌组织的分化程度、淋巴结转移及临床分期有关（P〈0.05）。胰腺癌组织中MTA1与KISS-1的表达呈负相关（r=-0.533,P〈0.01）。结论MTA1和KISS-1与胰腺癌的发生、侵袭以及转移有关,其有望成为胰腺癌诊治的重要生物学指标。     

胰腺癌中的Pin1表达及其意义

目的检测胰腺癌及癌旁组织中Pin1的表达,探讨Pin1在胰腺癌发病中的作用。方法收集20例胰腺癌组织和相应的癌旁组织标本,采用实时荧光定量逆转录聚合酶链反应法（RTQRT—PCR）和westernblot检测Pin1mRNA和蛋白的表达。结果胰腺癌中Pin1mRNA和蛋白的表达明显高于癌旁组织（2．78±1．02VS4．36±1．27和5．48±1．69VS9．97±1．86,P〈0．05）。Pin1与肿瘤的临床分期和病理分化程度无明显的相关性（P〉0．05）。结论胰腺癌中Pin1的过表达可能在胰腺癌中起着重要作用。     

Fascin-1在胰腺癌中的表达及意义

目的探讨Fascin-1蛋白在胰腺癌组织中的表达及其与临床病理参数的关系。方法采用免疫印迹法检测Fascin-1蛋白在5株胰腺癌细胞株(AsPC-1、HPAC、PANC-1、Capan-2、BxPC-3)中的表达。采用免疫组织化学染色SP法测定62例人胰腺癌中和53例癌旁正常组织中Fascin-1蛋白的表达情况,统计分析其与胰腺癌临床病理参数(TNM分期、淋巴结转移、组织分化等)的关系。结果胰腺癌细胞株AsPC-1、HPAC、PANC-1及Capan-2中Fascin-1蛋白呈阳性表达,BxPC-3中Fascin-1蛋白无表达。胰腺癌组织中Fascin-1蛋白的表达率为61.3%,癌旁正常组织中Fascin-1蛋白不表达,差异有统计学意义(P<0.05)。Fascin-1蛋白的表达与胰腺癌的TNM分期、组织分化程度、门脉是否受侵及有无淋巴结转移有关(均P<0.05),与患者的性别、年龄及肿瘤大小无关(均P>0.05)。结论 Fascin-1蛋白在胰腺癌细胞株及癌组织中高表达,在癌旁正常组织中不表达,提示其可能参与胰腺癌的发生、侵袭及转移过程。     

胃癌患者DNT细胞和T细胞亚群变化及临床意义

目的探讨胃癌患者外周血中CD3＋CD4CI）8-（I）NT）细胞及T淋巴细胞亚群的表达及临床意义。方法利用流式细胞仪对43例胃癌、36例健康人外周血中的DNT细胞及T细胞亚群进行检测,并对比分析两者的差异。结果胃癌患者DNT细胞百分比（9．11±5．56）％明显高于止常对照组（4184±1．43）％（P〈O．01）,胃癌患者CD4＋％、CD4±／CD8＋比值低于正常对照组（P均〈0．01）,CD8＋％高于正常对照组（P〈0．01）。结论胃癌患者DNT细胞百分比显著升高及T淋巴细胞亚群比例改变,提示胃癌患者免疫功能异常,为胃癌发病机制研究及免疫治疗提供理论依据。     

血清sICAM-1及sVCAM-1在胰腺癌中的表达

目的 探讨血清sICAM-1及sVCAM-1在胰腺癌中的表达及临床意义.方法 用ELISA法测定了93例胰腺癌、42例慢性胰腺炎、51例健康人血清sICAM-1、sVCAM-1含量,并进行相关比较.结果 胰腺癌患者血清sICAM-1、sVCAM-1水平明显高于慢性胰腺炎及健康对照组(P<0.01);肿瘤直径≥4 cm者血清sICAM-1、sVCAM-1水平明显高于肿瘤直径<4 cm者(P<0.01);肿瘤有远处转移者其水平高于无转移者(P<0.01);分化程度低者其水平高于分化成度高者(P<0.01).胰腺癌患者血清sICAM-1和sVCAM-1水平呈正相关(r=0.964,P<0.01).结论 胰腺癌患者血清sICAM-1、sVCAM-1过度表达,其水平与胰腺癌的侵袭转移密切相关;血清sICAM-1、sVCAM-1水平可作为判断胰腺癌预后的指标.     

慢性丙型肝炎患者DNT细胞及T细胞亚群的研究

目的探讨外周血中CD3+CD4-CD8-(double negative T,DNT)细胞及T淋巴细胞亚群在慢性丙型肝炎(chronichepatitis C,CHC)患者中的表达及意义。方法利用流式细胞仪对92例CHC患者、93例正常健康人外周血中的DNT细胞及T细胞亚群进行检测,并对比分析两者的差异。结果 CHC患者DNT细胞百分比(8.57%±6.16%)高于正常对照组(6.78%±4.50%)(P<0.05),其绝对数在两者间比较,差异无统计学意义(P>0.05)。CHC患者CD4+%,CD4+/CD8+比值低于正常对照组(P值均<0.001),CD8+%高于正常对照组(P<0.001)。结论 CHC患者DNT细胞百分比显著升高及T淋巴细胞亚群比例改变,可能是丙型肝炎病毒感染慢性化的重要原因之一。     

P21WAF1在胰腺癌组织中的表达及意义

目的 探讨P21WAF1 在胰腺癌组织中的表达与临床病理因素的关系.方法 用免疫组化法检测胰腺癌31例中P21WAF1的表达水平.结果胰腺癌31例中P21WAF1的阳性表达17例(54.84%),明显低于对应癌旁非癌组织(26例,83.87%);胰腺癌中P21WAF1的表达水平与胰腺癌的临床分期、神经浸润转移密切相关(P<0.05).结论与对应癌旁非癌组织相比,胰腺癌组织中P21WAF1的表达水平明显下降(P<0.05),其改变可作为提示胰腺癌病期早晚及有无神经浸润转移的一个指标.     

髓样细胞白血病基因-1在胰腺癌组织和胰腺癌细胞株中的表达和意义

目的 研究人胰腺癌组织中髓样细胞白血病基因-1(Mcl-1)的表达情况,并分析其与临床病理特征的关系及在不同胰腺癌细胞株中表达的情况.方法 应用免疫组织化学SP法检测50例胰腺癌组织和14例正常胰腺组织中Mcl-1的表达,分析其与临床病理特征的关系.应用Western blot法检测Mcl-1在不同胰腺癌细胞株中的表达情况.结果 胰腺癌标本50例中有34例出现Mcl-1阳性表达,阳性率为68.0％;而正常胰腺组织中均未检测到Mcl-1表达.Mcl-1蛋白的表达与肿瘤分化程度、临床分期有关(P＜0.05),与患者性别、肿瘤部位及有无淋巴结转移无显著相关性(P＞0.05).PANC1和BxPC3两种细胞中均有Mcl-1表达,表达强度为PANC1＞ BxPC3,但差异无统计学意义.结论 抗凋亡蛋白Mcl-1在胰腺癌组织中的呈高表达,提示其对胰腺肿瘤的发生、发展可能起重要作用,Mcl-1的表达情况可作为胰腺癌预后不良的重要生物学指标.     

磷脂酶D1对胰腺癌细胞增殖的影响

目的 探究磷脂酶D1（PLD1）对于胰腺癌细胞增殖的影响。方法 通过CCK-8法、EdU荧光染色和流式细胞术检测PLD、PLD1及PLD2抑制剂对胰腺癌细胞系Capan-2细胞活力、增殖、周期的影响;采用同样方法检测抑制/过表达PLD1对Capan-2细胞活力、增殖、周期的影响。结果 PLD、PLD1抑制剂均抑制了Capan-2增殖（P=0.004、0.044）,而PLD2抑制剂对Capan-2增殖无明显影响（P=0.945）。下调PLD1的表达使Capan-2细胞活力降低（P=0.000）、增殖能力减弱（P=0.002）,阻碍了细胞周期进展（P=0.004、0.002）;上调PLD1的表达使Capan-2细胞活力提高（P=0.004）、增殖能力增强（P=0.002）,促进细胞周期进展（P=0.0004、0.035）。结论 PLD1能够促进胰腺癌细胞的增殖,在胰腺癌的发展中发挥着重要的作用。     

HSPA2在胰腺癌中的表达及其临床意义

目的 检测并对比热休克蛋白A2(HSPA2)在胰腺癌及癌旁胰腺组织中的表达水平,分析HSPA2蛋白在胰腺癌标本中的表达水平与其临床病理参数之间的相关性.方法 采用实时定量PCR、Western blot法检测并对比胰腺癌及癌旁胰腺组织中HSPA2蛋白和mRNA的表达水平,采用免疫组织化学染色方法测定胰腺癌患者组织中HSPA2蛋白的表达,并探讨其表达与临床病理特征之间的关系.结果 与癌旁胰腺组织相比,胰腺癌组织中HSPA2 mRNA和蛋白表达水平均明显升高.HSPA2蛋白在胰腺癌组织中的阳性表达率为68.8%(55/80).HSPA2蛋白表达量与胰腺癌的分化程度、血管侵犯、TNM分期差异有统计学意义(P=0.011、0.005、0.012),而与患者性别、年龄、肿块大小及位置、血清CA199水平差异无统计学意义.结论 HSPA2在胰腺癌组织中的表达明显高于与之相应的癌旁胰腺组织,且HSPA2的高表达与胰腺癌的恶性进展、侵袭和转移等事件密切相关.     

KiSS-1基因及其蛋白在人胰腺癌组织中表达及其与侵袭和转移的关系

目的研究胰腺癌组织中KiSS-1表达及其与侵袭和转移的关系.方法应用RT-PCR和western blot法检测KiSS-1mRNA及其蛋白肽metastin在37例胰腺癌及27例转移灶和9例正常胰腺组织中的表达情况.结果在胰腺癌组织中KiSS-1基因及其蛋白表达水平显著低于正常胰腺组织(P＜0.01,P＜0.01).KiSS-1mRNA及其蛋白的表达与性别、年龄、肿瘤大小及组织学分级无关,与临床分期、有无转移和神经侵犯密切相关.在Ⅲ、Ⅳ期胰腺癌组织中KiSS-1基因及蛋白的表达分别为(0.135±0.121)和(9.23±2.74)μg/100μg总蛋白,明显低于Ⅰ、Ⅱ期(P＜0.05,P＜0.05).KiSS-1基因及其蛋白在无转移、有转移的胰腺癌原发灶和转移灶组织中表达水平呈降低趋势,转移灶中的表达水平最低.有神经侵犯的胰腺癌原发灶KiSS-1基因及蛋白表达显著低于无神经侵犯的胰腺癌原发灶(P＜0.01,P＜0.01),其表达与有无神经侵犯相关系数分别为Kendall τ-b=0.597(P=0.003)和Kendall τ-b=0.438(P=0.007).结论KiSS-1基因转录和表达降低与胰腺癌侵袭和转移密切相关,可能参与胰腺癌转移的调控.     

胰腺癌组织中Plexin-B1、Gli1蛋白表达及其与临床特征的关系

目的探讨胰腺癌组织中从蛋白B1（Plexin-B1）、脑胶质瘤相关癌基因-1（Gli1）蛋白表达及其与临床特征的关系。方法选取经手术后病理学证实的69份胰腺癌组织标本为胰腺癌组,胰腺癌旁3cm的34份正常组织标本为对照组。采用免疫组化染色检测组织标本中Plexin-B1、Gli1蛋白表达情况,并分析其与胰腺癌患者临床特征的关系。结果胰腺癌组Plexin-B1、Gli1蛋白表达阳性率均明显高于对照组（均P＜0.05）。胰腺癌组织中Plexin-B1、Gli1蛋白表达与临床分期、肿瘤直径、淋巴结转移等有关（均P＜0.05）。胰腺癌组织中Plexin-B1与Gli1蛋白表达呈正相关（r=0.885,P＜0.05）。结论胰腺癌组织中Plexin-B1、Gli1蛋白表达阳性率明显升高,与患者的临床分期、肿瘤直径、淋巴结转移等有关。     

XAF1基因对胰腺癌细胞SW1990增殖和凋亡的影响

目的探讨Ad5／F35腺病毒介导的X染色体连锁凋亡抑制蛋白相关因子1（XAFl）基因对胰腺癌细胞株SW1990增殖和凋亡的影响。方法构建和包装Ad5／F35-XAF1重组腺病毒并感染胰腺癌细胞SW1990（Ad5／F35-XAF1组）,设立对照病毒感染组（Ad5／F35-Null组）和空白组。运用RT—PCR技术和Western blotting分析对感染细胞进行鉴定。流式细胞仪检测细胞凋亡并分析细胞周期,TUNEL法测定细胞凋亡率;MTT法检测细胞增殖。结果Ad5／F35-XAF1组SW1990细胞XAF1mRNA和蛋白表达水平均明显上调。与空白对照组和Ad5／F35-Null组比较,Ad5／F35-XAF1组细胞凋亡率明显增加,增殖活性明显降低,G2／M期细胞比例显著增加,组间比较差异均有统计学意义（P〈0．05）。结论Ad5F35-XAF1重组腺病毒感染胰腺癌细胞SW1990后,能促进细胞凋亡并抑制细胞增殖。     

人硫酸酯酶1对生长因子介导的胰腺癌细胞生长的作用

目的:探讨人硫酸酯酶1对生长因子诱导下胰腺癌细胞生长作用的影响及其机制.方法:应用lipofectamine方法转染人硫酸酯酶1基因到低表达该基因的胰腺癌细胞Panc-1,通过Northern bloting筛选阳性转染的细胞克隆,并检测转染后胰腺癌细胞硫酸酯酶1的水平;应用噻唑氮蓝比色分析(MTT)法检测转染后胰腺癌细胞对生长因子作用的影响;应用Western bloting检测人硫酸酯酶1转染对生长因子受体与MAPK磷酸化水平的影响.结果:硫酸酯酶1稳定转染入Panc-1细胞后,Panc-1细胞稳定表达硫酸酯酶1 mRNA,并且硫酸酯酶1表达水平升高.FGF-2、HB-EGF、EGF均促进胰腺癌细胞Panc-1的生长,硫酸酯酶1基因转染后减弱FGF-2对细胞的生长促进作用,降低FGF-2所诱导的MAPK磷酸化水平,但对HB-EGF、EGF的作用无明显影响.结论:人硫酸酯酶1 转染减弱生长因子FGF-2所诱导的胰腺癌细胞的生长促进作用;人硫酸酯酶1可能参与胰腺癌的病理发生发展过程.